红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性的研究（可编辑）

红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性的研究（可编辑） 青岛科技人学研究生学位论文 红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 ?? 学位论文完成日期: 指导教师签字: 答辩委员会成员签字: ?簇青岛科技大学研究生学位论文 红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 摘要 红松 为松科松属植物,主要分布 在我国东北部地区。松塔为红松的球果,其中所含有的活性多糖成分的抗肿 瘤、 抗病毒等功效已有众多研究者先后报道。本课题以红松松塔为原料,探索建 立 了其中红松松塔多糖成分的适宜提取、分离纯化 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 ,开展了系列研究工作, 同时还首次报道了该提取物的体外抗氧化活性,相关主要工作如下: 建立了一种红松松塔多糖的含量测定方法.改良差示酚硫法,本课题初 次尝试运用本方法测定红松松塔多糖含量。该方法弥补了传统酚硫法、改良 酚硫 法和现有差示酚硫法的不足,既能简化多糖样品预处理 步骤 新产品开发流程的步骤课题研究的五个步骤成本核算步骤微型课题研究步骤数控铣床操作步骤 和容易伴随的多 糖成 分丢失,又能减少非糖杂质的干扰,同时还能克服在显色反应中因浓硫酸放热而 导致的诸多难点。本课题研究中从检测波长、水解时间、显色液放置时间和用量、 以及线性范围、稳定性、重现性、回收率等多方面对该方法进行了考察,结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明该法可用于红松松塔多糖含量测定,方法简便、准确,重复性好。 采用水提醇沉法制备红松松塔多糖提取物,并对其脱蛋白、脱色等精 制工艺进行了研究。 红松松塔多糖提取物的制备工艺:水煎煮次,时间,料液比:,此 条件下,多糖得率为.%。 多糖脱蛋白工艺:通过对三氯乙酸法、法和木瓜蛋白酶法等不同方法 的比较,得知木瓜蛋白酶法为较理想的方法,其优化后的工艺条件为:木瓜蛋白 酶用量.,酶液浓度 ?.,值.,酶解时问.,酶解温度?, 此条件下,蛋白去除率为.%,多糖损失率为 .%。 多糖脱色工艺:通过对活性炭法、双氧水法、大孔树脂法及阴阳离子交换树 脂法的比较,得到大孔树脂为脱除红松松塔多糖色素的有效方法,该法优化 工艺条件为:大孔树脂用量.,脱色时间,脱色温度。,.,此条件下, 色素脱除率为.%,多糖损失率为.%。 研究了红松松塔粗多糖分离纯化的综合工艺路线并对纯化后组分进行 纯度检测。红松松塔粗多糖经木瓜蛋白酶法加两次法脱蛋,超滤分级, 去除小分子杂质,大孔树脂脱色,并经。柱层析后得到个多糖组分, 其中主要组分为三种。三种多糖组分与粗多糖相比,多糖含量有显著提高,并经红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 紫外检测、冻融分析及双缩脲反应,结果表明三种多糖为均一组分。 通过对红松松塔多糖的还原能力、羟自由基?以及,一二苯基.. 三硝基苯肼叶的清除能力的测定,研究了红松松塔多糖的体外抗氧化活性。 结果表明,红松松塔多糖具有一定的还原能力;多糖对?以及?都具有 较强的清除作用,并且清除能力随多糖浓度的增大而增大。纯化后的松塔多糖 对?禾?的清除能力不如粗多糖,但其仍具有一定的清除作用,有关原 因探索,正在后续研究之中。 该毕业论文中,对红松松塔多糖的分析方法、提取、纯化方法,以及其体 外抗氧化活性等多个方面进行了系列探索性研究,并且获得了明显进展,其中 多项内容尚未见有文献报道,期望能为进一步合理开发利用红松松塔资源提供 理论依据和科学数据。 关键词:红松松塔多糖改良差示酚硫法提取工艺分离纯化抗氧化. .. . .. , ?,, . . . ?? , . . ,, , . ,.. .%, . : : 红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 , ,. ... ?, ,.,.% . .% : , ,,. . , .% ..?, ., .%. . , , . ,一.. ,? . . ,. , , . . ? ,,, ?.. .青岛科技大学研究生学位论文 : ,,. ,,, 红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 青岛科技大学研究生学位论文 目 录 第章绪论 .红松研究概况?.. ..红松植物简介 ..红松松塔化学成分研究进展 ..红松松塔多糖生物活性研究进展? .多糖的研究进展一 ..多糖的简介? ..多糖的提取? ..多糖的含量分析方法 ...分光光度法??. ...色谱法?. ...酶法一 ..多糖的纯化? ...除蛋白?. ...脱色? ...小分子杂质的去除??. ...多糖的分级纯化. ..多糖的分子量及单糖组成测定..多糖的药理作用.本课题的研究目的、内 容及意义..本课题的研究目的和内容. ..本课题的研究意义. 第章改良差示酚硫法测定红松松塔多糖含量??. .材料与仪器..材料. ..仪器. .原??.. .实验内容 ..松塔粗多糖的初步纯化?. ..相关溶液的制备?. ...样品液的制备: ...对照品溶液的制备:? ...其它溶液的制备... ..