临床免疫学检验

临床免疫学检验 一、免疫球蛋白检测 •概念:免疫球蛋白(Ig)是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统称。由浆细胞产生，存在于机体的血液、体液、外分泌液和某些细胞的膜上。 (一)分类 •按重链性质分:IgG、IgA、IgM、IgD 、 IgE IgG •于出生后三个月开始合成， 3—5岁接近成人水平。是血液中含量最高的Ig，占血清总Ig的75%—80%，是抗感染的主要抗体。是唯一能通过胎盘的抗体。IgG增高是再次免疫应答的标记。 IgA •分为分泌型和血清型，分泌型IgA是主要存在于母乳、唾液、泪液、胃肠液、支气管分泌等外分泌液中，是粘膜局部免疫的最重要因素，血清型占总Ig的10—20%。 IgM •是分子量最大的Ig。占血清Ig的5-10%。是个体发育过程中最早出现的抗体，在胚胎发育晚期的胎儿即能产生IgM。在机体受抗原刺激后，是最先产生的抗体。IgM是血管内抗感染的主要抗体。 IgE •是正常人血清中含量最少的Ig。约0.1—0.9mg/L。占总血清Ig的0.002%，为亲细胞抗体。参与?型变态反应,与寄生虫病及皮肤过敏有关。 (四)临床意义 ?免疫球蛋白增高 •(1)单克隆免疫球蛋白增高(M蛋白血症)，即IgG、IgA 、IgD 或IgE增高。 见于:多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴样异常增生性疾病等。 •(2)多克隆免疫球蛋白增高 ?感染:特别是慢性感染如细菌、寄生虫、螺旋体感染，可见IgG、IgM增高 ?自身免疫性疾病:SLE以IgG、IgA或IgG、IgM增高多见，类风关以IgM增高为主 ?慢性肝病:IgG、 IgA 、IgM可增高，慢活肝IgG、IgM增高明显 •?IgE增高:见于IgE型多发性骨髓瘤、变态反应性疾病、寄生虫病及皮肤过敏、急慢肝、肾综 ?免疫球蛋白减少: IgG,6.0g/L，IgM、IgA,0.4g/L •(1)先天性:见于先天性无丙种球蛋白血症、先天无胸腺症 •(2)获得性: •见于?大量蛋白丢失性疾病:肾综、剥脱性皮炎 ?中毒性骨髓病、白血病 ?淋巴网状系统肿瘤:淋巴瘤、霍奇金病 ?长期使用免疫抑制剂 ?Ig减少易引起反复感染 •IgG缺乏:易患化脓性感染 •IgM 缺乏:易患革兰氏性阴败血症 •IgA缺乏:易患呼吸道感染 二、血清M蛋白检测 , M蛋白是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖时产生的，具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子或其分子片段。 M蛋白检测的临床意义 ,多发性骨髓瘤 ,巨球蛋白血症 ,重链病:α型、γ型、μ型 , 半分子病:一条重链+一条轻链 ,恶性淋巴瘤 ,良性M蛋白血症 二、补体检测 •补体是人或动物血清中的一组具有酶活性的糖蛋白，在机体免疫系统中发挥抗感染和免疫调节的作用，也参与免疫病理反应。 ? CH50临床意义 •主要反应补体经典激活途径的溶血功能，其结果与C1-C9各组分的量和活性均有关 •增高见于:急性炎症、组织损伤 •降低见于:?急、慢性肾小球肾炎 ?各种自身免疫病 ?感染性疾病 ?作为判断肝病严重程度的指标 ? C测定的临床意义 1q ,是补体经典途径激活的始动因素 ,增加:见于骨髓炎、类风关、痛风 ,降低:见于SLE、肾小球肾炎、肾病综合症、重度营养不良 ? C3测定的临床意义 ,补体中含量最高，是经典途径和旁路途径的关键物质，也是一种急性时相反应蛋白 ,增高见于:急性炎症或传染病早期、急性组织损伤、恶性肿瘤、移植排异反应 ,降低见于: ?补体合成能力降低:慢性肝病、肝坏死 ?补体合成原料不足:营养不良 ?补体消耗或丢失太多:急性肾小球肾炎链球菌感染后肾炎、狼仓性肾炎、SLE活动期、化疗后 ?