过氧化物酶活性的测定(比色法)
实验 48 过氧化物酶活性的测定（比色法）
过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的
氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化，因此测量这种酶，可
以反映某一时期植物体内代谢的变化。
一、原理
在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在 470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量 470 nm 的吸光度变化测定过氧化物酶活性。 二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料
马铃薯块茎。
（二）试剂
1 ． 100 mmol ／ L 磷酸缓冲液 pH6.0 （见附录）。
2 ．反应混合液： 100 mmol ／ L 磷酸缓冲液（ pH6.0 ） 50 mL 于烧杯中，加入愈创木酚 28 μl ，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入 30 % 过氧化氢 19 μl ，混合均匀，保存于冰箱中。
（三）仪器设备
分光光度计，研钵，恒温水浴锅， 100 mL 容量瓶，吸管， 离心机。
三、实验步骤
1 ．称取植物材料 1 g ，剪碎，放入研钵中，加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆，以 4000 r ／ min 离心 15 min ，上清液转入 100 mL 容量瓶中，残渣再用 5 mL 磷酸缓冲液提取一次，上
清液并入容量瓶中，定容至刻度，贮于低温下备用。
2 ．取光径 1 cm 比色杯 2 只，于 1 只中加入反应混合液 3 mL 和磷酸缓冲液 1mL ，作为对照，另 1 只中加入反应混合液 3 mL 和上述酶液 1mL （如酶活性过高可稀释之），立即开
启秒
表
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记录
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时间，于分光光度计上测量波长 470 nm 下吸光度值，每隔 1min 读数一次。 四、结果计算
以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以 ΔA 470 /[min ? g （鲜重） ] 表示之。也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。
过氧化物酶活性 [u/ （ g ? min ） ]= 式中： Δ A 470 ——反应时间内吸光度的变化。 W ——植物鲜重， g 。 V T ——提取酶液总体积， mL 。
V s ——测定时取用酶液体积 , mL 。
t ——反应时间， min 。
浙公网安备 33021202002483