纳米银涂层深静脉导管的体外抗菌研究（可编辑）

纳米银涂层深静脉导管的体外抗菌研究（可编辑） 学位 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 独创性声明 学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地 方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含 为获得直昌态堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我 一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的 说明并表示谢意。 学位论文作者签名手写:踯祸.签字日期:办弓年:月口占日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规 定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允 许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部 分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制 手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中 国学术期刊光盘版电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论 文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发 表,并通过网络向社会公众提供信息服务。 保密的学位论文在解密后适用本授权书 导师签名手写: 学位论文作者签名手写坤朔. 签字日期:年&月口日 签字日期:弓年口月摘要 摘要 背景: 危重症患者常需置入深静脉导管以便治疗和监测,但随之而来的导管相关 性感染已成为院内感染的重要组成部分。 目的: 观察纳米银涂层深静脉导管的体外抗菌性能,探索一种强效广谱、持久稳 定的新型抗菌导管,满足危重病人液体输入、营养支持及血流动力学监测等方 面的需求,减少导管相关性感染的发生率。 方法: .抑菌圈实验:采用抑菌圈实验法分别测定纳米银涂层抗菌导管实验组 和普通导管对照组对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿 假单胞菌、鲍曼不动杆菌、白色念珠菌的抑菌圈直径。 .体外抗菌实验:将纳米银涂层抗菌导管实验组和普通导管对照组 浸泡于无菌生理盐水中长期恒温保存;相应时间后取出部分导管与菌悬液混合, 平板菌落计数法测定导管表面粘附的细菌数,并计算抗菌率。 .数据处理和统计分析:采用配对检验和方差分析法分析实验组与对照组 数据,判断差异有无显著性。 结果: .抑菌圈实验。实验组纳米银涂层抗菌导管的抑菌圈直径显大于对照 组普通导管.。实验组抑菌圈直径为金黄色葡萄球菌.土.、表皮 葡萄球菌.:.、大肠埃希菌.:.、铜绿假单胞菌.:.、鲍曼不 动杆菌.:.、白色念珠菌..,差异有显著性.。对照组抑 菌圈直径为金黄色葡萄球菌.士.、表皮葡萄球菌.士。、大肠埃希菌 .:.、铜绿假单胞菌.:.、鲍曼不动杆菌.士.、白色念珠菌 .:.,差异有显著性.。 .体外抗菌实验。实验组纳米银涂层抗菌导管表面粘附细菌数明 显少于对照 组普通导管尸.。纳米银涂层抗菌导管对金黄色葡萄球菌个时相 点的抗 菌率%分别为..、..、.:.、.士,、..: 对表皮葡萄球菌为..、..、.士.、.:.、..:摘要 对大肠埃希菌为..、..、.:.、..、..; 对铜绿假单胞菌为..、.:.、.士.、..、..; 对鲍曼不动杆菌为.士.、..、.士.、.士.、.士.; 对白色念珠菌为.:.、.:七.、.士.、..、..。 结论: 纳米银涂层深静脉导管对各常见菌种具有强效、广谱的抗菌能力, 且抗菌 效果持久稳定,具有较高的临床实用价值。 关键词:导管相关性感染;生物膜;纳米银;抗菌导管 : ?,. :?印 ?, , , ‘. , : .: ?? , , 、 ? 、 、 . .: ;, . . :, .: ..? /伊。叩沪.. : .士.、 ..、 ..、 .士.、 ..、 .士., ? : .. .:.、 .士.、 .士.、 .士.、 . .、 .士., ...? .妒. /? 印? .士.、..、.士.、.士.、..; 、..、 :.士.、..、.士. .土.; :.士.、.士.、..、..、., :..、.士.、.土.、.士.、 .士.; :..、.士.、.士.、.士.、 .士.: :..、.土.、.士.、.士.、.士. :?, , .. , : 目录 目录 第章前言? .引言?.. ..背景?.. .. 诊断 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 . .. 相关病原学??. ..预防的探索..纳米银抗菌材料.纳米银涂层抗菌导管相关数 据?.. .实验设计思路??一 第章抑菌圈实验.. .实验菌种选择. .材料?. ..主要试剂与仪器 ..菌株..导管?.. .实验方法..配制菌悬液..菌悬液涂布平板 ..导管插入平板一 ..平板培养??.. ..测量抑菌圈直径??.. ..统计学分析?.. .结果? .小结与讨论.. .几点说明?.. 第章体外抗菌实验目录 . 引言 . 实验 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 标准. 