植物组织各类固定液及优弊病[精彩]

植物组织各类固定液及优弊病[精彩] 动物组织各种固定液及优缺点 编类别 名字 配方 优缺点或备注 号 甲醛:从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:1. 组织收缩较少,损伤少,保存固有物质好.2. 固定均匀,穿透力强.3. 能使组织硬化,增进组织弹性,有利于切片.4. 能保存脂肪及脂类物质.5. 成本较低. 缺点:1. 杂质含量较多,如甲醇,可钝化酶类,影响反应.2. 含有微量甲酸,导致固定液酸变,影响染色.3. 可产生福尔马林色素,影响观察.4. 不能固定尿酸和糖类物质.5. 容易挥发,污染环境,可导致标本干涸.6. 可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,临床活检不用.因此要特别指出的是,在其后的各种技术操作中,要特别注意到甲醛的存在,必须要想办法除去它,否则将会给各种染色造成影响,甚至导致失败。 甲醛 100ml 该固定液是当今流行的固定液,因它对组织固1 10%缓冲福尔马林固 蒸馏水 900ml 定较好,损伤较少,因对其后的各方面研究都较定液 好,尤其是对免疫组化的染色. NaHPO 4g 24 NaHPO 6.5g 24 10%福尔马林固定液 2 甲醛100 ml 这是一种最简单的固定液，适合于边远地区携 自来水900ml 带的固定液，但由于它的单一性，因此，只要 有条件的单位都不要求使用这种固定液。 10%福尔马林盐固定甲醛 100ml 先将Nacl溶于水，再加入甲醛。这也是一种3 液 自来水 900ml 较为简单的固定液，但由于加入Nacl，它是 Nacl 9克 一种重金属盐物质，加入了它可促进和改善染 色，增加染色的强度 Bouin氏固定液 苦味酸饱和水溶液 该固定液中的冰醋酸，对胶原纤维等组织有膨4 胀作用。而甲醛对组织有收缩作用。两种试剂75ml 甲醛 2 ml 的混合使用，用以抵消彼此间的副作用。使组 冰醋酸 5 ml 织固定达到优良的固定水平 醛糖钙固定液 甲醛100ml 5 先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水，后加入甲醛。 蔗糖300ml 该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较 乙酸钙20g 好，组织固定后，做冰冻切片，再给予显示。 蒸镏水90ml 酒精:优点:1、 可保存尿酸结晶和糖原等物质。2、 能在任何比例的情况下与水混合，如组织的脱水，切片染色前后都离不开酒精，通常都用95%的工业酒精来配成60%、70%、80%、90%等不同的浓度来使用。 3、 可溶解苯类物质为染色步骤中的桥梁试剂。常规活检等切片上的石蜡必须除去，才能进行染色，能除去石蜡的物质有苯及汽油等，因此称它为桥梁试剂。4、 能除去切片上的水份，使切片无水化。切片经染色后，到无水酒精中已完全无水，这样处理对于切片的保存是有好处的，否则，切片将会褪色。5， 可与其它试剂配成多种的混合固定液，加快固定，它的缺点是:1、 可溶解脂类物质，凡要证明组织是否含有脂类和类脂物时，切不能用含有酒精的固定液去固定组织，也不能用石蜡切片。2、 对组织收缩较大，不宜作单纯固定液。3、 渗透力不强。当用酒精固定组织时，组织表面很快就被固定，并形成了一层蛋白膜，这层膜可阻挡固定液向里渗透，造成了中间组织固定不佳的现象。4、 可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡经酒精固定的组织，核的染色都不好。5、 可脱去切片上已着染的各种颜色，切片经染色后，一是必须洗去多余的染液，二是必须脱去切片上的水。在用酒精洗切片时，必须仔细地掌握显微镜下观察，还要掌握酒精的浓度，低浓底的酒精脱色力强，稍不注意，便可脱去切片上大部分的颜色。