实验条件的考察?. ...最大吸收波长的确定? ...水解条件的考察红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 ...显色条件的考察 ..红松松塔多糖含量测定方法??.. ..结果计算?. ..方法学研究.. ...线性关系的考察 ..精密度实验...重复性实验...稳定性实验...加样回收率实验 ..样品测定实例??. ..讨论一 .本章小结 第章红松松塔多糖提取物的制备及其精制工艺研究??. .材料和仪器..材料. ..仪器与设备. .蛋白质含量测定??考马斯亮蓝法? ..测定原理?. .. 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线的绘制?. ..样品中蛋白质含量测定和蛋白去除率的计算?. .多糖损失率测定 .脱色率的测定? .红松松塔多糖提取物的制备? ..松塔多糖的提取?. ...煎煮浓缩 ...醇沉 ...沉淀处理 ..结果与分析. ..放大实验?. ...提取方法 ...结果与分析.红松松塔多糖脱蛋白工艺研究 ..脱蛋白方法筛选?. ...三氯乙酸法脱蛋白...木瓜蛋白酶法脱蛋白? ...脱蛋白方法比较 ..木瓜蛋白酶法脱蛋白单因素考察. ...酶用量的考察? ...酶解时间的考察 ... 的考察??..青岛科技大学研究生学位论文 ...酶解温度的考察 ..正交设计优选红松松塔多糖酶法脱蛋白工艺?. ...实验方法 ...结果分析 ...优选工艺的验证 .脱色方法研究【...脱色方法筛选??. ...活性炭脱色...双氧水脱色...阴离子树脂脱色 ...阳离子树脂脱色 ...大孔吸附树脂脱色...脱色方法的比较 ..大孔吸附树脂脱色方法研究??. ...树脂用量对脱色效果的考察? ...脱色时间对脱色效果的考察? ...脱色温度对脱色效果的考察? ... 对脱色效果的影响一 ...正交设计优选红松松塔多糖脱色工艺 ...树脂的再生及重复利用 .本章小结. 第章红松松塔多糖综合纯化工艺研究??. .材料与仪器..材料. ..仪器. .酶解法结合法脱蛋白一 ..多糖样品液的制备:??. ..脱蛋白试验. ..结果. .超滤分级试验? ..原理.. ..预处理??. ..超滤试验?. ..结果与讨论. ...多糖分子量分级 ...渗出通量变化趋势观察 ...讨论?. ...膜的污染及清洗 .大孔吸附树脂脱色..大孑吸附树脂预处理:??红松松塔多糖的提取、分离纯 化及抗氧化活性研究 ..脱色试验?. . 一纯化红松松塔多糖? ..原理.. ..预处理:?. ..装柱 ..上样. ..层析结果与分析?. .. .的再生及重复使用??. .红松松塔多糖纯度测定 ..紫外分光光度法检测??. ..冻融分析法. ..双缩脉反应. .本章小结 第章红松松塔多糖抗氧化活性研究. .实验材料与仪器 ..材料与试剂. ..仪器??. .实验内容 ..还原能力的测定?. ...原理:? ..试剂的配制:? ...实验方法:...结果与分析..清除?自由基?. ...】原理: ...试剂的配制:? ...实验方法 ...结果与分析..清除?自由基. ...原理:? ...试剂的配制:? ...实验方法 ...结果与分析.本章小结 结论参考文献? 致谢青岛科技大学研究生学位论文 攻读学位期间发表的学术论文目录独创性声明红松松塔多糖的提取、分离纯 化及抗氧化活性研究青岛科技大学研究生学位论文 第章绪论 .红松研究概况 ..红松植物简介 红松是名贵而又稀有的树种,又被称为果松,为松科植物,属于国家二级重 点保护野生植物,主要分布在东北的长白山到小兴安岭一带。红松为常绿针叶乔 木,树干粗壮,树高入云;树皮为灰红褐色,且皮沟较浅,较为平滑,内皮呈浅 驼色,裂缝呈红褐色,大树树干上部常分杈。心边材区分明显。边材区浅黄褐色; 心材褐色带红色,所以称为红松。松籽为红松的种子,内含脂肪、蛋白质、碳水 化合物等,坚持服用有利于身心健康,延缓衰老。松塔为松属植物的球果,松塔 资源丰富,可作为药材使用,具有很好的应用前景?。 ..红松松塔化学成分研究进展 从 年至今,国内外众多研究者【.对红松松塔成分进行了探索和研究, 不断发现其活性成分。主要含有多糖、萜类、挥发油、酚类以及木质素类等成分。 但是对其活性成分的研究多集中在多糖及挥发性成分上【】 . 红松松塔多糖生物活性研究进展 有研究表明红松松塔中含有活性多糖,久被流传于民间,饮其煎煮液即可治 疗胃癌,其抗肿瘤、抗菌和抗病毒等生物学作用已得到证实【。相关实验表 明, 红松松塔多糖能够对机体固有的免疫能力起到一定的增强作用。刘中禄等经 过实验证实了松塔多糖能够促进小鼠的脾细胞、淋巴细胞之间的转换,加强细 胞的吞噬及杀伤作用; ?研究表明该多糖对小鼠感染伤寒杆菌的死亡 率具有明显的降低作用,在人羊膜的体外培养液中,加入红松松塔多糖后,对 样酪氨酸激酶受体配体感染、、、具有较强的保护功效。 .多糖的研究进展 ..多糖的简介 多糖是构成生命的基本物质,在动植物及微生物中分布极广,根据其出处可 将其划分为植物、动物及生物多糖。植物多糖有高等植物及藻类多糖之分。它是红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 大分子物质,由几十至几万个单糖分子通过或糖苷键聚合而得【?。 多糖是除蛋白质和核酸之外的一大类重要生物大分子,对于多糖的研究,其 层次与深度较蛋白质与核酸相对落后,但是随着多糖生物活性的发现与研究,多 糖逐步成为药物及科学研究的热点卜。 