中药有效部位提取分离与检识测定

中药有效部位提取分离和检识测定北京中医药大学刘斌2008年04月????????中药药效物质基础有效部位含义、研究意义有效成分????????生物碱有效部位黄酮有效部位皂苷有效部位????????一、生物碱有效部位????????提取分离理化性质溶解性碱性沉淀反应显色反应????????提取分离提取水（酸水）提取醇提取亲脂性有机溶剂提取????????提取分离分离纯化酸溶碱沉有机溶剂萃取生物碱沉淀试剂沉淀离子交换树脂交换大孔吸附树脂吸附????????检识定性鉴别显色反应（少用）沉淀法色谱法薄层色谱法纸色谱法（少用）高效液相色谱法检识测定????????测定——总生物碱 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 化学法分光光度法重量法容量法直接测定法加试剂法直接重量法加试剂法酸碱滴定法两相滴定法（酸性染料滴定法）络合滴定法酸性染料酸类磺酸类其他????????化学分析法要求样品中总生物碱成分含量较高。分析前应选择适宜方法（如采用氧化铝色谱法）对样品进行净化处理。主要采用重量法和容量法。????????重量法直接重量法加试剂重量法（间接重量法）容量法酸碱滴定法两相滴定法酸性染料滴定法络合滴定法沉淀滴定法????????分光光度法——单波长分光光度法单波长光谱法测定时要求干扰成分在测定波长基本无吸收，因此，一般供试品溶液均要经过适当分离净化方可进行测定。分离净化的方法可采用化学法和色谱法等。????????直接测定法原理：不经过化学反应、利用生物碱自身的光吸收直接测定（可见光、紫外光、荧光）。特点：不加试剂。备注：一般用于药味较少、干扰不大的中药制剂中总生物碱的含量测定，注意其他有色物质及有紫外吸收、荧光吸收物质的干扰。????????雷氏盐比色法原理：利用生物碱在一定pH条件下与试剂定量生成有色物质，可转溶于有机溶剂。????????雷氏盐比色法特点：生物碱雷氏盐丙酮溶液所呈现的颜色是其中硫氰酸铬铵部分，故吸收值与样品或溶液无关。根据测得的吸收值即可计算出样品的量，不需要 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品对照及绘制标准曲线。测定波长520~526nm（丙酮）或427nm（甲醇）。????????雷氏盐比色法备注：硫氰酸铬铵的克分子吸收系数为：106.5（单盐）或213.0（双盐） 计算公式 六西格玛计算公式下载结构力学静力计算公式下载重复性计算公式下载六西格玛计算公式下载年假计算公式 ：W=A/ε×M×VW：生物碱雷氏盐重量mgA：吸收度ε：克分子吸收系数V：溶液mL数M：生物碱雷氏盐分子量????????雷氏盐比色法注：注意生物碱雷氏盐沉淀是单盐形式还是双盐形式。对含2个以上N原子的生物碱，存在形式与生物碱中N原子的碱性大小和酸性溶剂的酸性强弱有关。????????雷氏盐比色法注：测定时，可将沉淀溶于丙酮（或甲醇）直接比色测定，换算生物碱的含量；也可精密加入过量雷氏盐试剂，滤除生成的生物碱雷氏盐沉淀，测定滤液中残存的过量雷氏盐，间接计算生物碱含量。????????雷氏盐比色法注：雷氏盐水溶液不稳定，宜用时新鲜配制。沉淀反应宜在低温下进行。雷氏盐丙酮溶液的吸光度值随时间会发生变化，应控制测定时间。????????酸性染料比色法原理：利用生物碱在一定pH条件下与试剂定量生成有色物质，可转溶于有机溶剂。特点：在一定pH下生物碱以阳离子与酸性染料阴离子定量结合成有色离子对。此离子对可定量转溶于有机溶剂，测定有机溶剂的吸收度或经碱化后释放出的染料的吸收度。????????酸性染料比色法备注：pH低，生物碱呈阳离子，而酸性染料为游离状态；pH高，酸性染料呈阴离子，而生物碱为游离状态。均不能形成离子对。对离子对溶解度好且应无水，常用氯仿、二氯甲烷等。????????酸性染料比色法备注：常用的酸性染料有溴酚蓝、溴麝香草酚蓝、溴甲酚绿、溴甲酚紫、甲基橙等。????????苦味酸盐比色法原理：利用生物碱在一定pH条件下与试剂定量生成有色物质，可转溶于有机溶剂。特点：在弱酸或中性条件下，生物碱与苦味酸定量生成苦味酸盐沉淀，该沉淀可溶于氯仿等有机溶剂，或在碱性下解离释放出生物碱和苦味酸。????????苦味酸盐比色法操作方法之一：滤取生物碱苦味酸盐沉淀，加碱使其解离，以有机溶剂萃取游离出的生物碱，用含有苦味酸的碱性水溶液比色测定，再换算出生物碱的含量。????????苦味酸盐比色法操作方法之二：在pH4～5的缓冲溶液中加氯仿提取生物碱苦味酸盐，氯仿液在360nm直接比色测定。????????苦味酸盐比色法操作方法之三：在pH为7的缓冲溶液中使生物碱与苦味酸成盐，用氯仿提取改盐，再用pH为11的缓冲溶液使其解离，苦味酸转溶于碱水液中，比色测定，再换算出生物碱的含量。????????异羟肟酸铁比色法原理：羧基与羟胺反应生成异羟肟酸，再与Fe3+生成紫红色配合物异羟肟酸铁特点：含有酯键结构的生物碱，在碱性介质中加热，酯键水解，产生游离羧基。