透射电镜超低倍观察植物材料的制样方法
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江苏农学院
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实验室技术?
透射电镜超低倍观察植物材料的制样方法
项晓人袁莉杭向前午一了/
形态结构的研究工作中光学显微镜视
野大.但分辨率差,电子显微镜虽然分辨
率很高,但又受到视野小的限制.植物超
微结构的研究工作中,由于植物细胞远大
于动物细胞,以一般倍率的电镜观察,更
感视野小,
分析
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图象有所不便.运用透射
电镜超低倍观察,可弥补光,电镜两方面
的不足,既可获得较大范围的跚察槐野.
又可获得较高的分辨率.为此,我们参考
动物超低倍观察的切片技术”,根据担
物材料的特点,摸索出植物供超低倍暇镜
观察的超薄切片的制样方法..
1方法和步骤.’
取丝瓜卷须和三叶草叶片.4%戊二醛
前固定2lI,H7:的磷酸缓冲液浸洗3瓦
每次15rain;2%饿酸后固定211,浸洗肯皓
同前.梯度丙酮脱水,50%,70%,80%,
90%,95%每级1次,每次20rain,100%丙
酮脱水2次,每次30min.包埋剂采用环氧
树脂6.8与Epon812按2:l体积比混台配
方,其中DDSA每10ml包埋液减少
0.5ml,MNA则相应增加0如Il口配好包埋
液后,纯丙酮与包埋液3:ll:1,1:3
浸透,37?下每步2h,纯包埋液37?下浸
透4,12h.最后常规包埋,聚台.聚台完成
后两周切片.取50或100目铜陶复
Formvar膜后行亲水化处理.样品修块
面积为0.8xlmm,普通玻璃刀中.右侧刀
刃切片,片厚70~90nm,氯仿薰片,采
用提贴方式捞片.常规醋酸双氧铀,枸椽酸
铅双染色,H-300电镜250倍,700倍观
察,拍照.
收稿日期:192-24.
2结果与讨论
在电镜超低倍250倍下观察,切片大
而平整,整张切片没有一丝折叠.移动视
野观察,丝瓜卷须的表皮,厚角组织,维
管束,薄壁组织等排列层次及相互毗邻关
系清晰可辨.三叶草叶片的上,下表皮,
叶肉组织,气孔,小脉的排列层次和相互
毗邻关系亦十分清楚.700倍观察,丝瓜
卷须维管束横切面可清楚地观察到木质部
的导管,韧皮部的筛管,伴胞及薄壁组织
等结构,甚至筛管中叶绿体的片层,伴胞
细胞质中的小液泡都能清晰地观察到,图
版一l1.三叶草叶片的横切面可观察到表
皮.气孔,叶肉组织,小脉等结构.叶肉
细胞结构保存良好可分辨出其中叶绿体的
片层,淀粉粒,原生质,小液泡等.小脉
中木质部分予,筛分子,伴胞及中间细胞
结构各异,亦可清楚地识别出,图版一2.
植物材料由于其生物杼陛,制样,切片
往往难于动物材料.在制样中我们适当延长
了固定.脱水.尤其是浸透的时间,以便使
植物材料自日得到良好的固定和完全的浸透;
选择包埋液的配方和适当调整DDSA与
MNA的比例,是为了能适应南方潮湿的气
候和使包埋块硬度与植物材料的硬度相适
应:加上用玻璃刀的中,右侧刀刃切片,便
能得到较好.较大的切片.亲水化处理铜网
和采用提贴方式捞片能使切片在贴附铜同时
不产生折叠.便于超低倍观察.拍照.该法
制出的切片有以下优点:1.面积大而没有皱
折,观察
内容
财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容
多:2相同倍率下电镜超低倍
观察的分辨率优于光镜:3.若切片厚度在
走
二
之一
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丫眦
耖帆
一
掺,
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江苏农学院第l4卷
70nm左右,还可进一步放大进行超微结构
的观察,以弥补光,电镜之间巨大的倍率
差,图版一3,4.使研究人员能先识别出组
织结构.然后逐步进入超微结构内容,便于
观察与分析.
图版说喊1.丝瓜卷须维管束韧皮部超低倍电镜观察图能V术质部导管,ST韧皮部筛管,Pa伴胞
及薄壁组织,t细胞内质体,t伴胞中的t}葭渔’700虫.2.三叶草叶片超低倍电镜观察图像,Epi表
皮,st气孔.MC叶肉细胞,t可见到原生质,i蠹枢,叶绿体片层及淀粉粒的叶内细胞,t小脉.700
×.3.70nm切片的电镜图像,2000×.43的进一步放大像,’30000×.
参考文献
1李椒荣等.超低倍透射电镜切片技术.河北医学院,199t;l2(3):142
2田中敬一等.图说走查电子显镦镜朝仓书店,1980
3王文等.超薄切片玻璃刀涮作技术及使用方法撵讨电子显徽,1991;l0(3):307
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(蝙提:张立元)
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