全国名牌大学分子生物学试题库(研友给力)
名牌大学分子生物学试题库 一、选择题(单选或多选)
1(证明 DNA是遗传物质的两个关键性实验是:肺炎球菌在老鼠体内的毒性和 T2噬菌体感染大肠杆菌。这两个实验中主要的论点证据是:( )
(a)从被感染的生物体内重新分离得到DNA，作为疾病的致病剂
(b) DNA突变导致毒性丧失
(c)生物体吸收的外源 DNA(而并非蛋白质)改变了其遗传潜能
(d) DNA是不能在生物体间转移的，因此它一定是一种非常保守的分子
(e)真核生物、原核生物、病毒的DNA能相互混合并彼此替代 2(1953年Watson和 Crick提出:( )
(a)多核苷酸 DNA链通过氢键连接成一个双螺旋
(b)DNA的复制是半保留的，常常形成亲本—子代双螺旋杂合链
(c)三个连续的核苷酸代表一个遗传密码
(d)遗传物质通常是 DNA而非RNA
(e)分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变
3(双链DNA中的碱基对有:( )
(a) A-U (b) G-T (c) C-G (d) T-A (e) C-A
4( DNA双螺旋的解链或变性打断了互补碱基间的氢键，并因此改变了它们的光吸收特性。以下哪些是对 DNA的解链温度的正确描述:( )
(a)哺乳动物 DNA约为45?，因此发烧时体温高于42?是十分危险的
(b)依赖于 A—T含量，因为 A-T含量越高则双链分开所需要的能量越少
(c)是双链 DNA中两条单链分开过程中温度变化范围的中间值
(d)可通过碱基在260mm的特征吸收峰的改变来确定
(e)就是单链发生断裂(磷酸二酯键断裂)时的温度
5( DNA的变性:( )
(a)包括双螺旋的解链
(b)可以由低温产生
(c)是可逆的
(d)是磷酸二酯键的断裂
(e)包括氢键的断裂
6(在类似RNA这样的单链核酸所表现出的“二级结构”中，发夹结构的形成:( )
(a)基于各个片段间的互补，形成反向平行双螺旋
(b)依赖于 A-U含量，因为形成的氢键越少则发生碱基配对所需的能量也越少
(c)仅仅当两配对区段中所有的碱基均互补时才会发生
(d)同样包括有像 G-U这样的不规则碱基配对
(e)允许存在几个只有提供过量的自由能才能形成碱基对的碱基
1
7(DNA分子中的超螺旋:( )
(a)仅发生于环状 DNA中。如果双螺旋在围绕其自身的轴缠绕后(即增加缠绕数)才闭合，
则双螺旋在扭转力的作用下，处于静止
(b)在线性和环状 DNA中均有发生。缠绕数的增加可被碱基配对的改变和氢键的增加所制
(c)可在一个闭合的 DNA分子中形成一个左手双螺旋。负超螺旋是 DNA修饰的前 提，
为酶接触 DNA提供了条件
(d)是真核生物 DNA有丝分裂过程中固缩的原因
(e)是双螺旋中一条链绕另一条链的旋转数和双螺旋轴的回转数的总和
8(DNA在10nm纤丝中压缩多少倍(长度)?( )
(a)6倍 (b)1O倍 (c)40倍 (d)240倍 (e)1000倍 (f)100 000倍
9( DNA在30nm纤丝中压缩多少倍?( )
(a)6倍 (b)10倍 (c)40倍 (d)240倍 (e)1000倍 (f)100 000倍 10(DNA在染色体的常染色质区压缩多少倍?( )
(a)6倍 (b)10倍 (c)40倍 (d)240倍 (e)1000倍 (f)100000倍
11(DNA在中期染色体中压缩多少倍?( )
(a)6倍 (b)10倍 (c)40倍 (d)240倍 (e)1000倍 (f)100 0O0倍 12(组蛋白的净电荷是:( )
(a)正 (b)中性 (c)负
13(核小体的电性是:( )
(a)正 (b)中性 (C)负
14(当新的核小体在体外形成时，会出现以下哪些过程?( )
(a)核心组蛋白与 DNA结合时，一次只结合一个
(b)一个 H3-H4核形成，并与DNA结合，随后按顺序加上两个 H2A—H2B二聚体 22
(c)核心八聚体完全形成后，再与 DNA结合
15(当一个基因具有活性时:( )
(a)启动子一般是不带有核小体的
(b)整个基因一般是不带有核小体的
(C)基因被核小体遮盖，但染色质结构已发生改变以致于整个基因对核酸酶降解更 加敏感 16.原核细胞信使RNA含有几个其功能所必需的特征区段，它们是:( )
(a)启动子，SD序列，起始密码子，终止密码子，茎环结构
(b)启动子，转录起始位点，前导序列，由顺反子间区序列隔开的SD序列和 ORF，
尾部序列，茎环结构
(c)转录起始位点，尾部序列，由顺反子间区序列隔开的SD序列和ORF，茎环结构 (d)转录起始位点，前导序列，由顺反子间区序列隔开的SD序列和ORF，尾部序列 17.tRNA参与的反应有:( )
(a)转录 (b)反转录 (C)翻译 (d)前体mRNA的剪接 (e)复制 18.氨酰tRNA的作用由( )决定
2
(a)其氨基酸 (b)其反密码子 (c)其固定的碱基区
(d)氨基酸与反密码子的距离，越近越好 (e)氨酰tRNA合成酶的活性
19.?型内含子能利用多种形式的鸟嘌呤，如:( )
(a)GMP (b)GDP (c)GTP (d) dGDP (e)ddGMP(2?，3?-双脱氧GMP)
20.?型内含子折叠成的复杂二级结构:( )
(a)有长9bp的核苷酸配对 (b)对突变有很大的耐受性
(c)形成可结合外来 G和金属离子的“口袋”
(d)使内含子的所有末端都在一起 (e)在剪接过程中发生构象重组
(f)利用 Pl和 P9螺旋产生催化中心
21.RNase P:( )
(a)其外切核酸酶活性催化产生tRNA成熟的5?末端
(b)含有RNA和蛋白组分 (c)体内切割需要两个组分
(d)体外切割需要两个组分 (e)采用复杂的二级与三级结构形成催化位点
22(锤头型核酶:( )
(a)是一种具有催化活性的小RNA
(b)需要仅含有17个保守核苷酸的二级结构
2+ (c)不需要Mg协助
(d)可用两个独立的RNA创建锤头型核酶
23.?型剪接需要( )
(a)单价阳离子 (b)二价阳离子
(c)四价阳离子 (d) Ul snRNP (e)一个腺苷酸分支点
(f)一个鸟膘呤核苷酸作为辅助因子
24.在?型剪接的过程中，( )
(a)游离的G被共价加到内含子的5?端
(b)GTP被水解 (c)内含子形成套马索结构
(d)在第一步，G的结合位点被外来的 G占据，而在第二步时，被3?剪接位点的G所取代
(e)被切除的内含子继续发生反应，包括两个环化反应 25.DNA的复制:( )
(a)包括一个双螺旋中两条子链的合成
(b)遵循新的子链与其亲本链相配对的原则
(c)依赖于物种特异的遗传密码
(d)是碱基错配最主要的来源
(e)是一个描述基因表达的过程
26.一个复制子是:( )
(a)细胞分裂期间复制产物被分离之后的 DNA片段
(b)复制的 DNA片段和在此过程中所需的酶和蛋白
(c)任何自发复制的 DNA序列(它与复制起始点相连)
3
(d)任何给定的复制机制的产物(如:单环)
(e)复制起点和复制叉之间的 DNA片段
27.真核生物复制子有下列特征，它们:( )
(a)比原核生物复制子短得多，因为有末端序列的存在
(b)比原核生物复制子长得多，因为有较大的基因组
(c)通常是双向复制且能融合
(d)全部立即启动，以确保染色体在S期完成复制
(e)不是全部立即启动，在任何给定的时间只有大约15,是有活性的 28.下述特征是所有(原核生物、真核生物和病毒)复制起始位点都共有的是:( )
(a)起始位点是包括多个短重复序列的独特 DNA片段
(b)起始位点是形成稳定二级结构的回文序列
(c)多聚体DNA结合蛋白专一性识别这些短的重复序列
(d)起始位点旁侧序列是 A-T丰富的，能使 DNA螺旋解开
(e)起始位点旁侧序列是 G—C丰富的，能稳定起始复合物 29.下列关于 DNA复制的说法是正确的有:( )
(a)按全保留机制进行 (b)接3??5?方向进行
(c)需要4种 dNMP的参与 (d)需要 DNA连接酶的作用
(e)涉及RNA引物的形成 (f)需要 DNA聚合酶? 30.滚环复制:( )
(a)是细菌DNA的主要复制方式
(b)可以使复制子大量扩增
(c)产生的复制子总是双链环状拷贝
(d)是噬菌体 DNA在细菌中最通常的—种复制方式
(e)复制子中编码切口蛋白的基因的表达是自动调节的 31.标出下列所有正确的答案:( )
(a)转录是以半保留的方式获得两条相同的DNA链的过程
(b)DNA依赖的DNA聚合酶是负责DNA复制的多亚基酶
(c)细菌转录物(mRNA)是多基因的
(d)σ因子指导真核生物的 hnRNA到 mRNA的转录后修饰
(e)促旋酶(拓扑异构酶?)决定靠切开模板链而进行的复制的起始和终止
32.哺乳动物线粒体和植物叶绿体基因组是靠D环复制的。下面哪一种叙述准确地描述了这个
过程?( )
(a)两条链都是从oriD开始复制的，这是一个独特的二级结构,由 DNA聚合酶复合体识别
(b)两条链的复制都是从两个独立的起点同时起始的
(c)两条链的复制都是从两个独立的起点先后起始的
(d)复制的起始是由一条或两条(链)替代环促使的
(e)ter基因座延迟一条链的复制完成直到两个复制过程同步
4
33.DNA多聚体的形成要求有模板和一个自由3?—OH端的存在。这个末端的形成是靠()
(a)在起点或冈崎片段起始位点(3?—GTC)上的一个RNA引发体的合成
(b)随着链替换切开双链 DNA的一条链
(c)自由的脱氧核糖核苷酸和模板一起随机按Watson-Crick原则进行配对
(d)靠在3?末端形成环(自我引发)
(e)一种末端核苷酸结合蛋白结合到模板的3?末端
34.对于一个特定的起点，引发体的组成包括:( )
(a)在起始位点与 DnaG引发酶相互作用的一个寡聚酶
(b)一个防止 DNA降解的单链结合蛋白
(c)DnaB解旋酶和附加的 DnaC， DnaT， PriA等蛋白
(d)DnaB，单链结合蛋白， DnaC， DnaT， PriA蛋白和 DnaG引发酶
(e)DnaB解旋酶，DnaG引发酶和DNA聚合酶?
35.在原核生物复制子中以下哪种酶除去RNA引发体并加入脱氧核糖核苷酸?( )
(a)DNA聚合酶? (b)DNA聚合酶? (c)DNA聚合酶?
(d)外切核酸酶 MFl (e)DNA连接酶
36(λ阻遏蛋白是一种 DNA结合蛋白，它属于以下哪一组?( )
(a)螺旋—环-螺旋蛋白 (b)螺旋-转角—螺旋蛋白
(c)锌指蛋白 (d)亮氨酸拉链蛋白 (e)DNA脱甲基化酶 37(λ原噬菌体的晚期基因的表达依靠:( )
RE (a)聚合酶，σ因子，σ，从启动子 P起始转录 RE
(b)抗终止:N因于允许从启动子 P开始转录的继续 R
(c)抑制: Cro蛋白抑制从启动子 P开始的转录 R
(d)抗终止: Q因子允许从启动子 P开始转录的继续 R
(e)以上全不对
38(裂解细菌的噬菌体具有以下类型:( )
(a)只有 ssRNA (b)只有 dSRNA (c)只有 ssDNA
(d)只有 dsDNA (e)以上全有
39(原噬菌体(整合到宿主基因组的噬菌体基因组)是自私 DNA。这是因为:( )
(a)它总是与溶源菌的基因组一起增殖
(b)它独立于溶源菌的基因组复制
(c)它对病毒颗粒的进一步感染具有免疫力
(d)(a)和(c)对 (e)(b)和(c)对
40(一个病毒有一个由单链负链RNA组成的基因组。以下哪一个过程正确描述了病毒
RNA的产生?( )
(a)病毒单链负链RNA直接作为mRNA
(b)先合成双链RNA，而后以新合成的正链作为mRNA
(c)先合成单链正链DNA，而后再转录成mRNA
5
(d)单链负链RNA病毒的基因组只编码病毒tRNA (e)以上全不对
41(温和噬菌体从溶源到裂解的转换可用以下哪个过程来描述:( )
(a)自体调节的 c?基因的表达被 Cro蛋白所抑制
(b) cro基因的表达被λ阻遏蛋白所抑制
(c)原噬菌体的复制被转移因子(TF)介导的DNA聚合酶活性所诱导
(d)转移σ因子介导的从 P启动子开始转录的诱导 (e)以上全不对 R
42(标出以下所有正确表述:( )
(a)转录是以半保留方式获得序列相同的两条 DNA链的过程
(b)依赖 DNA的 DNA聚合酶是多亚基酶，它负责 DNA的转录
(c)细菌的转录物(mRNA)是多基因的
(d)σ因子指导真核生物 hnRNA的转录后加工，最后形成mRNA
(e)促旋酶在模板链产生缺口，决定转录的起始和终止
43(下面哪些真正是乳糖操纵子的诱导物?( )
(a)乳糖 (b)蜜二糖
(c)O—硝基苯酚—β—半乳糖苷(ONPG)
(d)异丙基—β—半乳糖苷 (e)异乳糖
44(σ因子的结合依靠( )
(a)对启动子共有序列的长度和间隔的识别
(b)与核心酶的相互作用
(c)弥补启动子与共有序列部分偏差的反式作用因子的存在
(d)转录单位的长度
(e)翻译起始密码子的距离
45(下面哪一项是对三元转录复合物的正确描述:( )
(a)σ因子、核心酶和双链 DNA在启动子形成的复合物
(b)全酶、 TF?和解链 DNA双链形成的复合物
(c)全酶、模板 DNA和新生RNA形成的复合物
(d)三个全酶在转录起始位点(tsp)形成的复合物
(e)σ因子、核心酶和促旋酶形成的复合物
46. σ因子和 DNA之间相互作用的最佳描述是:( )
(a)游离和与 DNA结合的σ因子的数量是一样的，而且σ因子合成得越多，转录起 始的
机会越大
(b)σ因子通常与 DNA结合，且沿着 DNA搜寻，直到在启动子碰到核心酶。它与DNA的
结合不需依靠核心酶
(c)σ因子通常与 DNA结合，且沿着RNA搜寻，直到碰到启动子，在有核心酶存在的时候
与之结合
(d)σ因子是 DNA依赖的RNA聚合酶的固有组分，它识别启动子共有序列且与全酶结合
(e)σ因子加入三元复合物而启动RNA合成
6
47( DNA依赖的RNA聚合酶的通读可以靠( )
(a)ρ因子蛋白与核心酶的结合
(b)抗终止蛋白与一个内在的ρ因子终止位点结合，因而封闭了终止信号
(c)抗终止蛋白以它的作用位点与核心酶结合，因而改变其构象，使终止信号不能被核心酶识别
(d)NusA蛋白与核心酶的结合 (e)聚合酶跨越抗终止子蛋白——终止子复合物 48(σ因子专一性表现在:( )
(a)σ因子修饰酶(SME)催化σ因子变构，使其成为可识别应激启动子的σ因子
(b)不同基因编码识别不同启动子的σ因子
(c)不同细菌产生可以互换的σ因子
(d)σ因子参与起始依靠特定的核心酶
(e)σ因子是一种非专一性蛋白，作为所有RNA聚合酶的辅助因子起作用
49(色氨酸操纵子的调控作用是受两个相互独立的系统控制的，其中一个需要前导肽的翻译，下面哪一个调控这个系统?( )
Trp (a)色氨酸 (b)色氨酰—tRNA
(c)色氨酰—tRNA (d)cAMP (e)以上都不是
50( IS元件:( )
(a)全是相同的 (b)具有转座酶基因 (c)是旁侧重复序列
3 (d)引起宿主 DNA整合复制 (e)每代每个元件转座10次 51(组成转座子的旁侧 IS元件可以:( )
(a)同向 (b)反向 (c)两个都有功能 (d)两个都没有功能 52(复制转座:( )
(a)复制转座子，即在老位点上留有一个拷贝
(b)移动元件转到一个新的位点，在原位点上不留元件
(c)要求有转座酶 (d)要求解离酶
(e)涉及保守的复制，在这个过程中转座子序列不发生改变 53(非复制转座:( )
(a)复制转座子，即在原位点上留有一个拷贝
(b)移动元件到一个新的位点，在原位点上不留元件
(c)要求有转座酶 (d)要求解离酶
(e)涉及保守的复制，在这个过程中转座子序列不发生改变 54(一个转座子的准确切离:( )
(a)切除转座子和两个靶序列
(b)恢复靶 DNA到它插入前的序列
(c)比不准确切离更经常发生
55(下面哪个(些)是在非复制转座中转座酶所起的作用?( )
(a)切除转座子 (b)在靶位点产生一个交错切口
7
(c)将转座子移到新位点 (d)将转座子连到靶位点的交错切口上 56(关于在 Tn10转座子上 dam甲基化效应的陈述哪些是对的?( )
(a)在 IS10R反向重复序列上，一个位点的甲基化可以阻断转座酶的结合
(b) P中的一个位点被甲基化可以刺激转座酶的转录 IN
— (c) Tn10转座在dam突变中增加1000倍
(d)复制后甲基化位点立即半甲基化，允许转座酶表达和作用 57(玉米控制因子:( )
(a)在结构和功能上与细菌转座子是相似的
(b)可能引起染色体结构的许多变化
(c)可能引起单个玉米颗粒的表型发生许多变化
(d)在植物发育期间的不同时间都有活性
58(DS元件:( )
(a)是自主转座元件 (b)是染色体断裂的位点
(c)与Ac元件相似 (d)内部有缺失 (e)没有末端倒位重复
(f)靠一种非复制机制转座
59. 下面哪些是在反转录病毒中发现的基因?( )
(a)gag (b)pol (C)env (d)onc
60(反转录病毒LTR:( )
(a)在病毒基因组的RNA中发现
(b)整合到宿主染色体上产生
(c)包含一个强启动子
61(宿主染色体在反转录病毒整合位点上会发生什么?( )
(a)4,6个核苷酸被切除
(b)4,6个核苷酸在整合的一边被复制而在另一边被切除
(c)4,6个核苷酸在整合的每一边都被复制
(d)两个核苷酸从右边被切除
(e)两个核甘酸从左边被切除
62(下面哪些是 LTR的组分?( )
(a) U3 (b) U4 (C) R (d) U5
63(反转录病毒的整合酶:( )
(a)是一种位点特异性内切核酸酶
(b)在LTR上起外切核酸酶的作用
(c)在靶 DNA上产生交互切口
64(δ元件:( )
(a)是具有活性的启动子
(b)当Ty转座时可留在基因组 DNA后面
65(Copia元件:( )
8
(a)在 Drosophila基因组中约有20 00O个拷贝
(b)串联排列 (c)两侧为定向重复
(d)不被转录 (e)与反转录病毒的 env基因有同源性 66(L1元件:( )
(a)是病毒反转录转座子超家族的成员
(b)每个哺乳动物基因组中有20 000到50 000个拷贝
(C)大约长300bp (d)包括一个可读框，产物与反转录酶有同源性
(e)被转录 (f)有 LTRs
67( Alu因子:( )
(a)是病毒反转录转座子超家族的成员
(b)每个哺乳动物基因组中有20 000到500 000个拷贝里被发现
(C)大约长30Obp
(d)包括一个与反转录酶基因有同源的可读框
(e)被转录 (0有LTR
68. 下面哪些关于Alu序列的描述是正确的?( )
(a)所有Alu序列都是相同的
(b)Alu序列来源于有翻译功能的7SL RNA
(C)Alu序列是靠RNA聚合酶?转录的
(d)Alu序列永远不会存在于结构基因中
