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脱氢酶脱氢酶活性测定 (一)基本原理利用2,3,5-三苯基四氮唑氯化物(TTC)为基质(氢受体),由于土壤中脱氢酶的作用使之形成红色的TPF,两者在一定范围内呈线性关系,因此,用比色法测定其形成量作为土壤脱氢酶的活性指标。 (二)实验试剂 1、酶促反应试剂 (1)0.5mol/L三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液,pH7.6:2mol/L三(羟甲基)氨基甲烷溶液50mL与1mol/L盐酸溶液75mL混合,加蒸馏水定容到200mL。 (2)0.5%TTC溶液:TTC0.5g溶于0.5mol/L三(羟甲基)氨基...

脱氢酶活性测定 (一)基本原理利用2,3,5-三苯基四氮唑氯化物(TTC)为基质(氢受体),由于土壤中脱氢酶的作用使之形成红色的TPF,两者在一定范围内呈线性关系,因此,用比色法测定其形成量作为土壤脱氢酶的活性指标。 (二)实验试剂 1、酶促反应试剂 (1)0.5mol/L三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液,pH7.6:2mol/L三(羟甲基)氨基甲烷溶液50mL与1mol/L盐酸溶液75mL混合,加蒸馏水定容到200mL。 (2)0.5%TTC溶液:TTC0.5g溶于0.5mol/L三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液中,定容到100mL。 2、测定试剂 (1)甲醇 (2)TPF 标准溶液:称取TPF30mg,置于100mL容量瓶中,用甲醇定容到 100mL,此溶液浓度即为1μg/Ml.再用甲醇稀释该溶液,配制成25、50、 75、100、150ng/mL的标准溶液。 (三)操作步骤 1)称取通过2mm筛的土样5g于带塞试管(0.7*15.0cm)中,加入TTC溶液 5mL,充分混合。 2)同时设置对照,即在试管内加入三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液5mL 以替代土壤与TTC。 3)将以上试管置暗处30℃保温培养12h后,分次少量地加入甲醇100mL,移入带塞三角瓶中,用振荡机震荡1h,过滤。 4)取滤液用分光光度计(波长485nm)测定其光密度。以甲醇作为空白。 5)用上述同样方法测定不同浓度TPF标准溶液光密度,在半对数纸上绘制标准曲线。 6)根据减去空白的光密度查标准曲线,即可求出产生的TPF的量,该量(μg/g 干土)即表示脱氢酶活性。脱氢酶的活性可按下式计算: 土壤脱氢酶活性(μg TPF/g干土)=C×V/dwt C:滤液中TPF的量(μg/mL)(由标准曲线查知); V:滤液的体积(mL); dwt:烘干土壤重量(g)。

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