药学论文-山楂精降脂胶囊的质量标准研究

药学论文-山楂精降脂胶囊的质量标准研究 作者：朱才庆 李艳 吴迪 何南生 曾宪仪 余华 目的以山楂对照药材和熊果酸作为对照品，分别建立薄层色谱（TLC）鉴别和高效液相色谱（HPLC）法控制山楂精降脂胶囊的质量。方法TLC鉴别用甲苯-醋酸乙酯-甲酸（20:4:0.5）为展开剂；HPLC法采用Alltima C18色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mn），用乙腈-甲醇-水-乙酸铵(70:16:14 :0.5)为流动相，检测波长220 nm；柱温25?；流速1.0 ml/min。结果TLC鉴别图谱斑点清晰，阴性无干扰；熊果酸含量1.796 8～17.968 0 μg范围内呈良好线性关系，得回归 方程Y＝44 820X+5 725.5，r=0.999 9，平均加样回收率及RSD分别为101.17%和1.02%。结论以熊果酸为对照品，采用TLC法和HPLC法控制山楂精降脂胶囊 质量的方法简便快速、准确可靠、重复性好，专属性强。 山楂精降脂胶囊 薄层鉴别 高效液相色谱 熊果酸 山楂精降脂胶囊是由山楂提取物制成的中药单方制剂，是由山楂精降脂片经剂型 改变而来，功能与主治为降血脂，可用于治疗高血脂症，亦可作为冠心病和高血 压病的辅助治疗［1］。文献报道山楂主要含黄酮类有机酸和三萜类等有效成分， 其中金丝桃苷、熊果酸是山楂中黄酮和三萜类物质的主要成分［2，3］。研究表明黄酮类成分具有降压、增加冠脉血流量、降血脂、强心和抗心律失常的药理作 用，而三萜类成分有降低高脂模型小鼠血脂的作用［4～7］。原标准只有理化鉴别和UV法测定总黄酮的含量，专属性不强。为了提高产品的质量可控性，以山 楂对照药材及熊果酸对照品为对照，探讨TLC鉴别和HPLC法测定熊果酸含量的 质量控制法。 1.1 仪器 高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司)：P200 II型高压恒流泵，UV200 II 紫外可变波长检测仪，Rheodyne 7725i 高压六通进样阀，20 μl定量环；HW色谱工作站（南京千谱软件有限公司）；百万分之一电子天 平（瑞士Mettler公司M3型）。 1.2 试药 山楂精降脂胶囊（由本实验室自制）；山楂对照药材(中国药品生物制品检定所，批号：121138-200403)；熊果酸对照品（供含量测定用，中国 药品生物制品检定所，批号:110742-200415）；乙腈、甲醇为色谱纯（中国医药 集体上海化学试剂公司）；水为自制的重蒸水，其余试剂均为分析纯。 2.1 山楂的薄层鉴别取山楂精降脂胶囊4粒，倾出内容物，加甲醇25 ml，超声30min，滤过，滤液浓缩至2 ml，作为供试品溶液；另取山楂对照药材1 g，加70％乙醇25 ml，回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水5 ml溶解并加盐酸5 ml（6 mol/L），水浴水解30 min，抽滤，滤液弃去，滤渣加水洗至洗涤 液呈中性,滤渣连同滤纸80?干燥后，加甲醇25 ml，超声提取30 min，滤过，滤液浓缩至1 ml，作为对照药材溶液。取熊果酸对照品，加甲醇制成每1毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［8］试验，吸取供试品溶液5 μl、对照药材溶液5～10 μl、对照品溶液4 μl，分别点于同一含0.2%羧甲 基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（20?4?0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试液，105?加热数分钟。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见 图1。 1,2,3.供试品 4.山楂对照药材 5.熊果酸对照品 6.阴性对照 图1 山楂精降脂胶囊薄层鉴别 2.2 熊果酸的含量测定 2.2.1 色谱条件 色谱柱为Alltima 5U C18（5 μm，4.6 mm×250 mn）；流动相为乙腈-甲醇-水-乙酸铵(70:16:14 :0.5)；使用前用孔径为0.45 μm的有机滤膜减压过滤，超声20 min；检测波长220 nm，柱温25 ?，流速1 ml/min；进样量20 μl。 2.2.2 可行性试验 精密称取熊果酸对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇 制成每毫升含熊果酸约400 μg的溶液，即得，作为对照品溶液。取本品20粒，倾出内容物，混合均匀，精密称取适量（约0.5 g）置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，超声处理40 min，取出，放冷，再称定重量，用 甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，作为供试品溶液。分别取 熊果酸对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液注入液相色谱仪， 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 色谱图， 结果见图2～4，从图2～4中可知熊果酸保留时间为15.8 min左右，阴性对照在相应的位置处无干扰峰，说明本品在上述色谱条件下熊果酸与其它组分分离较 好。