实验设计? , 材料.. ..主要试剂与仪器??. ..菌株? ..导管?. . 实验方法?.. .. 导管置入生理盐水中保存.. ..菌悬液浸泡导管,培养菌膜??.. ..洗脱菌膜,得到待测菌悬液??.. ..待测菌悬液涂板,培养菌落??一 ..菌落计数,并计算抗菌率.. ..统计学分析.. .结果 .小结与讨论?.:第章结论与展望.. . 结论 .展望 ..抗菌导管新进展?。 ..后续实验设想??.. 致谢? 参考文献综述中英文缩略词表 中英文缩略词表 缩略词 中文全称 英文全称导管相关性感染 导管相关性血流感染 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌‘ ? 耐甲氧西林表皮葡萄球菌 美国模式培养物集存库 导管细菌定植 扫描式电子显微镜激光扫描共聚焦显微镜 第章前言 第章前言 .引言 ..背景 大面积烧伤患者由于正常皮肤严重毁损,体液大量丢失,亟需补 充足量晶、 胶体、水分防止低血容量性休克,维持体内环境稳定,故常规置入 深静脉导管, 保证输液通畅;其他危重病人为了快速用药、监测血流动力学、 胃肠外营养等 也经常采用深静脉置管以保证治疗顺利进行。但随之而来的导管相关性感染 ,已成为医院获得性感染的重要组成部分。据资料 显示】,美国导管相关性感染发生率占院内感染总数的%左右,人数高达一 万例;在中国占医院相关性菌血症的%一%,是导致危重症患者病死率升高 和医疗费用增加的主要原因之一。 .. 诊断标准 正确诊断有赖于临床症状和实验室检测的紧密结合。参考美国 版导管相关性感染防治指南中的诊断标准【】,按严重程度细分为?导管定植:无 临床症状,仅导管表面有病原体粘附,通过导管尖半定量培养确诊。?导 管相关性软组织感染:置管部位出现明显感染症状,如红肿、压痛、脓性分泌 物等炎症反应,但感染局限,未形成全身性脓毒症,导管尖半定量培养阳 性。?导管相关性菌血症:病原体随导管入血,出现高热、寒战等全身感染症 状,导管尖和外周血分离培养出相同菌株。 导致的全身性脓毒症常危及患者生命,导管尖和外周血的联合细菌培养 是目前最可靠的诊断方法金标准,但需要拔除导管进行检测。若患者情况危 重不允许拔管或重新置管困难时,可从深静脉导管和表浅静脉内分别采集 .血液进行血培养定量,当病原菌种类相同且深静脉导管血的细菌数大于 表浅静脉血.倍以上时,便可诊断为导管相关性菌血症;也有学者提出,单 凭深静脉导管血培养菌落数/,诊断便能成立【。 .. 相关病原学第章前言 近年来,为了解的病原学特征及其细菌耐药性,进行了一系列多中心大 样本的细菌学研究及耐药性实验。目前认为皮肤表面共栖菌和院内感染常见菌 是导管相关感染的主要致病菌种,包括耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和表皮葡 萄球菌,以及肠杆菌、阴沟杆菌、铜绿假单胞菌、念珠菌等。 常规深静脉置管时的无菌操作只能将皮肤表层细菌杀灭,仍有约%残留 在表皮层、皮脂腺和毛囊等皮肤附件中;且常用的穿刺部位如腹股沟、颈部等 均是细菌密度较高的区域,深静脉导管作为人体异物,极易导致上述细菌附着。 其他主要的感染途径包括?由于医护人员忽视无菌操作原则,易发生院内感染 细菌从接头处侵入导管内表面并定植,细菌生长繁殖后释放入血流?导管血管 内段与进入血循环的细菌接触后,细菌在导管上黏附定植【。 研究表明,%.%的细菌不是以漂浮状态生长于液体中,而是以固定菌 落形式生长、黏附于物体表面,黏附的细菌形成生物膜。向军等用扫描电子显 微镜观察烧伤患者的深静脉导管尖端生物膜情况,比较直观地显示了生物 膜复杂结构和多样形态:可见细菌大量粘附于导管内表面,混合血液中少量红 细胞,与自身分泌的细胞外基质融合成形态多样的立体膜片状结构:临近管壁 的生物膜基底处细菌密度高,结构完整,但因缺乏必需的营养物质和氧气,死 菌比例高;而表层细菌较少,与胞外多糖融合不完全,有利于菌体 摄取养分和 脱落释放,因此活菌较多。对分离出的临床菌和标准菌行激光扫描共聚焦显微 镜观察可知,临床菌株生物膜形成能力远远强于标准株,原因可能与 基因调控相关。 生物膜是细菌在物体表面形成的程序化多细胞三维结构。与浮生细菌相比, 杀灭生物膜中细菌更加困难,这是通过耐药性的改变和免疫逃逸机制实现的。 在合适环境下生物膜可以向血液中释放大量游离菌,导致机体反复迁延性感染 和对绝大多数抗生素耐药【。 ..预防的探索 以往的研究【已明确导管长期留置、导管性状、患者免疫力低下、多次穿 刺及输注高营养液体等为.形成的危险因素,得到如下结论:如中心静脉导管 留置时间不超过天,尽量选用柔软、光滑、直径较小的单腔高分子材料管,避 免在同一部位反复穿刺置管尤其是创面,重视导管周围皮肤的无菌护理等。但 这些措施只能起到部分预防的作用,一旦留置静脉导管的患者出现高热、寒第章前言 战、脓性分泌物等感染症状,排除其他感染源,标本实验室检测阳性而确诊后, 只有拔除可疑导管才能彻底解决病灶。 在了解的发病机制后,如何破坏生物膜的形成才是治疗导管相关性感染 的关键。最有效、最直接的方法就是对深静脉导管表面进行抗菌改性,使其具 有抵抗病原微生物的作用;病原体无法在导管表面粘附、定植形成生物膜,也 就从根本上杜绝了的来源。等研究报道抗生素锁联合全身抗生素疗 法治疗导管相关性感染有一定疗效,特别是针对革兰氏阴性杆菌和凝固酶阴性 葡萄球菌。另有研究表明【。,米诺环素/利福平涂层导管可以有效降低导管中 多重耐药菌定植以及,原理是应用阳离子表面活性剂来结合负电荷的利福 平以及米诺环素,使之减慢药物的释放。季君晖等】在医用高分子材料加工过 程中加入银系抗菌剂使塑料等材料具有抑菌和杀菌作用。