高效液相色谱-荧光法测定食用菌中多菌灵的含量

高效液相色谱-荧光法测定食用菌中多菌灵的含量 高效液相色谱-荧光法测定食用菌中多菌灵 的含量 现代农业科技2011年第18期食品科学 固相萃取一高效液相色谱一荧光法测定食用菌中多菌灵的含量 ? 张松成王小玲金锦长夏乐舜 (丽水出入境检验检疫局,浙江丽水323000) 摘要建立了固相萃取一高效液相色谱一荧光法检测食用茵样本中多茵灵的新方 法.食用茵经乙酸乙酯提取,提取溶液经固相萃取 柱净化,浓缩后,C.色谱柱分离,采用带有荧光检测器的高效液相色谱检测,流动相 为20mmo叽磷酸盐缓冲液和乙腈.试验结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,多 菌灵的定量检出限为0.05ms/kg.加标回收率为85.5%一95.4%,相对标准偏差小于 6.O%.该方法操作简单,结果准确,重现性好,可用于食用 茵中多茵灵的检测. 关键词食用茵;多茵灵;固相萃取;高效液相色谱;荧光检测;含量 中图分类号0657.7~2:TS201.6文献标识码A文章编号1007—5739(2011)18—0357 —02 DeterminationofCarbendaziminEdibleFungusbySPE—HLC-FLD ZHANGSong--chengWANGXiao—lingJINJiI卜changxIALe-shun (LishuiEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau.LishuiZh~iang323Ooo) AbstractAnewmethodwasestabfishedforthedeterminationofcarbendaziminediblefungu sbysolidphaseextraction—hishperformance liquidchromatographywithfluorescencedetector(SPE—HPLC— FLD).Theediblefungussampleswereextractedbyethylacetateandpurifiedbyasolid phaseextractioncolumn.Then,thechromatographicseparationWasachievedonaClscolum n.Themobilephasewas20mmoL/Lphosphate— acetonitrile.Theresultsshowedthattherecoveryratesofcarbendazimwerebetween85.5%t o95.4%withtherelativestandarddeviationsbelow6.O%. andlimitofquantification(LOQs)was0.05mg/kg.ThemethodiSsimple,sensitive,accurate, andrepeatable,andcanbeusedfordeterminationofcarbon- daziminediblefungus. Keywordsediblefungus;earbendazim;solidphaseextraction;highperformanceliquidchro matography;fluorescencedetection;content 2一苯并咪唑基氨基甲酸甲酯(carbendazim,MBC),俗称 多菌灵,是一种高效,低毒和广谱的苯并咪唑类杀菌剂,广 泛应用于蔬菜,水果等多种作物生长期和储存期真菌性病 害的防治【l-21.食用菌是一种兼有营养和疗效功能的食品,而 多菌灵是食用菌生产中常用的杀菌剂.近些年食用菌的产 量和出口量日益增大.因此食用菌中的农药残留检测日益 受到关注13-63.