近几年,有关多糖及其复合物的研究 发展迅速,在关于细胞膜的生物学功效、免疫调节和对新的药物能源的找寻的探 索中,糖类的重要性进一步的被发掘,它不仅可以作为能源或者是材料来使用, 更值得一提的是它还是抗原抗体之间的反应、细胞之间相关信息的传输和感 应以 及抗原与抗体的反应的重要因子,所以有关多糖的研究日益增多,所涉及的领域 也日益广泛。就现在而言,国际方面涉及到糖类的研究主要包括糖工程、糖生物 学等。 、香 目前有很多的植物多糖被作为临床常用药或预防疫苗,例如猪苓多糖 菇多糖【】、当归多糖】等,此类多糖毒副作用甚微,生物活性明显;还有一类多 糖,利用其亲水性、粘性等在一些工业领域得到了一定的发展【。 ..多糖的提取 多糖为极性大分子聚合物,种类繁多,提取产物与产率也因方法的不同而有 所差异。 目前常用的多糖提取方法主要有:溶剂提取法、超滤法、碱提取法、酸提取 法、酶提取法、微波法、超声波提取法、超临界流体萃取。溶剂提取法 中常用 的为传统的水体醇沉,它是依据多糖溶于热水而在乙醇中不溶的原理使其形成沉 淀,进而提取多糖,此法操作简单易行,成本低且安全、干便于工业路线的放大 但是提取时间较长且需多次煎煮,效率低。超滤法州是运用膜分离去除小分 子杂 质,是一种高效的现代分离技术,此法操作简单、耗能低、能够保证多糖活性、 生产连续性,无污染。碱提取法怛?,一般需加氮气或充入硼氢化钾或者硼氢化钠 来避免多糖糖苷键的断裂,此法提取率虽高,但是容易产生杂质需进行分离纯化。 酸提取法【,易使多糖中糖苷键断裂及容器腐蚀,不作为常规提取方法。酶法【】 是近几年发展起来的生物提取技术,此法在温和条件下即可进行,能够尽量避免 多糖活性的降解。等进行实验证明了酶可以水解多糖与酚类之间 形成的酯键且具有专一性。超声波澍 提取是由超声波产生的热效应、空化效应 及骚动效应使物质的扩散溶解速率得到加速,来提高提取物的产率。此方法常温 下即可进行,有效减短了提取的时间,但是此法存在降解可溶性的多糖的可能性。 超临界流体萃取法【是利用超临界流体的双重性质,具有良好的扩散性能,同时 又具有较强的溶解性。当达到临界点时,溶解性能发生改变,从而可以使提取物青岛科技大学研究生学位论文 可以隔段萃取,此法萃取效率较高,过程比较容易调控。 ..多糖的含量分析方法 多糖定量分析方法主要有分光光度法、比色法、色谱法、酶法、电泳法、电 泳法、次亚碘酸盐定量法等。 ...分光光度法 苯酚.硫酸法 苯酚硫酸法为多糖含量测定的常用方法【 。年 等学者所发表的 苯酚硫酸法在多糖定量分析的研究中具有非常重要的意义 ,至今仍被广泛应用 于多糖成分含量测定。该法适用于测定高纯度多糖成分,在测定含有杂质的多糖 样品时误差较大;并且不同时间不同操作人员操作时所测数据常见有差异;此后 不断有研究者对苯酚硫酸法进行了诸多改进,其中徐光域等发表的预配显色液 的改良苯酚硫酸法,以及贺福元【等人建立的差示苯酚硫酸法皆取得重要进展, 有效克服了传统酚硫法应用中存在的部分问题】。 王超、张曜副在综合吸收以上各方法优点的基础上进一步做出改进,弥补 了传统酚硫法、改良酚硫法和差示酚硫法的不足,建立了一种新方法一一改良 .差示酚硫法,该方法可用于含有杂质的多糖样品的定量分析,既能简化多糖样品 预处理,避免繁琐操作和容易伴随的多糖成分丢失,又能减少非糖杂质的干扰, 同时还能克服原有方法在显色反应中因浓硫酸放热而常导致的诸多难点,从多方 面减少了分析误差,提高了定量分析结果的稳定性、重现性和准确性。 法 法即,.二硝基水杨酸比色法,原理为在碱性条件下溶液与还原 糖产成红色物质,一定的浓度范围里,还原糖的多少与颜色呈现一定的比例,从 而根据比色法对多糖的含量进行测定。显色液可以直接配制,也可以预先配 制好甲溶液和乙溶液液,然后合并即可。此法简单、快捷。该法应用广泛,具有 很好的使用价值?。 其他方法 法是根据一. 在中性的条件 下还原糖与该试剂反应后生成了吖嗪,进而在碱性或酸性的条件下,将剩余的 试剂氧化为阳离子,与之前生成的吖嗪反应产生蓝色的化合物。此法具有 较高的灵敏度,还可以避免蛋白质等的干扰,尤其适合用于测定含量较低的还原 糖。红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 ...色谱法 利用法测定多糖含量时,测定样品需含有挥发性,但是糖类物质挥发性 较小,需转化成为衍生物时才能进行测定。通常是将多糖的酸水解后的物质或者 是甲醇水解物,利用或将其转化成挥发性成分,然后再进行气相色谱 分析。 白日刮等曾运用?技术研究了甲基化多糖一级结构的推测原理 及测定的方法。此外,还可以利用不同的衍生物进行定性、定量的分析以及 糖异构的检测。法测定多糖含量具有较好的分离效果、快速、分辨率较高等 优点,但是选择性能不高。 法 法进行多糖含量测定时,操作简便,不需要进行衍生化处理。此法测 定具有较好的稳定性、高分辨率、测定快速,但是因该法使用示差折光检测器, 。 该检测器灵敏度较低,影响该法的使用 法 法根据机理的不同分为离子交换、分配和吸附。该法因其操作简单方便 并且对含量较少的组分进行迅速的分离,在实验室倍受青睐。可以用于分离糖类 的薄层色谱主要包括:硅藻土、氧化铝及硅胶色谱。由于多糖为极性大分子化合 物,比较容易被吸附,因而大多采用无机盐水溶液制备溶液,来降低硅胶的吸附 性,尽量集中斑点,改善分离效果【。 ...酶法 利用酶法对多糖含量进行测定的原理是葡萄糖氧化酶催化葡萄糖转化为葡 萄糖酸和,葡萄糖酸在过氧化物酶的催化作用下,与酚和.氨基安替比林反 应生成了醌亚胺。利用酶法测定多糖含量,简单易行,方法灵敏【】。 ..