高效液相色谱D-2000标准操作规程

高效液相色谱D-2000 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 操作规程 2、操作 2.1 开机 - 将组织器背部的电源开关打开，并按下泵与检测器面板上的白色按扭，则泵的面板上 的“A”指示灯与检测器面板上的“CH1”与“D2 LAMP”指示灯呈绿色。 - 打开柱温箱电源 - 打开电脑，按下图双击桌面上的[D-2000Elite]图标。 D-2000Elite]图标 - 即进入如下D-2000 HPLC控制软件[HSM]主菜单界面: 主菜单界面 - 单击主菜单界面中系统状态图标 ，出现一个界面，单击此界面中左下角的 “Initialize [初始化]”，待出现如下信息时，则 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 示已联机。 - 单击以上界面右下角的“OK”确认后，即出现如下主菜单界面: 2.2 新建方法 2.2.1 在主菜单界面上，单击左上角的“[File ](文件)”出现如下对话框: - 在以上对话框中单击“[New](新建)” 又出现如下新建对话框: - 在以上对话框中选择“Method[方法] ”，单击“[OK](确定)”，出现如下界面: - 在“Method Name(方法名)” :可建立最多15个字符的方法名，在保存时命名。 - 在“Developed by” :可填入方法建立者名字，也可不写。 - 在“Description(描述)” :可对方法进行最多1000个字符的描述。 - 在“Solvent Name(溶剂名)” :可对溶剂进行最多15个字符的命名。 2.2.1 单击以上界面中的图标(仪器配置)，出现如下界面: - 按实际仪器配置情况选择填写其相应内容。其内容包括界面(Interface，选“IFB”)梯度模式(Gradient Mode，选“Low”)，检测器型号(Channel 1，选“L-2400”;Channel 2，选“None”)、柱温箱(Column Oven，选“None”)、自动进样器(Autosapler，选“Manual”)、泵型号(Pump(A)，选“L-2130”; Pump(B)，选“None”)、色谱柱型号(Column，如选“Apollo C18 5μ”)的选择。 - 选择好后，单击图标确认 2.2.2 单击以上界面中的图标(方法信息设置)，出现如下界面: - 在“Method Name[方法名称]”中可建立最多15个字符的方法名，在保存时命名 - 在“Descripti[描述]”中可对分析方法进行最多1000个字符的描述。 - 在“Developed”中可加入方法建立着名字，也可不写。 - 在“Solvent Names[溶剂名] ”项下填写各通道(A、B、C、D)的流动相的名称。 - 单击，确认。 2.2.3 单击以上界面中的图标(泵参数设置)，出现如下界面: - 在“ Pressure Limit压力范围]”项下设置泵的压力范围，最小设置可为0-39.2MPa，最大设置为0.1-39.2MPa， - 在 “Solvent Name溶剂名” 项下可对溶剂进行最多15个字符的命名(根据上面的设置自动显示)。 - 在下方的溶剂时间表中设置不同时间(Time(min))溶剂比例(%AA，%AB，%AC，%AD)、流速(Flow(mL/min))。 - 单击，确认。 2.2.4 单击以上界面中的检测器设置图标(检测器设置)，出现如下界面: - 设置响应时间“Response Time”，单位秒，用于设置数据获取时间，长的响应时间 可以得到更小的噪音，短的响应时间可以得到更好的灵敏度，缺省值为2秒。 - 设置吸光度范围“Absorbance Range”，用于设置检测器吸收范围 - Offset(AU)[补偿值]:设置补偿值 - Polarity[极性]:指定信号输出为正或负。 - 设置采样时间“Stop time(min)”，比出峰时间略长。 - Auto Zero Before injection[进样前自动归零]:如果点选，则进样前吸收值自动归零。 - Auto Data Acquisition Period[自动数据采集周期]:如果点选，可自动设置不同时间 段数据采集周期 - Initial Sampling Period(ms)[原始采样周期]:可设置采样周期，缺省值200ms。只在 自动数据采集周期点选时生效。 - Doubling Time(min)[双倍时间]:设置采样周期双倍的时间，设置时间为0-200min， 只在自动数据采集周期点选时生效。 - Sampling Period Table[样品周期表]:显示自动数据采集周期，如自动数据采集周期 没有选择[手动模式]，可手动加入不同时间的采样周期。