先天补体缺乏 •? C4测定的临床意义 •增高:见于各种传染病、急性炎症(如急性风湿热、皮肌炎、关节炎等)和组织损伤等 •降低:见于自身免疫性肝炎、狼仓性肾炎、SLE、类风关、IgA型肾病等 •在SLE，C4的降低常早于其他补体成分，且缓解时较其他成分回升迟 •?B因子测定的临床意义 • 主要反应补体旁路途径的溶血功能 •增高:见于某些自身免疫性疾病、肾综、慢性肾炎、恶性肿瘤 •降低:见于肝病、急性肾小球肾炎、自身免疫性溶贫 •三、细胞免疫检测 •免疫细胞 • 泛指执行机体免疫功能的各种细胞，主要包括T、B和NK细胞等与免疫应答有关的细胞。 • 不同的细胞群或亚群各有其不同的 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面标志和功能，可反映机体的细胞免疫状态或功能 • •细胞免疫检测的应用 •自身免疫性疾病、免疫缺陷病、肿瘤患者治疗前后细胞免疫功能的检测 •骨髓移植和器官移植过程中免疫功能监护 •感染性疾病和变态反应性疾病的免疫功能监测 •某些疾病的发病机制研究 • •T细胞抗原标记: CD2、CD3、CD4、CD5 、CD7、 CD8 •B细胞抗原标记: CD10、CD19、CD20、CD21、CD22 •髓系(粒-单系)抗原标记: CD11b、CD31-36、CD64、CD68、CD13、 CD14、CD15、MPO •巨核系抗原标记: CD41a、CD41b、CD42b、CD61 •干细胞抗原标记:CD34 •祖细胞抗原标记:CD38 •红细胞抗原标记;CD71、血型抗原A、H •非谱系抗原标记:HLA-DR 急性白血病免疫分型 分型基础:正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆 或胞核抗原的出现，表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细 胞系列及其分化程度相关的特性。这些细胞表面和细胞浆内的抗原随着分化成熟过程不断发生改 变，称为造血细胞分化抗原。分化抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。 一、T淋巴细胞表面标志检测 1. E玫瑰花结形成试验:CD2+ 2.T细胞分化抗原测定: CD3+、CD4+、CD8+ 免疫荧光法和流式细胞术 CD3+检测的临床意义: ,总T淋巴细胞的重要标志 ,评价免疫缺陷症及白血病、淋巴瘤的分型诊断 ,自身免疫性疾病如SLE、类风湿关节炎等的免疫调节治疗 ,器官移植或骨髓移植时免疫监测及指导免疫抑制治疗 CD3+CD4+检测的临床意义: ,辅助、诱导T淋巴细胞的标志 ,机体免疫功能检测 ,白血病、淋巴瘤的分型诊断 ,免疫抑制治疗效果评价 ,病毒感染性疾病时常降低 CD4+绝对计数 是HIV(+)者/AIDS诊断和分型指标之一。 HIV(+)者分型: 6 一期:>500×10/L; 6 二期:(200-499) ×10/L; 610 三期: <200×/L CD3+CD8+检测的临床意义 ,抑制、杀伤性T淋巴细胞的标志 ,病毒感染性疾病时常增高 CD4+/CD8+减低:常见于爱滋病、恶性肿瘤进行期及复发时 CD4+/CD8+增高:在器官移植时预示可能发生排斥反应、自身免疫病 •二、B淋巴细胞表面标志检测 •1.B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白测定:SmIgM、 SmIgD • 免疫荧光法、流式细胞术 •2.B淋巴细胞分化抗原检测:CD10、CD19、CD20、CD21、CD22、CD40 • •二、B淋巴细胞表面标志检测临床意义: •1.B淋巴细胞膜表面仅表达SmIgM则为未成熟B淋巴细胞，而同时表达SmIgM、 SmIgD则为成 熟B淋巴细胞 •2.SmIg+细胞增多:慢淋、毛细胞性白血病、巨球蛋白血症 •3.SmIg+细胞减低:体液免疫缺陷如丙种免疫球蛋白缺乏症等 •4.CD19为全部B淋巴细胞共有的表面标志 • CD19增高见于B淋巴细胞系统的恶性肿瘤 • CD19减低见于体液免疫缺陷病 三、淋巴细胞亚群功能检测 淋巴细胞转化试验: 1. 