(e)这些序列有一个区段与病毒的 DNA复制起点同源 69(基因组是:( )
(a)一个生物体内所有基因的分子总量
(b)一个二倍体细胞中的染色体 (c)遗传单位
(d)生物体的—个特定细胞内所有基因的分子的总量 70(多态性(可通过表型或DNA分析检测到)是指:( )
(a)在一个单克隆的纯化菌落培养物中存在不同的等位基因
(b)一个物种种群中存在至少两个不同的等位基因
(c)一个物种种群中存在至少三个不同的等位基因
(d)一个基因影响了—种表型的两个或更多非相关方面的情况
(e)—个细胞含有的两套以上的单倍体基因组
71(真核基因经常被断开:( )
(a)反映了真核生物的 mRNA是多顺反子
(b)因为编码序列“外显子”被非编码序列“内含子”所分隔
(c)因为真核生物的 DNA为线性而且被分开在各个染色体上，所以同一个基因的 不
同部分可能分布于不同的染色体上
(d)表明初始转录产物必须被加工后才可被翻译
9
(e)表明真核基因可能有多种表达产物，因为它有可能在mRNA加工的过程中采用不同的外
显子重组方式
72. 下面叙述哪些是正确的?( )
(a)C值与生物体的形态复杂性呈正相关
(b)C值与生物体的形态复杂性呈负相关
(c)每个门的最小 C值与生物体形态复杂性是大致相关的
73(选出下列所有正确的叙述。( )
(a)外显子以相同顺序存在于基因组和 cDNA中
(b)内含子经常可以被翻译
(c)人体内所有的细胞具有相同的一套基因
(d)人体内所有的细胞表达相同的一套基因
(e)人体内所有的细胞以相同的一种方式剪接每个基因的 mRNA 74(下列关于酵母和哺乳动物的陈述哪些是正确的?( )
(a)大多数酵母基因没有内含子，而大多数哺乳动物基因有许多内含子
(b)酵母基因组的大部分基因比哺乳动物基因组的大部分基因小
(c)大多数酵母蛋白比哺乳动物相应的蛋白小
(d)尽管酵母基因比哺乳动物基因小但大多数酵母蛋白与哺乳动物相应的蛋白大小大致相同 75(下列哪些基因组特性随生物的复杂程度增加而上升?( )
(a)基因组大小 (b)基因数量
(c)基因组中基因的密度 (d)单个基因的平均大小
76(以下关于假基因的陈述哪些是正确的?( )
(a)它们含有终止子 (b)它们不被转录
(c)它们不被翻译 (d)它们可能因上述任一种原因而失活
(e)它们会由于缺失或其他机理最终从基因组中消失
(f)它们能进化为具有不同功能的新基因
77(假基因是由于不均等交换后，其中一个拷贝失活导致的。选出下面关于此过程的正确叙述。( )
(a)失活点可通过比较沉默位点变化的数量和置换位点变化的数量来确定
(b)如果假基因是在基因复制后立即失活，则它在置换位点比沉默位点有更多的变 化
(c)如果假基因是在基因复制后经过相当长一段时间才失活，则它在置换位点与沉默位点有
相同数量的变化
78(下列哪些基因以典型的串联形式存在于真核生物基因组?( )
(a)球蛋白基因 (b)组蛋白基因 (c)rRNA 基因 (d)肌动蛋白基因 79. 根据外显子改组(exon shuffling)假说:( )
(a)蛋白的功能性结构域由单个外显子编码
(b)当 DNA重组使内含子以一种新的方式结合在一起时，新基因就产生了
(c)当 DNA重组使外显子以一种新的方式结合在一起时，新基因就产生了
10
(d)因为一些新的功能(蛋白质)能通过外显子的不同组合装配产生，而不是从头产 生新功能，所以进化速度得以加快
80(简单序列 DNA( )
(a)与 Ct曲线的中间成分复性 ,ol2
(b)由散布于基因组中各个短的重复序列组成 (c)约占哺乳类基因组的10,
(d)根据其核苷酸组成有特异的浮力密度 (e)在细胞周期的所有时期都表达 81. 原位杂交:( )
(a)是一种标记 DNA与整个染色体杂交并且发生杂交的区域可通过显微观察的技术
(b)表明卫星 DNA散布于染色体的常染色质区
(c)揭示卫星 DNA位于染色体着丝粒处
82(非均等交换:( )
(a)发生在同一染色体内 (b)产生非交互重组染色体
(c)改变了基因组织形式，未改变基因的总数 (d)在染色体不正常配对时发生
(e)降低一个基因簇的基因数，同时增加另一个基因簇的基因数 83(微卫星重复序列:( )
(a)每一簇含的重复序列的数目比卫星重复的少
(b)有一个10,15个核苷酸的核心重复序列
(c)在群体的个体间重复簇的大小经常发生变化
(d)在 DNA重组时，是不具有活性的
84(细胞器 DNA能够编码下列哪几种基因产物?( )
(a)mRNA (b)大亚基 rRNA (c)小亚基 rRNA
(d)tRNA (e)4.5S rRNA (f)5S rRNA
85(典型的叶绿体基因组有多大?( )
(a)1.5kb (b)15kb (c)150kb (d)1500kb
86(细胞器基因组:( )
(a)是环状的 (b)分为多个染色体 (c)含有大量的短的重复 DNA序列 19(叶绿体基因组含:( )
(a)两个大的反向重复 (b)两个大的单一序列 DNA (c)两个短的单一序列 DNA 87(酵母线粒体基因组:( )
(a)编码的基因数目与人线粒体基因组编码的基因数目大致相同
(b)大小与人线粒体基因组大小大致相同
(c)含有许多内含子，其中有些能编码蛋白质
(d)含有 AT丰富区 (e)有几个功能未明的区域
88(在人类线粒体基因组中:( )
(a)几乎所有的 DNA都用于编码基因产物
(b)几乎所有编码蛋白质的基因都从不同的方向进行转录
(c)产生惟一一个大的转录物，然后剪接加工，释放出各种RNA分子
11
(d)大多数编码蛋白的基因被 tRNA基因分隔开 89(酵母的小菌落突变:( )
(a)已失去全部线粒体的功能 (b)总是致死的
(c)由编码线粒体蛋白的细胞核基因突变引起 (e)由线粒体基因组丢失或重排引起
90( DNase I的超敏位点:( )
(a)对消化的敏感程度比一般染色质强约100倍以上
(b)是一些不带有核小体的DNA区域
(C)是一些不带有蛋白的 DNA区域
(d)通常仅在基因正在表达时出现
(e)能在启动子、 DNA复制起点、着丝粒区发现
(f)能通过 DNA复制得以保持
91(交配型转换反应 :( )
(a)涉及将 DNA盒从一个沉默基因座(HML或HMR)转移到MAT基因座
(b)通常导致交配型的改变 (C)不发生在单倍体细胞中 92(沉默基因座:( )
(a)因为沉默子区域的存在与MAT基因座不同
(b)在SIR基因产物的作用下，保持转录失活
(c)存在几个 DNase I超敏位点
(d)与 DNA复制起点结合在一起
(e)在交配型转换过程中作为受体
(f)因为染色质结构保持转录失活
93(HO基因是交配型转换所必需的，它:( )
(a)编码一个位点特异的 DNA内切核酸酶
(b)它的启动子中含有许多不同的功能元件
(c)任何时候在任何酵母细胞中都表达
(d)编码可以切割沉默基因座，而对MAT没作用的蛋白 94(锥虫:( )
(a)是在昆虫与哺乳动物宿主间交替生活的单细胞寄生虫
(b)由多种表面糖蛋白(VSG)分子组成的包被包裹
(c)可同时表达多种 VSG基因
(d)在哺乳动物体内时，丢失它们的 VSG包被
(e)通过每 1,2周改变 VSG，从而逃避的宿主的免疫反应
(f)可以产生10种不同的 VSG分子
95(哪些有关 VSG基因的叙述是正确的?( )
(a) VSG基因产物可发生免疫交叉反应
(b)锥虫基因组中含有多个 VSG基因
12
(c) VSG基因成簇存在于一条染色体上
(d)它们可以位于端粒的附近或染色体的内部
(e)所有位于端粒附近的 VSG基因是可被转录的，而所有位于染色体内部的 VSG 基因则是转录失活的
96(下列关于 VSG基因转录活性的叙述是正确的有:( )
(a)只有在表达位点的 VSG基因被转录
(b)ELC(expression linked copy)总是位于端粒附近
(c)将内部的VSG基因拷贝复制到表达位点可以改变表达位点的 VSG基因
(d)不需经过基因复制，端粒附近的 VSG基因就可以被激活
(e)少数情况下，通过不同的 VSG基因拷贝在表达位点组装可以产生一个新的VSG 基因
(f)以上都正确
97(位于 ELC的 VSG基因有一个不寻常的结构，包括:( )
(a)不含限制性内切酶切割位点的5?无义区
(b)由一个简单序列重复多次组成的3?无义区
(c)以上都正确 (d)以上都不正确
98(哪些有关免疫球蛋白基因重排的叙述是正确的?( )
(a)所有物种中 V基因的数目是一样的
(b) J是恒定区的一部分 (c)各部分连接时，将产生缺失或重排
(d)当一个等位基因中发生有意义的重排时，另一个等位基因也发生重排 99(以下关于抗体类型转变的叙述哪些是正确的?( )
(a)每种重链具有不同的功能
(b)类型转变的次序按染色体上重链排列顺序进行
(c)一旦一种类型转换发生，其他的转换将不再进行
(d)也可通过可变剪接改变重链
100(锌指蛋白与锌的结合( )
(a)是共价的 (b)必须有 DNA的存在
(c)通过保守的胱氨酸和组氨酸残基间协调进行 (d)位于蛋白质的α—螺旋区域 101(锌指蛋白与 DNA的结合( )
(a)位于 DNA大沟 (b)通过“锌指”的 C端进行
(C)利用蛋白的α—螺旋区域 (d)每个“指”通过形成两个序列特异的DNA接触位点
(e)通过“指”中保守的氨基酸同 DNA结合
102(甾醇类受体转录因子( )
(a)结合的激素都是相同的 (b)与 DNA的结合不具序列特异性
(c)与锌结合的保守序列不同于锌指蛋白 (d)通过第二“指” C端的氨基酸形成二聚体
(e)参与转录激活，与 DNA和激素结合分别由不同的结构域完成 103(糖皮质激素类的甾醇受体( )
(a)是同源二聚体 (b)所结合的 DNA回文序列都不相同
13
(C)结合的回文序列相同，但组成回文序列两段DNA间的序列不同
(d)RXR受体通过形成异源二聚体后与同向重复序列结合 (e)这类受体存在于细胞核中 104(同源异型域蛋白( )
(a)形成具有三个α—螺旋的结构
(b)主要通过α—螺旋3和 N端的臂与 DNA接触
(c)与原核生物螺旋—转角—螺旋蛋白(如λ阻遏物)的结构很相似
(d)通常存在于细胞核中 (e)在果蝇早期发育调控中起重要作用 105( HLH蛋白( )
(a)在序列组成上与原核生物螺旋—转角—螺旋蛋白具有相关性
(b)通过环区与 DNA结合 (c)形成两个α—螺旋与 DNA的大沟结合
(d)形成两性螺旋，其中疏水残基位于螺旋的一侧 (e)以上都不是 106( bHLH蛋白( )
(a)在环中含有保守的碱性氨基酸 (b)不能形成同源二聚体
(c)非诱导表达 (d)通过它们碱性区与HLH相互作用
(e)只有与 HLH形成异源二聚体后才与 DNA结合 (f)以上都不是 107(以下关于亮氨酸拉链蛋白的叙述哪一项是正确的?( )
(a)它们通过保守的亮氨酸残基与 DNA结合
(b)它们与 HLH蛋白相似之处是:它们都具有相邻的 DNA结合结构域和二聚化的结构域
(C)Jun蛋白可以形成同源二聚体而 Fos蛋白不可以
(d) Fos,Jun复合物与 Jun,Jun复合物结合的 DNA序列不同
(e) Fos,Jun与 DNA的结合比 Jun,Jun牢固
108(选出所有正确的选项:( )
(a)基因必须经过完全的甲基化才能表达 (b)具有活性的 DNA是非甲基化的
(c)随着发育阶段的改变， DNA的甲基化也要发生变化
(d)在 DNA复制过程中，通过识别半甲基化的酶，甲基化得以保存 109(下列哪些转录因子含有 TBP?( )
(a) TF?B (b) TF?A (c) SLl (d) TF?D (e) TF?B (f)UBFl 110(下列哪些转录因子是装配因子?( )
(a) SPl (b) TF?B (c) TF?H (d)以上都不是
111(以下关于 TBP的陈述哪些是正确的?( )
(a) TBP诱导 DNA发生弯曲 (b) TBP结合于 DNA双螺旋的大沟
(C) TBP通过与不同的蛋白结合来识别不同的启动子
(d) TBP与聚合酶?、聚合酶 ?和聚合酶?的共同亚基作用 112(TATA框存在于( )
(a)聚合酶?识别的所有启动子中 (b)聚合酶?识别的大部分启动子中
(c)聚合酶?识别的极少数启动子中 (d)聚合酶?识别的所有启动子中
(e)聚合酶?识别的大部分启动子中 (f)聚合酶?识别的极少数启动子中
14
113(RNA聚合酶?的C端结构域(CTD)的磷酸化与( )相关
(a)与起始前复合体的结合 (b)TF?H的激酶活性
(c)TF?D中特异 TAF蛋白的存在 (d)从起始聚合酶到延伸聚合酶的转换 (e)起始因子TF?A， TF?B及 TF?D的释放
114. 下列哪个(些)情况能解释为什么一些基因在它们的转录因子存在时并不总是处于活性状态?( )
(a)转录因子结合位点的邻近序列 (b)有其他蛋白的结合
(c)转录因子结合位点的染色质结构状态 (d)缺少共激活蛋白 (e)以上都是 115( 剪接小体是( )
(a)由多种 snRNP组成的结构 (b)大小为40S,60S
(c)一种在拼接中起作用的结构 (d)以上都不正确 (e) RNA加工的一种形式 116( 在O-连接寡聚糖中，直接同多肽相连的糖基是( )
(a)甘露糖 (b)N-乙酰葡糖胺
(c)C—半乳糖或N—乙酰半乳糖胺 (d)半乳糖或N—乙酰葡萄糖胺 (e)葡萄糖
117(正常情况下，同乙酰化蛋白质氨基末端的甘氨酸相连的脂肪酸是( )
(a)软脂酸 (b)油酸 (c)十四酸盐(肉豆蔲酸盐)
(d)乙酰基 (e)以上都对
118(在阿黑皮素原中被识别和切割的氨基酸残基是( )
(a)赖氨酸和精氨酸 (b)谷氨酰胺和甘氨酸
(C)赖氨酸和天冬酰胺 (e)天冬酰胺和赖氨酸
(d) a和b，其中a是丙氨酸，天冬氨酸或甘氨酸，b是丙氨酸或脯氨酸 119(哪些有关剪接位点的叙述是正确的?( )
(a)剪接位点含有长的保守序列 (b)5?与3?剪接位点是互补的
(c)几乎所有的剪接位点都遵从GT—AG规律 (d)剪接位点被保留在成熟的mRNA中
(e)内含子3?与5?剪接位点间的距离可以很大
f)一个内含子的5?剪接位点只能与同一个内含子的3?剪接位点作用，杂合内含子不能被剪接 120(分支位点核苷酸( )
(a)总是 A (b)的位置在内含子内是随机的
(c)位于一个非严格保守的序列内 (d)通过与3?剪接位点作用起始剪接的第一步
(e)在剪接的第一步完成后与内含子中另外三个核苷酸共价连接 121(转酯反应:( )
(a)不需要ATP (b)拆开一个化学键后又形成另一个化学键
(c)涉及对糖磷骨架OH基团的亲核攻击 (d)以上都正确
122(选出所有有关 snRNA的正确叙述:( )
(a)snRNA只位于细胞核中 (b)大多数snRNA是高丰度的
(c)snRNA在进化的过程中是高度保守的 (e)以上都正确
(d)某些snRNA可以与内含子中的保守序列进行碱基配对
15
123(参与前体mRNA剪接的 snRNP( )
(a)与一组Sm蛋白结合
(b)含有独特的蛋白(即不存在任何其他snRNP的蛋白)
(c)其 RNA和蛋白组分都是其作用不可缺少的
(d)主要通过蛋白组分与前体mRNA结合 (e)以上都正确 124(剪接小体的组装( )
(a)按有序的途径一步步完成
(b)涉及snRNP与水溶性蛋白(即不是任何snRNP组分的蛋白)
(c)不需要ATP (d)伴随着多次snRNP的重组合 (e)以上都正确 125( SR蛋白( )
(a)家族中的成员都具有一个或多个精氨酸和丝氨酸丰富区
(b)分别与特异的 RNA序列结合
(c)形成一个蛋白质桥连接 U2AF和 Ul snRNP
(d)可以与3?外显子的剪接增强序列结合，促进3?弱剪接位点的作用
(e)可帮助识别外显子 (f)以上都正确
126( ?型剪接与前体mRNA剪接的相似之处是( )
(a)两种内含子具有相似的剪接位点
(b)它们都通过同样的机制进行剪接，其中涉及套索中间体
(c)都由 RNA催化进行 (d)都需要 U1 snRNP
(e)都可以在没有蛋白的情况下进行 (f)两种内含子都形成精细的二级结构 127(可变剪接( )
(a)与“组成型”剪接的机制完全不同
(b)可以从单个基因产生多种同功蛋白，即添加或缺失少数氨基酸的变异蛋白
(c)涉及不同的5?和3?剪接位点
(d)被用于在不同组织和不同的发育阶段产生不同的蛋白质
(e)可以跨越外显子，也可涉及可变外显子或保留内含子 128(多数情况下，剪接发生在同一个RNA分子内部。但反式剪接( )
(a)已被证实存在于天然和合成的内含子中
(b)涉及前体mRNA与独立的 SL RNA间的剪接
(c)与顺式剪接的机制完全不同 (d)有时是锥虫与线虫的剪接方式
(e)将同一个5?外显子(SL RNA)剪接到所有 mRNA上
(f)只需要 Ul与 U5 snRNP
129(tRNA中的内含子( )
(a)通过两步转酯反应被切除 (b)具有与反密码子互补的序列
(c)都形成相似的二级结构 (d)由蛋白酶(核酸内切酶和连接酶)切除
(e)在5'和3'剪接位点的序列是保守的
130. 在前体 mRNA上加多聚腺苷酸尾巴( )
16
(a)涉及两步转酯机制 (b)需要保守的AAUAAA序列
(c)在 AAUAAA序列被转录后马上开始
(d)通过一个多组分复合物的逐步组装进行 (e)由依赖于摸板的RNA聚合酶催化 131. 真核细胞 mRNA前体的长度由( )
(a)转录终止位点形成的茎环结构决定
(b)其3?末端的聚腺苷酸化位点所决定，转录产物在此位点被切割并加上 Poly(A)
(c)在终止位点与RNA聚合酶?结合的终止蛋白决定
(d)将所有初始转录产物加工成最终长度的前体 mRNA的核酸外切酶决定
(e)加帽、聚腺苷酸化及内含子的剪接所决定
132. 下列关于 mRNA降解的正确叙述是( )
(a)原核mRNA的降解由核酸内切酶从核糖体翻译的后面5?端开始
(b)原核mRNA的降解通常由核酸外切酶从3??5?进行
(c)真核mRNA的降解依赖于末端序列中多个特异性失活元件
(d)真核mRNA的降解依赖于 poly(A)核糖核酸酶的作用
(e)所有的mRNA在5?末端的降解通常涉及核糖核酸内切酶活性 133(可变剪接能增加转录产物，这些转录产物间的区别在于( )
(a)mRNA的5?非转录区 (b)mRNA的编码区
(c)mRNA的3?非转录区 (d)上述全是 (e)上述全不是
134(在哺乳动物细胞中，RNA编辑( )
(a)可以在转录后水平改变一个基因的编码能力
(b)能在小肠细胞中的 apo—B mRNA的中部插入一个终止密码子，在肝细胞中却不能
(c)通常使每个mRNA都发生很大的变化 (d)通过脱氨基可以改变特定的核苷酸 135(在锥虫的线粒体中，RNA编辑( )
