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肉与肉制品 L(-) - 羟脯氨酸含量测定 GB 9695.23-90
Meat and meat products-Method for determination
of L (-)- hydroxyprolin content
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本标准等效采用国际标准 ISO 3496-1978《肉和肉制品中 L(-)-羟脯氨酸含量的测定》。
1 主
题
快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题
内容与适用范围
本标准规定了肉与肉制品中 L(-)-羟脯氨酸含量的测定方法。
本标准适用于肉与肉制品中 L(-)-羟脯氨酸含量的测定。
2 引用标准
GB 9695.19 肉与肉制品 取样方法
3 原理
试样在氯化亚锡的盐酸溶液中水解,释放出羟脯氨酸。经氯胺 T氧化,生成含有吡咯环
的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺 T。羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红
色化合物,在波长 558nm处进行比色测定。
4 试剂
所用试剂均为
分析
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纯,水为蒸馏水或同等纯度的水。
4.1 氯化亚锡(GB 638):0.75％溶液。
将氯化亚锡 7.5g溶于 500mL水中,再加入 500ml浓盐酸(GB 622)。
4.2 盐酸(GB 622):6 mol/L溶液。
4.3 氢氧化钠(GB 629);1 mol/L、10 mol/L溶液。
4.4 缓冲液:将 50g柠檬酸,26.3g氢氧化钠和 146.1g结晶乙酸钠(GB 694)溶于水,稀至 1L,
此溶液与 200mL水和 300mL正丙醇混合。
4.5 氯胺T(HG 3-972)溶液:将 1.41g氯胺T,溶于 10mL水中,依次加入 10mL正丙醇和 80mL
缓冲溶液(用时现配)。
4.6 显色剂:称取 10g对二甲氨基苯甲醛,用 35mL高氯酸(GB 623)溶解,缓慢加入 65mL异丙
醇。
4.7 L(-)-羟脯氨酸(C5H9NO3)标准溶液。
4.7.1 标准储备液 500μg/mL:称取 50.0 mg/L(-)-羟脯氨酸用少量水溶解,加一滴 6 mol/L
盐酸,定容至 100mL容量瓶中。
4.7.2 标准工作液 5μg/mL:吸取标准储备液 5.00mL于 500mL容量瓶中,定容。
5 仪器和设备
5.1 实验室常规设备。
5.2 绞肉机;孔径不超过 4mm。
5.3 配有冷凝管的三角瓶:250mL。
5.4 恒温水浴。
5.5 试管加热器或水浴,可控温于 60℃。
5.6 分光光度计。
6 试样
6.1 按 GB 9695.19取样。
6.2 试样准备
6.2.1 生肉与生肉制品:用快刀把完整的肉切成约 0.5cm**3的小丁,装入密封样品盒中,或
者用耐热塑料袋真空包装,在 70℃以上保温 30min,以下按 6.22步骤进行。
6.2.2 熟肉制品:取有代
表
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性的试样 200g,于绞肉机中绞两次,使其混匀,贮于容器中备用。
6.3 制备好的试样要尽快分析,若不立即分析要密封冷藏保存,防止变质和成分变化。贮
存的试样在启用时必须重新匀质。
7 分析步骤
7.1 试样前处理
称取试样 5g(精确至 0.001g)放入 250mL磨口三角瓶中,注意不要使样品粘在壁上。加
几粒沸石。加入氯化亚锡溶液 100mL,置于水浴上加热回流 16h。
趁热将水解溶液过滤于 200mL容量瓶中,用 6 moL/L热盐酸 10mL反复三次冲洗三角
瓶和
滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取 5～25mL(V1)水解液于 100mL烧杯中,用 10mol/L、
1 mol/L氢氧化钠溶液调节 pH为 8±0.2,过滤于 250mL容量瓶中,用 30mL水冲洗烧杯和滤
纸
上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。
7.2 测定
7.2.1 标准曲线的绘制
吸取 L(-)-羟脯氨酸标准工作液 0.00,10.00,20.00,30.00,40.00mL,分别置于 100mL
容量瓶中,定容摇匀。浓度分别为 0.0,0.5,1.0,1.5,2.0μg/mL。取不同浓度的上述溶液
4.00mL,分别加入 20mL具塞试管中,加氯胺 T溶液 2mL,摇匀后于室温放置 20min。加入显
色
剂 2mL,摇匀,塞上塞子于 60℃试管加热器(或恒温水浴)中保温 20min后取出,迅速冷却,在
波长 558±2nm处测定吸光值,绘制标准曲线。
7.2.2 试样测定
从 250mL容量瓶中吸取已制备好的样液(7.1)4.00mL于 20mL具塞试管中,以下按 7.2.1
步骤进行,同时作空白试验。
8 分析结果的计算
5C
计算公式: X = ───
mV1
式中:X——样品中 L(-)-羟脯氨酸的含量,％;
C——从标准曲线上查得相应的 L(-)-羟脯氨酸量,μg;
m——称取试样的质量,g;
V1——从 200mL容量瓶中吸取滤液的体积,mL。
当符合允许差所规定的要求时,取两次测定结果的算术平均值作为结果,结果精确
到 0.01％。
9 允许差
同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不得超过平均值的 5％。
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附加说明:
本标准由中华人民共和国商业部提出。
本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。
本标准由中国肉类食品综合研究中心起草。
本标准主要起草人张燕婉、焦烨。
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国家技术监督局 1990-11-15批准 1991-10-01实施
浙公网安备 33021202002483