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实验二培养基母液的配制及保存

实验二培养基母液的配制及保存实验二培养基母液的配制及保存实验二培养基母液的配制及保存一、目的要求了解并掌握植物组织培养中MS培养基母液、生长调节剂母液配制与保存的基本知识及操作规范，能根据配方准确计算各种药品的称取量。二、基本原理在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、有机物、铁盐、激素等分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱内保存。当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液即可。本实训以MS培养基为例，...

实验二培养基母液的配制及保存实验二培养基母液的配制及保存一、目的要求了解并掌握植物组织培养中MS培养基母液、生长调节剂母液配制与保存的基本知识及操作规范，能根据配方准确计算各种药品的称取量。二、基本原理在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、有机物、铁盐、激素等分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱内保存。当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液即可。本实训以MS培养基为例，学习培养基母液的配制方法。三、试剂与主要用具 (仪器、用具 1 电子天平(感量0.01g和0.0001g)、药匙、玻璃棒、称量纸、吸水纸、滴管、洗瓶、标签纸、烧杯(50ml、100ml、200ml)、容量瓶(100ml、200ml、500ml、1000ml)、试剂瓶(100mL、200mL、500ml、1000ml)、量杯、量筒、移液管、移液枪、洗耳球、电炉、冰箱等。 2(试剂 (1)95%乙醇、1mol/L NaOH、1mol/L HCl (2)MS培养基各成分试剂 (3)植物生长调节剂:2，4-D、6-BA、IAA、NAA等 (4)洗涤剂、蒸馏水四、方法步骤 1(大量元素母液的配制按照MS培养基配方的需要量，将各种化合物称量扩大10倍，用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。完全溶解后，按表 4-1顺序依次混合已溶解的化合物溶液，并搅拌，以免产生沉淀，注意最后加入氯化钙溶液，混匀，用量筒定容到500ml，倒入试剂瓶中并贴好标签。保存于4?冰箱待用。表4-1 MS培养基大量元素母液(10倍)的配制剂量配1L培养配方用量扩大母液体积称取量基吸取母母液化合物名称倍数 (mL) (mg) (mg/L) 液量(mL) 大 KNO1900 9500 3 NHNO1650 8250 43 量 MgSO?7HO 370 1850 42100 10 500 KHPO 170 850 24元 CaCl?2HO 440 2200 22 素 2(微量元素母液的配制按照MS培养基配方需要量，将微量元素各种化合物(如表4-2)扩大100倍，用万分之一的电子天平分别准确称取，用少量蒸馏水溶解，也可以混合溶解，混合后定容到500mL。将配制好的母液倒入试剂瓶中，并贴好标签，保存于4?冰箱中。表4-2 MS培养基微量元素母液(100倍)的配制剂量配1L培养基母液体配方用量称取量扩大倍吸取母液量母液化合物名称积数 (mg/L) (mg) (mL) (mL) ?4HO 22.3 1115 MnSO42微 ZnSO?7HO 8.6 430 42 HBO 6.2 310 量 33 10 KI 0.83 100 500 41.5 元 NaMoO?2HO 0.25 12.5 242 CuSO?5HO 0.025 1.25 42 素 CoCl?6HO 0.025 1.25 22 3. 铁盐母液的配制常用的铁盐是FeSO?7HO和Na-EDTA的螯合物，必须单独配制。配制时，422 的用量(如表4-3)，分别称取FeSO?7HO和Na-EDTA，分别溶按照扩大100倍422解后，将Na-EDTA溶液缓缓倒入FeSO溶液中(需加热溶解)，搅拌均匀使其充分24 螯合，用蒸馏水定容到500mL后贮放于棕色玻璃瓶中，贴好标签，保存于4?冰箱中。表4-3 MS培养基铁盐母液(100倍)的配制剂量配1L培母液体称取量养基吸培养基用扩大倍积母液化合物名称取母液量(mg/L) 数 (mg) (mL) 量(mL) -EDTA 37.3 1865 Na210 铁盐 100 500 FeSO?7HO 27.8 1390 42 4(有机物母液的配制按照表4-4 中各成分浓度扩大100倍后的用量，用感量0.0001g电子天平分别称量各有机物。分别溶解定容后装入试剂瓶中，也可以混合溶解定容，装入同一试剂瓶中，写好标签，放入冰箱中保存。一般有机物都溶于水，但叶酸(VBc)先用少量稀氨水或1mol/L NaOH溶液溶解;V(生物素)先用1mol/L NaOH溶H 液溶解;V、V、V应先用95%乙醇溶解，然后再用蒸馏水定容。 AD3B12 表4-4 MS培养基有机物母液(100倍)的配制剂量培养基用配1L培养基母液称取量扩大倍量吸取母液量母液有机物名称体积数 (mg) (mL) (mL) (mg/L) 甘氨酸 2.0 100 盐酸硫胺素0.1 5 有 (VB1) 10 机盐酸吡哆素0.5 100 500 25 (VB6 ) 物烟酸 0.5 25 肌醇 100 5000 注:表中各成分的扩大倍数与称取量仅是举例，可以根据各实际需要，确定扩大倍数、计算实际称取量。 5(激素母液的配制激素母液必须分别配制，浓度根据培养基配方的需要量灵活确定，一般是 0.1,2mg/ml，根据需要确定配制的浓度。称量激素要用感量万分之一天平。配表4-5。制激素母液时应注意，各激素的溶剂不同，具体见表4-5 常用植物激素及生长调节物质的溶剂中文名缩写溶剂 2，4-二氯苯氧乙酸 2,4-D NaOH/乙醇吲哚乙酸 IAA NaOH/乙醇吲哚丁酸 IBA NaOH/乙醇 α-萘乙酸 α-NAA NaOH/乙醇 6-苄基氨基腺嘌呤 6-BA NaOH/ HCl 腺嘌呤 Ade HO 2 激动素 KT HCl / NaOH 玉米素 ZT NaOH 赤霉素 GA 乙醇脱落酸 ABA NaOH 注:称取10mgNAA溶解后定容至100ml，即得到0.1mg/mlNAA贮备液。称取100mg 6-BA溶解后定容至100ml，即得到1mg/ml6-BA贮备液。激素称配量(mg) 定容体积(ml) 浓度(mg/ml) 6(在配制母液时应注意: (1)培养基各试剂应使用分析纯，用蒸馏水溶解及定容。 (2)在称量时应防止药品间的污染，药匙、称量纸不能混用，每种试剂使用一把药匙，多出的试剂原则上不能再倒回原试剂瓶。 (3)使用电子天平时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用洗耳球将天平内的脏物清理干净。 (4)母液配制好后，贴上标签，标明母液名称、试剂浓度或扩大倍数、配制日期，并存放在4?冰箱中。使用前，要进行检查，若发现试剂中有絮状沉淀、或长菌、或铁盐母液的颜色变为棕褐色，都不应再使用。五、结果与分析 1 为什么要配制培养基母液, 2 在配制培养基时，配制1升MS基本培养基应吸取本实验中所配制的四种混合母液各多少毫升, 3仔细观察在配制母液过程中的现象与遇到的问题，如是否产生浑浊或沉淀，并分析出现混浊的原因。

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