(a)被广泛用于改变许多 mRNA的编码能力
(b)只在每个mRNA上改变单个核苷酸 (c)只加上G和缺失G
(d)由向导RNA指导进行，其中向导RNA与编辑前mRNA上被编辑区域相邻的碱基互补
(e)所用的向导RNA上有一小段区域与被编辑的 mRNA互补
(f)进行的方向与转录方向相同
136(氨酰tRNA分子同核糖体结合需要下列哪些蛋白因子参与?( )
(a) EF-G (b) EF-Tu (c) EF-Ts (d) eIF-2 (e) EF—1
137(在真核生物细胞中，翻译的哪一个阶段需要GTP?( )
(a)mRNA的5?末端区的二级结构解旋 (b)起始tRNA同核糖体的结合
(c)在延伸的过程中，tRNA同核糖体的结合
(d)核糖体的解体 (e)5?帽子结构的识别
138(下列关于原核生物转录的叙述中哪一项(哪些)是正确的?( )
(a)核糖体的小亚基能直接同 mRNA作用
(b)IF—2与含GDP的复合物中的起始tRNA结合
17
(c)细菌蛋白质的合成不需要ATP
(d)细菌所有蛋白质的第一个氨基酸是修饰过的甲硫氨酸
(e)多肽链的第一个肽键的合成不需要 EF-G
139(下面关于真核生物翻译的叙述哪一个(哪些)是正确的?( )
(a)起始因子eIF只有同GTP形成复合物才起作用
(b)终止密码子与细菌的不同 (c)白喉毒素使 EF—l ADP—核糖酰化
(d)真核生物蛋白质的第一个氨基酸是修饰过的甲硫氨酸，在蛋白质合成完成之后，它马上被切除 (e)真核生物的核糖体含有两个 tRNA分子的结合位点 140. 下列叙述不正确的是:( )
(a)共有20个不同的密码子代表遗传密码 (b)色氨酸和甲硫氨酸都只有一个密码子
(c)每个核苷酸三联体编码一个氨基酸 (d)不同的密码子可能编码同一个氨基酸
(e)密码子的第三位具有可变性
141. 起始因子 IF-3的功能是:( )
(a)如果同40S亚基结合，将促进40S与60S亚基的结合
(b)如果同30S亚基结合，将防止30S与50S亚基的结合
(c)如果同30S亚基结合，促使30S亚基的16S rRNA与mRNA的 S-D序列相互作用
(d)指导起始 tRNA进入30S亚基中与 mRNA结合的 P位点
(e)激活核糖体的 GTP酶，以催化与亚基相连的GTP的水解
142(真核起始因子 eIF-3的作用是:( )
(a)帮助形成亚基起始复合物(eIF—3，GTP，Met-tRNA，40S)
(b)帮助亚基起始复合物(三元复合物，40S)与mRNA 5?端的结合
(c)若与4OS亚基结合，防止4OS与60S亚基的结合
(d)与 mRNA5?端帽子结构相结合以解开二级结构
(e)激活核糖体GTP酶，使亚基结合可在GTP水解时结合，同时释放eIF-2 143(核糖体的 E位点是:( )
(a)真核mRNA加工位点 (b)tRNA离开原核生物核糖体的位点
(c)核糖体中受E.coR I限制的位点 (d)电化学电势驱动转运的位点 144. 下列关于核糖体肽酰转移酶活性的叙述正确的是:( )
(a)肽酰转移酶的活性存在于核糖体大亚基中(50S或60S)
(b)它帮助将肽链的 C末端从肽酰tRNA 转到 A位点上氨酰tRNA的 N末端
(c)通过氨酰tRNA的脱乙酰作用，帮助氨酰tRNA的 N末端从A位点移至P位点 中肽酰tRNA的 C末端
(d)它水解 GTP以促进核糖体的转位 (e)它将肽酰tRNA去酰基 145(核糖体肽链的合成因( )终止
(a)可读框内编码 C末端氨基酸的密码子 (b)可读框内存在不对应氨酰tRNA的密码子
(c)浓度太低或缺少特定的氨酰tRNA
18
(d)释放因子(RF)的 GTP依赖性作用，防止 A位点中终止密码子与氨酰tRNA的 错配结合 (e)末端氨酰转移酶的活性，这个酶蛋白通过将一个赖氨酸或精氨酸残基加到新生多肽 C末端将肽酰tRNA脱乙酰化
146(下列复合物中哪些不是起始反应的产物?( )
(a) GTP十Pi (b)ATP十Pi (c)装配好的核糖体 (d)起始因子 (e)多肽 147(反密码子中哪个碱基对参与了密码子的简并性(摇摆)。( )
(a)第一个 (b)第二个 (c)第三个 (d)第一个与第二个 (e)第二个与第三个 148( GAUC四个碱基中，在密码子的第三位上缺乏特异性的是:( )
(a) G (b) A (c) U (d) C (e)它们通常都有独特的含义
149(“同工tRNA”是:( )
(a)识别同义 mRNA密码子(具有第三碱基简并性)的多个 tRNA
(b)识别相同密码子的多个tRNA (c)代表相同氨基酸的多个tRNA
(d)由相同的氨酰tRNA合成酶识别的多个tRNA
(e)多种识别终止密码子并导致通读的tRNA
150(氨酰tRNA合成酶催化tRNA负载的氨基酸是否正确，由( )来判断。
(a)化学校正(非相关的氨酰腺苷酸被水解)(b)动力学校正(非相关氨酰腺苷酸迅速解体)
(c)tRNA D环中的特征序列 (d)氨基酸乙酰化反应的特异性
(e)氨酰tRNA合成后能否能进入核糖体 A位点
151(氨酰tRNA合成酶的数量由:( )
(a)存在的tRNA的数量所决定 (b)可翻译的mRNA密码子的数量所决定
(c)由所用到的氨基酸数量所决定 (d)各个物种的种类所决定
(e)不是由任何传统的
标准
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所决定
152(下列有助于抑制功能的是:( )
(a)使用tRNA类似物，如嘌呤霉素
(b)在tRNA修饰酶的结构基因中引入点突变
(c)在氨酰tRNA合成酶结构基因中引入点突变
(d)提高tRNA阻遏物的竞争效率(如与释放因子和正确的 tRNA的竞争力)
(e)在编码tRNA的基因的反密码子区中引入点突变
153(密码子-反密码子间的相互作用构成了翻译准确度的一个薄弱点。在体内它受以下因素控制:( )
(a)tRNA与 A位点结合时，对大亚基蛋白质的选择性
(b)核糖体依赖于密码子侧翼序列产生的不同前进速度
(c)延伸因子与核糖体 A、 P位点相互作用的特异性
(d)tRNA与 A位点结合时，对小亚基蛋白质的选择性 (e)释放因子与tRNA的竞争 154(因研究重组 DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( )
(a) A(A. Kkornberg (b)W. Gilbert (c) P.Berg (d) B.McClintock
19
155(第一个作为重组 DNA载体的质粒是( )
(a) pBR322 (b) Col E1 (c) pSC101 (d) pUC18
156. 第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是( )
(a) EcoR I (b) EcoB (c) EcoC (d) EcoR ?
157. P. Berg构建 SV40二聚体时用了几种不同的酶，其中( )的作用是制造隐蔽的5?端，
(a)末端转移酶 (b)λ切核醚酶 (c)外切酶? (d) DNA连接酶
158. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )是不太恰当。
(a)由作用于同一 DNA序列的两种酶构成
(b)这一系统中的核酸酶都是?类限制性内切核酸酶
(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 DNA进行修饰
(d)不同的宿主系统具有不同的限制—修饰系统
159. RFLP产生自( )
(a)使用不同的限制性内切核酸酶 (b)每种类型的染色体有两条(二倍体)
(c)染色体中碱基的随机变化 (d) Southern印迹 (e)不同探针的使用
160( ?型限制性内切核酸酶:( )
(a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列
(b)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
(C)限制性识别非甲基化的核苷酸序列 (d)有外切核酸酶和甲基化酶活性
(e)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
161. ?型限制性内切核酸酶:( )
(a)由两个亚基组成，仅识别半甲基化位点。甲基化位点相对于限制位点的位置(上游或下游)
决定了 DNA是被甲基化还是被限制
(b)不同亚基的识别位点甲基化和限制活性相互排斥:MS亚基促使甲基化，R亚基促使限制
(c)由两个亚基组成，在识别位点附近识别并进行甲基化或限制
(d)在错配修复中起关键作用，因为酶结合到 DNA上是以结构扭曲为基础而不是 序列错
误识别
(e)是光依赖型酶，是嘧啶二聚体进行“光反应”的关键酶，它们能使胸腺嘧啶二聚体间的共
价键断裂
162(分析限制性内切核酸酶切割双链DNA所得到的 DNA片段的长度有助于物理作图， 这
是因为:( )
(a)即使只用一种限制酶，因为 DNA是线性的，所以也可以迅速确定限制性片段 序列
(b)内切酶在等距离位点切割 DNA，同时对于每个生物体的长度是特异的
(c) DNA的线性意味着单限制性酶切片段的长度之和等于 DNA的总长，而双酶切产生的
重叠片段则产生模糊的图谱
(d)这些内切酶的消化活性是物种特异的 (e)这一技术同时为核苷酸序列提供了广泛信息
163(通过限制性片段分析，可以对等位基因进行精确的分析比较，其原因是:( )
(a)限制性内切核酸酶只切割两个变异等位基因中的一个
20
(b)它利用限制性位点作为遗传标记
(c)一个特定细胞中等位基因的核苷酸序列不会是相同的
(d)它不依赖于变异等位基因产物的功能。
(e)限制性内切核酸酶的切点被限制在 DNA的编码区域内 164(限制性片段长度多态性(RFLP)是:( )
(a)用于遗传的“指纹结构”模式分析的技术
(b)二倍体细胞中的两个等位基因限制性图谱的差别
(c)物种中的两个个体限制性图谱间的差别
(d)两种物种个体间的限制性图谱差别
(e)两种酶在单个染色体上限制性图谱的差别
165(为了正确地构建一个真核基因组的物理图谱:( )
(a)必须有可能清晰地分离各个染色体(通过脉冲场凝胶电泳)
(b)必须从单倍体细胞(配子)中分离 DNA，这样避免了由二倍体细胞中同源染色体的存在而产生的干扰信息
(C)必须进行单个染色体分析，这只能在细胞分裂后期进行
(d)必须找到对于每个染色体只切割一次的限制酶
(e)必须首先分离核 DNA和细胞器 DNA，然后对它们分别作图 166(下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( )
(a)限制酶是外切酶而不是内切酶
(b)限制酶在特异序列(识别位点)对 DNA进行切割
(c)同一种限制酶切割 DNA时留下的末端序列总是相同的
(d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链 DNA，产生粘末端
(e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链 DNA，产生平末端 167(因研究λ噬菌体的限制与修饰现象的本质而获得诺贝尔奖的科学家是:( )
(a) J(Lederberg (b) W.Arber (c) H(Smith (d) F(Sanger 168(第一个被分离的?类酶是:( )
(a)EcoK (b)Hind? (c)Hind? (D)EcoB
169(双链DNA中一段自我互补的序列被称为回文序列，这种序列一般具有下列特征:
(a)有对称轴 (b)两条链的5??3?方向的序列相同
(c)是?类酶的识别序列 (d)可增强基因的表达
170(在下列进行 DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?( )
(a)反应时间 (b)酶量 (c)反应体积 (d)酶的温度
2+171(在下列试剂中，那一种可以整合 Ca离子?( )
(a) EDTA (b)柠檬酸钠 (c) SDS (d) EGTA 172(在下列工具酶中，那一种可以被 EGTA抑制活性?( )
(a) SI单链核酸酶 (b)末端转移酶 (C)碱性磷酸酶 (d) Ba131核酸酶 173(限制性内切核酸酶可以特异性地识别:( )
21
(a)双链 DNA的特定碱基对 (b)双链 DNA的特定碱基序列
(c)特定的三联密码 (d)以上都正确
174(在下列酶中，催化反应不需要ATP的是( )。
(a)EcoK (b) EcoB (c) T4 DNA连接酶 (d) BamH ?
175(下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是( )。
(a) Sau3A ? (b) E.coR ? (c)hind? (d)Sau3A ? 176(限制性内切核酸酶的星号活性是指:( )。
(a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。
(b)活性大大提高 (c)切割速度大大加快
(d)识别序列与原来的完全不同
177(下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( )。
(a)甘油含量过高 (b)反应体系中含有有机溶剂
,， (c)含有非 Mg二价阳离子 (d)酶切反应时酶浓度过低 178(DNA被某种酶切割后，电泳后得到的电泳带有些扩散，下列原因中，那一项不太
可能?( )
(a)酶失活 (b)蛋白质(如 BSA)同 DNA结合
(c)酶切条件不合适 (d)有外切核酸酶污染
179. 关于回文序列，下列各项中，( )是不正确的
(a)是限制性内切核酸酶的识别序列 (b)是某些蛋白的识别序列
(c)是基因的旁侧序列 (d)是高度重复序列 180(关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当
(a)由作用于同一 DNA序列的两种酶构成
(b)这一系统中的核酸酶都是?类限制性内切核酸酶
(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 DNA进行修饰 (d)不同的宿主系统具有不同的限制—修饰系统
181(T4 DNA连接酶是从 T4噬菌体感染的E.coli，中分离的，这种连接酶( )
(a)催化连接反应时既能以ATP又能以NAD作为能量来源
(b)既能催化平末端连接又能催化粘性末端连接
(c)是一种单肽酶，分子量为74kDa
(d)既能催化单链 DNA连接又能催化双链 DNA连接
182(DNA连接酶在体内的主要作用是在 DNA复制、修复中封闭缺口( )
(a)将双链 DNA分子中的5?磷酸基团同3?—OH末端重新形成磷酸二酯键
(b)作用时不消耗能量
2+ (c)需要 Mn等二价辅助离子 (d)也可以连接RNA分子 183(在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用( )
(a) T4 DNA聚合酶 (b) Klenow酶
(c)大肠杆菌 DNA聚合酶? (d) T7 DNA聚合酶
22
184(末端转移酶是合成酶类，( )
(a)作用时不需要模板
2+ (b)在Co的存在下，可以在突出的3?末端延长 DNA链
2+ (c)在Co的存在下，可以在隐蔽的3?末端延长 DNA链
(d)上述说法有两种是正确的
185(在以下关于噬菌体 SP6RNA聚合酶特性的描述中，( )是不正确的。
(a)能够特异性识别 SP6启动子 (b)可能在 DNA模板的切口(nick)处停止
(c)具有抗酸酶活性 (d)用于体外标记 RNA探针。 186(在基因工程中，可用碱性磷酸酶( )
(a)防止 DNA的自身环化 (b)同多核苷酸激酶一起进行 DNA的5?末端标记
(c)制备突出的3?末端 (d)上述说法都正确
187(从E.coli中分离的连接酶:( )
(a)需要ATP作辅助因子 (b)需要 NAD作辅助因子
(c)可以进行平末端和粘性末端连接 (d)作用时不需要模板 188(下列酶中，除( )外都具有磷酸酶的活性
(a)λ核酸外切酶 (b)外切酶? (c)单核苷酸激酶 (d)碱性磷酸酶 189(下列哪一种酶作用时需要引物? ( )
(a)限制酶 (b)末端转移酶 (c)反转录酶 (d) DNA连接酶
190(EDTA是一种螯合剂，可以抑制大多数酶的活性，但在下列酶中，( )不受它的影响
(a)外切酶? (b)EcoR ? (c) Ba131核酸酶 (d) Pst ? 191(S1核酸酶的功能是( )
(a)切割双链的 DNA (b)切割单链的RNA
(c)切割发夹环 (d)以上有两项是正确的
192(Klenow酶与 DNA聚合酶相比，前者丧失了( )的活性。
(a)5??3?合成酶 (b)3??5’外切酶 (c)5??3?外切酶 (d)转移酶 193(用 Ba131核酸酶作系列缺失突变时，( )
2+ (a)缺失从一端开始 (b)需要 Mg作辅助因子
2+ (c)需要 Ca作辅助因子 (d)以上有两项是正确的
194(在 cDNA技术中，所形成的发夹环可用( )
(a)限制性内切核酸酶切除 (b)用3?外切核酸酶切除
(c)用 S1核酸酶切除 (d)用5?外切核酸酶切除
195(λ外切核酸酶:( )
(a)作用时不需要摸板 (b)可以从3?末端降解 DNA
(c)可以从 nick部位降解 DNA (d)可以从 gap部位降解DNA 196(T4 RNA连接酶:( )
(a)作用时不需要模板 (b)作用时需要模板 (c)是1972年发现的 (d)是1967年发现的 197. 下列DNA不是λ外切核酸酶作用底物的是(
23
(a)具有3?突出端的双链 DNA (b)具有5?突出端的双链 DNA
(C)切口 DNA (d)平末端 DNA
198(可以在切口部位起作用的酶是( )
(a) S1核酸酶 (b)外切酶? (c) λ外切核酸酶 (d) Ba131核酸酶 199(线性质粒复制的引物来自于( )
(a)细胞中合成的小分子RNA (b)自身末端的端粒序列
(c)外加的寡聚 DNA (d)自身断裂的小分子 DNA
200(下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，( )是不正确的
(a)质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约，因而有较多的拷贝数 (b)可以在氯霉素作用下进行扩增 (c)通常带有抗药性标记