国内现行的食用菌中多菌灵残留检测标准方 法GB/T5009.188—2003网采用的是紫外分光光度法,该方法 选择性低,样品前处理繁琐,检测周期长.行业标准 SN0220—1993r~检出限过高.已达不到要求;加之食用菌基 体复杂,基质干扰严重,峰形拖尾易造成假阳性结果.因 此,研究一种操作简单,准确,可有效去除本底干扰的测定 多菌灵残留量的 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 方法.对监控食用菌的安全状况具 有重要意义.研究采用固相萃取一高效液相色谱一荧光检 测的技术建立了香菇,黑木耳,鸡腿菇,杏鲍菇等食用菌中 多菌灵的分析方法,利用荧光检测器具有灵敏度高,无荧 光特性的物质不会产生干扰的优势is2】,多菌灵的定量检 出限达到0.05mg/kg,为食用菌样品的检验和产品质量控 制提供依据和技术支持. 1材料与方法 1.1仪器与试剂 1.1.1试验仪器.LC一20AT高效液相色谱仪(日本ShimadZU 公司),配备荧光检测器,混合型阳离子固相萃取柱MCX(天 津天兴达,150mg/6mL),MCX(CNW150mg/6mL),阳离子 交换固相萃取柱SCX(SUPELCO150mg/6mE);超声波清洗 器(上海科导);快速溶剂萃取仪(美国戴安公司,ASE350): 食品料理机;氮吹浓缩仪;Milli—Q超纯水器(美国Millipore 作者简介张松成(1971一),男,山东烟台人,硕士, 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 师.从事食品化 学检测工作. 收稿Et期2011-07—21 公司). 1.1.2试剂.甲醇,乙腈和乙酸乙酯均为色谱纯(德国 MERCK公司),其他试剂均为分析纯.试验用食用菌样品购 自浙闽赣食用菌交易市场.多菌灵标准溶液(100~g/mL,纯 度>99%)购自农业部环境保护科研监测所,使用时用甲醇 稀释上述标准储备液,配制成不同浓度的标准工作溶液. 1.2色谱条件 色谱柱SHIMADZUVP—ODS(4.6mmx150mm,5p,m); 流动相A为20mmoL/L磷酸盐缓冲液,pH值为6.8,B为乙 腈,A与B体积比为80:20,等度洗脱15min;流速1.0mUmin; 柱温40oC;激发波长286am,发射波长315nm;进样量: 20L. 1-3样品处理与净化 1.3.1样品处理.将干食用菌置于食品料理机中打碎,用样 品袋密封保存.准确称取试样1.00g于50mL离心管中.加 入0.1moL/L碳酸钠溶液10mL,放置30min.加入乙酸乙酯 20mL,在漩涡混合器上提取1min,然后放入超声波清洗器 中超声提取30min,加入氯化钠约2g,以5000dmin的转 速离心3min,将上清液转移至150mL浓缩瓶中,再在离心 管中加入20mL乙酸乙酯,重复提取1次,合并上清液.于 4OcI=水浴中旋转蒸发至近干,加入0.1moL/L盐酸5.0mL溶 解残渣,待净化. 1.3.2样品净化.固相萃取柱依次用甲醇6mL,水6mL预 淋洗,然后将待净化液5.0mL加至已活化好的固相萃取柱 上,依次用水6mL,甲醇6mL洗涤,抽至近干后,用5%氨 水一甲醇溶液5.0mL洗脱,洗脱液于45?下用氮吹仪缓缓 吹至近干,用1.0mL流动相溶解,旋涡1min,过0.20m微 孔滤膜后,供高效液相色谱测定. 1.4试验方法 1.4.1提取条件优化.分别用乙腈匀浆提取,索氏提取,超 357 食品科学现代农业科技2011年第18期 声波辅助提取,快速溶剂萃取4种提取方法对质量控制样 品中的多菌灵进行提取效率比较,确定最优提取条件. 1.4.2固相萃取柱净化方法的选择过考察淋洗曲线,确定 固相萃取柱的淋洗体积;分别用天兴达MCX(150mg/6mL), SUPELCOSCX(5oomS/3mL),德国CNWMCX(150mg/6mL) 小柱对提取液的净化效果进行考查. 