脂质体包封率的测定方法

脂质体包封率的测定方法 , ,, , ,,, ,,,, ,,,, ，,,( ( 中南药学 , ,, ,,, , , , , ; (,,; , , ,,,, , , ,年 ,月第 ,卷第 ,期 脂 质 体 包 封 率 的 测 定 方 法 ,，奉 建 芳 邵红 霞 , ,，龙 晓英 ((广东药学院，广州 , ,, , , ,; (上海医药工业研究院(上 , ,, , , , 海 , ,; (上海 中 医药 大 学 ，上 海 , , , , ,, ) 关 键 词 :脂 质 体 ; 包封 率??,, 中图 分类 号 :, , 文献 标 识 码 :, , ,, , ,, ),—, ,, 文章 编 号 :,, —, ,( , , ,, ,—, 脂 质 体 系指 将 药 物 包 封 于 类 脂 质 双分 子 层 内而 形 成 的 微 ,, , ,流 份 ，每 份 , ,,，，脂 质 ? , ，用 , ,洗 脱 ，收 集 , ( 型泡囊 。脂质体的包封率是包封 于脂质体 中的药物量 占脂质 , , ,管 , 体 在 , , 管 流 出 ，第 , 的 浓 度 最 大 。游 离 药 物 从 第 , 体 系 中药 物 总量 的百 分 比 。也 有 人用 测 定 包 封 体 积 来 表 征 脂 , , 管 开 始 流 出 ， 主要 集 中 在 , , , 管 ， 因 够 分 离 脂 质 体 质 体 的包 封特 性 。包 封 率 是 评 价 脂质 体 此 能 制 剂 质 量 好 坏 的 最 重 和游离药物。作 者还 考查 了药物 和脂质 体在 柱子 中的 回收 要 的指标之一 ，也 是脂质 体能否 发挥较普 通制剂 高效 、低 , , 率 ，脂 质体 的柱 回收率 约为 , ，其 损失 的 , 可能是 由 毒特点的关键〔 。因此 ，研究脂 质体 时，包封率是一个重要 于 一 些 聚 集 粒 径 脂 质 体 被 截 留在 柱 的顶 端 没 有 洗 脱 下 如 的考 察 的 大 项 目 。包封 率 的测 定 方 法 一 般 是先 用 一 定 的方 法 ( 来。柱 层 析 法 、透 析法 、超 速 离 心 法 等 )把 未 包 封 的游 离 药 物 与 , 微 柱 离 心 法 脂 质 体 分 离 开 并 进 行测 定 后 ，根 据 总 投药 量计 算 得 出 。或 分 由于 葡 聚 糖凝 胶 柱 法 在 分 离 脂 质 体 与 游 离 药 物 时洗 脱 液 离 后 测 定 包 封 于脂 质体 内 的药 物 量 与 磷脂 的 比例 ，计 算 药 脂 对 脂 质 体 进 行 了 大量 的稀 释 ，这 可 能 导 致脂 质体 的渗 漏 ，从 比 。本 文 综 述 了 近 年来 脂 质 体 包 封 率 的 测 定方 法 。 而 使 测 定 的 包 封 率 不 准 确 ，故 在 葡 聚 糖 凝 胶 柱 法 的 基 础 上 ，, 分 子排 阻 色谱 法 , , , ,提 出 了微 柱 离 心 法 。基 本 步 骤 , 是 :? 首 先 把 溶 胀 好 的 分子排阻色谱是利用脂质体 与游离药物分子质量和粒径 凝 胶 装 入 去 塞 加 滤板 的 注 射器 中 ，在 一 定 的条 件 下 离 心 ，去 大小 的差 异 进 行 分 离 ，较 广 泛 地 用 于 测 定 脂 质 体 的包 封 率 。 掉 离 心 液 ，制 备 干 燥 的 凝 胶 小 柱 ;? 