以上实 验思路值得肯 定,但所得新型导管有效抗菌时间相对临床实际需求仍较短,抗菌效果亦有限, 对需要长期留置的危重患者效果甚微,亟需一种强效、稳定、安全的新型抗菌 材料。 ..纳米银抗菌材料 随着纳米科技向医学领域内的渗透,一种新型的抗菌材料一纳米银. 在抗菌敷料、外用凝胶、医用导管、人工关节等方面的应用日渐广泛】。 纳米材料独特的微观属性决定其具有与宏观物体截然不同的理化性质,抗菌活 性远高于传统抗菌剂【 。‘。纳米银广谱抗菌的机制目前仍不完全清楚,主要与 纳米银微粒的直径、形态、对细菌蛋白质和遗传物质的破坏作用有关【明】。体外 抗菌实验研究表明:纳米银制剂对多种凝固酶阴性葡萄球菌、条件致病的非发 酵菌、肠杆菌属、多数真菌等都表现出强效、广谱的抗菌效果【】。 目前也有许多研究证实高浓度的纳米银对细胞产生毒性,引起细胞凋亡, 主要机制包括肿瘤坏死因子受体通路、线粒体依赖的细胞内通路,的损伤 通路、活性氧通路以及相关等通路。向冬喜等对小鼠进行了经口毒性试 验、皮肤及阴道黏膜刺激试验和亚急性毒性试验,所用纳米银悬液浓度高达 ?/,结果显示小鼠皮肤、阴道粘膜均未见明显异常反应,血常规、血 生化等在正常范围,血清银含量无明显差别,肝、肾、阴道等脏器病理检查也 无组织学异常;另纳米银对犬肾细胞的毒性实验证实:纳米银对其最大 无毒浓度为./。由此可见,纳米银虽极易进入组织细胞内,但只要严格控第章前言 制其最大无毒浓度,规范最低有效剂量,完全可以在避免毒性作用的同时达到 较好的治疗效果。由此可见,纳米银是一种强效、安全、稳定的新型抗菌材料, 具有巨大的临床应用价值。 现阶段对纳米银的了解大多集中在基础研究和直接应用范畴,缺乏不同状 态、不同界面的报道。因此我们决定以普通导管为对照,研究新 型的纳米银涂 层抗菌导管对各种常见病原体定性及定量的抗菌效果。得出试验数据后,运用 配对检验和方差分析法分析结果。拟通过本研究得出纳米银涂层导管具有强效 广谱、稳定持久的抗菌效果,探索出一种新型抗感染深静脉导管,满足临床实 际需求,减少导管相关性感染的发生。 .纳米银涂层抗菌导管相关数据 本实验前通过与清华大学深圳研究生院的合作,已成功研制出纳米银涂层 抗菌导管的样品,有较好的前期研究基础,具体过程如下:?室温下,首先把 四氢呋喃中。?加入 聚氨酯溶解在 /硝酸银水溶液 .,高速搅拌分钟至溶解完全。?按照还原剂与银盐质量比 为:~:,迅速加入硼氢化钠.,高速剧烈搅拌小时直至反应完全。 此时银盐可被快速还原生成纳米银颗粒,溶液呈棕黄色。?去除杂质,所得溶 液经过过夜沉淀,获得液态纳米银一聚氨酯抗菌材料,装瓶密封或浇铸成膜保存。 ?液态纳米银.聚氨酯抗菌材料可在导管表面浇铸成膜,室温下 待溶剂挥发完全, 所得导管用大量纯水清洗,再在~纯水中超声小时去除残留溶剂, ~?烘干,即得纳米银涂层抗菌导管。 导管壁涂层中的聚氨酯基质通过物理吸附作用与纳米银颗粒相结合,使其 免于氧化、不易脱落;同时纳米银抗菌成分通过扩散作用缓慢释放出来,达到 长效抗菌的目的。 .实验设计思路 一、为了研究纳米银涂层抗菌导管的实际抗菌效果和有效抗菌时间,核心 设计应该使导管与各致病菌种直接接触、作用,模拟导管长期留置于血管液态 坏境中,抵抗入侵病原体粘附、定植的过程??最终决定采用菌悬液浸泡导管 的方法,在相似的液态环境里进行体外抗菌实验,最大程度还原临床实际置管第章前言 过程。从而直接验证纳米银抗菌导管的实际效果,而非单纯纳米银制剂的作用。 相比动物深静脉置管的复杂性和不可预知性,体外抗菌实验有着细菌浓度稳定 且菌种多样,易于操作,容易掌控等优点。 二、?抗菌导管的最终目的是确保不发生导管相关性感染,主要是防止其 表面形成生物膜,而非一般抗菌药物那样单纯杀菌或抑菌,因此实验结果观察 的重点应是与细菌相互作用后导管上粘附细菌的数量,而非菌悬液中存留的细 菌浓度。?由于纳米银导管对病原体的作用各异,不同菌种间粘附的细菌数无 可比性,不利于比较纳米银导管对各菌种抗菌效果的差异,因此引入抗菌率的 概念。抗菌率的高低就显示纳米银导管不同的抗菌效果,同时也便于观察抗菌 能力随时间的变化。?为了达到长时间留置的预期目标,设计导管浸泡时问需 较长,以此验证抗菌导管壁上的有效成分经缓慢释放后是否仍有足够抗菌能力。 经过对照、比较,认为周比较合适详见后述。此为体外抗菌实验。 三、上述实验定量测定了纳米银导管的抗菌效果,比较准确,但不够直观, 因此引入一项抗菌药物常用的测试方法??抑菌圈实验。将培养基中心的滤纸 片替换成纳米银抗菌导管即可直接观察抑菌效果,如有相关抑菌 圈出现,更能 直观证明纳米银导管显著的抗菌能力。此为抑菌圈实验。第章抑菌圈实验 第章抑菌圈实验 .实验菌种选择 目前认为皮肤表面共栖菌和院内感染常见菌是导管相关感染的主要致病菌 种,其中凝固酶阴性的表皮葡萄球菌、耐甲氧西林金葡菌占有相当大 的比例;近年来随着广谱抗生素的滥用,逐渐改变了院内感染的细菌组成,某 些条件致病菌的比例明显升高,主要包括革兰氏阴性杆菌,如大肠埃希菌、粪 肠球菌、鲍曼不动杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯菌等;以及部分真菌,如白色 念珠菌、热带念珠菌、霉菌等。 据沈连香等【】报告:医院感染的病原菌以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、金 黄色葡萄球菌居多,而最常见的致病菌为凝固酶阴性葡萄球菌特别是表皮葡 萄球菌,其次是肠杆菌属和念珠菌属。徐雅萍等的调查结果显示最常见致 病菌为鲍氏不动杆菌,其次是表皮葡萄球菌和绿脓杆菌,真菌以白色念珠菌为 主。