肉鸽肾病变型传染性支气管炎病毒的分离与鉴定

Chinese Journal of Veterinary Medicine 中国兽医杂志 2007年(第 43卷)第 4期 39 肉鸽肾病变型传染性支气管炎病毒的分离与鉴定 杨笃宝，吕 品 (山东农业大学动物科技学院，山东 泰安 271018) 中图分类号：$858．395．3 文献标识码：B 文章编号：0529—6005(2007)04—0039—01 目前国内还未见有鸡传染性支气管炎病毒肾型 变异株感染肉鸽的报道，而在2005年10月送检我院 的12只病死肉鸽，其临床症状和剖检病变疑似鸡 NIB，随即我们作了病毒的分离与鉴定，试验的结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，该批肉鸽感染了NIBV。报告如下。 1 材料与方法 1．1 病料采集 2005年1O月，肥城张某饲养的500 只25日龄肉鸽相继开始发病，病初具有轻微的呼吸 道症状，随后病鸽表现食欲下降，饮欲增加，排白色 收稿日期：2006—04—24 石灰渣样稀粪，剖检病死鸽可见病鸽脱水严重；肾肿 大，肾小管和输尿管有尿酸盐沉积，呈典型的“花斑 大肾”；气管黏膜有点状出血，环内有少量的黏液。无 菌采集具有典型病变鸽的肾脏、肺脏和气管作为分 离病料。 1．2 病毒分离与传代 将无菌采集的病鸽肾脏、肺 脏和气管经剪、磨碎按1：5加入生理盐水制成组织 悬液，加入青霉素、链霉素各1000 IU(Fg)／ml，反复 冻融 3次，置于4 C的冰箱中过夜。次日以3 000 r／ min离心30 min，吸取上清液作无菌检验后，将其给 1 O枚9日龄SPF鸡胚经尿囊腔接种 ，每胚0．2 ml， 口时非常方便，但对于本次试验来说，则需要另做切 口做十二指肠瘘管，所以不建议做两个切口。 结合本次试验 自身特点，手术部位选择在右侧 肷部，而且是一个切口。十二指肠乙状弯曲前端位于 右侧最后肋骨弓，所以瘘管出口选择在紧贴最后肋 骨弓后向上向后位置十分恰当。回盲末端位于左侧 腰椎横突腹侧，而瘘管出口在右侧髋结节向前下 5 cm，手术难度较大，但经过术后观察肠内容物流 动正常，没有因为从右侧出口而受影响，这大概是与 回盲末端游离性较大有关。 3．4 术后护理 由于瘘管安装属于污染手术，术后 感染很难避免，故应用抗生素，并时刻监测体温。猪 的正常体温 38．5 C～4O．5 C，术后抗感染过程中体 温升高1 C～2 C是正常的。但严重感染时，体温过高 或持续高热，应当大剂量应用抗生素。麻醉后可能发 生体温降低，但麻醉作用消失后可恢复，如果发生体 温持续降低，需要注意是否有因腹膜炎等引起的意 外发生。此外，术后观察猪的排便十分必要，排便顺 畅表明瘘管安装正常，没有堵塞肠管，如排便困难， 则要留心观察瘘管是否有脱落。如有便秘现象，可用 5 9／6硫酸钠从瘘管灌2O～50 ml即可。 3．5 体会 选择合适大小的瘘管相当重要，管径过 大易堵塞肠管，同时不利于伤口愈合，管径过小取不 出食糜，所以“T”型导管的口径大小必须与猪的大小 相适应。在做回肠瘘管时，由于回盲口游离性较强，向 后拉出回盲末端时容易被其他肠段干扰，不容易找 到，需要术者有较好的手感和经验，但向前可以很容 易将十二指肠拉出创口外。总体上说，右侧肷术部基 本上既有利于回肠末端又有利于十二指肠瘘管安装。 安放十二指肠和回肠末端“T”型瘘管时，皮肤 及肠壁切口一定要尽可能小，接近于瘘管直径。