(d)同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子
201. 基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载体中只有( )被视为用作基因工程载体的天然质粒载体
(a) pBR322 (b) pSC101 (c) pUB110 (d) pUC18
202(下列哪种克隆载体对外源 DNA的容载量最大?( )
(a)质粒 (b)粘粒 (c)酵母人工染色体(YAC) (d)λ噬菌体 (e) cDNA表达载体 203(反向重复序列:( )
(a)可以回折形成发夹结构 (b)可以是某些蛋白的结合位点
(C)参与转座子的转座 (d)以上说法都不对
204(松弛型质粒:( )
(a)在寄主细胞中拷贝数较多 (b)可用氯霉素扩增
(c)一般没有选择标记 (d)上述(a)、(b)两项正确
205(Col El是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒:( )
(a)是松弛复制型 (b)具有四环素抗性
(c)能被氯霉素扩增 (d)能产生肠杆菌素
206(同一种质粒 DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是:( )
(a) OC DNA>SC DNA,L DNA (b) SC DNA>L DNA>OC DNA
(c) L DNA,OC DNA,SC DNA (d) SC DNA,OC DNA,L DNA 207. pBR322是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自: ( )
(a) Col EI (b) Ri质粒 (c) pSC101 (d) pUC18 208(关于质粒的相容性。下面哪一种说法不正确?( )
(a)不同相容群的质粒能够共存于同一个细胞
(b)质粒可以分成若干个不相容群，但不能分成若干个相容群
(c)如果 a、 b两种质粒不相容，说明它们的复制机制相同
(d)属于同一个不相容群中的质粒，不仅复制机制相同，而且拷贝数和分子量也相同 209(关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?( )
(a)在不同的宿主中具有不同的复制机制 (b)在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点
24
(c)在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶 (d)在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率 210(能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是( )
(a) charomid (b) plasmid (c) cosmid (d) phagemid
211(第一个作为重组 DNA载体的质粒是( )
(a) pBR322 (b) Co1El (c) pSC101 (d) pUC18
212(Ti质粒:( )
(a)可从农杆菌转到植物细胞中 (b)作为双链 DNA被转移
(c)在植物中导致肿瘤 (d)介导冠瘤碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素
(e)需要细菌的 vir加基因帮助转移 (f)在植物细胞中作为染色体外质粒 213. 限制性内切核酸酶EcoR I在野生型的λ噬菌体 DNA中有5个切点、Hind?有7个切点，
BamH ?也有5个切点。调整这些酶切位点的数量，主要通过( )
(a)体内突变 (b)完全酶切后连接
(c)部分酶切 (d)先用甲基化酶修饰后再酶切
214(pBluescript M13载体在多克隆位点的两侧引入了 T7和 T3两个噬菌体的启动子，这样
增加了该载体的功能，如:
(a)可以对插入到多克隆位点的外源片段进行转录分析
(b)利用这两个启动子的通用引物进行 PCR扩增
(c)利用通用引物进行序列分析 (d)利用这两个启动子进行定点突变
上述四种功能中哪一种是不正确的?( )
215(下面关于细菌人工染色体( BAC)的特征描述，除了( )外都是正确的。
(a)通过电激法将大质粒转化大肠杆菌比酵母的转化率提高了10,100倍
(b) BAC载体在细菌中以环型超螺旋状态存在，使分离操作起来相对容易
(c) BAC载体在大肠杆菌宿主保持高拷贝
(d)克隆到 BAC载体上的外源片段可以直接进行测序以获得末端序列 216. 以粘粒为载体转染受体菌后，平板上生长的菌落会大小不一、生长速度不一的现象，其
原因是( )
(a)营养成分不足 (b)重组后的质粒复制不稳定
(c)重组后的粘粒整合到宿主染色体上 (d)重组体中插人片段的大小不同 217. M13K07是一种辅助噬菌体 DNA，可用它帮助噬菌粒制备单链 DNA，这是因为( )
(a) M13K07能够进行滚环复制，得到大量的单链噬菌体DNA
(b) M13K07能够提供成熟包装的蛋白
(c) M13K07提供了成熟包装所需的信号 (d) M13K07的10个基因都是正常的 218(粘粒(cosmid)是一种人工建造的载体，( )
(a)它具有 cos位点，因而可进行体外包装 (b)它具有质粒 DNA的复制特性
(c)进入受体细胞后，可引起裂解反应 (d)进入受体细胞后，可引起溶源化反应 219(Mu噬菌体也是一种转座元件，这种转座元件( )
(a)可引起寄主的突变 (b)可用于细胞内的基因工程
25
(c)具有转座酶基因 (d)以上说法都正确
220(关于 M13的 IG区，下列说法中哪一项不妥当?( )
(a)具有正负链的复制起点 (b)具有噬菌体 DNA被包装的信号
(c)具有150个碱基的 AT富集区 (d)具有八个回文序列，可形成五个发夹环 221( M13噬菌体基因组编码10个基因，在它的成熟过程中起调节作用的蛋白是( )
(a)gp2蛋白 (b) gp5蛋白 (c) gp7蛋白 (d) gp9蛋白
222(从细胞或组织中分离 DNA时，常用蔗糖溶液，目的是:( )
(a)抑制核酸酶的活性 (b)保护 DNA，防止断裂
(c)加速蛋白质变性 (d)有利于细胞破碎
223(不是所有松弛型质粒都需要进行扩增的，如 pBS、 pUC载体系统就不必进行氯霉素扩
增，这是因为这些质粒的拷贝数很高，达到( )
(a)30,50 (b)10O,200 (c)300,400 (d)50O,700
224(在亚磷酰胺化学法合成 DNA中，影响产量的最关键步骤是:( )
(a)脱三苯甲基反应 (b)偶联反应 (c)氧化反应 (d)封端反应
225(有两种确定核酸中核苷酸序列的方法:化学序列分析法(Maxam—Gilbert)和酶学序列分
析法(Sanger)。酶学测序法的基本原理优点是:( )
(a)碱基与特殊染料间不同的相互作用
(b)一个合成引物的延伸和 DNA修复合成的可靠终止
(c)限制性位点与 DNA末端标记的相关性
(d)可同时对 DNA双螺旋的两条链进行测序
(e)反应是DNA特异的，RNA不会带来干扰。这样既减少纯化步骤，也节约了开支 226(CSCl-EB密度梯度离心法纯化质粒 DNA的原理是:( )
(a)氯化铯可以较多地插入到线状 DNA中去
(b)氯化铯可以较多地插入到 SC DNA中去
(c) EB可以较多地插入到线状 DNA中去
(d) EB可以较多地插入到 SC DNA中去
227(关于 cDNA的最正确的提法是:( )
(a)同 mRNA互补的单链 DNA (b)同 mRNA互补的双链 DNA
(c)以 mRNA为模板合成的双链 DNA (d)以上都正确
2+228. 在分离mRNA的溶液中， Mg离子的浓度不能低于0.5m mol,L。因为低了,( )
(a)mRNA会降解 (b)mRNA会沉淀 (c)核糖体解体 (d) mRNA会变性 229(用碱法分离质粒 DNA时，染色体 DNA之所以可以被除去，是因为:( )
(a)染色体 DNA断成了碎片 (b)染色体 DNA分子量大，而不能释放
(c)染色体变性后来不及复性 (d)染色体未同蛋白质分开而沉淀
230(下面哪一种特性不是密码所具有的?( )
(a)偏爱性 (b)简并性 (c)重叠性 (d)连续性
231(用 SDS—酚来抽提DNA时 SDS的浓度是十分重要的，当 SDS的浓度为0.1,时，( )
26
(a)只能将 DNA抽提到水相 (b)只能将RNA抽提到水相
(c)可将 DNA、RNA一起抽提到水相 (d) DNA和RNA都不能进人水相 232(关于碱解法分离质粒 DNA，下面哪一种说法不正确?(
(a)溶液?的作用是悬浮菌体 (b)溶液?的作用是使 DNA变性
(c)溶液?的作用是使 DNA复性
(d)质粒 DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性
233(异戊醇的作用是:( )
(a)使蛋白质脱水 (b)使 DNA进入水相
(c)帮助 DNA进入水相 (d)减少气泡，促进分相
234(松弛型质粒:( )
(a)在寄主细胞中拷贝数较多 (b)可用氯霉素扩增
(c)一般没有选择标记 (d)只有(a)和(b)是正确的
235(关于 PCR扩增停滞的原因有很多种，但下列各项中，( )项不是主要原因。
(a)底物(模板)过剩 (b) dNTP的大量消耗
(c)产物的聚集 (d)非特异性产物的竞争性抑制
236( Clark做了一个有趣的实验，发现Taq DNA聚合酶可以不需要模板，在双链 DNA的末端加一个碱基，主要是加( )
(a) dGTP (b) dATP (c) dCTP (d) dTTP
237(在简并引物的3?端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是因为( )
(a)Taq酶具有一定的不精确性 (b)便于排除错误碱基的掺入
(c)易于退火 (d)易于重组连接
238(变色的酚中含有氧化物，这种酚不能用于 DNA分离，原因主要是:( )
(a)氧化物可使 DNA的磷酸二酯键断裂 (b)氧化物会改变 pH值
(c)氧化物同DNA形成复合物 (d)氧化物在 DNA分离后不易除去 239(重叠群(contig)是一群克隆。在这个克隆群体中各个体( )
(a)相互之间重叠 (b)都是来自不同生物的克隆
(c)插入片段位于不同染色体的不同区段 (d)位于同一染色体的不同区段
240(根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、 cDNA文库等。在下列文库中， ( )是 cDNA文库
(a) YAC文库 (b) MAC文库 (c)扣减文库 (d) BAC文库 241(下面关于多克隆位点(multiple clone site, MCS)的描述，不正确的一句是( )
(a)仅位于质粒载体中 (b)具有多种酶的识别序列
(c)不同酶的识别序列可以有重叠 (d)一般是人工合成后添加到载体中 242(部分填补是 DNA体外重组中常用的一种技巧，填补时应( )
(a)控制 DNA聚合酶的用量 (b)控制酶反应的时间
(c)限制dNTP的种类 (d)注意只能填补载体
27
243(在下列限制性内切核酸酶中，( )的识别序列中有松弛碱基，选用这种酶时要考虑连接后外源 DNA的插入方向。
(a)Hind ? (b)E.coR ? (c)BamH ? (d)Pst?
244(EcoR ?切割载体 DNA和供体DNA所产生的片段在用于重组连接前要( )
(a)用65?处理5,10分钟使限制性内切核酸酶失活
(b)用 CIP处理载体 DNA防止自身环化
(c)进行琼脂糖凝胶电泳监测 (d)上述说法都正确
245(在 cDNA技术中，所形成的发夹环可用( )
(a)限制性内切核酸酶切除 (b)用3’-外切核酸酶切除
(c)用 Sl核酸酶切除 (d)用5ˊ外切核酸酶切除
246(在 DNA的酶切反应系统中，通常:( )
2+ (a)用 SSC缓冲液 (b)加人 Mg作辅助因子
(c)加人 BSA等保护剂 (d)上述说法中，有两项是正确的
247(粘性末端连接法，不仅操作方便，而且( )
(a)产生新切点 (b)易于回收外源片段 (c)载体不易环化 (d)影响外源基因的表达 248(在下列表型中，( )是基因工程上理想的受体菌表型
+++-----+++-(a)rmrec (b) rmrec (c) rmrec (d) rmrec
249(关于 DNA接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项不正确?( )
(a)给外源DNA添加适当的切点 (b)人工构建载体
(c)调整外源基因的可读框 (d)增加调控元件
250( DNA的结构对转化的影响很大，一般说来，转化效率最高的是:( )
(a)完整的线性双链DNA (b)单链线性DNA
(C)完整的环状双链DNA (d)开口的双链环状 DNA 251(cDNA文库包括该种生物的( )
(a)某些蛋白质的结构基因 (b)所有蛋白质的结构基因
(c)所有结构基因 (d)内含子和调控区
252(下列关于建立 cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的?( )
(a)从特定组织或细胞中提取 DNA或RNA
(b)用反转录酶合成mRNA的对应单链 DNA
(c)以新合成的单链 DNA为模板合成双链 DNA
(d)新合成的双链 DNA甲基化
253(下列对粘性末端连接法的评价中，哪一项是不正确的?( )
(a)操作方便 (b)易于回收片段
(c)易于定向重组 (d)载体易于自身环化，降低重组率
254(关于 cDNA的最正确的提法是:( )
(a)同 mRNA互补的单链 DNA (b)同mRNA互补的双链 DNA
(c)以 mRNA为模板合成的双链 DNA (d)以上都正确
28
255(关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确?( )
(a)具有可诱导性 (b)具有可转移性
(c)细菌生长的任何时期都可以出现 (d)不同细菌出现感受态的比例是不同的 256(下列各项中、需要进行液相杂交的是( )
(a) Southern印迹 (b)Northern印迹 (c) Slot印迹 (d) Sl作图 257. 下面关于用T4多核苷酸激酶标记5’端制备探针的描述中( )是不正确的。
(a)既能标记 DNA，又能标记RNA
(b)既能标记双链 DNA又能标记单链 DNA
(c)只能标记突出的5?端不能标记其他类型末端
(d) DNA或RNA必须有5?—OH的存在
258. Southern印迹的DNA探针( )杂交。
(a)只与完全相同的片段
(b)可与任何含有相同序列的DNA片段 (c)可与任何含有互补序列的DNA片段 (d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段 (e)以上都是 259. 用 下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。
(a) Southern印迹杂交 (b) Northern印迹杂交
(c) Western印迹 (d)原位菌落杂交
260(下列哪一个不是 Southern印迹法的步骤?( )
(a)用限制酶消化 DNA
(b) DNA与载体的连接 (c)用凝胶电泳分离 DNA片段
(d) DNA片段转移至硝酸纤维素膜上 (e)用一个标记的探针与膜杂交 261(
报告
软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载
基因( )
(a)以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列
(b)以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区
(c)能用于检测启动子的活性 (d)能用于确定启动子何时何处有活性 262(当用过量的RNA与有限的 DNA杂交时,( )
(a)所有的 RNA杂交 (b)所有的 DNA杂交
(c)50,的 RNA杂交 (d)50,的 DNA杂交
(e)没有RNA 杂交，所有的 DNA复性为双链 DNA
263(在利用 lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是( )
(a)诱导宿主的α肽的合成 (b)诱导宿主的ω肽的合成
(c)作为酶的作用底物 (d)作为显色反应的指示剂
264(用菌落杂交法筛选重组体时，( )
(a)需要外源基因的表达 (b)不需要外源基因的表达
(c)要根据克隆基因同探针的同源性 (d)上述说法都正确
265(微细胞是一种大肠杆菌突变体，( )
(a)它不带任何 DNA (b)它的体积为正常细胞的 l,10
29
(c)它带有染色体 DNA，但不能表达 (d)它带有质粒 DNA，可以表达 266(切口移位是指在( )作用下，使( )带上放射性标记。
(a) DNA聚合酶 I，RNA (b) DNA聚合酶 I， DNA
(c) DNA聚合酶?，RNJL (d) DNA聚合酶?，DNA
267(用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的( )
(a) DNA (b) RNA (C)抗体 (d)抗原
268(下面关于细菌人工染色体( BAC)的特点描述，除了( )外都是正确的。
(a)通过电激法将大质粒转化大肠杆菌比酵母的转化率提高了10,100倍
(b) BAC载体在细胞中以环型超螺旋状态存在，使分离操作起来相对容易
(C) BAC载体在大肠杆菌宿主保持高拷贝
(d)克隆到 BAC载体上的外源片段可以直接进行测序以获得末端序列 269(用免疫化学法筛选重组体的原理是(
(a)根据外源基因的表达 (b)根据载体基因的表达
(c)根据 mRNA同 DNA的杂交 (d)根据 DNA同 DNA的杂交 270(随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的?(
(a)双链 DNA、单链 DNA、RNA都是可以标记的 (b)不需要用 DNase ?预处理
(c)反应时可用 Klenow酶 (d)反应时可用 DNA聚合酶 ?