1.4.3流动相的选择.分别考查甲醇/水,甲醇/磷酸盐缓冲 溶液,乙腈/水,乙腈/磷酸盐缓冲溶液作为流动相对多菌灵 的分离效果,确定最佳流动相. 1.4.4方法学评价.?线性范围和检出限.配制一系列标准 工作溶液,在选定的色谱条件进行测定;?方法的回收率和 精密度.采用经测定不含有多菌灵的食用菌样品,分别进行 添加回收率和精密度试验,样品中添加不同浓度标准溶液, 测定其在低(0.05mg/kg),中(0.20mg/kg),高(1.00mg/kg)的 3个添加水平范围内的平均回收率. 1.4.5样品分析.运用该方法对市场上出售的20种食用菌 样品进行多菌灵残留量的分析测定,对该方法操作,灵敏 度,重现性,适用性进行评价. 2结果与分析 2.1提取条件的优化 分别用乙腈匀浆提取,索氏提取,超声波辅助提取,快 速溶剂萃取4种提取方法对质量控制样品中的多菌灵进行 提取效率比较,结果发现超声提取效果最好,保证了较高的 回收率(表1). 表1质控样品中多菌灵回收率及相对标准偏差 注:样本数n=6,下同. 2.2固相萃取柱净化方法的选择 通过考察淋洗曲线,最终确定固相萃取柱的淋洗体积为 5%氨水一甲醇溶液5.0mL;分别用天兴达MCX(150mg/6mL), SUPELC0SCX(5O0rag/3mL),德国CNWMCX(150mg/6mL) 小柱对提取液的净化效果进行了考查,结果天兴达MCX (150mg/6mL)的净化处理效果最好,回收率最高(表2). 表2不同固相萃取小柱对多菌灵回收率比较 2.3流动相的选择 分别考查了甲醇/水,甲醇,磷酸盐缓冲溶液,乙腈,水,乙 腈,磷酸盐缓冲溶液作为流动相对多菌灵的分离效果,结果 表明乙腈,磷酸盐缓冲溶液分离效果最好.在8min内即可 完成多菌灵的分离,获得了最优的色谱分离效果(图1). 100Oo0 80O0o 》 目6O00O 400oO 200o0 0 一 一 一 一 /\ 0246810 时间//min 图10.5ttg/mL多菌灵标准品的色谱分析结果 2.4方法学评价 2.4.1线性范围和检出限.配制一系列标准工作溶液,在选定 的色谱条件进行测定,结果表明,多菌灵在0.05,1.O0g,mL 范围内具有良好的线性,R?0.9999.以10倍信噪比(S/N) 为方法定量限(LOQ),经样品添加试验确定食用菌样品多 菌灵的定量检出限为0.05ms/ks. 2.4.2方法的回收率和精密度.采用经测定不含有多菌灵的 食用菌样品,分别进行添加回收率和精密度试验,样品中添 加不同浓度标准溶液,按该方法进行测定.在低,中,高的3 个添加水平范围内的平均回收率(每个添加浓度平行测定 6次)YJ85.5%,95.4%,相对标准偏差小于6.0%(表3). 2.5样品分析 应用该方法对市场上出售的20种食用菌样品进行了 分析测定,其中2种样品(香菇和黑木耳)中含有多菌灵,含 量分别为2.1mg/kg和1.6mg/kg.代表性样品图谱见图2.该 表3食用菌样品中多菌灵的添加回收率试验结果 方法快速简便,灵敏度高,重现性好,适用性强. 3结论 建立了固相萃取一高效液相色谱一荧光检测法测定食 用菌中多菌灵含量的方法,并进行了方法学验证.试验结果表 明,多菌灵的定量检出限为0.05me/ks,加标回收率为85.5% , 95.4%,相对标准偏差小于6.0%.该方法具有简便,快速, 灵敏度高的优点,可用于食用菌中多菌灵残留的检测. 4参考文献 【1]潘艳坤,劳燕文,谢一兴,等.固相萃取一高效液相色谱法对罗汉果及 58 其提取物中甲基托布津与多菌灵的同时测定[J】.分析测试, 2010,29(2):199. 『2l2卢业举,程静,聂磊.高效液相色谱法测定水果和蔬菜中多菌灵残留 量『J].理化检验:化学分册,2009,45(3):296. 【3】董爱军,杨鑫,马莺,等.