盛慧球等口报道五种最常见的病原菌分别为表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球 菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯菌和鲍氏不动杆菌。刘斌等【】结果相似,依次为凝 固酶阴性葡萄球菌、白色念珠菌和鲍氏不动杆菌。 、表皮葡萄 综上所述,确定种实验菌种??金黄色葡萄球菌 、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌。 球菌、大肠埃希菌 其中金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌为质控标准菌株;其余均为院内感染标本中 分离所得的临床菌株。以上菌种均是院内感染和导管相关性感染的最常见致病 菌,涵盖了革兰氏阳性菌口、革兰氏阴性菌一及真菌,且分为标准菌 及耐药菌,菌种范围广,有力的证明了纳米银涂层深静脉导管的广谱抗菌性能。 .材料 ..主要试剂与仪器 生产或提供单位 主要试剂与仪器 美国公司 .%增菌盐水 贵州天地药业有限责任公司 无菌生理盐水 第章抑菌圈实验 一次性使用拭子 江苏康健医疗用品有限公司 移液器 德国公司 法国生物梅里埃公司 比浊仪 隔水式电热恒温培养箱 上海一恒科学仪器有限公司 琼脂培养基 郑州贝瑞特生物技术有限责任公司 广州市迪景微生物科技有限公司 沙氏培养基 超净工作台 深圳市利龙湖实业有限公司 ..菌株 金黄色葡萄球菌 、 大肠埃希菌 、表皮葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、 白色念珠菌 ..导管 纳米银涂层抗菌导管:由清华大学深圳研究生院提供 普通导管:苏州百世康医疗器械有限公司 .实验方法以下操作均在无菌安全柜中进行 ..配制菌悬液 ?将适量.%增菌盐水加入玻璃试管中约/高度待用; ?用一次性使用拭子从菌种平板中挑取个完整菌落,置于试管盐水中缓 慢搅拌、混匀,使棉拭子上的菌落充分溶解在增菌盐水中,并利用拭子头端清 除配制过程产生的少量气泡,最终形成无色透明、溶质均匀的新鲜菌悬液; ?将盛有新鲜菌悬液的试管放入比浊仪孑腔内,随即转动一圈,通过增菌 盐水调整菌悬液浓度,使之达到.个麦氏单位左右,含菌量约为 /; ?用增菌盐水将/菌悬液等比稀释注至/,无菌棉塞封口, 标记待用。 注:等比稀释即菌悬液与增菌盐水按:容积比例混合,每次所得菌悬液含 菌量降低倍,共稀释次。 ..菌悬液涂布平板 ?预先将平板和沙氏平板从?冰箱取出,使其在常温环境下复温,第章抑菌圈实验 以利于细菌增殖; ?将一次性使用拭子浸入各稀释的/菌悬液中,沾取适量后,用十 字划线法注将白色念珠菌菌悬液均匀涂布到沙氏平板上;其余种细菌菌悬液均 匀涂布到各自平板上。 注:即先平行划字线,划满平板后再垂直于之前所画线继续划字线, 最后再环绕平板边缘一周。 ..导管插入平板 ?在平板外壳上用标记笔划线,将涂布完成的含菌平板标记为左右对称的 两部分,即抗菌导管组实验组和普通导管组对照组; ?用无菌手术镊将根环氧乙烷灭菌的注长纳米银抗菌导管直立插于平 板左半部中央的琼脂内,同时右半部灭菌普通导管对照。 注:由于平板厚度的限制,导管长于则培养基盖不能合上,导管极易 移动、歪斜、脱落,也易受到环境中杂菌的污染。 ..平板培养 ,观察结果。 将操作完成的平板置于电热恒温箱中培养 ..测量抑菌圈直径 以导管中心为圆心,测量其与最近菌落问的距离舢,可视为抑菌 圈半径, 乘以即得直径。 ..统计学分析 各菌种重复次,所得数据用表示,.统计软件进行配对 检验和单因素方差分析,.有统计学意义。 .结果 实验组抗菌导管平板左侧与对照组普通导管平板右侧抑菌效果有 明显差别。普通导管周围菌落密集,几乎不见抑菌圈,其中大肠埃希菌、铜绿 假单胞菌、鲍曼不动杆菌、白色念珠菌等四种直接在导管管壁上形成菌落,见 图. .。而抗菌导管周围则有较明显的类圆形无菌区域,其中无菌落生长,第章抑菌圈实验 见图.。 抗菌导管组实验组和普通导管组对照组所测得抑菌圈直径有明显 差别,以金黄色葡萄球菌为例,按照配对资料检验方法,计算得.,查 界值表得.,结果有明显的统计学意义。其余菌种统计结果依次为表 皮葡萄球菌.,.;大肠埃希菌.,.;铜绿假单胞菌 .,.;鲍曼不动杆菌.,.;白色念珠菌., .。综上可知,全部菌种的实验组和对照组比较均有统计学意义。 对抗菌导管组实验组的抑菌圈直径进行单因素方差分析,验证其在不 第章抑菌圈实验 同菌种间是否存在差异,得.,.,差异有显著性,说明抗菌导管对 种实验菌种的抑菌圈直径不完全相同。各实验菌种两两比较可得:抗菌导管对 金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径大于其余菌种,差异有显著性尸.;其余菌 种抑菌圈直径差异无显著性.。 同样对普通导管组对照组分析得.,.,可知普通导管对实 验菌种的抑菌圈直径也不完全相同。两两比较得:只有金黄色葡萄球菌和表皮 葡萄球菌与其余菌种的差异有显著性.,其余均无显著性.。 表.抑菌圈实验所得直径士 注:与普通导管比较.。 .小结与讨论 目前已有相当数量文献报道了深静脉导管相关性感染,对其感染发生率、 病原菌分布及危险因素等都有较详细的描述。本研究即根据相关结论设计抑菌 圈实验,通过对比新型纳米银涂层抗菌导管与普通导管在含菌平板上形成抑菌 圈的大小,直观验证纳米银涂层导管的抗菌性能,有利于对比分析数据,得出 的抗菌结论有较强可信度。其次上述种实验菌株涵盖了近年来最常见的 致病菌,包括革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及真菌,且分为标准 菌及耐药菌两类。