271(在切口移位标记 DNA探针时只能使用( )
(a)Klenow酶 (b) DNA聚合酶 ? (c) DNA聚合酶? (d) DNA聚合酶? 272(要对一双链的 DNA分子进行3?末端标记，可用( )
(a) Klenow酶 (b) DNA聚合酶 ? (c) T4 DNA聚合酶 (d) T7 DNA聚合酶 273(关于噬菌斑筛选法的原理，下面哪一种说法不正确?( )
(a)噬菌斑颜色变化 (b)cI基因失活造成的噬菌斑的变化
(c)对IPTG的分解能力 (d)X-gal的分解与否
274(下列筛选重组体的方法中，不属于遗传学的方法是:(
(a)插入失活法 (b)显色反应选择法 (c)噬菌斑选择法 (d) R环分析法 275.关于 DNA的修复，下列描述中，哪些是不正确的?( )
(a)UV照射可以引起嘧啶碱基的交联 (b)DNA聚合酶?可以修复单链的断裂
(c)双链的断裂可以被 DNA聚合酶 ?修复 (d)DNA的修复过程中需要 DNA连接酶
(e)细菌可以用—种核酸内切酶来除去受损伤的碱基
(f)糖苷酶可以切除 DNA中单个损伤的碱基
276.DNA最普遍的修饰是甲基化，在原核生物中这种修饰的作用有:( )
(a)识别受损的 DNA以便于修复 (b)复制之后区分链，以确定是否继续复制
(c)识别甲基化的外来 DNA并重组到基因组中
(d)保护它自身的 DNA免受核酸内切酶限制
(e)识别转录起始位点以便RNA聚合酶能够正确结合
277.单个碱基改变是 DNA损伤的一种形式，它们:( )
30
(a)影响转录但不影响复制，在此过程中一个 ATG起始密码可能被修改
(b)影响 DNA序列但不影响 DNA的整个结构
(c)将继续引起结构变化但不影响复制循环
(d)可能由错配复制或酶的 DNA修饰(如脱氨基)所引起
(e)可以由 UV照射(如嘧啶二聚体)或加成化合物形成(如烷基化)所引起
278.错配修复是基于对复制期间产生的错配的识别。下列叙述正确的是:( )
(a) UvrABC系统识别并靠 DNA聚合酶 I促使正确核苷酸的引人而使错配被修复
(b)假如识别发生在被重新甲基化的半甲基化 DNA之前，那么修复可能偏向野生型序列
(Dam甲基化， MutH， MutSL)
(c)错配一般由单链交换所修复。这要靠 RecA蛋白恢复正常拷贝序列的能力
(d)错配修复也可被认为是对 DNA的修饰活动，如去烷基化或再氨基化，但是不会替换损
伤的核苷酸
(e)错配修复是靠正常情况下被 LexA蛋白抑制的修复功能完成的(SOS反应)
279.非均等交换:( )
(a)发生在同一染色体内 (b)产生非交互重组染色体
(c)改变了基因组织形式，未改变基因的总数 (d)在染色体不正常配对时发生
(e)减少—个基因簇的基因数，同时增加另一个基因簇的基因数
280.许多细菌在它们的基因组中几乎平均分配重组敏感热点，这些热点在大肠杆菌E. coli中称为 chi，，它们是:( )
(a)是双链经常断裂的部位，它可来诱导重组
(b)是单链经常断裂的部位，导致单链同化作用
(c)是 RecBCD复合物作用的位点，在这些位点，受双链断裂激活的 RecBCD复合物切开
一个自由3?-OH端
(d)是顺式作用元件，在该元件内可以产生—个单链的自由3?-OH末端
(e)是 RecA蛋白结合的 DNA位点， RecA蛋白从该位点沿着 DNA移动直到断裂点
二、判断题
1(在高盐和低温条件下由 DNA单链杂交形成的双螺旋表现出几乎完全的互补性，这一过程
可看作是一个复性(退火)反应。
2. 在核酸双螺旋(如DNA)中形成发夹环结构的频率比单链分子低。发夹结构的产生需要回文
序列使双链形成对称的发夹，呈十字结构。
3(B型双螺旋是 DNA的普遍构型，而 Z型则被确定为仅存在于某些低等真核细胞中。 4( 病毒的遗传因子可包括 l到300个基因。与生命有机体不同，病毒的遗传因子可能是 DNA
或 RNA(但不可能同时兼有!)，因此 DNA不是完全通用的遗传物质。
5. Ct与基因组大小相关。 ,o12
6(CC与基因组复杂性相关。 01/2
31
7(非组蛋白染色体蛋白负责30nm纤丝高度有序的压缩。
8.大肠杆菌中，复制叉以每秒5O0个碱基对的速度向前移动，复制叉前的 DNA以大约 3000r,min的速度旋转。
9.所谓半保留复制就是以 DNA亲本链作为合成新子链 DNA的模板，这样产生的新的双链 DNA分子由一条旧链和一条新链组成。
10.“模板”或“反义” DNA链可定义为:模板链是被RNA聚合酶识别并合成一个互补的mRNA，这一 mRNA是蛋白质合成的模板。
11.在DNA复制中，假定都从5??3?同样方向读序时，新合成 DNA链中的核苷酸序列同模板链一样。
12.DNA的5??3?合成意味着当在裸露3’-OH的基团中添加dNTP时，除去无机焦磷酸DNA链就会伸长。
13.在先导链上 DNA沿5??3?方向合成，在后随链上则沿3??5?方向合成。 14.如果 DNA沿3??5?合成，那它则需以5?三磷酸或3?脱氧核苷三磷酸为末端的链作为前体。 15.大肠杆菌 DNA聚合酶缺失3??5?校正外切核酸酶活性时会降低 DNA合成的速率但不影响它的可靠性。
16.DNA的复制需要 DNA聚合酶和RNA聚合酶。
17.复制叉上的单链结合蛋白通过覆盖碱基使DNA的两条单链分开，这样就避免了碱基配对。 18.只要子链和亲本链中的一条或两条被甲基化，大肠杆菌中的错配校正系统就可以把它们区
别开来，但如果两条链都没有甲基化则不行。
19.大肠杆菌、酵母和真核生物病毒DNA的新一轮复制是在一个特定的位点起始的，这个位点由几个短的序列构成，可用于结合起始蛋白复合体。
20.拓扑异构酶?之所以不需要ATP来断裂和重接 DNA链，是因为磷酸二酯键的能量被暂时贮存在酶活性位点的磷酸酪氨酸连接处。
21.酵母中的拓扑异构酶?突变体能够进行 DNA复制，但是在有丝分裂过程中它们的染色体不能分开。
22.靠依赖于DNA的DNA聚合酶所进行的 DNA复制要求有作为一个引发物的游离3?—OH的存在。游离的3?—OH可以通过以下三种途径获得:合成一个RNA引物、DNA自我引发的或者一个末端蛋白通过磷酸二酯键共价结合到一个核苷酸。
23.当 DNA两条链的复制同时发生时，它是由一个酶复合物: DNA聚合酶?负责的真核生物的复制利用3个独立作用的 DNA聚合酶，Polα的一个拷贝(为了起始)和Po1δ的两个拷贝(DNA多聚体化，当MFl将RNA引发体移去之后填入)。
24.从oriλ开始的噬菌体复制的起始是被两个噬菌体蛋白 O和 P所控制的，在大肠杆菌E.coli中 O和 P是 DnaA和 DnaC蛋白的类似物。基于这种比较，O蛋白代表一个解旋酶而 P蛋白调节解旋酶和引发酶结合。
25(拓扑异构酶 ?和?可以使 DNA产生正向超螺旋。
26(拓扑异构酶? 解旋需要ATP酶。
27. RNA聚合酶 ?合成 DNA复制的RNA引物。
32
28(线粒体 DNA的复制需要使用 DNA引物。
29. λ噬菌体整合到大肠杆菌基因组上是由一个位点专一的拓扑异构酶(入整合酶)催化的，它
可以识别在两条染色体上短的特异 DNA序列。
30(在真核生物染色体 DNA复制期间，会形成链状 DNA。
31(所有已知的基因转变都需要一定量的 DNA合成。
32(根据不同物种同一蛋白质中氨基酸的不同来估计突变率往往较实际的突变率低，因为一
些突变体由于危及蛋白质功能，在选择压力下从种群中消失。
33(因为组蛋白 H4在所有物种中都是—样的，可以预期该蛋白基因在不同物种中也是一样
的。
34(DNA修复机制有很多种，但所有这些机制都依赖于二倍体染色体上两套遗传信息的存在。 35.自发的脱膘呤作用和由尿嘧啶DNA糖基化酶切去一个已脱碱基的胞嘧啶都会产生可被无
膘呤嘧啶内切核酸酶作为底物识别的同样的中间产物。
36.DNA修复的第一步是由专用于修复过程的酶催化的，下面的步骤由 DNA代谢过程中的常
用酶催化。
37.大肠杆菌中 SOS反应的最主要作用是通过在原始 DNA损伤区附近导人补偿突变来提高
细胞存活率。
38.DNA中四个常用碱基自发脱氨基的产物，都能被识别出来。
39.在细菌细胞中，短片段修复是由损伤诱导的。相反，长片段修复是组成型的，且往往涉及
长约150O一9000bp损伤 DNA片段的替换。
40.真核生物中 DNA的修复没有原核生物重要，这是因为体细胞的二倍体特征。 41.一般性重组需要交换的双方都有一长段同源 DNA序列，而位点专一重组仅需要短而专一
的核苷酸序列。某些情况下，只需要交换双方中的一方具有该序列即可。 42.一般性重组包括 DNA片段的物理交换，该过程涉及 DNA骨架上磷酸二酯键的断裂 和
重新形成。
43.RecA蛋白同时具有位点专一的单链切割的活性和将单链从双螺旋 DNA分子上脱离
的解旋酶的功能，但需要依赖于ATP活性。
44.大肠杆菌的单链结合蛋白通过与糖—磷酸骨架结合并使碱基暴露，从而解开单链上的短发
夹结构。
45.RecA蛋白同时与单链、双链 DNA结合，因此它能催化它们之间的联会。 46.交叉链互换包括交叉链和未交叉链，至少其中一条链的磷酸骨架断裂才可能使这个过程逆
转。
47.基因转变是真菌类偶然改变性别的方式;正常情况下，一次接合产生等量的雄性与雌性孢
子，但偶然也会出现1?3或3?1的比例。
48.当两个 DNA的突变片段相互间不能反式互补，则可以推测这两个突变影响了同一种功能。
这样的两个突变和每个不能反式互补的突变分为同一个互补群，并被认为是一个独立遗传
单位的一部分。这个遗传单位可能是一个顺反子，或者如果突变稳定地干扰了转录过程，
这可能是一个多顺反子转录单位。
33
49.编码区以外的突变不会导致细胞或生物体表型改变。
50.若一个二倍体酵母细胞中发生了一个错义突变，而这一突变将另外一个不同的氨基酸引入
了一个分解代谢酶的催化位点，从而使得这个酶可以利用别的底物。这就是所谓的功能获
得性突变。
51(因为 T4噬菌体至少编码30种参与基因组复制和转录的酶，它和寄主 DNA和RNA聚
合酶都是独立的，但它必须依赖寄主蛋白质的复制机制。
52.小的DNA病毒，如 SV40和噬φX174完全依赖寄主复制机制来复制它们的 DNA。
53. 负链病毒不包含编码蛋白的基因。
54(追踪有外壳病毒的一个生活周期就等于游历整个细胞。
55(当一个λ噬菌体侵染一个合适的大肠杆菌寄主细胞时，通常是裂解性侵染，释放出几百
个子代噬菌体;更少见的是，它会整合到寄主染色体中，产生带有原噬菌体λ染色体的
溶原菌。
56(通过从寄主细胞表面出芽生殖的病毒常因为出芽造成细胞表面改变而致癌。 57(一种把新病毒按 DNA或RNA分类的简易方法是看它的生长是否受放线菌素 D的抑制。
放线菌素 D只阻遏依赖DNA的RNA合成，而对依赖RNA的复制酶无影响，如果病毒
生长受它抑制，那肯定是 DNA病毒。
58(大病毒比小病毒更有可能存在重叠基因，因为它们有更多的基因。 59(因为类病毒不编码任何蛋白但又能够复制并在植物中造成严重的疾病，所以非常特殊。
60.负责λ噬菌体 DNA合成的酶是在裂解循环的晚期形成的。
61.溶源化是一个双链 DNA病毒的生活周期中的一种状态，是当病毒的基因组整合进一个宿
主细胞的基因组时形成的状态。
62.c?蛋白的稳定性是影响溶源和裂解循环之间开关的一个关键。
63.为了把噬菌体附着位点(attp)和在细菌染色体上的附着位点(attB)结合重组起来，λ噬菌体
DNA在感染大肠杆菌后靠末端cos位点退火成环。
64(下面哪些结构物能够诱导乳糖操纵子?哪些是β—半乳糖苷酶的底物?
(a)β—l，4—半乳糖苷
(b)α—l，4—半乳糖苷
(c)β—1，6—半乳糖苷
(d)α—l，6—半乳糖苷
(e)上面既没有诱导物，也没有底物
65(下面哪些说法是正确的?
(a)Lac A的突变体是半乳糖苷透性酶的缺陷
(b)在非诱导的情况下，每个细胞大约有4分子的β—半乳糖苷酶
(c)乳糖是一种安慰诱导物
(d)RNA聚合酶同操纵基因结合
(e)多顺反子 mRNA是协同调节的原因
(f) Lac阻遏物是一种由4个相同的亚基组成的四聚体
34
(g)腺苷酸环化酶将 cAMP降解成 AMP
(h) CAP和 CRP蛋白是相同的
(i)-35和-10序列对于RNA聚合酶识别启动子都是很重要的
(j)色氨酸的合成受基因表达、阻遏、弱化作用和反馈抑制的控制
(k)Trp的引导 mRNA能够同时形成三个“茎—环”结构
(l)在转录终止子柄部的 A-T碱基对可以增强结构的稳定性
(m)真核生物和原核生物的转录和翻译都是偶联的
(n)在色氨酸浓度的控制下，核糖体停泊在 Trp引导区—串色氨酸密码子上，但并不与之脱离
(o)Ara C蛋白既可作为激活蛋白，又可作为阻遏蛋白起作用
(p)Ara C的表达不受调控
66(转录的起始位点(stp)决定在模板链上嘧啶核苷酸的位置，在此形成第一个杂合的 RNA和 DNA碱基对。
67(反转录病毒侵染常常同时导致子代病毒的非致死释放和被侵染细胞内致癌的永久性基因改变。
68(转座酶可以识别整合区周围足够多的序列，这样，转座子不整合到基因的中间，因为破坏基因对细胞是致死的。
69(转座要求供体和受体位点之间有同源性。
70(TnA家族的转座子通常转移三种基因:转座酶、解离酶和氨苄抗性基因。 71(Tn10高水平表达转座酶。
72(水晰的基因组比人的基因组大。
73(高等真核生物的大部分 DNA是不编码蛋白质的。
74. 假基因通常与它们相似的基因位于相同的染色体上。
75(在有丝分裂中，端粒对于染色体的正确分离是必要的。 76(大多数看家基因编码低丰度的 mRNA。
77(所有真核生物的基因都是通过对转录起始的控制进行调控的。 78(所有高等真核生物的启动子中都有TATA盒结构。
79(只有活性染色质转录的基因对 DNase ?敏感。
80. 内含子通常可以在相关基因的同一位置发现。
81(40,以上的 Drosophila cirilis基因组是由简单的7bp序列重复数百万次组成。 82(卫星 DNA在强选择压力下存在。
83(真核细胞中的RNA聚合酶仅在细胞核中有活性。
84. 在RNA的合成过程中，RNA链沿3??5?方向延长。
85. 候选三磷酸核苷通过对生长中RNA链的α磷酸的亲和攻击加到链上。 86(核不均一RNA是mRNA和rRNA的前体而不是tRNA的前体。 87(密码子AUG专门起 mRNA分子编码区的终止作用。
fMet88(tRNA的反密码于是 TAC。
35
89. RNA聚合酶能以两个方向同启动子结合，并启动相邻基因的转录。但是，模板链的选择
由另外的蛋白因子确定。
90(细菌细胞用一种RNA聚合酶转录所有的RNA，而真核细胞则有三种不同的RNA聚合酶。
91. 转录因子具有独立的 DNA结合和转录激活结构域。
92.每个转录因子结合位点被单个转录因子识别。
93.纠正下列一段话中的错误:
在E. Coli中，通过RNA聚合酶同操纵基因的结合来起始转录。与转录起点碱基互 补的
dNTP同δ亚基结合，然后是第二个dNTP通过与第一个 dNTP形成2??5?磷酸 二酯键而
结合上。当生成的RNA链约有12个核苷酸长度时， β?亚基脱离 DNA聚合酶，RN,链
在全酶的作用下继续延伸。当 DNA聚合酶在RNA链上遇到终止密码子时，转录作用停
止。
94. 在tRNA分子中普遍存在的修饰核苷酸是在掺入tRNA转录物结合前由标准核苷酸共价修
饰而来。
Tyr95(如果tRNA加的反密码子发生单个碱基变化后成为丝氨酸的反密码子，被加入到无细胞
系统，所得的蛋白质在原来应为丝氨酸的位置都变成了酪氨酸。
96. 在肽链延伸的过程中，加入下一个氨基酸比加人氨酰 tRNA 更能激活每个氨酰tRNA间
的连接。
97(摇摆碱基位于密码子的第三位和反密码子的第一位。
98(核糖体小亚基最基本的功能是连接mRNA与tRNA，大亚基则催化肽键的形成。 99. 蛋白质合成时，每加人一个氨基酸要水解4个高能磷酸键(4个,密码子)，所消耗的总能
量比起 DNA转录(每加入一个核苷酸用两个高能磷酸键，6个,密码子)要少。
100(因为 AUG是蛋白质合成的起始密码子，所以甲硫氨酸只存在于蛋白质的 N末端。 101(通过延缓负载tRNA与核糖体结合以及它进一步应用于蛋白质合成的时间，可使与不适
当碱基配对的tRNA离开核糖体，提高蛋白质合成的可靠性。
102. 延伸因子eEF—1α帮助氨酰tRNA进入 A位点依赖于ATP内一个高能键的断裂。
103(三种RNA必须相互作用以起始及维持蛋白质的合成。
104(G-U碱基负责fMet-tRNA对GUG的识别。
105.限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源 DNA的修饰和对自身 DNA的
限制实现的。
106.限制性内切核酸酶在 DNA中的识别,切割位点的二级,三级结构也影响酶切效率。一般
来说，完全切割质粒或病毒 DNA，要比切割线状 DNA需要更多的酶，最高的需要20
倍。
107.如果限制性内切核酸酶的识别位点位于 DNA分子的末端，那么接近末端的程度也 影
响切割，如Hpa?和Mbo ?要求识别序列之前至少有一个碱基对存在才能切割。 108.能够产生防御病毒侵染的限制性内切核酸酶的细菌，其本身的基因组中没有被该核酸酶识
别的序列。
36
109(限制性图谱与限制性片段长度多态性(RFLP)图谱的最显著的区别在于前者是一个物理图
谱而后者是一个连锁图。
110(用限制性内切核酸酶Hpa ?分别切割载体 DNA和供体 DNA后，可用E(coli DNA 连
接酶进行连接。
111(已知某一内切核酸酶在一环状 DNA上有3个切点，因此，用此酶切割该环状 DNA，
可得到3个片段。
112.迄今所发现的限制性内切核酸酶既能作用于双链 DNA，又能作用于单链 DNA。 113(基因工程中使用的?类限制性内切核酸酶不仅有内切核酸酶的活性，而且有甲基化酶的
活性。
114.DNA多态性就是限制性片段长度多态性。
115.用限制性内切核酸酶 Pst ?切割质粒 pBR322后，再用外切核酸酶,.coli ?进行系列缺
失，可得到一系列大小不同的缺失突变体。
116.甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶的星活性的主要原因之
一，防止的办法是酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5,以下。
117.具有EcoR ?末端的外源片段只能以一个方向插入到EcoR ?末端的载体中。
118.从Esherichia coli K中分离的限制性内切核酸酶命名为 EcoK。
119.同一种限制性内切核酸酶切割靶 DNA，得到的片段的两个末端都是相同的。 120.在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他的限制性酶就
不能切割了„
121.稀有酶是指那些识别序列很长又不常用的限制性内切核酸酶。
122.T4 DNA连接酶和E.coli连接酶都能催化平末端和粘性末端的连接。
123.T4 DNA连接酶和E.coli连接酶都能催化双链 DNA和单链 DNA的连接。 124.反转录酶能够以单链RNA或单链 DNA为模板，在引物的引发下合成一条互补的DNA
链。以 RNA为模板合成的 DNA是互补 DNA(complementaly DNA, cDNA)。若是以 DNA
模板合成 DNA，dNTP的掺人速度很低(约5个核苷酸,秒)，比 T7 DNA 聚合酶的合成
速度差不多低100倍。
125.以RNA为模板，用反转录酶可同时产生单链和双链的cDNA，双链 DNA是由自身引 物
引导合成。但这种自身引物引导的合成效率远低于外加寡核苷酸引物引导的合 成。
2+126.Ba131核酸酶(Ba131 nuclease)是 Ca依赖性的，在反应混合物中加入 EDTA便可抑制它
的活性。
127.λ外切核酸酶不能在双链 DNA的 gap和 nick处切割 DNA。
128.当一个 DNA结合蛋白同它识别的核苷酸序列结合以后，就保护了它们的磷酸二酯
键免遭切割，其结果，电泳胶上就有明显可见的空缺带(与对照相比)，这就是 DNA 足迹
法。
+129.T4 DNA连接酶和E.coli连接酶作用时都需要ATP和NAD作为辅助因子。
32130.多核苷酸激酶之所以能够用于 DNA片段的标记，是因为它能够将单个的P标记的单核
苷酸加到每一 DNA链的5?端。
37