形态学方法:有丝分裂原: T淋巴细胞---植物血凝素、刀豆蛋白A、美洲商陆 B淋巴细胞---美洲商陆、葡萄球菌A蛋白 淋巴细胞亚群功能检测临床意义: ? 反映机体的细胞免疫功能水平; ?估计疾病的疗效和预后 ?NK细胞的免疫检测 ?数量检测——免疫荧光法、流式细胞术 CD16+56 ?功能的检测—— ,NK细胞活性测定:酶释法、 放射性核素法、免疫荧光法 ,抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)测定: ?NK细胞的免疫检测临床意义 1. NK细胞活性增高:病毒感染早期、器官移植患者 2. NK细胞活性减低:恶性肿瘤、AIDS、联合免疫缺陷病 3.抗肿瘤疗效观察和预后评价 4.免疫调节功能:释放IFN-γ、TNF-β 等，增强抗感染和免疫监视能力 第三节 感染免疫检测 一、血清抗链球菌溶血素“O”试验(P434) ,链球菌溶血素“O”是 A群溶血性链球菌产生的溶血外毒素，可刺激机体产生特异的抗链球菌溶血 ASO) 素“O”( ,临床意义 1. 链球菌感染1周后ASO开始升高，4-6周达高峰，以后逐渐下降，在体内可持续存在数月甚至 数年 2. 增高见于:风湿性疾病、急性肾小球肾炎、扁桃体炎 3正常人血清中可存在ASO 二、伤寒和副伤寒沙门菌免疫检测 1.肥达反应(WR):利用伤寒和副伤寒沙门菌菌液为抗原，检测患者血清中有无相应抗体的一种凝 集试验。 参考值 :直接凝集法 伤寒 “H”,1:160;“O”,1:80。 副伤寒 甲、乙 、丙都,1:80。 肥达反应的临床意义 ,WR阳性一般出现在伤寒发病后一周，阳性率10%;第二周上升为60-70%;第四周可达90%以上。 ,单份血清抗体效价“O”,1:80及“H”,于1:160者有诊断意义; ,若动态观察，WR持续超过参考值或较原效价升高4倍以上者更有价值。 ,“O”不高，“H”升高见于预防接种后或非特异回忆反应 ,“O”升高，“H” 不高见于感染早期或其他沙门菌感染 2.伤寒和副伤寒沙门菌抗体IgM测定 参考值: ELISA法正常人为阴性或滴度,1:20 临床意义:发病后一周即可出现升高，有早期诊断价值，若其滴度,1:20对诊断伤寒带 菌者也有意义。 3(伤寒和副伤寒沙门菌可溶性抗原测定 参考值 : 胶乳凝集法为阴性 临床意义:阳性对确诊沙门菌感染更有重要意义 三、梅毒螺旋体抗体检测(P438) ,初筛试验(非特异性反应素):快速血浆反应素试验(RPR)、不加热血清反应素试验(USR) 美国性病研究实验室实验(VDRL) 确诊试验(特异性抗体):梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)、 荧光螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS) ,临床意义: 1.USR、RPR法:感染梅毒螺旋体后1-2周检出率为76,，二期梅毒为95-100%，晚期梅毒为70-95%，隐性感染期为70-80%， SLE、疟疾、结核、瘤型麻风病等可出现阳性反应。可作定量，用于疗效观察。 2.筛选试验阳性的情况下必须做确认试验，阳性可肯定梅毒的诊断。确诊试验灵敏度高，特异性强，不受药物治疗的影响，特异性抗体可持续数年甚至终身。不能用于疗效观察。 四、TORCH试验 ,TO:刚地弓型虫 ,R:风疹病毒 ,C:巨细胞病毒 ,H:单纯疱疹病毒?型和?型 ,这组病毒常引起围产期感染，导致流产、早产、死胎和各种异常，目前已作为妇产科产前常规检查项目 五、C反应蛋白(CRP)(P439) ,能与肺炎链球菌C多糖发生反应的急性时相反应蛋白 ,细菌感染，尤其G-杆菌感染， CRP明显增高;病毒感染不增高或仅轻度增高 ,风湿热的疗效观察:急性期或活动期CRP增高可达200mg/L静止期恢复正常。 ,判断组织损伤的敏感指标:器质性损伤CRP增高，功能性损伤CRP正常。 ,器官移植后疗效观察指标:排异反应时CRP增高 ,超敏CRP对急性冠脉综合症的诊断和危险性评估有意义 第四节 自身免疫检测 ,自身免疫耐受:在正常情况下，机体的免疫系统对自身抗原表现为不应答 ,自身免疫: 当某些原因消弱或破坏正常的自身耐受时，免疫系统即会对自身组织或成分产生免疫应答 ,自身免疫病:指由自身免疫应答而产生的疾病 ,自身抗体: 指针对自身组织或成分产生的抗体 ?类风湿因子(RF)测定 ,类风湿因子是由变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性疾病患者的血清或关节液内。它有IgM型，也有IgG、IgA、 IgD和IgE型。 ,检测方法:胶乳凝集法、免疫比浊法、RIA、ELISA法 ?类风湿因子(RF)测定临床意义 1.类风关(RA)时，阳性率可达79.6%，高滴度RF支持对早期RA的诊断，RF滴度与临床表现正相关 2.SLE、多发性硬化、干燥综合征时可见阳性 3.部分老年人可见RF阳性 ?抗核抗体检测 ,概念: 抗核抗体(ANA)指抗各种核成分[脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、和可提取的核抗原(ENA)等]自身抗体的总称。ANA的性质主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD，无器官和种族的特异性， ANA主要存在于血清中，也可以存在于其他体液如滑膜液、胸水和尿液中。 ,抗核抗体(ANA)检测可作为自身免疫病的筛选试验 ?抗核抗体检测 ?抗DNA抗体检测临床意义: •抗dsDNA抗体:为SLE特征性标志抗体，特异性95-100%，敏感度30-50%，抗体滴度与疾病活动度相关(阳性率70-90%) •抗ssDNA抗体:阳性见于SLE、药物性狼仓 ?抗可提取性核抗原(ENA)多肽抗体谱测定临床意义 •抗Sm抗体:主要见于SLE •抗nRNP抗体:主要见于混合性结缔组织病 •抗SSA、抗SSB抗体:主要见于干燥综合症 •抗Scl-70抗体:主要见于进行性系统性硬化症 •抗组蛋白抗体:主要见于药物性狼仓、SLE 三、抗组织细胞抗体检测 ?、抗肾小球基底膜抗体(抗GBM抗体) 是抗基底膜抗体型肾小球肾炎特异性抗体，见于免疫复合物型肾小球肾炎、急进型肾小球肾炎等 ?抗乙酰胆碱受体抗体测定(AchRA): 是一种针对运动肌细胞上乙酰胆碱受体的自身抗体，阳性主要见于重症肌无力 ?抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA) ,ANCA是血管炎患者的自身抗体，是诊断血管炎的一种特异指标 ,ANCA分胞质型(cANCA)和核周型(pANCA)两型 ,cANCA阳性主要见于韦格纳肉芽肿 ,pANCA主要与多发性微动脉炎相关 ?抗心磷脂抗体(ACA) ,ACA是一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体 ,SLE患者中枢神经系统血栓形成与阳性ACA显著相关，血清及CSF中ACA检测有助神经精神性狼仓患者的临床诊断 ,高水平ACA是急性脑血管病的预后不良信号 ,70%未经治疗的ACA阳性患者可发生自发性流产和宫内死胎，尤其IgM型ACA可作为自发性流产的前瞻性指标 本章要求: 1. 能够概述免疫球蛋白、补体(C3、C4、C1q、B因子)、分化抗原(CD3、CD4、CD8)的概念，检测方法及临床意义。 2. 了解T细胞、B细胞数量和功能的检测方法及NK细胞活性检测的临床意义。 3. 掌握自身免疫的概念(包括自身免疫耐受、自身免疫病的概念)，掌握类风湿因子、抗核抗体的概念及检测的临床意义。 4. 掌握ASO、肥达氏反应检测的临床意义。 5. 掌握TORCH实验包含的检测项目及临床意义。 6. 掌握梅毒检测的方法及临床意义。 7. 掌握C-反应蛋白检测的临床意义。 9. 了解抗ENA、抗dsDNA、抗GBM、ANCA、ACA检测的临床意义。