多糖的纯化 经水提醇沉或者其它试剂沉淀所得到的多糖,其中常有色素、蛋白质、低聚 糖等一些杂质。它们对多糖的活性会产生影响,而且会对多糖的定性、定量 分析、 分子量测定和结构的测定产生干扰。为了得到纯度较高的多糖,需进一步除 杂。 ...除蛋白 多糖与蛋白质均为大分子物质,溶解性相似,所以利用传统的热水煎煮,乙 醇沉淀得到的粗品中,常常混有蛋白质。除去蛋白质的方法主要有酶解法、 三氯青岛科技大学研究生学位论文 乙酸法、法、三氟三氯乙烷法等【。 酶解法:此法除蛋白的原理为多糖提取液中的蛋白质被水解酶酶解。该方法 除蛋白反应温和,专一性强,实验中常用的酶主要有:木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、 链蛋白酶等。 三氯乙酸法:原理为将多糖的提取液低温搅拌,滴加质量分数为%的三氯 乙酸溶液,直至多糖溶液不再出现混浊,到摄氏度静置过夜,离心,得上清 液,即可得到脱蛋白的多糖溶液。此方法由于具有耗时短,操作简便,反应温 度 温和等诸多优点,在植物多糖脱蛋白中常被应用。 法:该方法是根据蛋白质在氯仿溶液中容易失活变性,首先将氯仿和 正丁醇按照:.的比例混合,混匀后按照:的比例与多糖溶液混合,剧烈振 摇后,变性后的蛋白质存在于氯仿与水的临界面,经离心将变性蛋白除去。需重 复数次,才可得到较好的脱蛋白效果。 所以多糖损失率高、耗时且大量使用有 机溶剂。 三氟三氯乙烷法:该法是按照:的比例加入三氟三氯乙烷和多糖溶液,低 温搅拌 ,离心弃去变性蛋白,上层的水层再按照上述方法处理两次即可。 该方法效率高,但是该溶剂易挥发,操作难度高,不能大量应用【】。 ...脱色 粗多糖中往往含有酚类物质,加深了多糖的颜色,对后续多糖的研究产生了 干扰,需对色素进行脱除。 通常使用的脱除色素的方法有:吸附法活性炭、 硅藻土等、离子交换法、氧化法、金属络合物法等【】。 活性炭脱色 活性炭为黑色粒状、粉状或者是丸状的多孔的无定形物质,表面积较大,吸 附性好且具有选择性。非极性与极性物质相比,更容易被吸附。活性炭通常在? 附近脱色效果较好,加入千分之一到三的活性炭即可,脱色到。但是活 性炭容易吸附多糖,造成多糖大量损失,并且活性炭难以除去【。 聚酰胺脱色 聚酰胺为美国最先开发利用的树脂。李进伟、丁宵琳等研究了金丝 小枣多糖脱色工艺,采用活性炭、聚酰胺及吸附树脂等方法对该多糖进行脱色, 实验结果表明,聚酰胺对金丝小枣多糖的脱色效果最佳,并且多糖的保留率也最 高,多糖中的其它杂质也可同时被除去。 脱色 双氧水法为一种常用的脱色剂,具有强的氧化性。当使用双氧水脱色时,红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 浓度不应太高,而且应该在低温下操作,否则可能会引起多糖的降解,影响其生 物活性,采用该方法时,要考虑慎重。 大孑树脂脱色 利用树脂脱色【】是新发展的一种脱色方法,其脱色效果较好。树脂也是一种 吸附性质的高聚物脱色剂,在干燥状态下其内部具有较高的孔隙率,表面积较 大、交换速率也较快、热稳定性极好,在非水和水溶液里都可以使用。吸附树脂 吸附性能好,理化性比较稳定,在酸、碱和有机溶剂中不溶,低聚物和无机盐的 存在不会对其产生影响。王许聪【】等人在红花多糖的脱色工艺研究中,以多糖损 失率和脱色率为考虑指标,采用、一、一、、一、一 等不同型号的大孔树脂进行脱色比较。结果表明,一的脱色效果更佳,并 对该方法的脱色条件包括温度、树脂使用量、、脱色时间进行了考察。在优化 后的脱色工艺条件下,色素的脱除率高达.%,多糖损失率仅为.%。 ...小分子杂质的去除 粗多糖中常常混有低聚糖和小分子杂质,影响多糖的生物活性并对后续研究 产生干扰。实验中通常采用透析出去此类杂质。透析除去小分子的原理为小分子 可以经过半透膜扩散到溶剂中,多糖为高分子聚合物,不能通过透析膜而被截留 在透析膜内,从而出去小分子杂质?】。 ...多糖的分级纯化 多糖经脱蛋白和脱色后,仍具有分散性和不均一性,主要表现在分子形状、 化学组成及聚合度等方面的不同。具有生物活性的多糖的分子量有可能只是在一 定范围内,所以有必要对多糖进行分及纯化。常用的对多糖分级纯化的方法主要 有:分级沉淀、超滤法、柱层析及其它方法。 分级沉淀法 沉淀法是利用多糖溶解度和分子量大小的不同而进行分离,该方法适用于对 溶解度差别大的多糖进行分级纯化。分级沉淀要注意防止共沉淀的产生,多糖溶 液的浓度不宜过高,乙醇应边滴加边搅拌,不宜太快。常用的为种类型。有 机溶剂沉淀法:多糖的溶解度在有机溶剂中很小,根据有机溶剂的浓度不同,分 次沉淀,将多糖进行分级纯化。甲醇和乙醇为最常用的有机溶剂。季胺盐法:酸 性多糖与溴代十六烷基三甲胺产生不溶性盐,进而将酸性多糖与中性多糖进行分 离。 超滤法青岛科技大学研究生学位论文 超滤法【分级纯化多糖是利用多糖形状与分子量的不同,不同规模的超滤 膜截留的分子量也不同。该方法可以选择性地截留不同分子量的多糖,进而将多 糖分级纯化。超滤膜可以将分子量?的物质进行分离,既可以将多糖进 行分级纯化,又可以进行脱盐和浓缩。该方法设备简单,操作简便,处理方便, 更适合于工业化生产应用。超滤法因其诸多优点,具有较大的使用价值。 柱层析法 柱层析为常用的多糖分级纯化方法,此法主要有以下两种。离子交换柱层析 【】:该方法是根据物质的分子量的差异和电荷性质的差异进行多糖组分的分离, 适用于粘性多糖、中性多糖及酸性多糖的分离。最常见的主要是同规格的 一纤维素、、、等。洗脱剂主要是 不同离子强度、的缓冲液,一般为梯度洗脱。凝胶柱层析】:这类层析法是利 用凝胶的分子筛作用,根据多糖的形状和分子量大小的不同将其分离,最为常用 的主要为琼脂糖凝胶和葡聚糖凝胶。