将 样 品 加 入 小 柱 的 顶 分子 排 阻 色 谱 常 用 的 分 离 介 质 是 葡 聚 糖 凝 胶 和 琼 脂 糖 凝 胶 ， 部 ，离心 ，使脂 质体离心下来 ;?用洗脱液多次离心洗脱 把 把其装入柱子 中分离游离药物与脂质体 ，故也称为凝胶柱法 游 离 的药 物 离 心 下 来 。这 种方 法 的优 点 是 在 最 初 的 离 心 中 已 或柱 层 析 法 。其 基 本 方 法 是 先将 溶 胀 好 的凝 胶 装 入 柱 子 中 ， 除去 增 加 脂 质 体 体 积 的 过 量空 白溶 液 ， 因此 不 经 稀 释 即 可 重 用洗 脱 液 冲洗 柱 子 至 平 衡 后 ，将 脂 质 体 上 柱 ，洗脱 。脂 质 体 新得到脂质体 。但是该法 是建立 于脂质体不被填充物物理滞 由 于 粒径 较 大 先 被 洗 脱 下 来 ，而游 离 的药 物 粒 径 较 小 ，渗 透 留 的假 设 之 上 ，应 事 先 检 验该 假设 。到凝胶的内部空 隙，较后被洗脱下来 ，使得脂质体与游 离药 , ,〕 药 王汀 ,等 用 微 柱 离 心 一 脂 比 法 测 定 脂 质 体 的 包 封 率 ， 物分开。 ,制 备 离 心 小 柱 ， 首先 用 ,,,的 注射 器 装 入 葡 聚 糖 凝 胶 ,, 种 高 晓 黎 等 用 , 不 同 型 号 的 葡 聚糖 凝 胶 ，采 用 正 交 设 然后 考查 了小 柱 对 脂 质 体 药 物 的 分 离 作 用 和 影 响 因素 ，实 验 计 法 (对 测定 替 加 氟 脂 质 体 包 封 率 的 条件 进 行 了筛 选 (实 验 证 明 不 同 的药 物 性 质 ，可 能 造 成 脂 质 体 与 游 离药 物分 离 不 完 结 果 表 明 葡 聚 糖凝 胶 的径 高 比 、洗 脱 流速 、上 样 量 都 影 响 脂 全 ，离心 条件 不 同洗 脱 程 度 不 同 ，最 后 采 用 测定 药脂 比计 算 质 体 与 游 离 药 物 的 分离 效 果 ，且 ,种 凝 胶 中 以 粒 径 为 ,, , , 亲水性盐酸拓 包封率。在作 者所考查 的三种性质不同药物 〔 , , , , ,, , ; ,, ,, 的 , , , , ( ,最 适 于 脂 质 体 包 封 率 的 测 , 、亲脂 性 氟 吡 咯 芬 ( , ) 扑替康 ( , ) , , 、亲 水 定 。 , 亲 脂 性 酮 洛 , ,,,,等 , 用 带 有 蠕 动 泵 系 统 的 ,, ,, , 柱 分 离 ,, ,？ , , , ,, ,, , ,, ) 、相同脂 质组成 的脂质体 中，凝胶对性质相似 的 芬 ( ,〕 ,脂质体和游离药物白细胞介素一 ，所用 的柱 长为 , ,，流 ,; 不 同药 物 的 吸 附作 用 并 不 相 用 前 必 须 考 查 使 用 条 件 。 ( ,,, ,,一 洗速 为 , 同 ，使 , ? , ， 脱 液 为 枸 橼 酸 缓 冲 液 ，上 样 前 先 秦 晶等 用 微 柱 离 心 法测 定 了 阿魏 酸 脂 质 体 的包 封 率 研 究 中 用 空 白脂 质 体 饱 和 凝 胶 ，之 后 用 荧 光 法 测 定 游 离药 物 与包 在 发 现 ，离 心 转 速对 微 型凝 胶 柱 的分 离 能 力 有 很 大 影 响 ，转 速 脂 质体 中 的药 物 ，算 出 包 封 率 。