[可做时间采样梯度] - 在检测表“Detector Table” 的“wavelength(nm)”中设置检测波长(Time(min) 为“0.0”)。可做不同时间的检测波长切换。 - 设置完毕，单击，确认。 2.2.5 单击以上界面中的数据处理图标 或(数据处理)，出现如下界面: Calculation [计算] :用于设置样品计算方法。 Quantitation[定量]: - Peak Quantitation by[峰定量]:选择使用Area[峰面积]或Height[峰高]定量，一般点 “Area”。 - Calculation [计算方法]:选择使用Area%[面积归一法]、Ext-Std[外标法]、Int-Std[内 标法]或Norm%[ 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 方法]定量，一般点“Ext-Std”。 Identification[定性]: - Peak Identification Window[峰定性范围]: - %Time[相对时间]:选择此项表示定性范围以保留时间为中心加减峰保留时间的一 定百分比 - Absolute Time[相对时间]:选择此项表示定性范围以保留时间为中心加减一定时 间 - STD peaks Identification Rule [标准峰定性方法]: - Closest Peak[最靠近峰]:选择此项表示在设定定性范围内最靠近标准品保留时间 的峰为定性峰 - Highest Time [最高峰]:选择此项表示在设定定性范围内最高峰为定性峰 - UNK peaks Identification Rule [未知峰定性方法]: - Closest Peak[最靠近峰]:选择此项表示在设定定性范围内最靠近指定保留时间的 未知峰为定性峰 - Highest Time [最高峰]:选择此项表示在设定定性范围内最高未知峰为定性峰 - Spectrum Match[光谱匹配]:选择此项表示在设定定性范围内与指定峰光谱图最相 似的未知峰为定性峰 - Data Options[数据选项] - Update RT in Component Table[升级组分表中的保留时间]:选择此项将会把标准 品多次分析的保留时间取平均值代替每个组分的保留时间，目的，当组分保留时间 不断漂移时，取平均值进行确认定性峰。 - Do Blank Subtraction[基线扣除]:选择此项用于去除空白对分析的影响 - Blank from the same series[同系列空白]:选择此项表示指定同一系列的某项作为 空白扣除 - Other blank data[其它空白数据]:选择此项表示指定不同系列的某项作为空白扣 除。点击Select button[选择]选出某一数据作为空白扣除。 Calibration[校正]:此项在选择Area%[面积归一法]时不能使用 - Order of Curve Fit[曲线形式] - Linear f (Response)[线性(按照吸收值)]，选择此项。 - Line-f (Conc.) [线性(按照浓度值)] - Quadratic [二次曲线] - Cubic [三次曲线] - Force through Zero[强迫归零]:选择此项将强迫标准曲线过原点 Concentration[浓度]:选择“1.0” - 设置完毕，单击单击，确认。 2.2.6 单击以上界面中的图标 (组分表)，出现如下界面: - 建立、改善组分表用于样品定性、定量(使用Area%面积归一法不用建立组分表)。 - RT (min)[保留时间]:用于输入相应组分保留时间 - Window(%)[保留时间范围]:用于确认在保留时间左右一定范围内为标定峰 - Name[组分名称] - Func1, Func2, Func3[功能]:可在相应空格内线拉菜单中选择一定功能，用于样品中组分定性、定量;包括以下选项: - - Internal standard (ISTD)[内标]:当使用内标时用于标定内标化合物。 - - Relative retention time reference (RRT)[相对保留时间参比]:此功能用于指定一个或多个组分作为参比峰相对保留时间参比。 - - Corrected retention time reference (CRT)[校正保留时间参比]:此功能依靠各种液相条件校正保留时间，选择CRT最多可指定20个参比峰。 - - System Suitability Test (SST) [系统适应性]:使用此功能可以计算系统适应性。 - - 一般在Func1拦下，在需要进行系统适应性试验的某组分后选“SST” - 设置完毕，单击，确认。 2.2.7 单击以上界面中的图标(浓度设置)，出现如下界面: - Concentration [浓度表] 在此输入标样中每个标准组分的浓度值，用于校正样品值，浓度表参数个数取决于组分表，因此此表与组分表联合使用，当使用面积归一法时，此表不能使用; 这里可以使用20个稀释因子[Dilution Factors (DF)]，其中一个(如Std1)代表原始标准品，其稀释因子DF=1.0;点击[std?(1-20之一)]可指定其为原始标样，这个值不可编辑，其相应栏为灰色;其余栏的稀释因子可编辑，不使用某栏只需不输入任何值即可。 - Name[组分名] 如果组分表或系数表中输入了组分名，软件会自动复制组分名到浓度表。 - Std1-20[标准组分浓度]:设定标准品相应组分浓度 - Apply Dilution Factors[应用稀释因子] 用于计算组分浓度;稀释组分浓度通过原始浓度即稀释因子DF=1.0栏去计算其它栏浓度。 - Concentration Units[浓度单位]:可通过下拉菜单选择，一般选取“mg/mL”;缺省值为other，表示没有单位。 注意:当单位从other转换到某个单位(或从某个单位转换到other)不会出现警告栏; 但是从一个单位转换到另一个单位是会出现警告栏:选择NO，不转换;选择YES， 转换为新单位，但是此时如果没有输入相应的单位转换间的转换参数，浓度值将 会消失。 - 设置完毕，单击，确认。 2.2.8 单击以上界面中的系数表图标 (系数表)，出现如下界面: - 显示、改善每个组分标准曲线参数。 - Name[名称]:组分名称，软件自动复制组分表或浓度表中组分名称。 - A0-A3[曲线系数]:此系数为曲线方程系数，与计算方法中选择曲线方式有关。在参数处理时执行校正，在当前方法中的系数标中将会自动算出相应系数。 - Units[单位]:只读数据，在当前方法下为组分表中单位。 - R-sqr[线形系数]:R-sqr越接近1说明曲线的结果越好。 - 此界面一般不要动。 - 设置完毕，单击，确认。 2.2.9单击以上界面中的图标 (积分时间表)，出现如下界面: - 通过表中参数设置结果得到一个好的色谱图积分结果，表中前四行白字为自动设置，不可更改;后面参数可修改。 - Time (min) [时间]:设定积分参数生效时间段，0.00为全部时间生效，一般在第五行下选“0.00”;第六行填入出峰积分开始的保留时间;第七行填入出峰积分结束的保留时间;依次类推。 - Function[功能]:在下拉菜单中选择积分参数(通常选“INTEGRATION-INHIBIT[积分截止]”): - - NOISE [噪音]: - - SMOOTHING[滤波]:用于使色谱峰更平滑 - - SENSITIVITY [[灵敏度]:峰检测灵敏度，范围在1-255之间，1最灵敏，255最不灵敏;缺省值10 - - N-METHOD[基线设置方法]:设定基线在一定数的色谱峰间积分，如设定值为3则基线积分结果如下;如果设定值为0则表示基线自动积分。 - - Group[分组]:对于理化性质极其相似的组分[如:异构体]可作为一组进行含量计算 - - INTEGRATION-INHIBIT[积分截止]:设定某段时间内不积分。面积归一法时不可用。 - - FORWARD-HORIZONTAL[前方水平积分]:强制色谱峰基线与前方基线水平相同 - - BACK-HORIZONTAL[后方水平积分]:强制色谱峰基线与后方基线水平相同 - - VERTICAL[垂直分割]:强迫垂直分割相邻色谱峰 - - TAIL [尾峰分割]:强迫以切线方向分割相邻峰 - - NEGATIVE PEAK[负峰]:将负峰转变成正峰用于积分 - Value[数值]:一般不要填数值。 - Status[模式]:通常在第五行后选“ON”，表示“是积分截止”;在出峰积分开始行后选“OFF”，“否定积分截止”;在出峰积分结束行后选“ON” ，表示“是积分截止”;依次类推。 - 调整结束，单击，确认。 2.2.10 单击以上界面中的图标 (色谱图显示格式)，出现如下界面: - Vertical Axis Scale[纵轴比例]: - Intensity Range[强度范围]:输入色谱图吸收范围 当Autoscale[自动比例]被选中时，Autoscale Time Range[自动时间范围]下面窗口被激活，可手动输入色谱图窗口显示时间[可输入0-600min之间数值]，下面的吸收范围不可用。色谱图纵轴范围自动调节，以适应色谱图中最高峰在窗口中完全显示。 - Use Alternate Scale[使用转换比例] 选择使用转换比例，可按照一定的Unit Conversion Factor[单位转化因子]对纵轴单位转换，使用不同Alternate Scale Unit[转化比例单位]表示色谱峰吸收值。Alternate Scale Unit[转化比例单位]缺省值为AU，相应的Unit Conversion Factor[单位转化因子]缺省值为2.0 AU/V，即1V对应为2.0AU。 - Auto Zero[自动归零] 选择此项可使色谱每次从零点开始。 - Horizontal Axis Scale (Time)[横轴比例，单位时间] - Full Scale[全量程]:当此项没有选择时，可输入0-600min之间任意数值，作为色谱峰横轴显示;如果此项被选，则色谱图横轴数值不可改。 - Overlay [覆盖] - Peak Labels [标记峰]:选择这个部分，可以显示Time[时间], Name[组分名称], Number[位数], Area[峰面积], or Height[峰高]。点击Select[选择]，在对话框中选择需要显示的参数。 - Baselines[基线]:用于确定是否显示积分线，如果选择将就会在显示一条与基线颜色不同的积分线。 - Peak Start-End Markers[峰积分线起始-截至标记] - Integration Time Table[积分参数表]:选择将会在色谱图上显示积分参数，但是噪音参数不会显示 - Sampling Period Table[采样周期表]:选择将显示样品的采样周期。 - Gradient Curves[梯度曲线] - 此界面设置一般不要作更改。 - 设置色谱图显示的要求，调整色谱图的外观，设置结束后，单击，确认。 2.2.11 单击以上界面中的图标 ( 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 参数设置)，出现如下界面: - 按照实际的测试要求，设置系统适应性(SST:System Suitability Test)测试的要求， 如计算(Calculate)项下的半峰宽(Half Width)选欧洲药典方法“EP”;理论板数 (NO. of Theoretical)填入规定的数值;对称性(Asymmetry)填入“0.80 to 1.20”; 分离度(Resolution)应填入“1.50”、信噪比(S/N)等。 - 设置结束后，单击，确认。 2.2.12单击以上界面中的图标 (报告显示设置)，出现如下界面: - 设置报告显示内容 - 按照实验报告所想要描述的内容，设置报告中显示的项目。在首先和第二个浓度 “First Concentration”和“Second Concentration” 拦下选适当的浓度单位，如“mg/mL”。其余一般不作变更。 - 设置完毕后，单击，确认。 - 方法设置完毕后，点击以上界面右上角的×，即出现是否要保存此方法的对话框，点击“OK”即可。 2.2.13 如需要修改方法设置，可单击主菜单上的[方法设置]，则显示如下对话框: - 在以上对话框中选择所需要的方法名，点击“OK”，即显示如下界面: - 在以上界面上，按2.2.1,2.2.12修改方法设置即可。 2.2.14 如需要消除已经设置的方法，可点击主菜单界面上的[方法设置]，则显示如下对话框: - 选中需要消除的方法名，再点击“Delete”，即出现如下对话框: - 点击“Yes”即可。 2.3 设置样品表 2.3.1 在主菜单界面上，单击左上角的“[File ](文件)”出现如下对话框: - 在以上对话框中单击“[New](新建)” 即出现如下新建对话框: - 在以上对话框中选择“Sample Table[样品表]”，单击“确定”，即出现如下界面: - 在Sample Table[样品表]项下输入样品名称; - 在Method Name[方法名]栏内，点击向下箭头，选中已建立方法名称; - 将Perform Calibration[运行校正]前的对号去除，使Fixed Position for STD及 其下面各项成灰色，同时STD Name项也成灰色; - 在UNK Name[样品名称]后输入样品名称，如不知道可不输入，缺省为UNKNOWN; - 此之外在Vol(ul)栏输入进样体积，如20.0，缺省值为10.0 - 点击Append to Table and Map[添加到样品表和图]，即出现如下对话框: - 点击“确定”后，可以看到在样品表第一行会出现大写的S1[标准]或U[样品]，如下 图: - 点击以上界面左上角第二个图示(Edit Tab)[编辑表]，即出现以下界面: - “Vial No”为进样序号，依次填入1、2、3、4………。 - “Vol (μL)”为进样体积，一般为“20” μL。 - “Type”为进样类型，对照品溶液为“STD”，供试品溶液为“UNK” - “Sample Name”为进样的样品名称。 - 可以在以上编辑表中按实际情况进行修改。 - 设置完参数后点击以上界面左上角的“File”出现如下对话框: - 在以上对话框中，点击“Save Sample AS”，又出现如下对话框: - 在以上对话框中，点击“OK”保存即可。 - 也可点击“编辑表”界面右上角的× ，即出现如下对话框: - 点击“是”，即同样出现如下对话框: - 在以上对话框中，点击“OK”保存即可。 需要修改已经建立的样品表，只要点击主菜单界面上的2.3.2 如 [样品表]，即出现 如下界面: - 可以选择所需要的样品表名称，然后点击“OK”，同样可出现如下样品表: - 即可在以上编辑表中进行修改。再按以上方法点击以上界面右上角的×，再点击对话框中的“OK”保存即可。 2.3.2 如需要消除已经建立的样品表，只要点击主菜单界面上的 [样品表]，待出现如下界面时，按2.2.14的消除方法设置的方法操作，即可。 2.4 进样 2.4.1进样前准备: 2.4.1.1 松开泵面板上的白色旋扭这时流动相不通过色谱柱，单击主菜单界面左侧泵开/关图标 ，开启泵 ，通道中有流动相流出。 - 单击主菜单界面左侧泵控制模块信息/状态图标 ，出现以下泵控制界面: - 单击“Manual Setup” 进入泵的手动设置，如下图。调整各通道中流动相的比例、 流速及最大和最小压力，调整结束后，单击“Apply”即可。 - 如需快速排出通道中的气泡(注:泵面板上的白色旋扭必须松开)，单击泵控制界面 中的“Puege”进入泵的手动控制，出现如下对话框: - 单击“Puege on”，出现如下对话框: 选择流动相通道(A、B、C或D)，进行相应通道的快速排气，一般快速排气的时间为2-3分钟，快速排气时的流速为9.999ml/min，快速排气结束后，单击“Puege Off”，再单击“Close”，即关闭泵的手动控制界面。 - 旋紧泵面板上的白色旋扭，流动相即通过色谱柱。 2.4.1.2 点击主菜单界面上的，出现如下对话框: - 选择所需要的样品名称，点击“OK”，即出现如下界面: - 待基线平稳后，即可进样。 2.4.2 进样步骤 - 如只有单个样品，可单击单个进样“Start Run” 运行， - 如有数个样品，可单击连续进样“Start Series”， 出现对话框，“Waiting for Injecting”，即可进样。 - 向上调整进样阀的旋扭的手柄，将样品由进样阀注入，立即向下板动进样阀的旋扭，样品分析即开始进行。 - 待第一个样品分析结束后，待“Waiting for Injecting ”出现后，即可进行下一样品的进样分析。 2.4.3 柱冲洗: - 样品分析结束后，需用合适的流动相清洗色谱柱，一般情况下，如分析样品时所用的流动相含酸碱或盐，则需先用水比例较大的流动相(如 乙腈:水为10:90)冲洗20-30分钟后，再用合适的流动相(根据色谱柱的具体情况选择合适的流动相进行柱 的保存，如100%乙腈或甲醇等)冲洗20分钟后即可。 - 亦可预先建立柱冲洗的方法，在建立样品表时将柱冲洗作为最后一个样品进行分析即可，如下界面: 2.5关机 - 先点击关闭主菜单界面上的，关闭泵;再点击主菜单界面右上角的× ，关闭主菜单。 - 再关闭检测器和泵上的按纽及组织器背部的开关。 2.6 数据分析 - 单击主菜单界面左侧工具栏中数据处理图标，即出现如下界面: - 选择所需要分析图，点击“OK”即出现如下界面: - 选中已分析的标准品或样品，单击左下方的“Display”打开图谱并进行数据分析， 如下图: - 将积分线移至所需要积分的峰的开始位置，在左下方即出现“Time=11.6min”[峰的 开始时间]，然后点击以上界面左上方的(积分时间表)，即出现如下界面: - 将积分线移至所需要积分的峰的结束位置，在左下方以出现“Time=12.72min”[峰的 结束时间] ，如下界面: - 按 2.2.9所述步骤进行积分时间记录，如下界面: - 点击(积分时间表)左边的，确认。 - 可先将标准品的谱图积分时间记录好后，再将样品的谱图积分时间记录好。 - 然后再点击(积分时间表)界面右上角的× ，消除(积分时间表)，即出现如下界 面: - 单击“Recalculate”进行计算。 - 而后，单击“Modify Report”，即可得到样品的分析结果谱图。 - 点击主菜单界面上的，即可打印出所需要的色谱图。 2.7 退出工作站 - 退出控制软件:单击主菜单右上角按钮，即可。 2.8 注意事项 - 参与液相色谱分析的流动相最好使用色谱级试剂 - 做样前，应先开机使检测器预热平衡至少30分钟