食用菌中多菌灵残留的分散固相萃取/高效 液相色谱法测定[J】_分析测试,2010,29(6):573. 『4]辜雪英,仇满珍,刘云珠.高效液相色谱法测定柑橘中多菌灵,噻菌 灵,甲基硫菌灵和硫菌灵残留量阴.理化检验:化学分册,2010,46 (7):797. f51田宏哲,周艳明.高效液相色谱法对水果中多菌灵与福美双残留的 同时测定田.分析测试,2010,29(1):93. (下转第360页) 食品科学现代农业科技2011年第18期 袋口,放入冷凉处进行保存.二是腌渍贮存.该方法可以保 存野菜的风味和品质.贮存时间短时,只需洗净野菜后直接 将其加入2.0%,2.5%盐水中浸泡(1kg野菜用盐水量为2O, 25g).待食用时,用清水进行脱盐处理即可.贮存时间超过 6个月,宜选择2次腌渍法.第1次腌渍时,用盐量以野菜量 的20%-30%为宜,浸渍时间为10d;第2次用盐量以野菜 量的10%,15%为宜,并以饱和盐水(水盐比100:37)灌满缸 后加盖压石,腌渍时间为l0,l5d.食用或加工时,进行脱盐 处理即可. 5参考文献 f1】刘太珍.野菜的干制『J1_L东农机化,2005(5):35. f2】张卫明,肖正春,张广伦.我国野生蔬菜资源的开发利用研究『J].中国 野生植物资源,2009(3):4—8. 【3】兰波,秦文.鹿耳韭野菜干制加工工艺初探fJ1.四川食品与发酵,2005 (3):62—64. I曹宗波.浅谈野菜的开发与食用[J】.现代农业科技,2006(4):32—33. 【5]张雅稚.脱水野菜加工技术的开发与研究[J】.农业工程技术(农产品 加工业),2008(5):26—28. (上接第356页) 越深,说明枸杞橘子酒在常温时稳定,而当温度高于20? 时,其不稳定,所以其储藏最佳温度应该低于20?. 表2温度对枸杞橘子酒稳定性的影响 2.3pH值对枸杞橘子酒稳定性的影响 由表3可知,枸杞橘子汁pH值越低,总酸越高,发酵酒 颜色则越鲜亮,发酵结束后保留的橘子本身的颜色就越高; 当pH值大于4.0时枸杞橘子酒不稳定. 表3pH值对枸杞橘子酒稳定性的影响 2.4氧化剂,还原剂对枸杞橘子酒稳定性的影响 由表4可知,当加入较低浓度的亚硫酸钠时,枸杞橘子 酒的吸光度有所下降,说明酒中的有色物质在还原剂的作 用下发生了一定程度的降解,但随着Na2SO,添加浓度增大 时,枸杞橘子酒的吸光度变化不大.说明Na2SO,对枸杞橘 子酒具有保护作用.H:0:对枸杞橘子酒稳定性具有较强的 破坏作用,随H20:浓度的增大,枸杞橘子酒的吸光度逐渐 增大,酒的颜色加深.因此,枸杞橘子酒的储藏尽量避免与 氧化性的物质接触,添加适当的抗氧化剂. 2.5金属离子对枸杞橘子酒稳定性的影响 试验结果表明,无机离子zn,Fe,,Na+对枸杞橘子 表4氧化剂,还原剂对枸杞橘子酒稳定性的影响 酒没有明显影响;Cu,Ca2,A1对枸杞橘子酒吸光值有一 些增强作用;而少量Fe对枸杞橘子酒会产生严重影响,使 溶液由橙黄色透明状态变成褐色半透明状态.这说明枸杞 橘子酒对,Fe,Zn2+,Na稳定,对Fe3+,Cu,Ca2+,Al3+较敏 感.因此,使用和加工过程中应避免与铁,铜器皿接触. 3结论与讨论 枸杞橘子酒稳定性研究表明,枸杞橘子酒对光不稳定, 超过10d就开始有变化;常温下枸杞橘子酒的稳定性较好, 故可常温保存;pH值对枸杞橘子酒的稳定性影响较明显, pH值小于4时稳定,所以酒宜在pH值小于4条件下保存; 枸杞橘子酒在还原剂下稳定,在氧化剂下很不稳定,储藏要避 开与氧化性物质接触;其对,Fe",Zn,Na稳定,对Fe, Cu2+.Ca2~,A1敏感.因此,使用和加工过程中应避免与铁铜 器皿接触. 4参考文献 [1]潘咏梅.菠萝汁及加工,发酵过程中的风味变化的研究【D】.北京:北京 化工大学,2000. 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