然后 将基座背折压扁插入，使皮肤和肠壁紧紧箍于瘘管 上，术后即可防止肠液外溢。安置瘘管时，瘘管最好 用沸腾热水煮1O～15 min，既起到消毒灭菌作用，又 使瘘管材质软化，便于瘘管的折压安装。根据以往在 做绵羊瘤胃瘘管手术时，从手术后5O天时对术部进 行观察所发现，所有荷包缝合的缝线都从肠壁撕裂 开来，而成为围绕于瘤胃瘘管的虚设成分，致使后期 荷包缝合起不到任何作用。所以我们对此做了改进， 即在缝合完毕后，在紧贴管体的上下创缘部位各做一 针结节缝合，使创缘紧密箍于瘘管上。个别猪在将肠 壁与腹壁肌肉做了结节缝合的基础上，再对瘘管上下 方创口各用不锈钢丝做减张缝合，以防由于张力作用 创口愈合不良，致使创口变大，导致肠液外溢。 参考文献： [1] 郭铁．家畜外科手术学[M]．北京：中国农业出版社，l996． E2] 印遇龙．采用桥式瘘管法研究猪饲料中氨基酸利用率[J]．畜牧 兽医学报，1989，20(3)：272—273． [3] 印遇龙．猪回肠末端“桥”式瘘管技术与“T”型瘘管技术的比较 实验[J]．中国农业科学，1989，22(5)：81—85． [4] 张珂卿，林德贵，万宝瑶，等．猪回肠人工瘘管的替代方法—— 回肠与直肠吻合术[J]．中国兽医杂志，1992，18(9)：27． [5] 马永喜，常碧影，张宏福．评定猪饲料氨基酸生物学效价的方法 [J]．动物营养学报，1997，9(2)：1—14． [6] 李文斌，马恒东．猪回直肠吻合术中两种瘘管的比较[J]．四川 畜牧兽医，2001，28(1)：20—21． [7] 谭运华，陈铁桥，向建洲，等．不同El龄仔猪回肠人工瘘管手术 的效果观察[J_．广西畜牧兽医，2004，20(5)：220—221． 维普资讯 http://www.cqvip.com 40 中国兽医杂志 2007年(第43卷)第4期 Chinese Journal of Veterinary Medicine 并设对照组鸡胚接种生理盐水，鸡胚37 C孵化。弃去 24～36 h内死亡的鸡胚，收取部分鸡胚尿囊液盲传 5代，自第3代起同时设空白对照5枚。收取尿囊液 后剩下的5枚同空白对照胚一起孵化到 18日龄，观 察鸡胚发育和病变情况。以下的试验均用传至第 5 代的鸡胚尿囊液进行。 1．3 红细胞凝集试验 (1)直接血凝试验：分别取 1～5代鸡胚尿囊液，在96孔U型板上按常规方法作 血凝试验。(2)1％胰酶处理血凝试验：将分离病毒的 第 5代鸡胚尿囊液与等量的1％胰酶混合后在 56 C 的水浴中作用30 min，在96孔U型板上作红细胞凝 集试验。 1．4 干扰NDV试验 取9日龄的SPF鸡胚15枚随 即分成3组，每组5枚。第1组：每枚鸡胚经尿囊腔接 种0．2 ml NDV LaSota毒株；第2组：每枚鸡胚经尿 囊腔接种第 5代分离毒的尿囊液0．2 ml；第 3组：先 接种第 5代分离毒的尿囊液 0．2 ml，2 h后再接种 0．2 ml NDV LaSota毒株。孵化96 h，收取接种后 72～96 h死亡鸡胚以及 96 h活鸡胚的尿囊液，用0． 5 的鸡红细胞作血凝试验。 1．5 动物回归试验 取6日龄非免疫雏鸡6O只，随 机分成2组，每组3O只隔离饲养。第1组：用盲传第 5代的尿囊液感染雏鸡，每只滴鼻点眼0．1 ml，口服 0．1 ml。第2组：作空白对照。每 日观察攻毒雏鸡和 空白对照雏鸡至14日龄。剖检病死雏鸡和空白对照 雏鸡观察记录病变。 2 结果 2．1 病毒分离与胚体病变 鸡胚在接种病料后传 代的过程中，第 1、2代均未出现死亡现象，也未见明 显的病变。