切片脱水时，要较快地通过低浓度的酒精，以免使已着染的颜色被脱去。 氯仿 300ml 该固定液固定组织快速，在固定的同时兼有脱6 Carnoy氏固定液 冰醋酸 100 ml 水的作用。溶液中的氯仿和酒精，对组织的收 95%酒精 600 ml 缩较厉害，但应用了冰醋酸，这种现象便被中 和去 AF固定液 甲醛 100 ml 这种固定液的作用与上液有相似之处，但要注7 冰醋酸 50 ml 意的是，凡使用含有醋酸的固定液，其脱水用 95%酒精 850 ml 具不能使用铜制的脱水盒，因冰醋酸跟铜离子 起反应，生成醋酸铜，这种物质可沉淀于组织 间，可破坏组织中的抗原，造成免疫组化检测 的失败。应用时应多加注意 冰醋酸:优点有:1、 能迅速固定染色质，助于染色，用醋酸配成的固定液，其作用快，固定效果均匀，对于染色 质的固定快，因此，用其作固定的切片染色好，在配其它染色液如明矾苏木素和伊红时，常常需加入一定量的醋酸， 以促进染色。2、 能使组织尤其是富含纤维的组织膨胀。各种固定液对组织都有收缩的作用，尤其是对富含纤维的 组织。而它不但不会使组织收缩，而且还会令许多组织发生膨胀的作用。不足之处:1、 不能作为单一的固定剂。 2、 不能凝固蛋白质，不能保存白细胞颗粒，红细胞及含血铁黄素等。 Zenker氏固定液: 重铬酸钾 25G 8 先将重铬酸钾和升汞溶于水中，尢其是重铬酸 升汞 50G 钾，应用热水或加温的方法将其溶解，然后过 蒸馏水 1000ml 滤贮存于带盖的玻璃瓶中以防失效。临用时，冰醋酸 50ml 取贮存液950ml，加入50ml的冰醋酸，即可 使用。应用该固定液固定的组织，一般不要超 过24h，取出组织，流水冲冼12小时以上，然 后保存于75%-80%的酒精中，在切片染色 前，必须用碘除去汞盐的沉着。应用该固定液 的组织，细胞核及细胞浆染色十分清晰，特别 是要显示骨骼肌的横纹时，应用本液可获得满 意的结果，但由于其含有醋酸，故不能用于保 存细胞颗粒，红细胞及含铁血黄素。 2%酸水溶液 200ml 9 Flemming氏液 该液中的奥酸对脂肪组织既有固定作用，又有 1%铬酸水溶液 染色作用，对有髓神经纤维也有固定兼染髓鞘 700ml 的作用。如果做HE的染色，该液不适合。应冰醋酸 100ml 用该液固定的组织，切片不能太大过厚，一般 1-2毫米厚固定时间1-3天，后经水洗，保存 于80%酒精中，除上述两液体外，还有Bouin 氏液和Carnoy氏液等 重铬酸钾: 它的优点是:1、 能固定脂肪及类脂物。2、 为髓鞘及嗜铬细胞优良的媒染剂。3、 可配成多种的 混合固定液足之处有:1、 不能沉淀蛋白质，它必须和醋酸配成混合固定液，方能发挥作用，产生铬酸，沉淀蛋白 质。2、 具有毒性及产生高温。在配制液体时，如清洗剂，当加入硫酸时，可产生很高的温度，并挥发出刺鼻的气 体，应特别注意。3、 它不能长期固定组织，经它固定的组织应充分水洗后保存于80%酒精中。 重铬酸钾 25g 临用时加入甲醛，因其加入后于24小时后可10 Helly氏液 升汞 50g 发生沉淀而失效，因用时应特别注意。该液是 蒸馏水 1000ml 白细胞颗粒的优良固定剂，因此凡为白细胞或 甲醛 50ml 造血器官如骨髓，脾脏及患先天性梅毒之肝脏 等，可用此液固定。此液原配方要求加入硫酸 钠，但据我们经验认为，硫酸钠在液中对组织 无任何作用，故省去 Orth氏液 重铬酸钾 20g 11 该液固定组织较缓慢，不适合于作临床的活检 蒸馏水 1000ml 固定液，4毫米厚的组织固定时间需36-72小 甲醛 100ml 时，该液对于染色质的固定好，显示清晰，但 可溶解部分红细胞和含铁血黄素。 重铬酸钾的不足之处有: 1、 不能沉淀蛋白质，它必须和醋酸配成混合 固定液，方能发挥作用，产生铬酸，沉淀蛋白 质。 2、 具有毒性及产生高温。在配制液体时，如 清洗剂，当加入硫酸时，可产生很高的温度， 并挥发出刺鼻的气体，应特别注意。 3、 它不能长期固定组织，经它固定的组织应 充分水洗后保存于80%酒精中