131.在反转录过程中，使用 AMV比使用 M-MLV可得到较多的产物。 132.真核生物可能有两种DNA连接酶，连接酶?和连接酶 ?都能在 DNA合成和连接中起
作用。
133.DNA聚合酶?有三种酶活性，其中3??5?外切核酸酶的活性在较多的dNTP存在 下，常
被5??3?合成酶的活性所掩盖。
134(用同一种酶切割载体和外源 DNA得到粘性末端后，为防止它们自身环化，要用 CIP
将它们脱磷酸。
135.λ外切核酸酶的作用产物可以作为末端转移酶的作用底物。
136.用外切酶?作系列缺失突变时，可以从突出的3?端开始。
137.nick和gap的含义是不同的，前者指 DNA的单链中有较小的缺失，后者仅是断开 了一
个磷酸二酯键。
138.迄今发现的质粒 DNA都是环状的。
139.线性质粒同环状质粒一样都不带有宿主必需的基因。
140.有 a、b、c三个质粒，因为 a和 b能够共存于一个细胞，a和 c也可共存于同一个细胞，
所以 b和 c一定能够共存于同一个细胞。
141.插入元件(IS)也是一种转座元件，它除了有转座酶基因外，还有附加基因。 142.如果两个不同的质粒可以稳定地共存于同一个细胞中，这两种质粒则属于同一个不亲和
群。
143.一个带有反向重复序列的双链 DNA经变性后，复性时其单链可形成发夹环。
144.能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。
145.任何一种质粒都可以用氯霉素扩增的方法，增加它的拷贝数。
146.只有完整的复制子才能进行独立复制，一个失去了复制起点的复制子不能进行独立复制。 147(CsCl-EB密度梯度离心法纯化SC DNA原理是根据 EB可以较多地插入到 SC DNA 中，
因而沉降速度较快。
148(质粒 Co1El同 pSC101共整合后，得到重组质粒 pSC134，具有两个复制起点，这两个
起点在任何细胞中都是可以使用的。
149(pBR322可以用于粘性末端连接、平末端连接和同聚物接尾法连接，无论用哪种方法连
接，都可以用同一种酶回收外源片段。
150(所谓穿梭质粒载体是能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒，所用的复制起点不
同。
151.一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。
152. Co1El是唯一用作基因工程的自然质粒载体，它具有四环素抗性标记，因而很容易选择。 153.某一染色体 DNA经内切酶Sal ?切割后，产生了若干个具有粘性末端的 DNA片段，将
这些片段分别在 T4 DNA连接酶的作用下自身连接成环，然后导人受体细胞，都可以进
行独立地复制。
154(如果细菌的某种表型特征在UV处理下丧失后不再恢复，这种表型有可能是质粒赋予的。
155(基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。
38
156.代型载体(replacement vector)是指同一种限制性内切核酸酶在λDNA中具有两 个切点。
外源 DNA通过取代这两个切点间的片段被克隆。
157(现在最常用的 pUC载体是 pUC18，它的分子量小，具有多克隆位点和易于选择的分子
标记，并且是松弛型复制。另外，这种载体可在辅助质粒的帮助下合成单链 DNA。 158.噬菌粒(phagemid)pUC118,pUC119载体是集质粒和丝状噬菌体有利特征于一身 的载
体，既能合成单链 DNA，又能合成双链 DNA。
159.λ噬菌体 DNA和 M13单链噬菌体 DNA在成熟前的 DNA复制都是用滚环模型。
160.M13噬菌体每个世代裂解宿主后，可释放100个子代噬菌体。
161.以粘粒为载体的重组体虽然在平板上生长的速度不同，但是转化子中插入片段的扩增量是
相同的。
162.氯霉素扩增 DNA时，加氯霉素的时间是重要的，因为加得太早，菌数不够，加入时间过
迟，菌龄过老，容易自溶。
163(所谓引物就是同 DNA互补的一小段RNA分子。
164(脉冲凝胶电泳采用一个很强的电场来分离非常长的DNA分子，其原理在于迫使 DNA
分子根据长度的不同而具有不同的速度，并按大小顺序通过凝胶。
165(Agarose-EB电泳法分离纯化 CCC DNA原理是根据 EB可以较多地插入到 CCC
DNA 中，因而迁移速度较快。
166.如果 PCR的每一次循环都把上一次循环中合成的 DNA都加了一倍，那么，10个循环就
扩增了1000倍，20个循环就扩增了100万倍，30个循环就扩增了10亿倍。 167(PCR既能用于扩增任何天然存在的核苷酸序列，又能重新设计任何天然核苷酸序列的两
个末端。因此，任意两个天然存在的 DNA序列都能快速有效的扩增，并拼接在一起。 168(最有效的制备纯RNA的方法是让其在细胞中超表达，然后提纯。
169(大量制备已被克隆基因编码蛋白产物的常用方法是体外转录和翻译。 170.通过报告基因与来自于目的基因上游和下游各种 DNA片段的结合，研究基因的调控序
列。
171.温度敏感突变型是非常有用的，在这些突变型中，可以通过对温度的改变控制这些突变体
中异常表型的出现。
172(用人工合成的含有所需碱基变化的寡聚核苷酸，可以将特殊突变引入克隆的基因。 173(蛋白质的氨基酸序列中各种重要信号都可以通过短氨基酸序列同报告蛋白的融合进行研
究。
174(简并引物是根据已知 DNA序列设计的引物群。
175(在 DNA贮存液中加一滴三氯甲烷，可防止真菌的污染。
176(密码的偏爱性是指不同种属的生物对简并密码具有不同的使用频率。
177(插入到质粒 DNA中的 EB可以用正丁醇抽提除去。
178(碱法和煮沸法分离质粒 DNA的原理是不相同的。
179(酚法和碱法分离质粒 DNA都要用溶菌酶破壁，但碱法用的溶菌酶的浓度要高。
180(外源基因(或 DNA片段)插入到某一基因内的位点后，这个基因不再有任何功能。
39
181(用不同的产生粘性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源 DNA，得到的粘性末
端是不亲和的粘性末端。
182.基因组 DNA文库是含有某一生物中全部 DNA序列随机克隆的克隆群，而cDNA文库是
含有某一生物中所有表达基因随机克隆的克隆群。
183.cDNA克隆较之基因组克隆最重要的优越性就是它们含有一个基因的完整序列。 184(通过差示杂交后制备的 cDNA文库使克隆那些只在特定分化细胞中表达基因的机率大
为提高。
185(在染色体步移中，可通过 DNA测序知道已到达所感兴趣的基因。 186(一旦有了一套已知顺序的基因组克隆，通过从文库中获得覆盖目的突变基因所在基因组
区的所有克隆，就可以进行染色体步移。
187(根据遗传连锁作图把基因定位在基因组中是定位克隆的第一步，它为分离特定的人的基
因提供了一个直接而快速的方法。
188.人工感受态和自然感受态细胞都能吸收线性和环状单链 DNA。
189.人工导入基因和正常染色体基因间的同源重组，可以发生基因置换。
———190.为了保证重组 DNA分子在受体细胞中能够稳定地独立存在下来,通常用recrm表型的
细胞株作为受体菌。
191.线性 DNA片段被导人哺乳动物细胞后，在细胞内酶的作用下，很快相互连接成重复的
DNA大片段)并能在随机位点整合到染色体中。
192.不匹配的粘性末端是不能通过粘性末端连接的。
193.用限制性内切核酸酶切割载体、供体 DNA后，要加入 EDTA—SDS中止液使限制性内
切核酸酶失活，这样有利于重组连接。
194.限制性内切核酸酶Bgl?识别的序列为 A ?GATCT，BamH?识别的序列为G?GATCC，
用它们分别切割载体 DNA和供体 DNA，不必使酶失活，就可以直接通过粘性末端连接
法进行连接。
195.具有E.coR ?末端的外源片段只能以一个方向插入到E.coR ?末端的载体中。
196.不匹配的粘性末端可以通过部分填补后进行连接。
197.低丰度的mRNA不仅拷贝数少，而且种类也少。
198.同聚物接尾法构建重组体，不仅连接效率高，而且也很容易回收插入的片段
199.以λ噬菌体为载体的筛选方法比较简便，凡能形成噬菌斑的就一定是重组体。
200.核酸杂交探针就是带有放射性标记的 DNA分子。
201.Northern杂交中，为了防止RNA形成部分环状发夹结构，影响迁移率，所以要 用变性
缓冲液进行电泳。
202(探针的离体标记实际上是酶法标记。
203(切口移位法(nick translation)只能标记线性双链 DNA不能标记环状双链 DNA。 204(通过原位菌落杂交得到的阳性克隆即是重组体，但不能判断插入的外源基因是否进行了
表达。
40
205(尼龙膜(nylon membrane)是核酸杂交的一种固体支持物，具有同 DNA结合能力强、韧
性强，可反复洗脱使用，并且杂交信号本底低等优点，就是成本高。 206(如果 DNA序列的某种变异在群体中是稀有的，称为突变;若是普遍的，则称为多态险。 207(用寡聚 DNA进行高度严紧的杂交可用于胎儿遗传病的诊断，可检测到因单个核苷酸变
化而造成的基因突变。
208.由于基因家族中成员之间是密切相关的，因此可以用其中一个成员作为探针进行高度严紧
的杂交来检测其他成员。
209(通过用化学标记法取代放射性标记法，并采用一种抗体来特异性地识别这种化学修饰，
使得原位杂交的分辨率大大提高。
210(在杂交之前先用凝胶电泳将粗提取物中的RNA或 DNA分子进行分离，假定杂交后只
有一种或少数几种大小的片段被探针杂交上了，就能肯定这种杂交是特异性的。 211(根据某一感兴趣蛋白质的序列、抗原性以及配基结合性质制备探针，可从 DNA文库中
筛选到相应的基因。
212.如果用其他的方法对某种蛋白质已进行过鉴定，那么要确定某一克隆是否含有该蛋白编码
基因就相当容易了。
213(用DNA探针进行杂交反应非常敏感并具有选择性，可用来测定某一特定 DNA序列在
细胞基因组中的拷贝数。
214(双重药物选择法富集哺乳动物细胞中稀有重组体的原理是:一种药物用于选择以任意方
式整合外源 DNA的细胞，第二种药物杀死带有随机整合 DNA的细胞。 215(就像对培养中的鼠胚性干细胞进行遗传操作获得突变鼠一样，用 DNA转染培养中的单
个植物细胞，能够创造转基因植物。
216(NC(硝酸纤维素膜)和尼龙膜都可作为电转移 DNA支持物。
217(单克隆抗体是淋巴细胞和瘤细胞杂交后形成的单个杂交瘤细胞经无性繁殖而产生的特异
性抗体。
218(用免疫化学法筛选重组体不需要外源基因的表达。
219(用 DNA探针同RNA 分子杂交在测定一已知基因在某一细胞中是否表达时是很有 用
的，但不能用于检测转录起始位点、终止位点或内含子的位置。
220. 核酸杂交的原理是根据 DNA分子间互补。
221. 突出的3?末端或凹缺的3?末端都可以用Klenow大片段酶进行末端标记。
222(用多核苷酸激酶进行5?末端标记前， DNA必须进行脱磷酸，否则无法标记。
223. X-gal显色反应的基本原理是使载体上与受体互补的α肽失活。 224(Norhern印迹和 Southern印迹的基本原理是一样的，都是用于检测结构基因的表达。
225. 在液相—液相和液相—固相杂交中，它们的杂交效率都是一样的。
八、图示说明题
1(简述前体mRNA经过剪接形成mRNA的过程。
2(核内mRNA前体是按 GU,AG规则进行剪接的，还有什么机制可以从RNA初级转录物中剪接内含子?
41
三、填空题
1.RNA是由核糖核苷酸通过 键连接而成的一种 。几乎所有的 RNA都是由 DNA 而来，因此，序列和其中一条链 。
2.多数类型的RNA是由加工 产生的，真核生物前体tRNA的 包
括 的切除和 的拼接。随着 和 端的序列切除，3?端加上了序列 。在四膜虫中，前体tRNA 的切除和 的拼接是通过 机制进行的。 3.RNase P是一种 ，含有 作为它的活性部位，这种酶在 序 列的 切割 。
4.Ct实验测定的是 。 ,o12
5.假定摆动假说是正确的，那么最少需要 种tRNA来翻译61种氨基酸密码子。
6.写出两种合成后不被切割或拼接的RNA: 和 。
7.在 DNA合成中负责复制和修复的酶是 。
8.染色体中参与复制的活性区呈Y型结构，称为 。
9.在 DNA复制和修复过程中修补 DNA螺旋上缺口的酶称为 。 10. 在 DNA复制过程中，连续合成的子链称 ，另一条非连续合成的子链称为 。 11. 如果 DNA聚合酶把一个不正确的核苷酸加到3?末端，—个含3??5?活性的独立催化区会
将这个错配碱基切去。这个催化区称为 酶。
12. DNA后随链合成的起始要一段短的 ，它是由 以核糖核苷酸为底物合成
的 。
13. 复制叉上DNA双螺旋的解旋作用由 催化的，它利用来源于ATP水解产生的能量沿
DNA链单向移动。
14.帮助 DNA解旋的 与单链DNA结合，使碱基仍可参与模板反应。 15. DNA引发酶分子与 DNA解旋酶直接结合形成一个 单位，它可在复制叉上沿后随
链下移，随着后随链的延伸合成 RNA引物。
16. 如果 DNA聚合酶出现错误，会产生一对错配碱基，这种错误可以被一个通过甲基化作用
来区别新链和旧链的特别 系统进行校正。
17. 对酵母、细菌以及几种生活在真核生物细胞中的病毒来说，都可在 DNA独特序列
处观察到复制泡的形成。
18. 可被看成一种可形成暂时单链缺口(?型)或暂时双链缺口(?型)的可逆核酸酶。 19. 在大肠杆菌中发现了 种 DNA聚合酶。 DNA修复时需要 DNA聚合酶 。 20.真核生物中有5种DNA聚合酶。它们是:
(l) (2) (3) (4) (5) 。
21. 在 DNA修复过程中，需要第二种酶， ，作用是将 DNA中相邻的碱
基 起来。 DNA聚合酶具有外切核酸酶的活性。有两种外切核酸酶的活
性，它们分别从 和 降解 DNA。DNA聚合酶 只有 外切
核酸酶活性。
42
22. 只有真核 DNA聚合酶 和 显示 外切核酸酶活性。 23.DNA大多数自发变化都会通过称之为 的作用很快被校正。仅在极少情况下，DNA
将变化的部分保留下来导致永久的序列变化，称为 。
24.偶然情况下，在同一基因两个稍微不同拷贝(等位基因)间发生重组的过程中，一个等位基因
经过 过程会被另一等位基因代替。
25.通过 基因重组，游动 DNA序列和一些病毒可进入或离开一条目的染色体。 26.DNA修复包括3个步骤: 酶对 DNA链上不正常碱基的识别与切除，
酶对已切除区域的重新合成， 酶对剩下切口的修补。
27.一种主要的 DNA修复途径称 ，包括一系列 酶，它们都能识别并切去 DNA
上不正常碱基。
28. 途径可以切去任何造成 DNA双螺旋大片段改变的 DNA损伤。 29. 大肠杆菌中，任何由于 DNA损伤造成的 DNA复制障碍都会诱导 的信号，即允
许跨过障碍进行复制，给细胞一个生存的机会。
30. 在 中，基因交换发生在同源 DNA序列间，最常见是发生在同一染色体的两个拷贝间。 31. 在交换区域，一个 DNA分子的一条链与另一个 DNA分子的一条链相互配对，在两个双
螺旋间形成一个 。
32. 通过 ，两个单链的互补 DNA分子一起形成一个完全双链螺旋，人们认为这个
反应从一个慢的 步骤开始。
33. 大肠杆菌的染色体配对需要 ;它与单链 DNA结合并使同源双链 DNA与之配对。 34. 一般性重组的主要中间体是 ，也用它的发现者名字命名为 。 35. 产生单个碱基变化的突变叫 突变，如果碱基的改变产生一个并不改变氨基酸残基编
码的 ，并且不会造成什么影响，这就是 突变。如果改变了氨基酸残基的密码，
这就是 突变。这种突变对蛋白质功能影响程度要根据被改变的氨基酸残基在蛋白
质 或 结构中的重要程度，或是与酶的 的密切性来决定，活性变
化范围可从 到接近正常。
36. 一种由于蛋白质序列中丢失了 残基引起的突变将会阻止 的形成，这种蛋白质
更容易 。如果在 温度是稳定的而在 温度是不稳定的，将它称
为 突变，是 突变的一个例子。
37. 无义突变是将一种氨基酸的 转变成 密码子，结果使蛋白质链 。一个
碱基的插入或 叫 突变。由于三联 的移动，突变位置 的整个
氨基酸序列都会被改变。上述两种类型的突变(插入和缺失)所产生的蛋白质同 的
不同，通常是完全 。
38. 下面所列的是由突变而产生的一些异常表型(A)，同时也列出了表型由突变而造成的缺陷
的可能原因(B)。请尽可能地将 A项所列的异常表型同 B项所列的可能原因配对。
A 异常表型: B 缺陷可能出现在:
(a)细菌的营养缺陷型 (t)合成途径
(b)细菌温度敏感突变体 (u)降解途径
43
(c)细菌的诱导酶变成组成酶 (v)DNA的修复
(d)果蝇的红眼变成白眼 (w)转录控制
(e)果蝇形成两个胸节 (x)细胞分裂控制
(f)人的镰刀状细胞贫血症 (y)胚胎发育控制
(g)人的原卟啉症 (z)蛋白质的稳定性
(h)人着色性干皮病
(i)苯丙酮尿症
(j)人肿瘤的发生
39.下面各句是对不同诱变剂作用的叙述，写出相应情况的诱变剂的名称:
(1)通过同双螺旋的结合，引起变构，并激活修复性内切核酸酶的诱变剂是: 。
(2)引起总染色体的损伤如断裂和转位的诱变剂是: 。
(3)取代正常的碱基而掺人到 DNA中，并通过互变异构引起复制错误的诱变剂是:
。
(4)只能够除去胞嘧啶和甲基胞嘧啶的氨基基团的诱变剂是: 。
(5)主要是引起同一条链上的相邻嘧啶间的交联的诱变剂是: 。
(6)主要是在 DNA双螺旋的形变和链的错排过程中引起插入或缺失的诱变剂是:
。
(7)可以除去 DNA中任何一个带有氨基基团的碱基上氨基基团的诱变剂是: 。
—540. 据估计，单倍体人基因组包括50O00个基因，如果每个世代每个基因的突变率为5×10，
那么，每个个体中存在 刚产生的突变。
41. DNA中两种常见的自发突变是由于腺嘌呤、鸟嘌呤与脱氧核糖间的N-糖基连接断裂而导
致的 和使胞嘧啶变为尿嘧啶而导致的 。
42(能够诱导操纵子但不是代谢底物的化合物称为 诱导物。能够诱导乳糖操纵子的化
合物 就是其中一例。这种化合物同 蛋白质结合，并使之与 分离。乳
糖操纵子的体内功能性诱导物是 。
43.色氨酸是一种调节分子，被视为 。它与一种蛋白质结合形成 。 乳糖操纵子
和色氨酸操纵于是两个 控制的例子。 cAMP—CAP蛋白通过 控制起作
用。色氨酸操纵子受另一种系统一的调控，它涉及到第一个结构基因被转录前的转
录 。
44.负责把RNA转录成互补 DNA分子的 酶可以解释由 引起的永久性基因转变 45.利用自已的位点专一重组酶把自己从寄主基因组中的一个地方移到另一地方的遗传元件
叫 ，也叫作 。
46.酵母的 Tyl元件是一种 ，它的转座需一段完整RNA转录物的合成，这个转录物
又被复制成一个双螺旋 DNA，随后被整合到一个新的染色体位置。
47.真核生物的mRNA加工过程中，5?端加上 ，在3?端加上 ，后者由 催化。
如果被转录基因是不连续的，那么， 一定要被切除，并通过 过程将 连
44
接在一起。这个过程涉及许多RNA分子，如Ul和U2等，它们被统称为 。它们分
别与一组蛋白质结合形成 ，并进一步地组成40S或60S的结构，叫 。 48.胶原蛋白通过在不同的脯氨酸残基上添加 基团而被化学修饰。这个反应是由两
种酶催化的，它们是 和 。其他的一些蛋白质被 磷酸化。蛋白质上
添加寡聚糖的过程叫 ，而添加脂肪酸链则叫 。O—寡聚糖是一种
同 或 残基上氧连接的寡聚糖，而 N—寡聚糖是通过与 上的氮原子
连接而成。N—寡 聚糖又是从同一种叫做 脂的前体寡聚糖衍生而来。 49. 阿黑皮素原是 被切割以后可以产生很多活性蛋白质的一个例子。如 之
类的RNA病毒也能合成类似的结构物。蛋白水解过程也涉及细胞外毒素的活性，如蜜蜂
的 和动物激素的活性，如 和 。
50. 可使每个氨基酸和它相对应的tRNA分子相偶联形成一个 分子。 51. 包括两个tRNA分子的结合位点: ，即 P位点，紧密结合与多肽链延伸尾端
连接的 tRNA分子，和 ，即 A位点，结合带有一个氨基酸的tRNA分子。 52( 催化肽键的形成，一般认为这个催化反应是由核糖体大亚基上 的 分
子介导的。
53(释放因子蛋白与核糖体上 A位点的 密码结合，导致肽基转移酶水解连接新生多
肽与tRNA分子的化学键。
54(任何mRNA序列能以三种 的形式被翻译，而且每一种都对应一种完全不同的多肽链。 55(蛋白质合成的起始过程很复杂，包括一系列被 催化的步骤。 56(在所有细胞中，都有一种特别的 识别 密码子 AUG，它携带一种特别