若抗菌导管对上述菌种均显著有效,基本可以判断其具有广 谱抗菌能力。 实验中纳米银涂层抗菌导管表面附着的纳米银微粒以自身为圆心,通过琼 脂缓慢扩散到平板周围的圆形区域中,形成类圆形的抑菌圈。表.结果显示: 第章抑菌圈实验 纳米银抗菌导管组对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单 胞菌、鲍曼不动杆菌、白色念珠菌等形成的抑菌圈直径均明显大于普通导管组, 结果有统计学意义尸.,表现出良好的广谱抗菌效果。由于实验菌种各自 生物学特性存在明显差异,对纳米银敏感程度不同,其抑菌圈直 径的差异有显 著性,总体均数不完全相同.。其中抗菌导管对金黄色葡萄球菌抑菌圈 直径最大,达.,其余菌种差异无显著性.。对照组普通导管抑 菌圈直径过小,基本无抗菌作用,更有大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动 杆菌、白色念珠菌等四种抑菌圈直径为,直接在导管壁上形成菌落,完全 无抗菌能力。 综上所述,纳米银抗菌导管对、一及真菌,标准菌及耐药菌等均有良好 的抑制作用,表示其具有较强的广谱抗菌能力。 随着纳米技术和纳米抗菌材料在医学领域内的渗透,对其强效广谱抗菌机 制的研究正逐步深入。纳米粒子指直径小于.的超微颗粒,具有独特的精细 结构,如球状、棒状、平头三角形、六边形等复杂几何形状,是原子簇到宏观 物体的过渡形态。处于典型介观系统的纳米粒子具有大表面的特殊效应,在量 子力学、热学、电学等方面与常规抗菌剂存在显著差异】。众多新型纳米抗菌 材料中,以纳米银应用最为广泛。普通单质银抗菌性能微弱,只有以或酽 状态才能发挥其生物学活性。通常存在于银离子卤素化合物中,虽有较强的 抗菌能力,但大部分与卤化物结合,未能充分释放,为达到理想的抗菌效果, 需很高的药物浓度。烧伤科最常见的外用药磺胺嘧啶银软膏或.粉即属 于此类,虽有较强的抗菌能力,但易造成患者肝肾功能损害和重金属中毒等严 重后果。而本次实验采用的纳米银抗菌材料可提供酽形式的银粒子,相同质量 下大大提高了有效的银作用浓度,较之可增加倍,解决了高浓度矿在人 体内蓄积的弊端,同时纳米银微量高效的特点也非常适合用作导管表面抗菌改 性材料。 本实验通过物理吸附方法将聚氨酯与微量纳米银颗粒.,制备 结合并附着在导管内外表面,纳米银颗粒在琼脂中缓慢释放,轻易进入菌体, 与细菌代谢关键酶中特定的蛋白基团结合,导致菌体代谢障碍死亡;也可间接 产生活性氧自由基。,破坏菌体遗传物质中的磷酸二酯键,引起核苷酸链的断 裂,阻断复制、转录等过程而导致病原体死亡、 。抑菌圈实验结果证明导管 表面微量纳米银抗菌成分足以抑制各类病原菌的生长。第章抑菌圈实验 表.中纳米银抗菌导管抑菌圈直径较之一般抗菌剂偏小,主要是由于纳米 银抗菌导管是使有效抗菌成分缓慢、长效、定量的释放,防止其表面形成生物 膜,而非抗菌药物那样直接杀菌或抑菌,故抑菌圈直径小于一般抗菌剂属正常。 从侧面作为一种非杀菌目的导管具有可观的抑菌圈直径也说明了其良好的抗菌 效果。 何伟等【】也曾制备出纳米银/聚氨酯抗菌材料,对金黄色葡萄球菌、大肠埃 希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌和肠球菌进行过类似的抑菌圈试验,所 得抑菌圈直径依次为.士.、.:.、.士.、 ..、.士.,结果与本实验接近;但上述实验并未将纳米银/ 聚氨酯抗菌材料附着到导管表面,只是单纯的将纳米抗菌涂层剪 成小圆片贴于 含菌平板上,相比之下,本实验已经制作出可供临床实用的成品抗菌导管,实 验设计直接验证抗菌导管的效果,更接近临床实际需求,意义更进一步。 .几点说明 ?菌悬液浓度对本实验结果有较大影响,应选择适当浓度菌悬液。过高则 超过抗菌导管的承受范围,使抑菌圈直径过小小于,无实验意义;过低 则抑菌圈不明显,无法显示抗菌导管和普通导管的差别。预实验中试用 /、/、/、/多种含菌量,发现如/较为 适中,易于得到理想结果。 ?注意精确含菌量菌悬液的配制方法。采用具备相关精度的比浊仪进行配 制,配制前增菌盐水需提前取出复温:菌悬液配制完成后应妥善保存,避免污 染:最好即刻进行实验,防止细菌增殖。 ?实验全过程要严格遵循无菌操作,在生物安全柜中酒精灯旁进行,防止 环境中杂菌污染。第章体外抗菌实验 第章体外抗菌实验 . 引言 发生导管相关性感染时,致病菌从导管周围皮肤逐渐移动到导管的外表面, 最终到达导管内面,首先在非特异性理化因素作用下黏附形成原始菌膜,黏附 的过程与管壁性状及菌种有关,但形态上并无明显差别。随后细菌分泌如糖蛋 白、脂多糖等细胞外基质并逐步堆积、增厚,最终形成有助于细菌存活、具有 特异性三维结构的成熟生物膜【。生物膜是细菌在物体表面形成的高度组织化 的多细胞结构,是细菌所具有的一种非常重要的环境适应机制。膜中细菌通过 细胞外基质的保护和免疫逃逸机制,耐药性比浮游细菌提高了倍以上,可 不断释放出游离菌,并随导管直接进入体内导致感染。导管表面的抗菌改性是 破坏生物膜的关键,新兴的纳米银抗菌材料为其奠定了材料学的基础。 .实验评价标准 参考美国版导管相关性感染防治指南中关于导管定植的标准【: 导管尖、皮下部分半定量培养或定量培养。上述标准主要适 用于临床定性检测,根据导管尖端培养的菌落数分为定植与未定植两种状态。 由于人体脉管系统处于无菌状态,因此上述导管定植或感染的临界菌落数 很少,而体外实验中浸泡于菌悬液的两种导管虽不一定形成菌膜,但因菌悬液 浓度很高,在疏水作用、范德华力、极性改变、细菌自身粘附等作用下两者必 然都会有少量细菌吸附、定植于表面,其数量远多于上述规定的临界值,失去 了评价效果的标准,显然不适用于本次体外抗菌实验。 