用 空 白脂 质 体 预 先饱 和凝 胶 过 高 或 过 低 均 容 易 引起 凝 胶 柱 的 断裂 ，且 转 速 过 高 会 减 小 阿 ,, , , 的 目的是为 了消除凝胶对脂 质体的 吸附作用 。,,,,,;, 魏酸 的洗脱体 积 ，从而 导致脂 质体 和游 离药 物分 离效 果不 等 【用 凝 胶 柱 分 离 游 离 的 槲 寄 生 凝 集 素 ( ,,)和 包 封 在 脂 好 。 除 了用 葡 聚 糖 凝 胶 制备 离 心 小柱 外 ，张 乐 乐 用 阳离 子 质 体内的 ,， , ，所 用 的 柱 子 为 , ,,,,,， , ， ，流速 为 ,,, ,, 交换树脂制备离心小柱 ，测定羟基喜树碱 长循环脂质体 的包 , , , , , ,,, , , :, ,, , , , , ,( ,,; 作 者 简 介 :邵 红霞 ，女 ，硕 士研 究生 ，主 要 从 事 药 物制 剂 ，,,: (, ) , , ,, —, ，,,,, ,, , , , ,, , ,,(, ,通 讯 ,: ,, , , , , , : , , , , , , , , 作 者 :龙 晓 英 ，女 ，教 授 ，硕 士 生 导 师 ， 主 要 从 事 新 剂 型 及 新 技 术 的 研 究 ， , , ( , ) , , , , ，, , ( , ) , , , , ， ,,, : , , , ,, , (, ,, , , , , , , ; , ,,年 ,月第 ,卷 第 , 中南 药 学 ,, 期 ,,, , ,,, ,,,, ,,, , ，, ,,, ( , ,,, , , ,, ;( ,,; , , ,( , ,封率 。具 体 方法 足 将 处 理好 的树 脂 装 入 注射 器 中 ，上样 后 用 从 而 沉 降速 度 不 同 ，达 到 分 离 的 目 的 ，用来 测 定 包封 率 。 用 纯 水洗 脱 ，游 离药 物 吸 附 在 阳离 子 树脂 上 不 能 洗 脱 下 来 ( 而 离心法测定包封率分为超速离心和低速离心两种 。脂质 体 被 洗脱 下 来 (接取 定量 洗 脱 液 ，与总 药 量 相 比 ，计 算 ,, ,等 : , , ,, ,采用 超速 离心法评 价羟基喜树碱脂 质体 包封 牢 。 一, , 的包封率 ，取一定量稀释 ,倍的脂质体放人 ， , 型超 速 , 透 析 法 , , , ? , , 离 心 管 中 ，在 ,?条件 下 ，, ,,,, ,, 离 心 , ，分 离 透 析 法测 包 封 率 分 为 透析 法 和 反 透 析法 两 种 。透 析法 是 游 离 药 物 与脂 质 体 ，以未 离 心 前 的样 品计 算 总 药 物量 ，离 心 把 药物 放 人 一定 截 留分 子 量 的透 析 袋 中 (再 把 透 析 袋 置 于 比 , , ,等, 在 ( , 后的上清液为游 离药 物量 ，计算 包封 率。, , , 它体 积 大 许 多倍 的透 析 介 质 巾 ，游 离 药 物顺 浓 度 梯 度从 透 析 ,? 条件 下 ，, , ? , 超 速 离 心 ,, , ,, ,, ,, (并 用 去 离 子 水 袋 内渗 透 到透 (而脂 质 体 由于粒 径 较 大 而 不 能 渗透 到 次 洗 涤 , ，合 析袋 外 并 离 心 的滤 出 液 用 于测 定 游 离 药物 的量 ，用 破 外部 介 质 。