理论板数以熊果酸计算不低于3 000。 2.2.3 线性关系考察 精密称取熊果酸对照品22.460 mg，置25 ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得0.8984 mg/ml的对照品溶液。分别精密量取上述对照品溶液1，2，4，6，8 ml至10 ml容量瓶中，加甲醇至刻 度，摇匀，即得不同浓度的对照品溶液。分别吸取上述各对照品溶液及母液各 20μl注入色谱仪，测定其峰面积，以熊果酸对照品进样量为横坐标，以峰面积 积分值为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明在1.796 8～17.968 0 μg范围内进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系，回归方程为Y=44 820X+5 725.5，r=0.999 9（n=5）。 2.2.4 样品超声时间考察 取装量差异下的内容物约0.5 g，精密称定，称取4份，分别置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，称定重量，分别 超声20，30，40，50 min［250W，（26.5?1）kHz］，放冷，再称重，用甲醇补 足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。依上方法测定，结果表明超声 20，30，40，50 min的熊果酸含量分别为18.998 6，19.304 7，19.992 8，19.454 4 mg/g，可知样品超声提取40 min即可。 2.2.5 精密度实验精密吸取对照品溶液20 μl，重复进样6次，求得熊果酸峰面积积分值的相对标准偏差RSD为1.0%。 2.2.6 稳定性实验 精密吸取20 μl供试品溶液，以第1次进针为0 h，分别在0，1，2，4，8，12 h进针，测定其中熊果酸峰面积积分值，结果表明样 品在12 h内稳定，RSD为1.8％。 2.2.7 重复性实验 按样品测定项下方法，取同一批号山楂精降脂胶囊 样品6份, 精密称定，按供试品制备方法制备供试品溶液，照上述测试方法实验， 6个实验样本平均含量为16.797 5 mg/g，RSD为2.3％，结果表明本法的重复性 很好。 2.2.8 加样回收率实验取本品已知含量，同一批号（批号：20040701）样品共6份，每份约0.25 g，精密称定，精密加入一定量熊果酸溶液，照上述 供试品制备方法制备供试品溶液，按含量测定方法测定熊果酸含量（见表1）。结果表明本法回收率较高，方法可行。表1 山楂精降脂胶囊的熊果酸含量测定 加样回收实验结果 回收率（%）=实测量-样品中的量对照品加入量×100% 2.2.9 样品测定 按上述方法制备供试品溶液和对照品溶液，分别精密 吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μl，依上述色谱条件测定，计算1粒（0.15 g/粒）毛冬青胶囊中原儿茶醛含量，先后测定了10批样品，每批测2次，结果见表2。依据测定的结果暂定本品每粒含山楂以熊果酸（C30H48O3）计不得少于2.3 mg。 表2 山楂精降脂胶囊样品的熊果酸含量测定结果 山楂精降脂胶囊是由山楂药材提取物组成的单方制剂。山楂中含有山楂酸、 酒石酸、胡萝卜素、维生素B1、维生素B2、维生素C、黄酮类、内酯、糖类及 苷类、有机酸、鞣质、蛋白质、脂肪、钙、磷、铁等。迄今为止，国内外学者从 山楂中已分离得到槲皮素、金丝桃苷、芦丁等。原片剂标准中有两个理化鉴别和 1个含量测定指标（以槲皮素为对照品，运用UV法进行总黄酮的含量测定）， 理化鉴别由于专属性不强而被删去，而总黄酮含量在山楂提取物原料中已控制， 制剂中再控制同一指标意义不大，且供试品处理方法繁琐，故在新制剂中未采用 该法。山楂中有机酸类含有熊果酸，它有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、保肝、降血脂 等作用，选择其作为控制质量标准的指标之一，具有一定的实际意义。因此，本 研究中选用熊果酸对照品和山楂对照药材为对照，新建立了制剂薄层鉴别，彩照 斑点清晰，阴性无干扰，与理化鉴别相比，专属性大大增加，提高了制剂质量的 可控性。结合本制剂的实际情况，通过对流动相不断摸索，采用高效液相色谱法 测定制剂中熊果酸的含量，取得成功，方法简便可行，准确可靠，使制剂的质量 更加可控。 ［1］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准?中 药成方制剂,第9册［S］. ［2］ 石岩鹏, 丁杏苞. 山楂化学成分的研究［J］. 中草药, 2000, 31 (3) :173. ［3］ 孙敬勇, 杨书斌, 谢鸿霞, 等.山楂化学成分研究［J］. 中草药, 2002, 33(6):483. ［4］ 罗玉梅, 王贺振. 山楂的化学成分及药理研究进展［J］. 时珍国医国药, 2004, 15(1):53. ［5］ 王月刚, 陈素云. 山楂对心血管系统的药理作用研究［J］. 中医药信息, 2000, 6:29. ［6］ 李贵海, 孙敬勇, 张希林,等.山楂降血脂有效成分的实验研究. 中草药, 2002, 33(1):50. ［7］ 薛庆玲, 牛绍忠, 田中云. 山楂及其叶对心血管系统的作用研究进展［J］. 山东医药工业, 2000，9(3):21. ［8］ 国家药典委员会.中国药典,?部［S］.北京:化学工业出版社,2005:附录?B.