由于各菌种间存在巨大差异,纳米银制剂对其产生的效果也各不相同,不 同菌种间生成的菌落数无可比性,不能统一显示出纳米银导管对各菌种的作用 效果,因此引入抗菌率的概念,按照下列公式计算抗菌率:/。其中, 为抗菌率%,为普通导管平板菌落数,为纳米银抗菌导管平板菌落数。 抗菌率即代表了纳米银导管相比普通导管提升的抗感染能力。第 章体外抗菌实验 .实验设计 为探索一种可较长时间留置的抗菌深静脉导管,本实验另一个重要目的即 观察纳米银导管的有效抗菌时间。研究表吲:各种导管在天内的感染率无统 计学意义,在.天内相对安全,而抗感染导管在天内是安全的,天后感 染亦开始出现,周抗感染导管感染率明显上升,参照临床上危重患者深静脉 导管留置的时间,所以将试验分为、、、天几个阶段能较清楚的显示 出导管抗菌率的变化。另据文献报道【,普通导管在菌悬液中浸泡时,细菌不 断粘附到导管表面,经过左右菌膜己稳定生成;而抗菌导管表面细菌则先 升后降,对菌膜的抑制作用也在左右趋于稳定;故本试验将第设计成 第一个时相点符合菌膜的变化规律。 菌悬液与导管混合后需放置于。电热恒温箱中培育菌膜,常规只能培养 左右,长时间存放会导致菌悬液中细菌大量死亡,实验中设计将 两种导管浸 泡于无菌生理盐水中,模拟人体内置管时的大量输液环境,待个时相点取出, 置入现配的菌悬液中进行实验,解决了菌悬液不能长期保存的难 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ,同时确保 纳米银导管表面纳米银材料的正常缓释,来验证此抗菌导管能否长效抗菌。 本试验所用纳米银涂层深静脉导管能缓慢释放纳米银颗粒,长时间保持有 效抑菌浓度,确保试验期间抗菌导管内纳米银材料对病原微生物的足量、有效 作用。试验中导管浸泡时间最长达,能有效验证抗菌导管在长时间缓释后是 否还有足够的抗菌能力,从而证明了纳米银涂层深静脉导管的长效抗菌性能, 为延长深静脉置管时间提供参考。 .材料 ..主要试剂与仪器 生产或提供单位 主要试剂与仪器 .%增菌盐水 美国公司 贵州天地药业有限责任公司 无菌生理盐水 江苏康健医疗用品有限公司 一次性使用拭子 .离心管 江苏康捷医疗器械有限公司 移液器 德国公司 法国生物梅里埃公司 比浊仪第章体外抗菌实验 高频振动器 美国 公司 隔水式电热恒温培养箱 上海一恒科学仪器有限公司 哥伦比亚血琼脂平板 广州市迪景微生物科技有限公司 沙氏培养基 广州市迪景微生物科技有限公司 超净工作台 深圳市利龙湖实业有限公司 ..菌株 金黄色葡萄球菌 、大肠埃希菌 、表皮葡萄 球菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、白色念珠菌 ..导管 纳米银涂层抗菌导管:由清华大学深圳研究生院提供 普通导管:苏州百世康医疗器械有限公司 .实验方法以下操作均在无菌安全柜中进行 ..导管置入生理盐水中保存 ?将纳米银抗菌导管和普通导管用无菌手术剪剪成若干注长小段; ?分别浸泡入盛有足量无菌生理盐水的两只容器内; ?容器密封标记后放置于电热恒温箱中保存; ?于、、、、五个时相点分别取出部分导管实验。 注:长导管主要针对.离心管大小制定 ..菌悬液浸泡导管,培养菌膜 ?于五个时相点用无菌手术镊取出支纳米银抗菌导管和支普通导管分 别放入相应的.离心管中; ?用移液器加入现配的种菌悬液如/,配制方法同抑菌圈实 验浸没导管,与其充分接触; ?离心管封口、标记后于。电热恒温箱中培育 培养菌膜。 ..洗脱菌膜,得到待测菌悬液 ?恒温培养后将导管取出,用无菌生理盐水缓慢、轻柔冲洗,尽量去第章体外抗茵实验 除表面浮游细菌,同时保护新生菌膜不被破坏; ?然后将清洗过的导管装入盛有增菌盐水的离心管中; ?离心管标记、封口后用高频振荡器振荡,使导管表面粘附的细菌充 分洗脱分离,溶于增菌盐水中,形成待测菌悬液。 ..待测菌悬液涂板,培养菌落 ?移液器吸取.待测菌悬液,滴入血琼脂平板白色念珠菌菌悬液滴 入沙氏平板上; ?无菌棒将其均匀推平; 。 ?于。电热恒温箱中培养菌落 ..菌落计数,并计算抗菌率 培养后记录各平板上形成的菌落数,并按照下列公式计算纳米银导管 抗菌率:?/。其中,为抗菌率%,为普通导管平板菌落数,为纳 米银抗菌导管平板菌落数 ..统计学分析 各菌种各时相点重复实验次,所得数据用?表示,.统计软 件进行配对检验和单两因素方差分析。.有统计学意义。 .结果 抗菌导管组实验组平板上菌落生长稀疏,清晰可数;而相应普通导管 组对照组则菌落密集,布满整个平板见图.卜。。准确计算平板上菌 个 落数后按照配对资料检验方法,可知金黄色葡萄球菌组从第到第 时相点,实验组与对照组比较,值均小于.,结果有统计学意义。其余实 验菌种表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、白色念珠 菌统计结果相同,个时相点值均小于.见表.卜.。而对各菌种的 实验组及对照组不同时相点菌落数行单因素方差分析,值均大于.见表 ..,差异无显著性。第章体外抗菌实验 ’一 .‘...?.: .第小时 .第大 .第天 .第大 .第天 图. 浸泡于生理盐水中的纳米银抗菌导管和普通导管在不同时相点对/金黄色 葡萄球菌菌悬液的体外抗菌实验 第章体外抗菌实验 ;、 .第天 .第小时 餐 .第天 .第天 .。::、..: .第大 图.浸泡于生理盐水中的纳米银抗菌导管和普通导管在不同时相 点对如/表皮葡萄 球菌菌悬液的体外抗菌实验 第章体外抗菌实验 ? ,? .第小时 .第天 .第大 .第天 .第天 图.浸泡于生理盐水中的纳米银抗菌导管和普通导管在不同时相 点对/大肠埃希 菌菌悬液的体外抗菌实验 第章体外抗菌实验 ? .