然 后 在 不 同 的时 间测 定介 质 中 的药 物 浓 度 ， 直 乳 剂 破坏 脂 质 体 释 放 出包 封 的药 物 ，包 封 的 药物 量 比包 封 药 至外部 介 质 中 的药 物 浓 度 不 变 ，则 说 明 透析 袋 内外 游 离药 物 采用 低速 , 封率 。陆伟根等,的浓 度相 同 (达到 平 衡 (此 物与游离药 物的和 ，计算得包 时 的时 间 作 为游 离 药 物 透 析平 衡 离心的条件，测定草乌甲素多囊脂质体 的包封率，作者考察 时 问 。测 出此 时介 质 中 的 药物 浓 度 计 算 游 离 药物 的浓 度 (进 , 了离 心 强 度 对 包 封 率 的 影 响 ，最 终 选 用 的 转 速 为 ,, ,?而 计算 出包 封 率 。 , , ,, 离心 ,,,，用 离 心 后 的 上 清 液 测 定 游 离 药 物 浓 度 ， , ,,,, 用 透 折 法 测 定 了 苯 佐 卡 因脂 质 体 的 包 封 ,,, , ,,等 用 离 心 法 测 定 蒿 甲醚 脂 计 算 包 封 率 。 , , , , , ,的 ,率 (,,,的 苯 佐 卡 因 脂 质 体 放 入 截 留 分 子 量 为 , , 质 体 的 包 封 率 中 ，将 脂 质 体 水 溶 液 ,, ,, , ?,, 离 心 , , , 乙透 析 袋 巾 ， 把 透 析 袋 放 入 ,, ,,水 一 醇 ( ,:, , , ,)溶 , ,,，取 上清 液 测 定 ，得 游 离 药 物 的量 ，脂 质 体 用 乙 腈 破 乳 液 介 质 巾 ，并 在 转 速 为 , ?,, 的 磁 力 搅 拌 下 透 析 ， ,, , 后 同条 件 离心 ，取 上 清 液测 定 ，得 总 的药 物 量 ，从 而 计 算 包 于 不 同 的 时 问 取 样 并 补 充 等 量 的 透 析 介 质 ，直 至 取 样 的 封率 。浓 度 恒 定 停 止 取 样 (用 总 的 药 物 浓 度 减 去 分 散 到 介 质 中 超速离心法测包封 率时转速 比较 高，对温度有一定的要 的 最 终 药 物 浓 度 作 为 包 封 在 脂 质 体 内 的 药 物 浓 度 ，算 出 求 ，故 对 离心 机 的 要求 比较 高 ;且超 速 离 心 和 稀 释都 可 能 导 ,,,等 用 透 析 法 测 定 ,药 物 的包 封 率 。 , ; ,,脂 质 体 的 致 渗 漏 。但 低 速 离 心 仅适 用 于 一 些粒 径 比较 大 的 脂质 体 。 ,, ,的 透 析 袋 中 ，蒸 包 封 率 (样 品放 人 截 流 分 子 量 为 , , , 超 滤 离 心 法 (更 换 透 析 液 ，透 析 , 馏 水 作 为 外 部 介 质 (先 透 析 ,, ,, 如 果脂 质 体 与 游 离 药物 的粒 径 大小 无 重 叠 ，可 以用 超 滤 后 ，取 出 透 析 袋 内 的 样 品 计 算 包 封 的 药 物 量 ( 用 未 透 析 离 心 法 分 离 ，超 滤 离 心 法 很 适 用 于 分 离 水 溶 性 药 物口 。测 的 样 品 计 算 总 的 药 物 量 ，两 者 之 比为 包 封 率 。 定 方 法 是将 一 定 量 脂 质体 放 人 特 定 的超 滤 管 中 ，再把 超 滤 管 在 透 析 过 程 中外 部 介质 对脂 质 体 周 围 的游 离 药 物 稀 释倍 放 人 配 套 的离 心 管 中 ，一定 转 速 下 离心 一 .