备注：适用于含有酯键的生物碱，但应注意供试品溶液中必须不存在其他酯类或羧酸类成分。????????分光光度法——计算分光光度法不经分离或化学反应直接用光谱学方法排除共存组分干扰的计算分光光度法，如示差分光光度法、双波长分光光度法、三波长分光光度法、导数分光光度法和正交函数分光光度法等，亦可应用于中药中总生物碱类成分的含量测定，但由于中药组成成分过于复杂，方法重现性较差。????????测定——单体生物碱薄层扫描法特点检测时，可利用本身的光吸收或喷洒显色试剂（常用改良碘化铋钾试剂）。备注制剂成分复杂，或生物碱含量较低时，需要净化样品。显色要均匀。????????高效液相色谱法特点多用反相色谱法：C18为固定相；乙腈（甲醇）-水（缓冲溶液）为流动相。需注意固定相中硅胶 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面游离硅醇基对测定的影响。离子交换色谱也可用于生物碱类成分的定量分析，以阳离子交换树脂为固定相。????????高效液相色谱法特点流动相的pH对分离有一定影响。流动相可以用中性、碱性（加三乙胺）、酸性（加磷酸、磷酸缓冲盐）或酸碱系统。多用紫外检测器，也可用电化学检测器、化学发光检测器等。????????气相色谱法特点无论分析游离生物碱还是生物碱盐，均得到游离生物碱的色谱峰。备注适用于有挥发性及对热稳定的生物碱测定。????????二、黄酮有效部位????????提取分离理化性质溶解性酸性显色反应紫外光谱特征????????提取分离提取醇提取水提取碱水或碱性稀醇提取????????提取分离分离纯化碱溶酸沉有机溶剂萃取聚酰胺柱色谱大孔吸附树脂柱色谱????????检识测定检识化学鉴别法色谱鉴别法薄层色谱法气相色谱法高效液相色谱法????????色谱检识TLC、PC、HPLC备注TLC、PC一般在紫外光（365nm）下观察荧光（硅胶）、紫外光（254nm）下观察暗斑（硅胶GF254）或用AlCl3、Al(NO3)3及MgAc2等试剂显色与对照品或对照药材比较。HPLC使用紫外检测器等检测。????????测定——总黄酮总黄酮含量测定常采用分光光度法，包括直接测定法和加试剂测定法两种。特点直接测定法：主要利用黄酮类化合物自身颜色或紫外吸收进行测定。加试剂测定法：主要利用黄酮类化合物与金属盐类试剂的络合反应、黄酮类化合物的还原反应等进行测定。????????直接测定法原理：利用黄酮类化合物自身的光吸收直接测定（可见光、紫外光、荧光）。备注：一般用于药味较少、干扰不大的中药制剂中总黄酮类化合物的含量测定。????????加试剂测定法原理1：利用黄酮类化合物与金属盐类试剂的络合反应显色测定。备注：常用试剂有AlCl3、Al(NO3)3、ZrOCl2及MgAc2等。如常用醋酸钾-三氯化铝、亚硝酸钠-硝酸铝显色测定。显色试剂中加入碱可使最大吸收峰红移。????????加试剂测定法原理2：利用黄酮类化合物的还原反应显色测定备注：常用盐酸-镁粉反应等。原理3：利用二氢黄酮在碱性下异构成查耳酮测定备注：常用于二氢黄酮的测定。最大吸收峰红移，有利于消除干扰。????????测定——单体黄酮中药制剂中黄酮单体成分的含量测定多用色谱法。薄层扫描法高效液相色谱法脉冲极谱法????????三、皂苷有效部位????????提取分离理化性质溶解性颜色反应泡沫反应紫外可见吸收光谱????????颜色反应醋酐-浓硫酸反应三氯醋酸反应五氯化锑反应芳香醛-浓硫酸（或高氯酸）反应????????紫外-可见吸收光谱皂苷类化合物大多无共轭系统，在近紫外区无明显吸收，但与浓硫酸作用后在220～600nm范围可产生吸收。????????提取分离提取醇（水）提取碱水提取亲脂性有机溶剂提取（酸水解）????????提取分离分离纯化碱溶酸沉正丁醇萃取乙醚或丙酮沉淀胆甾醇沉淀大孔吸附树脂吸附????????检识——化学检识由于干扰杂质较多，样品本身颜色较深，专属性不强，灵敏度不高，少用。????????色谱检识固定相：硅胶、氧化铝显色剂：10%硫酸乙醇液5%磷钼酸乙醇液三氯化锑浓盐酸或氯仿溶液氯磺酸-乙酸（1∶2）碘蒸气三氯乙酸醋酐-浓硫酸????????测定——总皂苷常用方法有重量法和可见分光光度法（比色法）等特点重量法：一般少用。利用皂苷类成分的溶解性进行提取、分离和纯化后得总皂苷，恒重，称量。可见分光光度法（比色法）：主要利用皂苷类化合物与试剂反应显色后进行测定。????????常用显色试剂浓硫酸高氯酸醋酐-硫酸、硫酸-醋酸-冰醋酸、硫酸-冰醋酸芳香醛-硫酸（高氯酸）亚甲蓝2,6-二丁基对甲酚????????测定——单体皂苷薄层扫描法特点：大多数需要显色后测定。备注：显色剂喷洒要均匀，注意控制显色温度与时间。注意显色后斑点呈色的稳定性考察。????????高效液相色谱法特点：多用反相色谱，固定相选择C18键合相硅胶，流动相选择乙腈-水、甲醇-水（可加适量酸）等。备注：少数有紫外吸收的皂苷（如甘草酸）可用紫外检测器。多用蒸发光散射检测器检测，重现性、灵敏度均较好。????????