第天 .第小时 .’:.. 一黪 .第天 .第天 嗣舞 .第大 图.浸泡于生理盐水中的纳米银抗菌导管和普通导管在不同时相 点对/铜绿 假单胞菌菌悬液的体外抗菌实验 第章体外抗菌实验 .第小时 .第天 .第天 .第天 .第天 图.浸泡于生理盐水中的纳米银抗菌导管和普通导管在不同时相 点对/鲍曼不 动杆菌菌悬液的体外抗菌实验 第章体外抗菌实验 臼忿? 丫 .第天 .第天 白忿? .、 坠 一 瓣 薰赫 ?囔?一 叩 《? .第天.第天 .第天 图.浸泡于生理盐水中的纳米银抗菌导管和普通导管在不同时相 点对/白色 念珠菌菌悬液的体外抗菌实验第章体外抗菌实验 表.浸泡于生理盐水中的纳米银抗菌导管和普通导管在不同时相 点对/金黄色葡 萄球菌菌悬液的体外抗菌实验中表面粘附的细菌数夏? 注:与普通导管比较. 表.浸泡于生理盐水中的纳米银抗菌导管和普通导管在不同时相 点对/表皮葡萄 球菌菌悬液的体外抗菌实验中表面粘附的细菌数? 表皮葡萄球菌 抗菌导管组实验组 普通导管组对照组 第 .士. .:. 第 .:. .士. .:. 第 .:. 第 .士. .:. .: .第 .:. 注:与普通导管比较. 表.浸泡于生理盐水中的纳米银抗菌导管和普通导管在不同时相 点对/大肠埃希 菌菌悬液的体外抗菌实验中表面粘附的细菌数? 大肠埃希菌 抗菌导管组实验组 普通导管组对照组 第 .:. .:. 第 .. .士. 第 .:. .士. 第 .:. .:. 。士. 第 。妊. 注:与普通导管比较. 第章体外抗菌实验 表.浸泡于生理盐水中的纳米银抗菌导管和普通导管在不同时相 点对/铜绿假单 胞菌菌悬液的体外抗菌实验中表面粘附的细菌数? 铜绿假单胞茵 抗菌导管组实验组 普通导管组对照组 第 .士. .:. 第 .: . .:. ?第 .士. .. 第 .:. .士. .?. .?. 第 注:与普通导管比较, 表.浸泡于生理盐水中的纳米银抗菌导管和普通导管在不同时相 点对/鲍曼不动 杆菌菌悬液的体外抗菌实验中表面粘附的细菌数? 普通导管组对照组 鲍曼不动杆菌 抗菌导管组实验组 .:. .: . 第 .士. .::. 第 .: . .吐. 第 .:. 第 .: . .士. .:. 第 注:与普通导管比较. 表.浸泡于生理盐水中的纳米银抗菌导管和普通导管在不同时相 点对/白色念珠 菌菌悬液的体外抗菌实验中表面粘附的细菌数? 白色念珠菌 抗菌导管组实验组 普通导管组对照组 .:. .士. 第 .士. .士. 第 .士. .:. 第 .. .士。 第 .. .:. 第 注:与普通导管比较. 第章体外抗菌实验 由于菌种性质不同,不同菌种间生成菌落数无可比性,无法直观验证抗菌 导管抗菌性能有无差别,故将抗菌导管和普通导管各自的抗菌性能菌落数 集合成抗菌率一项数据。将抗菌导管在不同时相点对不同实验菌种的抗菌率进 行两因素方差分析,结果差异有显著性.,抗菌率不完全相同。见表 .。 表.纳米银抗茵导管在不同时相点的体外抗菌实验中对实验菌株的抗茵率%? 分组 第 第 第 第 第 .. .. .:. .士. .士. 金黄色葡萄球菌 .士. .:. .. .. .. 表皮葡萄球菌 .:. .. .. .. .. 大肠埃希菌 .:. ..:. .. .士. 铜绿假单胞菌 .:. .士. .. .. .. .:. 鲍曼不动杆菌 .. .. .:. .. .. 白色念珠菌 .小结与讨论 研制纳米银涂层抗菌导管最终目的并非单纯杀菌,而是防止导管 表面形成 生物膜。本实验即利用高浓度菌悬液与导管混合,温育培养菌膜, 通过琼脂平 板计数法得到不同时相点两种导管表面粘附的具体细菌量,定量 显示两种导管 各自的抗菌能力,并计算出纳米银导管相较普通导管的抗菌率,验证纳米银抗 菌导管有效性。 与抑菌圈实验定性或半定量不同,体外抗菌实验最大程度上还原了临床实 际置管过程:.高浓度菌悬液浸泡导管见实验方法..,类似于血管液态环 境中,致病菌与内置导管表面接触、粘附直至形成菌膜的过程,此时两种导管 表面粘附的细菌数直观显示了临床实际置管的抗菌效果。表...结果显示: 抗菌导管在金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、鲍 曼不动杆菌、白色念珠菌等实验菌悬液中恒温培养后,其表面粘附细菌数均远第章体外抗菌实验 少于普通导管,结果有统计学意义.,表明纳米银抗菌导管能长期有效 抑制/常见菌在表面粘附、定植。研究表明】:在生物膜成熟过程中存在一 种重要的调控机制??群体感应系统,该系统通过特殊的信号分子信 息素感应细菌的密度,调整相关基因的表达,当细菌密度达到相 应阈值后, 激活信号转导通路,最终激活靶基因,做出相应的调整。纳米银深静脉导管管 壁的抗菌涂层通过扩散作用释放纳米银抗菌成分,抑制和杀灭附着其上的致病 菌,使导管表面堆积的细菌浓度显著降低,不能达到形成群体效应所需的阈值, 继而与细菌黏附相关的某些基因,如基因、基因等被抑制,毒力侵袭 因子和降解酶等也不能表达,最终无法形成生物膜。由于本实验采用的菌悬液 含菌量高达/,远高于一般使用环境中的微生物浓度,故可以得出强效 抗菌的结论。 实验中,两种导管与种常见致病菌菌悬液混合温育,结果显示,纳 米银抗菌导管对上述、。及真菌,标准菌及耐药菌都普遍有效,具有广谱抗 菌能力。纳米银由于其特殊的微观效应,作用机制与一般抗菌剂完全不同,作 为非生物源性的无机抗菌材料,目前并未发现致病菌对银元素产生任何耐药情 况。相比种类繁多、作用机制各异的抗生素,银系抗菌剂始终对 各常见菌种高 度敏感。纳米银是银系抗菌材料的最新进展,本次实验结果证明纳米银同样具 有广谱抗菌的特性,是导管表面抗菌改性的理想材料。 .