类型不同,分离多糖的分子量也存在差异。 在纯化粗多糖时,通常是先经离子交换层析分离,再经凝胶过滤层析,洗脱剂多 为不同浓度梯度的缓冲液或者是盐溶液。该层析法成本较高,并且处理量也不大, 不适合应用于工业生产中。 其它方法 粗多糖的分级纯化方法除上述方法还有一些其它方法,如:高效液相色谱、 亲和层析、电泳法、盐析法等等。 ..多糖的分子量及单糖组成测定 多糖的分子量测定对于多糖的研究至关重要,但是由于多糖的不均一性给多 糖的分子量测定带来了困难。一般所得的分子量只是统计学上的平均值,目前测 定多糖的相对分子质量的常用方法主要有:粘度法、蒸汽压渗透法、凝胶色谱法、 高效液相色谱法、端基法及光散射法等等。 粘度法 利用粘度法测定多糖分子量时,先进行样品的特性粘度的测定,然后按照 经验的换算方程计算得到多糖的分子量。该方法简单易行,为常用方法。 蒸汽压渗透计法 蒸汽压渗透计法测定的多糖分子量范围在到,该方法灵敏度较 高,操作简单,但是在标准品的选择上应注意选择分子量已知的同种物质,求得 准确的值以后再测定样品多糖含量,但样品应预先除去小分子杂质,不能含有 葡萄糖、氯化钠等,否则会影响测定的多糖分子量的均值。红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 凝胶色谱法 凝胶色谱法【测定多糖分子量是选用分子量己知的多糖作为标准品,经凝胶 柱层析,上样、洗脱,测定外水体积和洗脱体积,计算得洗脱体积与外水体积的 比,并对作出标准曲线。按照上述方法测定样品的洗脱体积与外水体积的 比,代入标准曲线,即可求得样品多糖的分子量。 高效液相色谱法 利用高效液相色谱法【测定多糖分子量时主要是高效体积排阻色谱,进行检测 时,不进行柱前或柱后衍生化,直接通过示差折射检测器进行测定。目前为止, 最为先进的为小角激光散射检测器,它可以直接进行检测,得到多糖的分子量, 不需制作多糖标准品的标准曲线。 端基法 利用端基法测定多糖分子量时样品多糖结构中的所有的分子链必须含有利 用化学分析方法可以得到的基团,只有这样才可以对端基进行定量的分析,如此 可测的端基数目应该明确,并且数量需恒定。相比于其它测定方法,利用端基法 进行多糖分子量测定时,设备仪器简单,成本低,操作简便,为常用的方法之一。 多糖的各单元组成往往与多糖的生物活性有关,因此对多糖进行单糖组成的 测定有利于多糖的活性研究。进行单糖组成测定时,需将多糖完全酸水解,将多 糖转化为单糖,三氟乙酸、硫酸常被用作水解用酸,水解温度应保持在摄氏 度到 摄氏度,而后进行薄层色谱【、纸色谱【分析单糖组成,以各种单糖标 准品作为对照品进行分析。衍生化处理后的单糖则可采用液相或者气相色谱进行 单糖组成的测定。 气相色谱 在对单糖组成的分析中,气相色谱是常用的方法。利用该方法进行单糖的组 成测定时,一般是充氮气进行保护或者是在密闭的环境中,多糖在水解用酸 盐 酸、三氯乙酸及硫酸的作用下,转化为单糖,然后经衍生化,获得具有挥发性 和稳定性的单糖衍生物【,最后取样、上样进行气相色谱分析。对多糖进行衍生 化的方法主要有醋酸盐衍生化和三甲基硅醚衍生化。后者相对于前者而言,必须 在极性较强的溶剂中,才可以达到衍生物的有效分离旧。何玲玲等【采用该方法 对苦丁茶冬青叶中多糖的单糖组成进行了分析,采用硫酸进行酸水解、硼氢化钠 将其还原、经乙酸酐乙酰化得到稳定的衍生物,利用气相色谱进行分析,得出该 多糖由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露醇、木糖组成。 薄层色谱与纸色谱 气相色谱测定单糖组成时必须将多糖水解为单糖,进行衍生化处理,并且操 作复杂,而薄层色谱,操作简单易行。薄层色谱法测定单糖组成是首先将多糖水青岛科技大学研究生学位论文 解,然后在硅胶板上点样,经展开剂展开,显色剂显色后,根据显色斑点的 值测定单糖组成。黄纯等人【】利用该方法,通过对展开剂的探索研究,对灵芝多 糖的单糖组成进行测定。该方法中薄层板的制作也会对斑点的集中于分离产生影 响,加入:会降低硅胶的吸附能力,显色后斑点更容易集中,各个单糖的分 离效果更佳。该方法操作简便,具有较好的重现性,如与薄层扫描进行联用,则 可以对多糖进行定量检测,具有很好的实用价值。邵雪玲】通过纸色谱对蓝藻细 胞外多糖的单糖组成进行了分析。 红外光谱 红外光谱测定单糖组成主要是根据多糖基团的特征吸收峰来判定基团的存 在,主要是羟基吸收峰。、振动吸收峰和糖醛酸的吸收 峰?叫。 高效毛细管电泳法 单糖由于在中性环境中的离解能力不强,强碱的存在才能使其带上电荷,单 糖在硼砂缓冲液中即使较低的也能使其带上负电荷。单糖不同,即使是在同 一介质中,与硼砂产生的络合物也存在着差异,毛细管电泳法足以分辨出各单糖。 由于单糖在紫外范围内,吸收较弱,可以利用一萘胺将单糖衍生化,结合在紫 外可检测到的基剧。该方法将各种单糖的标准品与多糖样品进行统一处理,检 测出单糖图谱,然后将样品单糖的图谱与标准品的图谱作对照,分析即得单糖的 组成及含量。王建波等人【便采用该方法进行单糖组成的测定,并对实验条件进 行了探索研究,得出了理想的结果。 柱前衍生化高效液相色谱 高效液相色谱法测定单糖组成是近来研究中新兴的方法,它主要是水解后的 单糖经荧光试剂或者是紫外将其衍生化,然后通过进行分离,检测出单糖 组成。柱前衍生化近来得到不断的完善和发展,它有其独特的优点,例如其 衍生物不容易产生裂解,在分析的过程中不会因为异构峰产生干扰,并且该衍生 物在波长处紫外吸收明显。杨兴斌等人?