的氨基酸，即 ，作为蛋白质合成的起始氨基酸。
57(核糖体沿着 mRNA前进，它需要另一个延伸因子 ，这一步需要 的水解。当核
糖体遇到终止密码( 、 、 )的时候，延长作用结束，核糖体和新合成的多肽被
释放出来。翻译的最后一步被称为 ，并且需要—套 因子。 58.基因工程是 年代发展起来的遗传学的一个分支学科。基因工程技术的诞生，使人们
从简单地利用现存的生物资源进行诸如发酵、酿酒、制醋和酱油等传统的生物技术时代，
走向 的时代。
59.随着基因工程技术的诞生和发展，人类可以通过 、 和 三种主要
生产方式，大量取得过去只能从组织中提取的珍稀蛋白，用于研究或治病。 60. Cohen等在 年构建了第一个有功能的重组 DNA分子。
61.基因工程的两个基本特点是:(1) ，(2) 。
62.基因克隆中三个基本要点是: ; 和 。
63. 年，美国斯坦福大学 等 上在发表了题为: “将新的遗传信息插入
SV40病毒 DNA的生物化学方法:含有λ噬菌体基因和E.coli半乳糖操纵子的环状 SV40
DNA”的论文，标志着基因工程技术的诞生。这一工作具有划时代的意义，但是他们并没
有 。
64.克隆基因的主要目的有四:(1) ;(2) ; (3) (4) 。
45
65.严格地说限制性内切核酸酶(restriction endonuclease)是指已被证明是 的酶。基因工程中
把那些具有识别
内切核酸酶统称为限制性内切核酸酶。
66. 年 Luria和 Human在 T偶数噬菌体对大肠杆菌感染实验中首次发现了细 菌
的 现象。
67.1970年，Smith和wilcox从流感嗜血杆菌中分离到一种限制酶，能够特异性的切割DNA，
这个酶后来被命名为 ，这是第一个分离到的?类限制性内切核酸酶。 68.通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片
段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的 。 69.?类限制性内切核酸酶分子量较小(一般在20,40kDa，通常由 亚基所 组成。它们
的作用底物为双链 DNA，极少数?类酶也可作用于单链 DNA，或DNA,RNA杂合双链。
这类酶的专一性强，它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求，而且对更远的碱基也有
要求，因此，?类酶既具有专一性，也具有 专一性，一般在识别序列内切割。切
割的方式有 ，产生末端的 DNA片段或 的 DNA片段。作用时需要作
辅助因子，但不需要 和 。
70.完全的回文序列具有两个基本的特点，就是:
(1) (2) 。 71.?类限制性内切核酸酶一般识别 个碱基，也有识别多序列的限制性内切核酸酶。
根据对限制性内切核酸酶识别序列的分析，限制性内切核酸酶识别序列具有 倾
向，即它们在识别序列中含量较高。
72.EcoK是 ?类限制性内切核酸酶，分子组成是αβγ，分子量是300kDa。在这些亚基中，α22
亚基具有 作用;β亚基具有 的活性;γ亚基的作用则是 。
73.个体之间 DNA限制性片段长度的差异叫 。
74.限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自
，第二、三两个字母取自 ，第四个字母则用 表示。 75.限制性内切核酸酶 Acy ?识别的序列是5?,GRCGYG-3?，其R , 。 76.在酶切反应管加完各种反应物后，需要离心2秒钟，其目的是 和 。 77.部分酶切可采取的措施有:(1) (2) (3) 等。 78.第一个分离的限制性内切核酸酶差异是 ;而第一个用于构建重组体的限制性内切
核酸酶是 。
79.限制性内切核酸酶 BsuR ?和,ae?的来源不同，但识别的序列都是 ，
它们属于 。
80.由于 DNA是由4种碱基组成的，所以任何限制性内切核酸酶的切割频率的理论值应该
是 。
81.Sal ?和 Not ?都是哺乳动物中识别序列稀有的酶,在哺乳动物基因组的5kb片段中，找到
,ot ?切点的概率是 。
46
82.部分酶切是指控制反应条件，使得酶在 DNA序列上的识别位点只有部分得到切割，它的
理论依据是 。
83.?类限制酶识别 DNA的位点和切割的 DNA位点是不同的，切割位点的识别结合有两种
模型，一种是 ，另一种是 。
84.限制性内切核酸酶通常保存在 浓度的甘油溶液中。
85.连接酶(ligase)是一类用于核酸分子连接形成 键的核酸合成酶，有DNA连接酶和RNA
连接酶之分。
86.原核生物主要有两种类型的 DNA连接酶: E(coli DNA连接酶和 T4 DNA连接酶。 基
因工程中使用的主要是 T4 DNA连接酶，它是从 T4噬菌体感染的E(coli中分离的一种
单链多肽酶，分子量为 kDa，由 T4噬菌体基因 编码。E(coli DNA连接酶是
由大肠杆菌基因 编码，也是一条多肽链的单体，分子量为 kDa。这两种
DNA连接酶有两个重要的差异:第一是它们在催化反应中所用的能量来源不同，T4 DNA
连接酶用 ，而E(coli DNA连接酶则用 作为能源。第二是它们催化平
末端连接的能力不同，在正常情况下只有 T4 DNA连接酶能够连接平末端，E(coli DNA
连接酶则不能。即使是调整反应条件，E(coli DNA连接酶催化平末端的连接效率也只有
T4 DNA连接酶的 。
87.DNA连接酶的单位通常用Weiss单位表示，一个Weiss单位是: 。 88.DNA聚合酶?是 在1965年从大肠杆菌细胞中分离的，所以又称
为 聚合酶。该酶由大肠杆菌基因 编码，是一种单链球蛋白，分子量为
109kDa，酶蛋白中含有一个 Zn原子。
89.T4 DNA聚合酶与 Klenow酶一样，具有5??3?聚合酶和3??5?外切酶两种活性，但是它的
3??5?外切酶的活性比 Klenow酶强 倍。该酶的3? ?5?外切活性既能作用于单链
DNA也能作用于双链 DNA，不过作用于 链的活性要强于 链。 90.反向转录酶(reverse transcriptase)是由 kDa和 kDa两个亚单位组成的二聚体，作
用时以RNA为模板合成 DNA。
91(从小牛胸腺中分离纯化的末端转移酶催化的基本反应是将 ，同时释放出游离
的无机磷。催化反应时不需 ，但需要引物，单链 DNA是最好的引物，单
链 DNA受体的长度最短需有 个 dNTP。具有3?突出末端的双链 DNA也是较好的反
应底物。二价离子和 DNA末端状态对催化反应影响较大，但是用 作为辅助离子，
可以催化任何形式的末端(突出的、隐含的、平齐的)加接单核苷酸，但突出的3?端效率较
2+2+高。以 Mn,Mg作为辅助因子，只能在单链 DNA或双链 DNA的3?突出端加尾。 92. S1核酸酶(S1 nuclease)是从米曲霉(Aspergilluc oryzae)中分离纯化的一种含
的金属蛋白，分子量为32kDa，是一种耐热的酶(37—65?)。
93(在 S1保护实验中， S1切割的温度有两种:20?和45?，这是因为:在20?时，
;在45?时， 。 94. 技术可以用来鉴定 DNA分子中与 DNA结合蛋白相互作用的特定序列。 95.真核生物有两种 DNA连接酶，连接酶?主要是参与 ，而连接酶?则是与 。
47
96(T4RNA连接酶是1972年发现的，并于 1977年纯化。该酶是由 T4噬菌体基因
编码，作用是不需要模板。它在体内的作用是参与 T4噬菌体 不参与 DNA合成
的连接，但在 中可能有作用。
97(DNA聚合酶 ?的Klenow大片段是用 切割 DNA聚合酶?得到的分子量为76KDa
的大片段，具有两种酶活性:(1) 。 (2) 的活性。 98(反向转录酶除具有以 DNA和RNA为摸板合成 DNA的5??3?合成酶的活性外，还具有
4种酶的活性:(1) ; (2) (3) ;(4) 。
2+99(RNA连接酶作用时除了需要 ATP和 Mg外，还需要 。 100(DNA聚合酶 ?是一种单体酶，分子量为109kDa，它含有金属离子 。 101. 为了防止 DNA的自身环化，可用 脱去双链DNA 。 102(T4单核苷酸激酶进行DNA片段的5?端标记时，主要是通过两种反即 和 。 103(CIP催化脱磷酸时有两种最适温度，一种是37?，适用于 端脱磷酸;另一种是
56?，适用于 端脱磷酸。
104. λ外切核酸酶可从双链 DNA的5?端依次切下5?单核背酸，但对不同末端的底物来说，
作用效率不同， 最高， 最低。
105(EGTA是 离子螯合剂。
106(测序酶是修饰了的 T7 DNA聚合酶，它只有 酶的活性，而没有 酶的活性。 107(切口移位(nick translation)法标记 DNA的基本原理在于利用 的和 的作用。 108(欲将某一具有突出单链末端的双链 DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采
用 或 。
109(反转录酶除了催化 DNA的合成外，还具有 的作用，可以将 DNA-RNA杂种
双链中的 水解掉。
110(基因工程中有3种主要类型的载体: 、 、 。 111(由于不同构型的 DNA插入 EB的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不 同，
SC DNA的泳动速度 ，OC DNA泳动速度 ， LDNA居中，通过凝胶电
泳和 EB染色的方法可将不同构型的 DNA分别开来。
112(质粒的复制像染色体的复制一样，是从特定的起始点区开始的。然而，质粒的复制可以
是 向的、或是 向的。在杂种质粒中，每个复制子的起点都可以有效地加以
使用。但是在正常条件下只有一个起点可能居支配地位。并认为:当某些具有低拷贝数
的严紧型质粒与松弛性质粒融合后，在正常情况下的复制起点可能被关闭。 113(就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部
分: 、 、 。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 114(如果两个质粒不能稳定地共存于同一个寄主细胞中，则属于 群， 这是因为
它们的 所致。
115(质粒拷贝数是指细胞中 。
116. 复制子由三部分组成:(1) (2) (3) 。
117(酵母的2μm质粒有 ，可以配对形成哑铃结构。
48
118(一个带有质粒的细菌在有 EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，
这种现象叫 。
119(pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于 ，它的四环素抗性基因来自
于 ，它的氨苄青霉素抗性基因来自于 。
120(质粒的消失同染色体基因的突变是不同的，前者不能恢复，后者可以通过 恢复该基
因的性状。
121(Co1El质粒复制的起始需要三种酶，即 、 和 。
122(YAC的最大容载能力是 ，BAC载体的最大容载能力是 。
123(pSC101是一种 复制的质粒。
124(把那些没有可检测表型的质粒称为 。
125(转座子主要由下列部分组成:(l) (2) (3) 。
126. pUC18质粒是目前使用较为广泛的载体。 pUC系列的载体是通过
和 两种质粒改造而来。它的复制子来自 ， Amp抗性基因则是来
自 。
127.在基因型的表示中，符号Ω表示 ;符号A表示 。 128.噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因:一是 ;二
是 。
129.第一个报道的全测序的单链 DNA噬菌体是φX174，DNA长5386个碱基对，共 个
基因，为一环状 DNA分子，基因组的最大特点是 。
130.λ噬菌体的基因组 DNA为 kb，有 多个基因。在体内，它有两种复制方式，
扩增时(早期复制)按 复制，成熟包装(晚期复制)则是按 复制。它有一个
复制起点，进行 向复制。λ噬菌体的 DNA既可以以线性存在又可以环状形式存
在，并且能够自然成环。其原因主要是在λ噬菌体线性DNA分子的两端各有一个 个
碱基组成的天然粘性末端。这种粘性末端可以自然成环。成环后的粘性末端部位就叫
做 位点。
131.根据噬菌体的包装能力，将野生型λ噬菌体的基因组 DNA改造成插入型载体，该载体的
最小分子大小约为 kb，插入的外源片段最大不超过 kb。
132.野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是 和 。 133.粘粒(cosmid)是质粒-噬菌体杂合载体，它的复制子来自 、cos位点序列来
自 ，最大的克隆片段达到 kb。
134.有两类改造型的λ噬菌体载体，即插入型和取代型。从酶切点看，插入型为 个， 取
代型为 个。
135.野生型的λ噬菌体 DNA不宜作为基因工程载体，原因是:(1) (2) (3) 。 136.M13单链噬菌体的复制分为三个阶段:(1) (2) (3) 。 137.噬菌粒是由质粒和噬菌体 DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是 ，而来
自噬菌体的主要结构是 。
138.M13单链噬菌体基因2和基因4之间的 IG区有三个最重要的功能，即(l)
49
(2) (3) 。
139.野生型的 M13有10个基因，分为三个功能集团，其中与复制有关的两个基因是:
和 。
140.以λ噬菌体载体和粘粒载体构建文库时，起始 DNA的长度是不同的，前者为
kb后者为 kb。
141.λ噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源 DNA片段后，总的长度应在噬菌体基因组
的 的范围内。
142.不同的宿主细胞其核酸酶的活性是不同的，如细菌中的 HB101菌株及 JM系列的宿主菌
所含核酸酶的活性比 DHl、 LE392等菌株 。
143. SDS是分离DNA时常用的一种阴离子除垢剂，它有四个作用:
(1) ; (2) ;
(3) ; (4) 。
144.酚是蛋白变性剂，用酚抽提细胞 DNA时，具有两方面的作(1) (2) 。 145.用酚—氯仿抽提 DNA时，通常要在氯仿或酚—氯仿中加少许异戊醇。这是因为:异戊
醇 。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含 DNA的水
相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维 持稳定。
146.同其他水解蛋白酶相比，蛋白水解酶 K具有两个显著的优点:(1) (2) 。
147.在分离 DNA时要使用金属离子整合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是 148.用乙醇沉淀 DNA时，通常要在DNA溶液中加入单价的阳离子，如 NaCl和 NaAc，其
目的是 。
149.浓缩 DNA的方法有:(1) ;(2) ;(3) (4) 。 150.通常可在三种温度下保存 DNA:4,5?、—20?、—70?，其中以 最好。
9151.用于分离质粒 DNA的细菌培养浓度达到0.8×10细胞,ml时，即可通过离心收 集菌体。
收集菌体使用定角转子，离心的速度以 为宜。
152.引物在基因工程中至少有4个方面的用途:(1) ;
(2) ; (3) ;(4) 。
153.Clark发现用Taq DNA聚合酶得到的 PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末
端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆 PCR产物的 。 154.在用 SDS分离 DNA时，要注意 SDS的浓度，0(1,和 l级的 SDS的作用效果是不同
的，前者 ，后者 。
155.碱解法和清亮裂解法是分离质粒的两种常用的方法，二者的原理是不同的，前者是根
据 ，后者则是根据 。
156.在 DNA分离过程中，通常要进行透析，其目的是 。 157.在分离质粒 DNA的菌体培养过程中，加入氯霉素有两个好处:(1) (2) 。
158.在 DNA分离过程中造成 DNA分子断裂的因素很多，主要有(1)
(2) (3) 。
50
159.在分离 DNA时，常用 法、 法、 法 及 法等方法去
除蛋白质。
160.在 DNA保存液中，常加一滴氯仿，主要是起 作用。
161.按照人们的意愿，改变基因中碱基的组成，以达到 的技术称为 。 162.1955年，英国剑桥大学的 第一个合成了具有3?，5?—磷酸二酯键的 TpT和
pTpT，为此获得了 年的诺贝尔奖。
163.可以用 除去 DNA溶液中的氯化绝。
164.在 cDNA的合成中要用到 S1核酸酶，其作用是切除在 。 165.在简并引物的设计中，常常要用到 dI(次黄嘌呤)，原因是 。
166.在分离 DNA时，要戴手套操作，原因是 。
167.乙醇沉淀 DNA的原理是 。
168.简并引物 PCR主要是根据蛋白质的氨基酸序列设计 引物来合成相应的基因。 169.超离心法纯化质粒 DNA时，选用 CsCl作介质的优点是:
(1)
(2) ，从而使不同分子量的 DNA分子得以分开。
170.缺失突变的原理是缺失了 。 171.用核酸酶 Bal 31作系列缺失突变，得到的产物是: 。 172.SSC是由 NaCl和柠檬酸钠组成的试剂，其中 NaCl的作用是使 ，而柠檬酸钠的作
用是 。
173.在重蒸酚中加入0.1,的8—羟基喹啉及少量β-硫基乙醇，不仅可以防止酚的氧化，还可
以 的活性及 作用。
174.对于 HB101及其衍生株不宜用煮沸法分离质粒 DNA，其原因是 。
175.克隆策略有三层涵义:(1)第一层是 ;
(2)第二层涵义是 ;
(3)第三层涵义就是 。
176.假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件:
(1) (2) (3) (4) 。
177.现有的基因克隆策略大体上分为三类: 、 、 。
178.受体细胞的感受态是 。
179.DNA重组连接的方法大致分为四种:
(1) (2) (3) (4) 。
180.平末端连接法(blunt end ligation)的连接效率比粘性末端连接的效率低得多，所以通常在
连接反应体系中适量添加促进大分子凝聚的凝聚剂，以提高平末端 DNA连接的效率。
常用的凝聚剂是 。
181(一个细菌的表面大约有 个同 DNA结合的位点。
182(1984年，Hung和 Wesink发现如果两个不同的5?粘性末端通过部分填补得到如下的单
链突出末端，即可有效地相互连接:(1)
51
(2) (3) 。
183(将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个 ，各种此类质粒的集合体
称之为构建了一个 。
184(将含有一个 mRNA的 DNA拷贝的克隆称作一个 ，源于同一批RNA制备 物的
克隆群则构建了一个 。
185(在构建 CDNA克隆之前，可以用 来富集一特殊的核苷酸序列。做法是:用来自
于能够产生目的蛋白的细胞 mRNA分子同来自于另一类型细胞(不产生这种 蛋白质，
但亲缘关系密切)的过量 mRNA分子杂交。
186(一旦克隆了一个遗传定位的基因，就可以用 技术来鉴定基因组DNA文库中与
之相邻的基因克隆。
187(只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用 可以将这段 DNA进行百
万倍的扩增。
188(SD序列是 mRNA分子中同 结合的序列，其结构特征是 的全部或一部分。
189(环状质粒的转化效率很低，通常是线性双链 DNA转化效率的 。 190(cDNA技术是进行真核生物基因克隆的一种通用方法，因为它可以用 为模板通过反
转录合成一个双链的、无 的基因，因而有利于在原核细胞中进行功能表达。
191(产生平末端的方法通常有:(1) (2) (3) 。 192.不同细菌出现感受态的时期是不同的，如肺炎球菌感受态出现的时期是 、而
枯草杆菌感受态的出现是在 。