从第3代起开始出现死亡，而且随传代次 数的增加死亡量呈上升趋势，第 3代 2／10，第 4代 5／10，第5代8／10。死亡鸡胚发育迟缓，胚重减轻，呈 现典型的侏儒胚，表现在胚体蜷缩，双脚抱头，羊膜 增厚，羊水减少，胚体充血、出血，肾肿大，尿酸盐沉 积，而且第5代较第3、4代严重。对照组鸡胚发育正 常，未见死亡。 2．2 红细胞凝集试验 直接血凝试验结果为阴性， 对鸡红细胞不发生凝集；经1 胰酶处理后的鸡胚尿 囊液可使1 V0鸡红细胞发生凝集，血凝价为1：32O～ 1：640。 表 1 血凝试验 的检测 结果 分组 血凝价 2．3 干扰 NDV试验 从表 1可以看 出，分离得到 的病毒能显著干扰NDV LaSota毒株在鸡胚上的增 殖，这符合NIBV的生物学特征。 2．4 动物回归试验 在攻毒后18 h有16只雏鸡出 现精神委靡不振，食欲减退，咳嗽，甩鼻，安静时听有 轻微的哕音。36 h死亡2只，第3天死亡5只，并相继 发病死亡，至第10天，病鸡呼吸道症状基本消失，此 时表现病鸡饮欲增强，严重的腹泻，排白色石灰样稀 粪，迅速脱水。至第14天3O只雏鸡全部发病，死亡26 只，死亡率高达86．67％。剖检病死鸡可见肾脏肿胀， 尿酸盐沉积，呈现典型的“花斑大肾”，个别鸡气管有 点状出血，气管分支处有黄色的栓塞物。与自然感染 NIBV的病鸡症状和剖检病变相似。而对照组的雏 鸡健康成长，未见发病。 3 小结和讨论 3．1 试验结果充分表明，分离到的毒株不能直接凝 集鸡红细胞，但经1％胰酶处理后具有血凝性；通过鸡 胚接种盲传 5代，可引起 8O％的鸡胚死亡，并出现典 型的侏儒胚；能显著的干扰NDV LaSota毒株在鸡胚 上增殖；动物回归试验能复制出和自然感染病例相似 的l临床症状和剖检病变。这些特点与NIBV的生物学 特征一致，从而证明我们从肉鸽体内分离到病毒是 NIBV，从肉鸽体内分离到NIBV在国内还未见有报 道，本试验证明了NIBV能感染肉鸽。 3．2 该病毒在鸡胚尿囊腔盲传的过程中，第1，2代 鸡胚未见有死亡或有明显的剖检病变，而在第3、4、5 代鸡胚中出现明显的病变，说明分离到的病毒能逐渐 适应鸡胚生长环境并致鸡胚发病，这与报道的一致， 进一步证明了分离到的病毒为NIBV。在干扰NDV试 验中，分离到的病毒能明显干扰NDV LaSota毒株在 鸡胚上的生长，这是鉴别NIBV的一个特征。 3．3 NIBV血清型很多，同型间又有不同的变异 株，至于该批肉鸽感染的什么型的NIBV由于本实 验室的条件有限，目前还不能确定，因此对该肉鸽源 NIBV的核酸型、病毒的形态、抗原特征需要进一步 研究确定。 3．4 2006年山东省鸡肾病变型传支暴发相当严 重，是危害肉鸡饲养业的最大疾病之一，此批肉鸽感 染肾病变型传支可能与鸡肾病变型传支的暴发流行 有关，另外饲养环境差，自配料营养价值不全可能是 诱发本病的又一原因。 3．5 本试验充分证明了NIBV不但可以感染鸡而 且可以感染肉鸽，是否能感染其他禽类以及交叉感 染的机理和肉鸽源 NIBV的生物学特性是否与鸡 NIBV的生物学特性相同还需要进一步的研究。我 们将继续关注肉鸽源NIBV。 (参考文献略) O O ∞ 1 ： ．● ● ． 1 【 ∞ O Z O ； 1 1 ㈣o∞ 【 1 1 O O ∞ 1 ； ●． ●● 1 【 ㈣o 【 1 1 组 组 组 一 一一三 第 第 第 维普资讯 http://www.cqvip.com