综合实验 槐米中芦丁的提取、分离、分解与鉴定

综合实验 槐米中芦丁的提取、分离、分解与鉴定 槐米中芦丁的提取、分离、分解与鉴定 芦丁(Rutin)广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米(为槐Sophora japonica的未开放的花蕾)和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。槐花的主要化学成分为芦丁，又名芦丁，含量可达12-16%。芦丁是由槲皮素3位上的羟基与芸香糖〔为葡萄糖与鼠李糖组成的双糖〕脱水合成的苷。为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178?，无水物188~190?。溶解度:冷水中为1:10000;热水中1:200;冷乙醇1:650;热乙醇1:60;冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 一、实验目的 1(通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2(掌握芦丁的一种提取、精制方法及提制过程中防止甙水解的方法。 3. 掌握黄酮甙水解生成甙元的方法及二者之间的分离。 4(熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和纸层析鉴定方法。 二、实验原理 本实验主要是利用芦丁中含有较多的酚羟基，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出芦丁结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。芦丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，并能通过纸层析鉴定。芦丁及槲皮素还可通过化学反应及紫外光谱进行鉴定。 三、实验材料与器皿 槐米、石灰乳、镁粉，0.4,硼砂水溶液、浓盐酸、正丁醇、醋酸、1,的氢氧化钠溶液、氨水、1%的三氯化铝乙醇溶液、95,乙醇、1,芦丁乙醇溶液等。 烧杯(500ml)2个，试管2个，布氏漏斗1个，玻璃棒1根，抽滤 1 瓶1个，滴管，移液管(10ml)1根，洗耳球1个，滤纸，电热炉，真空抽滤机，pH试纸、中速层析滤纸等。 四、实验 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 称取15g槐花米用粉碎机研成粉状。置于250ml烧杯中加入150ml饱和石灰水,加入0.6g的硼砂,于石棉网上加热至沸并不断搅拌,煮沸15分钟后抽滤。滤渣再用100ml饱和石灰水煮沸10分钟,抽滤。 合并两次滤液,保持60-70度下用盐酸调节至pH=4。放置1-2小时使沉淀完全,抽滤并用水洗涤2-3次,即得芦丁粗品。烘干，称重。 将粗品置于250ml的烧杯中，加水150ml，在石棉网上加热至沸，不断搅拌，并慢慢加入约50ml饱和石灰水调节溶液pH值为8-9，待沉淀溶解后，趁热过滤。滤液置于250ml的烧杯中，用盐酸调节至pH4-5，静置30分钟。芦丁即以浅黄色结晶析出，抽滤，并用水洗涤1-2次。测熔点。 精制:取粗品转入烧杯中，加1:200ml比例的蒸馏水，加热至沸10分钟，使之刚好完全溶解(若没有完全溶解继续添加适量蒸馏水)，趁热过滤，静置过夜(或用玻璃棒摩擦烧杯壁)，使结晶析出。抽滤，用少量冷水洗两次，在70~80 ?干燥结晶，即得纯品。称重计算收率。 四、所得芦丁纯度的测定 1. 测熔点，看熔程 2. 外观结晶色泽: 均一性 3. 色谱法: TLC 三种不同的溶剂系统, 纯品均为单一斑点，HPLC为单一峰。 五、所得芦丁、槲皮素的检识 1、颜色反应: ?盐酸-镁粉试验:取芦丁(或者槲皮素)少许置于试管中，加5,乙醇2ml，在水浴中加热溶解，滴加浓盐酸2滴，再加镁粉约50mg，即产生剧烈的反应。溶液逐渐由黄色变为红色。 ?三氯化铝试验:取芦丁少许置于试管中，加入甲醇1~2ml，在水浴中加热溶解，加1,三氯化铝甲醇试剂2~3滴，呈鲜黄色。以同样方 2 法试验槲皮素。 ?氢氧化钠试验:取芦丁少许置于试管中，加水2ml振摇，观察试管中有无变化。滴加1,氢氧化钠溶液数滴，振摇使溶解，呈黄色澄清溶液。再加入1,盐酸溶液数滴使呈酸性反应，则溶液由澄清转为浑浊状态。 ? 三氯化铁试验:取样品水或乙醇液，加入三氯化铁试剂数滴，观察颜色变化。 ?醋酸镁试验:取芦丁少许置于试管中，加入甲醇1~2ml，在水浴中加热溶解，加1,醋酸镁甲醇试剂2~3滴，呈黄色荧光反应。