利用该方法对当归多糖的单糖组 成的测定进行研究,灵敏、准确、简单易行,适用于工业放大生产。 ..多糖的药理作用 多糖是人类生命活动的重要能源之一,它影响身体的新陈代谢,具有重要的 药理作用。中药的研究越来越得到研究者的青睐,多糖为中药材中普遍含有的有 效成分,因此,多糖的活性研究也日趋深入。多糖的药理作用主要有:抗氧化抗 衰老、免疫调节、抗病毒、抗肿瘤等。 抗氧化、抗衰老红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 在众多的中医有关抗衰老的药方中,多糖为其主要成分。近来的研究多表明 多糖具有清除多种氧自由基的作用。人体的氧自由基的失衡、机体的衰老及免疫 功能的紊乱之间关联密切。在对于多糖的活性研究中,多证明多糖具有明显的抗 氧化活性,具有一定的还原能力,在清除自由基方面能力较强。俞慧红等【】证明 了枸杞多糖及芦荟多糖的抗氧化活性的存在;魏晓东【】等对灵芝、银耳多糖进行 了体外抗氧化活性的研究,实验表明二者均可增强正常小鼠白细胞介素的能力, 并对老龄化小鼠该细胞的能力有所恢复。 免疫调节作用 多糖为重要的免疫调节剂,它对机体的免疫调节活性主要有以下几种作用机 制:激活人体的巨噬细胞分泌活性物质【】、促进淋巴细跑的增殖反应【及自然杀 伤细胞等一系列免疫细胞;对多种细胞因子产生诱生作用,促进白细胞介素和干 扰素的生成;促进抗体的产生】;激活补体系统和网状内皮系统。多糖的免疫调 节作用主要体现在对体液【】、细胞等的免疫作用。具有生物活性的多糖对免疫 系统而言,调节作用至关重要,此作用主要体现在免疫刺激或者是免疫增强。活 性多糖不但能够刺激细胞、细胞毒细胞、细胞、,还可以对、、 等一系列细胞因子的产生起到促进作用。有关研究还表明,多糖具有活化补体, 促进抗体生成的活性。多糖的免疫调节作用在一定程度上也会影响红细胞的免疫 功能、中性粒细胞及神经内分泌的免疫调节。 抗病毒作用 对多糖生物活性的研究表明,多糖具有很强的抗病毒作用,如艾滋病毒、流 感病毒、单巨细胞病毒、纯疱疹病毒、肝炎病毒等等。红茄莓多糖能够抵 抗病毒,阻止抗原表达,使细胞。免于艾滋病毒的诱导,产生病变;黄芪多 糖具有抗流感的作用】;从盐藻的水溶液中提取出来的硫酸多糖能够 明显抑市和病毒的表达与复制。 抗肿瘤作用 上世纪年代,有学者开始对多糖的抗肿瘤作用进行研究。多糖主要是在 宿主的中介作用下,使机体的免疫机能非特异性和特异性免疫得到增强,进 而杀死肿瘤细胞,并非是直接作用于肿瘤细胞。在对该活性的研究中,已证明甘 草、香菇、黄精、地黄、当归、黄芪等多糖均具有很好的抗肿瘤活性,目前已有 许多多糖如猪苓多糖、香菇多糖等已被应用为抗肿瘤药,在临床上得到广泛的应 用】。 其它作用 胡名柏等【研究了猪苓多糖的抗辐射作用,对己受辐射损伤的大鼠腹腔注射 猪苓多糖后,其免疫和造血功能得到一定程度的恢复,并且提高了脾指数、有 核青岛科技大学研究生学位论文 细胞的数目、 明显增强细胞的活性。人参、茶叶、刺五加、南瓜多糖能够 有效降低机体的血糖水平。 .本课题的研究目的、内容及意义 ..本课题的研究目的和内容 通过检索国内外有关红松松塔的研究状况,本课题进行以下研究工作。 建立红松松塔多糖含量测定的新方法。 以红松松塔为原料,采用水提醇沉法制备红松松塔多糖提取物,并对其 脱蛋白、脱色等精制工艺进行研究。 研究红松松塔多糖的综合纯化工艺。通过脱蛋白、脱色、超滤分级和 一柱层析等方法对红松松塔粗多糖进行分离纯化,并对纯化后多糖进行纯 度检测。 研究红松松塔多糖抗氧化活性。 ..本课题的研究意义 松始记于《名医别录》,《本草经集注》、《证类本草》、《本草纲目》、《本草 从 新》、《新修本草》等先后都有记载。红松 为松科 松属植物,主要分布在我国东北部地区。松塔为红松的球果,其中含有 的活性多糖成分的抗肿瘤、抗病毒等功效也已经有众多研究者先后报道。松 塔资 源极为丰富,值得进一步的开发与研究。但是,有关红松松塔多糖纯化工艺及 活 性的研究报道还比较少。 本课题以红松松塔为原料,采用水提醇沉法提取红松松塔粗多糖,并对粗多 糖进行分离纯化及抗氧化活性研究,为红松松塔多糖的进一步开发利用提供 理论 依据和基础数据。红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 第章改良差示酚硫法测定红松松塔多糖含量 .材料与仪器 ..材料 红松多糖样品实验室提取,无水葡萄糖,无水乙醚、石油醚、浓硫酸, 苯酚晶体均为分析纯。 ..仪器 型电子天平 上海精密科学仪器有限公司 上海亚荣生化仪器厂 .型旋转蒸发仪 新世纪紫外.可见分光光度计 北京普析通用仪器有限公司 水浴恒温振荡器 上海跃进医疗器械厂 型调温电热套 山东甄城华鲁仪器厂 循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司 .原理 改良一差示酚硫法中首先将苯酚、水、硫酸预配显色液晗引,从而避免显色 过 程中因浓硫酸放热反应而导致的误差因素,多糖样品与该显色液显色后可测定吸 光度。此后再测定吸光度陋?:先将多糖样品与浓硫酸反应生成糠醛衍生物, 冷却至室温以下再加苯酚,在室温条件下多糖不与苯酚反应生成黄棕色缩合物, 此时测到的吸光度仅代表多糖以外的杂质成分的吸收,、两者之差即为 样品中多糖成分吸光度,该测定值已消除了共存的其它非糖成分的干扰,因而本 方法可用于含有杂质的多糖样品的定量分析。 .实验内容 ..松塔粗多糖的初步纯化 在本方法初始阶段先后用石油醚、乙醚、乙醇对多糖样品粉末进行简便的洗 涤、离心处理,得初步精制的多糖样品,由此可减少大部分脂溶性杂质、单糖及青岛科技大学研究生学位论文 低聚糖等成分的干扰。