将导管置入生理盐水中长期保存见实验方法..,以模拟临床治疗过 程中危重症患者输注大量液体的情况,借此检验抗菌导管长时间浸泡能否持续 有效;略有差异是将诸如血液、白蛋白、高糖、氨基酸、脂肪乳等有利于细菌 生长的营养液简化为生理盐水,但核心始终是导管的长期留置。随着抗菌导管 浸泡在生理盐水中的时间逐渐延长,导管表面吸附纳米银材料逐渐释放减少。 表...菌落数方差分析结果显示:各实验菌种个时相点在抗菌导管和普通 导管表面粘附的细菌数差异无显著性尸.,总体均数相同,说明抗菌导管 的抗菌能力并未随浸泡时间延长而降低,始终保持对病原菌的强力抑制,维持 其表面稳定的低细菌密度,具有长效抗菌能力。表.结果显示:从第到第 整个实验过程中,抗菌导管对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、 铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、白色念珠菌等实验菌种的抗茵率总体均数不完 全相同.,体现了不同菌种间自然存在的生物学差异。各菌种不同时相 点抗菌率的差异有显著性.,呈现略微上下波动,可能是实验所配菌悬第章体外抗菌实验 液含菌量存在微小误差或细菌活性不同所致,但也始终保持在较高的数值,说 明纳米银抗菌导管经过长期留置仍具有强效广谱抗菌能力。 实验中所用抗菌导管制备的关键是将纳米银颗粒吸附在聚氨酯内部,在导 管表面浇注成膜,有效抗菌成分通过扩散作用缓慢释放。经长时间留置膜内抗 菌成分虽逐渐减少,但由于纳米银微粒少量高效的抗菌特性,仍能达到长效抗 菌的目的。本次实验即证实:至少在内,纳米银抗菌导管都能效抗菌,防 止导管相关性感染的发生,为需要长期留置深静脉导管的患者提供了新的选择。 综上所述,根据菌落数和抗菌率横向、纵向分析比较:证实纳米银 抗菌导 管具有强效广谱、持久稳定的抗菌能力。 目前已有部分关于新型纳米银涂层导管抗菌效果的报道。等研究口副 表明采用纳米银抗菌技术对静脉留置针进行处理后,微生物菌落生长减缓,长 期留置患者的导管感染率明显降低。赵亚群等】采用纳米银涂层尿管与普通尿 管进行随机对照临床实验,发现尿中自细胞阳性数和尿培养阳性数都呈现统计 学差异,也验证了其良好的抗菌效果。上述实验结果也为本实验提供了数据参 考和支持。第章结论与展望 第章结论与展望 . 结论 本研究将新型抗茵材料纳米银颗粒采用物理抗菌改性技术附着在深静脉导 管表面,使其缓慢、定量的释放,制成新型的纳米银涂层抗感染深静脉导管, 并与普通深静脉导管对比,测量其在多种含菌平板上形成抑菌圈大小及茵悬液 中的抗菌率,配对检验分析数据,验证其体外抗菌性能,结果显示:纳米银抗 菌导管具有强效广谱、持久稳定的抗菌能力,为危重病人提供了新型的抗感染 深静脉导管选择。 .展望 ..抗菌导管新进展 为了抑制医用器械表面的菌膜,制造有效的抗菌导管,除纳米银外,人们 也研制出了种类繁多的新型抗菌导管材料。如新型的抗感染导管 中,洗必泰醋酸盐与磺胺嘧啶银以分子键形式与导管壁的聚脲胺脂分子相结 合,具有药物缓释功能,磺胺嘧啶银每天释放%一%,洗必泰醋酸盐释放%%; 两者均为临床常见的外用抗菌剂,对、.菌普遍有效,且具有良好的协同抗 菌效果,实验证实能有效降低细菌在管壁的定植【。一项随机对照研究表吲】: 使用铋涂层的透析导管,可以减少细菌的定植,从而减少被膜的形成。余於荣 等【】用洗必尽和医用聚氨酯为主要成份制成抗菌静脉导管,并包埋于兔皮下行 动物实验,病理检查见涂覆导管周围组织结构清晰,没有炎症细胞,渗出物少; 而未涂覆导管周围组织镜下结构紊乱,浆细胞、淋巴细胞等炎症细胞密集,渗 出多,呈片状或小块状,血管高度扩张。等【】采用乳酸链球菌肽涂敷在 引流管中抑制细菌在器械表面的黏附和生长。等【】在聚氨酯表面浸渍 ,.二巯基丙醇铋抑制绿脓杆菌的生长及菌膜形成。上述抗菌导管材料都有相 应的适用范围和条件,与纳米银抗菌导管一起为临床导管相关性感染提供了解 决 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 。第章结论与展望 ..后续实验设想 纳米银虽有着其他抗菌剂难以比拟的优势,但同时也存在一些缺陷:.一定 的细胞毒性。纳米银的细胞毒性与其具体的形态、尺寸、剂量有关,不能一概 而论,研究显示在正常使用范围对组织细胞无明显毒副作用,因此产品应用于 临床前应重点进行动物实验,制作深静脉置管的动物模型,检验抗菌性能和有 无毒副反应,确保在生物体内的有效性和安全性。.纳米银在不加保护剂的常 规条件下,容易发生颗粒聚集而失去纳米特性,或被氧化为棕色的氧化银,这 些都会影响该材料的抗菌效果。目前主流方法是通过原位还原法将纳米银微粒 固定在医用高分子材料如聚氨酯、壳聚糖等内部,在其保护下,纳米银粒 子既不容易被破坏,同时达到了稳定释放、长效抗菌的效果。 本次体外抗菌实验采用无菌生理盐水浸泡抗菌导管,来模拟导管在血液中 留置的状况,简便且易于操作,但毕竟与实际置管情况有出入,在本次试验基 础上,首先可进一步改用如血浆、白蛋白、高糖溶液、脂肪乳等临床实际输注 的液体,验证在这些有利于细菌生长的营养液浸泡下是否仍有较高的抗菌率, 抑或出现抗菌性能的下降,试验结果将更具临床说服力。 其次,可继续增加抗菌试验中的细菌种类。事实上常见致病菌远不止 本次试验的种,其他如溶血葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、粪肠球 菌等都可对导管进行抗菌测试,所得结果将更全面的显示纳米银抗菌导管的抗 菌谱。 另外,本实验所用抗菌导管是将纳米银颗粒附着于硅胶材质导管表面,原 因是组织相容性好,表面光滑,对血管内壁损伤小;有机高分子材料中,聚四 氟乙烯、聚氨