以同样方法试验槲皮素(反应也可在滤纸上进行，观察荧光)。 2(色谱检识:与芦丁标准品对照: Co-TLC (共薄层色谱，三种系统) (1)芦丁的薄层鉴定 聚酰胺薄层色谱:固定相:聚酰胺薄层板;样品:a精制芦丁(取精制的芦丁适量，加95%乙醇溶解成每1ml含1mg的溶液，备用)。 b芦丁标准品 c精制槲皮素 展开剂:氯仿—甲醇—丁酮—乙酰丙酮:(16:10:5:1) 或者展开剂:乙酸乙酯-甲酸-水(8:1:1)或者正丁醇-乙酸-水(4:1:5)。 显色:a.可见光下观察色斑，再于紫外灯下观察荧光斑点;b.喷洒2%AlCl乙醇溶液,105?加热至斑点清晰，置紫外灯(365nm)下观察。 3 (2) 芦丁的纸色谱检识: 支持剂:层析滤纸(中速、20cmХ7cm);样品:自制1,芦丁乙醇溶液;对照品:1,芦丁标准品乙醇溶液 展开剂:a. 正丁醇:冰醋酸:水(4:1:5上层);b. 15,醋酸水溶液 展距:10-15cm 显色:a. 在可见光下观察斑点颜色，再在紫外灯下观察斑点颜色。 b. 喷三氯化铝试剂呈黄色斑点。 c(经氨气熏后再于可见、紫外下观察。 六、实验说明及注意事项 1(本实验采用碱溶酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。在提取前应注意将槐米略捣碎，使芦丁易于被热水溶出。槐花中含有大 3 量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除支。pH应严格控制在8-9，不得超过10。因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。酸沉一步pH为2-3，不宜过低，否则会使芦丁形成盐溶于水，降低了收率。 2(提取过程中加入硼砂水的作用:即能调节碱性水溶液的pH，又能保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。 3(槲皮素以乙醇重结晶时，如所用的乙醇浓度过高(90,以上)，一般不易析出结晶。此时可于乙醇溶液中滴加适量蒸馏水，使呈微浊状态，放置，槲皮素即可析出。 七、思考题 1(本实验提取过程中应注意哪些问题, 2(根据芦丁的性质还可采用哪些方法进行提取,简要说明理由。 1.答:(1)槐米粉碎要适度，过细将影响过滤。 (2)石灰乳不仅用于调节碱度，同时钙离子与槐米中的黏液质、树胶等的酸性基团结合生成水不溶物质使其不易溶出。 (3)用石灰乳调节PH值，不要超过PH9，在强碱性条件下，尤其加热时黄酮母核易被破坏。 (4)用浓盐酸酸化时，避免酸性过强，以免析出的芦丁生成佯盐而重新溶解。降低产品收率。 2.答:(1)热水提冷析出的方法 该方法充分利用芦丁在冷热水，甲醇和乙醇中的溶解度的不同(芦丁难溶于冷水(1:800)和冷乙醇(1:600)，略溶于热水(1;200)和冷甲醇(1:100)，溶于热甲醇(1:7)和热乙醇(1:30))。 (2)大孔吸附树脂法 利用芦丁易溶于热乙醇的性质进行提取，利用大孔吸附树脂对黄酮苷的选择吸附作用，通过水洗脱除去水溶性杂质，50%乙醇溶液洗脱芦丁，而与脂溶性杂质分离。 (3)超声波提取法 4 利用超声波法提取效率高的特点，能够避免碱性条件下加热提取可能造成黄酮母核的破坏。 (4)冷碱渗漉提取—酸沉淀法 (5)连续回流提取法 (6)渗漉法 八、结论与 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 本实验采用碱提酸沉的方法提取芦丁，操作 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 相对简单，操作时间较短，可以较快得到目标产物，而本法也同样存在产物提取不完全，提取出的产物纯度不高，含杂质较多等问题，以至于熔点测定时，未能得到熔点变化曲线和具体的熔点。又因为在本法中，芦丁的提取对酸碱度变化较敏感，因而对提取过程中的酸碱度要求较严格，对操作要求高。因此实验过程中应特别注意控制物料的研磨粉碎度，提取过程中的酸碱度，提取时长，干燥时间和温度，以提高终产物的得率和纯度。 计算: 粗品的质量=2.2463g,精制后的质量=1.3741g 粗品得率=2.2463/30*100%=7.5% 纯度=1.3741/2.2463*100%=61.2% 精制后的得率=1.3741/30*100%=4.6% 图一 图二 5 图三 图四 图五 注:图一为粗提物;图二为纯品;图三为颜色反应;图四为熔点测点;图五为槲皮素 6