““。 ..相关溶液的制备 ...样品液的制备: 将“..”项所得初步精制的多糖样品,置于锥形瓶中蒸馏水,于沸 水浴中加热使多糖溶解,趁热过滤,并用热水冲洗锥形瓶和滤渣,将洗液、滤液 混合,转移至容量瓶中,稀释、摇匀、定容即得。 ...对照品溶液的制备: 精密称取。干燥至质量恒定的葡萄糖,置于容量瓶中,加蒸馏 水稀释至刻度。 ...其它溶液的制备: 显色液:将浓硫酸缓缓加入盛有蒸馏水的棕色小烧杯中并冷却至 约.?,加入.苯酚晶体,搅拌溶解即得。该显色液应临用现配,苯酚 晶体在棕色称量瓶中称量。 ?。苯酚液:称量.苯酚晶体于蒸馏水中即得棕色瓶保存。 ?硫酸溶液:取浓硫酸加入蒸馏水中混匀制得。 ..实验条件的考察 ...最大吸收波长的确定 精密量取...项多糖样品液于棕色瓶中,加显色液.,于 沸水浴中保温后取出,流水冷却,加入蒸馏水.,摇匀,以相应的试 剂做空白,照分光光度法在~范围内扫描;另取样品溶液.于棕 色瓶中,加入?。硫酸溶液.,于沸水浴中保温后取出,流水 冷却,加入?。苯酚溶液.,摇匀,以相应试剂做空白,照分光光度法在 ~范围内扫描。两次扫描均在处有最大吸收,所以选择 处进行测定。 ...水解条件的考察 精密量取...多糖样品液份各,置于棕色瓶,加入显色液红松松塔多糖的提 取、分离纯化及抗氧化活性研究 ,分别在沸水浴中加热、、、、、、,流水冷却后加入 蒸馏水,摇匀。用相应的试剂作空白,照分光光度法测定吸光度。加样表见 表?,结果见图一。 袁.水解条件对吸光度影响加样表 .? 图.水解条件对吸光度的影响.由图一可知水解时间在时,吸光度最大,即多 糖己完全水解,所以 选择为适宜水解时间。 ...显色条件的考察 显色液用量的确定 精密量取多糖样品液份各,置于棕色瓶中,分别加入显色液、青岛科技大学研 究生学位论文 、、、、、显色液,沸水浴加热,同上流水冷却后加入蒸馏 水,摇匀。用相应的试剂作空白,照分光光度法测定吸光度。加样表见表, 结果见图?。 袁显色剂用量对吸光度影响加样表 .? 图.显色剂用量对吸光度影响. 由图可知,当显色液用量为时吸光度最大,所以显色液最佳用量为。 显色剂放置时间的确定 精密量取多糖样品液份各,置于棕色瓶中,分别加入己放置时间 为、、、、、的显色液,沸水浴加热,流水冷却后加入 蒸馏水,摇匀。用相应的试剂作空白,照分光光度法测定吸光度。加样表见 表.,结果见图.。红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 图.显色剂放置时间对吸光度的影响 .? 由图可知,显色液随放置时间的延长,显色后的吸光度值显著降低,所以显 色液应该在使用前临时配制。 ..红松松塔多糖含量测定方法 取...项下所得多糖样品溶液.,加入显色液. ,于沸水浴中保 温 后取出,流水冷却,加入蒸馏水.,混匀后于 处测定吸光度 值;另取多糖样品溶液.,加入.‘硫酸溶液.,于沸水浴中保 温后取出,流水冷却,..?一苯酚溶液.,混匀后于处测 定其吸光度;由、两者之差求得?。青岛科技大学研究生学位论文 ..结果计算 按照..项所述方法测定吸收值,求得?,由...项所述回归方程计算样 品液中的单糖浓度,按下式计算红松松塔多糖含量。 多糖含量?/×% . 式中:为样品最终测定液中单糖浓度/,为多糖样品溶液的稀释倍 数,为红松松塔多糖样品质量 ..方法学研究 ...线性关系的考察 取对照品溶液,精密吸取.、.、.、.、.、.,按照.. 项下方法测得对应?, 由浓度对?回归得方程? .. .,在..范围内线性关系良好。 ...精密度实验 精密吸取多糖样品溶液,按照..项下方法平行操作次,依次测得?为 .、.、.、.、.、.,其为.%,表明本法精密度良 好。 ...重复性实验 取同一批多糖样品,平行制备份样品溶液,按照..项下方法操作,依次 测得?为.,.,.,.禾.,为.%,表明本法重复 性良好。 ...稳定性实验 精密吸取同一多糖样品溶液,按照..项下方法依次测定受试样品,, ,,,,的?值,考察受试样品显色后的稳定性。依次测 得?为.,.,.,.,.,.,.和.,为.%, 表明受试样品显色后内稳定性良好。 ...加样回收率实验 精密吸取多糖样品溶液份各.,分别加入对照品溶液.,按照红松松塔多糖的 提取、分离纯化及抗氧化活性研究 ..下方法测得?,重复操作次,计算结果见表?,平均回收率为.%, 为.%,表明本法准确度较高。 表?加样回收率实验结果 .? ..样品测定实例 取个批次的样品批号分别为 , , ,按照“..” 项实验方法对红松松塔多糖样品进行分析测定,实验结果见表?。 表?样品测定实例 ....讨论 本实验对改良一差示酚硫法用于红松松塔多糖成分的含量测定进行了研究, 从检测波长、水解时间、显色液放置时间及其用量、线性范围、稳定性、重现性、 回收率等多方面进行了考察, 结果表明该方法可用于红松松塔多糖含量测定, 具有很好的实用价值。 改良一差示酚硫法尤其适合于含有杂质的多糖样品的含量测定,避免了繁琐 的纯化步骤,而且能够有效克服在加入浓硫酸放热的条件下进行显色反应所容易 导致的多种误差,我们研究组已用该方法先后进行过对淫羊藿多糖。州、红松松塔 多糖等不同多糖成分含量测定的研究,均取得较满意的结果,期望以上工作能够 对同类研究具有一定参考价值。青岛科技大学研究生学位论文 .本章小结 本实验采用改良差示酚硫法对红松松塔多糖含量进行了含量测定,并进行了 方法学考察,主要结果如下: 对实验条件进行了考察,如:最大吸收波长、水解条件。结果显示: 最大吸收波长为,水解条件为沸水浴。 进行了稳定性、重现性、精密度、加样回收率等方法学考察结果表明 该方法可用于红松松塔多糖含量测定,具有很好的实用价值。 红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 第章红松松塔多糖提取物的制备及其精制工艺研究 本实验以红松松塔为原料,采用水提醇沉法制备松塔多糖提取物,并在此基 础上对其脱蛋白、脱色等精制工艺进行了研究,为红松松塔多糖的进一步纯 化提 供了参考数据。 .材料和仪器 ..材料 苯酚、磷酸、浓硫酸、乙醇均为分析纯,木瓜蛋白酶万/广西省徐 闻县美仑生物制品有限公司;牛血清白蛋白细胞培养级国药集团化学试剂有 限公司。 ..仪器与设备 紫外分光光度仪. 北京莱伯泰科仪器有限公司 旋转式蒸发仪. 上海亚荣生物仪器厂 台式离心机? 上海安亭科技仪器厂 电子天平 上海精密科学仪器有限公司 调温电热套型 山东甄城华鲁仪器厂 数控超声波清洗器. 昆山合创超声仪器有限公司 循环水式多用真空泵.型 郑州长城科工贸有限公司 电热恒温干燥箱. 天津市泰斯特仪器有限公司 .蛋白质含量测定??考马斯亮蓝法 蛋白质的定量分析方法,在生物化学的研究中为最基本、最常用的分析。目 前最为常用的含量测定方法主要有考马斯亮蓝法、双缩脲法、凯氏定氮法、 紫外吸收法等。其中考马斯亮蓝法较其他方法,灵敏度最高;凯氏定氮法的准 确 性较高,但是操作比较复杂例。 蛋白质与考马斯亮蓝.发生反应,稳定并且迅速,在分钟内即可达到 平衡。结合后的产物可以在小时内稳定存在,且在~之间,产物颜色可 在到分钟内保持稳定。该法操作简便易行,耗能少,且不易受其他物质干 青岛科技大学研究生学位论文 扰。本课题综合考虑,选用该方法测定红松松塔多糖中的蛋白质含量。 ..测定原理 原理:考马斯亮蓝法是利用蛋白质能与显色剂发生反应产生颜色变化的原 理来测定蛋白质含量的。考马斯亮蓝.在酸性溶液中呈现棕红色,可 达到平衡,在处测定吸光度,在浓度范围为.../内均可进行测 定。该方法简便易行,反应快速,耗能少,但是法测定不同的蛋白质时 会产生较大的偏差,制作的标准曲线也会呈现轻微的非线性,所以不能利用 比尔 定律进行蛋白含量的计算,只能根据标准曲线来计算出样品中蛋白质的浓度, 圳。 ..标准曲线的绘制 蛋白质标准液的制备 精密称取牛血清白蛋白.于 容量瓶中,定容,即为.?一 的蛋白质标准液,于?~?冰箱中保存。 考马斯亮蓝试剂的制备: . ,再加入%磷酸 精密称取考马斯亮蓝. ,加入%乙醇 ,最终试剂含.%考马斯亮蓝.、.% ,最后用蒸馏水定容至 乙醇、.%磷酸,置于棕色瓶中备用。 标准曲线的制备: 用移液管分别精密量取蛋白质标准液.,.,.,.,.,.,.,., .于 棕色容量瓶中,分别记为、、、、、、、、,各管加水至 ,各加入考马斯亮蓝.溶液 ,混匀,放置,以号为参比于 处测定其吸光度。加样数据见表.,标准曲线见图.。 表?考马斯亮蓝法标准曲线加样表 .?红松松塔多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 《/ 图?考马斯亮蓝法蛋白质标;隹曲线 . ..样品中蛋白质含量测定和蛋白去除率的计算 取供试品溶液两份各,以空白试剂为参比,按上述标准曲线的测定法, 测定其吸光度值,根据标准曲线计算出样品中的蛋白质浓度,按照下式计算 样品 中蛋白质的含量。 蛋白质含量?/×% . 式中:为样品最终测定液中蛋白质的浓度/,为样品溶液的稀释倍 数,为红松松塔多糖样品质量 在以下脱蛋白工艺中,按下式计算蛋白去除率: 蛋白去除率酶解前蛋白含量一酶解后蛋白含量?酶解前蛋白含量×% . .多糖损失率测定 按照..项方法测定多糖含量,在脱蛋白脱色工艺研究中,按照下式计 算多糖损失率: 多糖损失率酶解/脱色前多糖含量一酶解/脱色后多糖含量酶解/脱色 前多糖含量×% .脱色率的测定 在脱色工艺研究中,按下式计算脱色率: 脱色率%脱.脱色后木/脱色前?青岛科技大学研究生学位论文 脱色前、脱也后分别为吸收前和吸收后溶液在处的吸光度。 .红松松塔多糖提取物的制备 ..松塔多糖的提取 ...煎煮浓缩 将红松松塔水洗、干燥、粉碎后称取,水煎煮次料液比为:, 每次,滤液合并,静置、离 心得 信息技术培训心得 下载关于七一讲话心得体会关于国企改革心得体会关于使用希沃白板的心得体会国培计划培训心得体会 上层清夜,浓缩、放冷。 ...醇沉 将...所得浓缩液加入一倍量乙醇,搅拌,静置过夜,离心所得清液加入 乙醇至约两倍量,静置,离心所得清液,继续加入乙醇至醇浓度为%,静 置,处理同上。 ...沉淀处理 将醇沉沉淀加入%乙醇洗涤,离心,沉淀继续加入%乙醇洗涤,离心,将 所得沉淀经自然晾干无醇味后,烘箱干燥得多糖粗品。 ..结果与分析 将...所得多糖粗品称重共.,按照改良差示酚硫法测定多糖含量为 .%,按照公式多糖得率多糖粗品重/投药量./.%,多糖产率多 糖粗品重术多糖含量/投药量.木./.%。 ..放大实验 ...提取方法 将红松松塔水洗、干燥、粉碎后称取.,加水浸泡,煎煮,趁热过滤,操 作过程同...?...。 ...结果与分析 放大实验所得粗品总重为,按照改良差示酚硫法测定多糖含量为.%, 按照公式多糖得率多糖粗品重/投药量/.%,多糖产率多糖粗品重术红松松塔 多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究 .%。 多糖含量/投药量./ .红松松塔多糖脱蛋白工艺研究 ..脱蛋白方法筛选 ...三氯乙酸法脱蛋白 三氯乙酸法脱蛋白的原理为试样中的蛋白质能与其反应,使蛋白质变性而产 生沉淀,该方法简单易