193. 人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为 时吸附 DNA， 时摄入 DNA。 194(感受态细胞是可以诱导的，诱导的方法有 、 、 。
195(影响酶切的主要因素之一是底物DNA，底物的影响包括 ， ，
， 。
196(sal ?是识别6个核苷酸的酶，其识别切割的理论值是 个碱基就有一个切点，但在
哺乳动物中，大约 才有一个切点。
197(在精简基因组文库中，用标记的 同末标记的杂交，最后建成的
是 库。
198(构建基因组文库时连接方法主要是 ;而构建 cDNA文库，可
用 或 。
199(将携带有外源基因并能持久传递给子代的动物称为 动物，这些外源基因就叫
做 。
200(为了提高重组 DNA分子对E.coli转化效率，通常可采取 处和 。 201(重组体的筛选有两层涵义，一是将 ，二是将 。 202(目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。大
致可以分为:(1) (2) (3) (4) 等。 203(噬菌斑形成选择法有两种判断标准，一是 ，二是 。 204( PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于 。
52
205(核酸杂交探针可分为两大类: DNA探针和RNA探针。其中 DNA探针又分为
探针和 探针。
206. 如果用限制性内切核酸酶切割双链 DNA产生3?突出的粘性末端，则可以用
进行3?末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割 DNA产生的是3?突出的粘性末端，
可以用 行3?末端标记。
207(单链 DNA探针的标记可以采用下列方法:(1)
(2) (3) 。
208(根据 Northern杂交的结果可以说明: 。
209(差示杂交(differential hybridization)技术需要 。
210(RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜)上，
同一放射 DNA探针杂交的技术称 。
211.在 技术中， DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼
龙膜)上，然后与放射性的 DNA探针杂交。
212. 使用核酸探针检测细胞和组织中特定核苷酸序列的位置。 213.为了鉴定某一具有特殊功能蛋白质的结构，可以用一个容易检测的报告蛋白
制 备 ，然后跟踪报告蛋白在细胞中的行为即可。
214(可用 T4 DNA聚合酶进行平末端的 DNA标记，因为这种酶具有 和
的活性。
215.硝酸纤维素膜(NC)结合 DNA的能力为 ，尼龙膜(Nylon)为 。 216.如果对一个克隆的基因进行遗传操作，使互补的链转录，会产生同正常的RNA转录物互
补的 分子。
217.在 Southern印迹中， DNA转移的速度取决于 和 。
218(根据噬菌斑的清晰程度筛选重组体主要是 cI基因的 。
219(用不对称 PCR合成单链 DNA探针时。两个引物的浓度比为: 。 220(微细胞是一种E.coli的突变体，通常只有正常细胞的 、而且不
含 。
221.点杂交的主要缺点是 。
222.根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素:(1)
(2) (3) 。
223.阻断翻译杂交法是 同 的杂交。
224.在切口移位标记探针时，DNAase?处理DNA的温度应控制在
温度过高， ，不利于标记。
225.Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别:
(1)
(2) 。
226.放射免疫筛选原理基于以下三点:(1)
(2) (3) 。
53
227(分子遗传学认为，生物体的第I类遗传信息是指 。第II类遗传信息是
指 。
228(E. coli Trp合成酶的Attenuator存在于 序列中，Attenuator序列的结构特点
是 。当Trp饥饿时，Attenuater开启转录的机理是 。 229( 核基因组mRNA内含子剪接的Chambon rule是 。snRNA的作用是 。切除内
含子不需能量，仅由内含子中的A发生 反应来完成。
230(卫星DNA形成的理论主要有 、 、 。
231(基因表达在转录水平上的调控机制中，调节蛋白的 特性与调节区序列的特
性 与调节区序列的 特征相统一，调节蛋白中的特异氨基酸识列DNA双螺旋
体 内的特异碱基序列。
232(真核生物成熟mRNA的Cap结构特点是 ，加尾识别序列是 。 233(真核生物基因启动子包括 ， ， Box，原核生物基因启动子包
括 ， ， box。
234(检测某DNA分子具有呼吸作用，这意味着，该DNA分子的序列具有 特点 235(采用双脱氧法进行DNA序列分析时，在A系统反应中，每一DNA片段的3?-末端
是 核苷酸，这是因为 。
236(在自发和化学诱发引起的取代突变中以 类型为主。
237(a„„a是5个不同位点发生突变而表型相同的突变型，分析互补测验的结果，你认为15
分属 个顺反子，其关系是 。
238(多肽链的第一个氨基酸多数情况下是 ，其密码是 相对应于DNA反意链上
的序列是 。在真核生物中，如果某一mRNA中这种密码子在多处出现，由
于 核糖体会选择第一密码进行准确翻译。
239( 年 对T.噬菌体γ?区的突变研究提出了顺反子假说。 年 对玉米胚乳色斑不稳定遗传现象进行研究提出了基因跳跃的概念。 年 对E. coli半乳糖代谢操纵子突变型研究重新发现了基因跳跃现象。 年 对人工合成的3(dG—dC)核苷酸研究提出DNA存在Z—DNA构象。 240(原核生物的S. D序列在 S rRNA的 端，它是富含 序列。 241(原核生物的启动子包括有 个site，它们分别是 以RNA的第一个Nt
是 或 。
242(真核生物mRNA的加尾识别序列是 。
243(在Northern Blot的分子杂交过程中，被固定在纤维膜上的是 核酸片段。 244(McClintock考察过一个玉米果穗的三倍体胚乳，其基因型为aaA??DS; ?? 111
, ?? ,Wx; 有色A对无色a为显性，直链淀粉 对支链淀粉Wx为显
性， 为非活化状态，这些籽粒胚乳的表型是 ，如果某些细胞中的一
54
个 处于活化状态，其表型是 。如果某些细胞中的两个
都处于活化状态，其表型是 。
33245(将mtDNA放在含52Ci/mmol的H一T条件下开始进行体外复制，中途转入5Ci/mmol H
3—T条件下复制，接近未期时又转入52ci/mmol H—T条件下复制，完成一个周期，如果
两个子代DNA分子还未分离，它的放射自显影图象是 。
——246(将一个重组质粒PMRI感染整合有不同PO区(W.t或OR或OR)的λ噬菌体的三RR12
个溶原性E. coli，培养于含ONPG 的培养皿中，随加入IPTG 量的逐步增加
检测被分解的邻硝基苯的黄色色度，并换算成Dac Z酶的酶活，请根据测定的结果，判
——断这三条曲线分别代表哪一个测验体系(wt, OR, OR)。 12
247(a、b为两个不同的顺反子，基因型为 的细胞，其表型为 型，基因型为
的细胞，其表型为 型。
248(某核酸分子的A+G/T+C=1.5,你认为这种核酸分子的特点是 。 249(以某真核生物的DNA分子的Cot值所估算的长度(dNt数目)低于在电镜下所测量的1/2
长度(换算成dNt)这是因为 。
250(按顺序写出的DNA链上一个加工基因的各个区域。
(5? 3?)
在电镜下观察到两种双链DNA分子经变性后再复性的图象。
(1) (2) 请分别说明它们的特点 。
251. mRNA的5?端第一个碱基是 或 。
271405’-AAG„„ATGAAA„„„„GGCTTTTTTT—3’
++ ++ a ba b
252. 设a、b分别为两个cistron中的muton位点，基因型为 的基因型为
-- - a ba
的细胞，表现型为 ，(表现型为V. t. mut)
253(在RNA转录过程中
K因子的作用是 。
pho 因子的作用是 。
Sigma 因子的作用是 。
βˊ因子的作用是 。
NusAp因子的作用是 。
254(一段poly(dG-dc)的双螺旋DNA分子在 mol浓度的NaCl溶液中较易形成Z-DNA构
型，测定其长度为37.2Å，推测这段DNA分子含 个bp，每一bp由 氢键连接，其
55
中 为顺式构象， 为反式构象，与相同序列的B—DNA分子比较，当用烷化剂
处理时Z—DNA分子中的 核苷酸易发生烷化，主要原是 。 255(编码一个短肽链的双链DNA的分子序列为
第一单链 TCATTTGCGTAGTGCCAT
第二单链 AGTAAACGCATCACGGTA
第 单链为有意链，极性方向为(左 右 )，mRNA的转录方向是(左 右)，
能翻译 个氨基酸的短肽，以第 链为有意链可转录出其micRNA，它的序列和极
性方向为 。
33256(将玉米叶片H-mDNA进行RNA Driven杂交，叶片H-mDNA与子房N—RNA进行RNA
Driven杂交，根据Indiscriminate transcription-post transcription selection理论，两者Rot/2
的比值应为 。
257(在分子杂交过程中选 65?的杂交温度，其目的在于 。 258(原核生物中Attenuator存在于 序列中，其调控机理是 Enhancer存在
于 序列中，其调控机理是 。
A B D
259(根据Whitehouse的palaron Hybrid DNA理论，在杂合体 中，如果
a b d
plaron发生在B/b基因内，形成AD，Ad, aD, ad配子的比例为 ，形成 AB，Ab配子的情况为 。
四、简答题
1.碱基对间在生化和信息方面有什么区别?
2.在何种情况下有可能预测某一给定的核苷酸链中“G”的百分含量?
3.真核基因组的哪些参数影响 Ct值? ,o12
4.请问哪些条件可促使 DNA复性(退火)?
5.为什么 DNA双螺旋中维持特定的沟很重要?
91)6.大肠杆菌染色体的分子量大约是2.5×10Da，核苷酸的平均分子量是330Da，两个邻近核苷酸对之间的距离是0.34mn;双螺旋每一转的高度(即螺距)是3.4nm，请问:
(l)该分子有多长? (2)该 DNA有多少转?
7.曾经有一段时间认为，DNA无论来源如何，都是4个核甘酸的规则重复排列(如， ATCG(ATCG(ATCG(ATCG…)，所以 DNA缺乏作为遗传物质的特异性。第一个直接推翻该四核苷酸定理的证据是什么?
8.为什么在 DNA中通常只发现 A—T和 C—G碱基配对?
9.列出最先证实是 DNA(或RNA)而不是蛋白质是遗传物质的一些证据。
10.为什么只有 DNA适合作为遗传物质?
ll.什么是连锁群?举一个属于连锁基因座的例子。
12.什么是顺反子?用“互补”和“等位基因”说明“基因”这个概念。
56
13.对于所有具有催化能力的内含子，金属离子很重要。请举例说明金属离子是如何作用的。
14.列出真核生物mRNA与原核生物mRNA的区别。
15.列出各种tRNA所有相同的反应及个别 tRNA的特有反应。
16.在体内，rRNA和 tRNA都具有代谢的稳定性，而 mRNA的寿命却很短,原因何在?
17.为什么真核生物核糖体RNA基因具有很多拷贝?
18.为什么说信使RNA的命名源自对真核基因表达的研究，比说源自对原核基因表达的研究更为恰当?
19.说明为什么mRNA仅占细胞RNA总量的一小部分(3,一5,)。
20.为何rRNA和tRNA分子比 mRNA稳定?
21.起始tRNA具有哪两种与其他 tRNA不同的特性?
22.区别rRNA和mRNA在翻译中的作用。
23.氨基酸分子如何与正确的tRNA分子连接?
24.简要说明证明信使的存在及其本质为RNA的证据。
25.列举4种天然存在的具有催化活性的RNA。
26.?型内含子发生改变后，可以产生其他酶的活性吗?如果可以，是哪些活性?这意味着?型
内含子的催化中心有什么特点?
27(某些自剪接的内含子具有可读框，它们编码何种蛋白?这与内含子的移动有什么关系?
28.描述 Meselson-Stahl试验，说明这一实验加深我们对遗传理解的重要性。
29.请列举可以在线性染色体的末端建立线性复制的三种方式。
30.为什么一些细菌完成分裂的时间比细菌基因组的复制所需的时间要少?为什么在选择营养
条件下，E. coli中可以存在多叉的染色体或多达4个以上的开环染色体拷贝， 而正常情
况下染色体是单拷贝的?
31.在 DNA聚合酶?催化新链合成以前发生了什么反应?
32.DNA复制起始过程如何受DNA甲基化状态影响?
33.请指出在 oriC或фX型起点起始的 DNA复制之间存在的重要差异。 34.大肠杆菌被 T2噬菌体感染，当它的 DNA复制开始后提取噬菌体的 DNA，发现一些RNA与 DNA紧紧结合在一起，为什么?
35.DNA连接酶对于 DNA的复制是很重要的，但RNA的合成一般却不需要连接酶。解释这个现象的原因。
36.曾经认为 DNA的复制是全保留复制，每个双螺旋分子都作为新的子代双螺旋分子的模板。如果真是这样，在Meselson和 Stahl的实验中他们将得到什么结果?
37.描述 Matthew和Franklin所做的证明 DNA半保留复制的实验。
38.解释在DNA复制过程中，后随链是怎样合成的。
39(描述滚环复制过程及其特征。
40.假如发生了碱基对的错配会产生什么表型，它们怎样被修复?
41.为什么 DNA的甲基化状态可以为复制的调节和 DNA的修复所利用?
42.错配修复的方向可以怎样被调节(突变型到野生型或野生型到突变型)?
57
43.RecA蛋白是怎样调节 SOS反应的?
44.以图4.1A为例，画出图4.1B所示分子同源区域交叉重组的产物，图中用一条单线表示
DNA双螺旋，同源重组的靶位点用箭头标出。
图4.1 各种重组的底物
45.图4.2所示为两条同源的亲代双螺旋和两套可能的重组产物。请画图表示两亲代双螺旋间可以产生指定重组产物的 Holliday连接，在每条链的左端标明 Holliday连接的3?或5?端，这样亲代和重组双螺旋间的关系就比较清楚。请指明为了产生每套重组产物哪些链应被切去。最后，画出经过一轮 DNA复制后的重组产物。
图4.2 亲代与重组的双螺旋
46.为什么基因内互补只发生在:(1)某一基因座的等位基因间;(2)这些基因座的特殊等位基因对间?
47.有很多突变对于野生型基因是隐性的，也就是说，在一个含有突变型和野生型基因二倍体细胞中，野生型的特性能够得到表达。请根据对突变过程的认识解释这一事实。对于说明为什么有些突变是显性的，有何见解?
48.为了选择下面两种突变型，应对只含有葡萄糖、硫酸铵以及无机离子的基本培养基作何调整?
— (1) leu，亮氨酸营养缺陷型;
— (3) gal，不能以半乳糖作为唯一碳源的突变型。
49.写出利用突变研究以下问题的步骤:
(l)氨基酸 X的代谢途径;
(2)E(coli中细胞分裂的控制。
50.在工业微生物菌种的选育中，人们喜欢用诱变的方法筛选解除了酶合成阻遏的突变株，而
不要解除了酶活性反馈抑制的突变株。请解释原因。
51.为什么一个基因座的正向突变发生的频率要比回复突变高?
52.一个基因间阻遏物突变怎样阻遏了一个错义突变?
53.为什么吖啶类染料诱导的突变较碱基类似物诱导的突变对生物体更有害? 54.羟胺对游离噬菌体和转化 DNA都是高度特异的致变剂。它只与 DNA中的C反应，使之转变成偶尔可与 A错配的形式。
(1)羟胺诱导的碱基替代是什么?
(2)推测羟胺是否可回复自身诱导的突变?
(3)羟胺可以回复5—溴尿嘧啶诱导的突变吗?
(4)5—溴尿嘧啶可以回复羟胺诱导的突变吗?
55.在下列哪些基因中你可以分离到温度敏感突变和琥珀突变?
(l) lacO;(2) lacZ; (3) lacP;(4) lacI
56.区别反向突变、回复突变和第二位点回复突变。
57.指出突变频率和突变率的区别。
58
58.简述大肠杆菌中的增变基因。
59.简述怎样利用化学诱变剂在细菌中的诱变来检测它们致癌作用。
60.简述 Muller—5技术，并说明如何利用它测得 X射线对果蝇突变频率的影响。
61.列举几种具以下特征突变:(1)不能合成特殊多肽;(2)组成型合成多肽。 62.突变能影响高等真核生物结构基因表达的几个水平?并指出每种突变最明显的分子表型。 63.当E.coli菌株 K同时被两个特异的 T4噬菌体 r突变体所感染时，感染细胞裂解并释放?
出正常数量的噬菌体后代。这些后代是重组的结果还是互补作用的结果?应怎 样辨别? 64.在E.coli中， A和 B基因座相隔了大约5,的基因组，另一对标记 C和 D间隔1,的基因组。哪对能被(1)共转化;(2)共转导?
65.当一个烈性噬菌体的所有基因全部表达时，如果不对转录进行时序性调控，将出现
什么问题?
66.为什么λ噬菌体感染产生的溶源菌通常对其他的λ噬菌体的感染有免疫?
67.请预测具有下列突变的λ噬菌体感染细菌的表型。并说明原因:
(1)产生一个抗蛋白酶的λ c?蛋白的突变。
(2)具有阻止蛋白结合的λO的突变。 R2
(3)使λN基因失去作用的突变。
(4)编码λ c I蛋白的基因突变。
68(鉴定化合物的致癌性的一个通用实验是爱姆斯试验，通过营养缺陷型菌的回复突变 确定
其致癌性。用人噬菌体和E.coli设计一个实验使之能用于致癌物的检测。 69(为什么像流感病毒这样的RNA 病毒的生命周期，有力地支持了以下这一论点:与其说
病毒是生命有机体，不如说它是“寄生的遗传因子”。
70.大肠杆菌噬菌体 T2的染色体是一个线性 DNA分子，它的两端都有冗余并且可作循 环变换。解释冗余的含义并说明这些分子是怎样产生的。
71.烈性噬菌体和温和噬菌体的区别是什么?
72.从噬菌体 MS2中提取出来的裸露染色体可以感染大肠杆菌的原生质球(去除胞壁的细菌)，
这会产生和具感染能力的噬菌体一样的噬菌体颗粒。如果染色体先用RNA酶处理，就会
失去感染能力;另外，如果标记感染的RNA，在子代中不出现标记。解释这些现象。 73.从λ噬菌体中提取的 DNA用两种只攻击单链 DNA的外切核酸酶处理。外切核酸酶 A
只从突出的5?端消化 DNA，而外切核酸酶 B只攻击自由的3’端。这种处理对λ噬菌体
DNA的生物活性有什么影响?
74(比较真核生物与原核生物转录起始的第一步有什么个同。
75(转录涉及模板链和编码链的分离，解释在转录中单链 DNA是怎样被保护的。
76(概括说明σ因子对启动子调节的辅助功能。
77(什么是增效与减效突变?
78(细菌促旋酶突变通常是致死的，但是促旋酶,拓扑异构酶?突变却可以成活，其原何在? 79(解释因子是怎样选择专一性启动子共有序列而启动不同基因表达的(考虑对环境压力的应
答)。
59
5480( rpoN基因编码σ因子:σ，它具有不同于已知原核生物的因子的特征。请与E. coli的因
70子:σ(RpoD)作比较讨论这些特征。
81(在原核生物中，核心酶与 DNA的松散结合和紧密结合之间存在—种平衡，为什么这比
核心多聚酶自身形成游离与结合平衡更有利?
82(正调控和负调控的主要不同是什么?
83(区别(1)启动子增效突变与启动子减效突变;(2)上游序列和下游序列。 84(解释为什么操纵子和启动子是反式隐性、顺式显性的，而编码阻碍蛋白的基因既是反式
显性又是顺式显性。
85(为什么只有 DNA双螺旋中的一条链能被正常的转录?
86(哪三个序列对原核生物mRNA的精确转录是必不可少的?
87(说明因 RNA聚合酶—启动子不同的相互作用如何导致不同基因的转录。 88(原核生物的核糖体 RNA和 tRNA的相对较稳定并且半衰期长，而 mRNA却不稳定，很
快被降解，请解释这种稳定性的差异。
89(列举两种受调控蛋白控制的、与氨基酸的生物合成有关的操纵子。
90(什么是安慰诱导物?
91(葡萄糖是如何影响涉及糖代谢的操纵子(葡萄糖敏感型操纵子)的表达? 92(在大多数细菌操纵子中，结构基因通常紧靠在一起并由单个操纵序列—启动子区调控，
而在一些例子中结构基因分散在染色体上。请问这些基因是如何以简单的方式达到协同
调节的。
93. 反转录病毒与反转录转座子有什么不同?
94. gag和pol基因的蛋白产物是怎样生成的? mRNA编码的 Env蛋白是怎样生成的?
95. 蛋白酶为什么对反转录病毒生活史很重要?
96. 列出转化病毒正链RNA掺入到宿主双链 DNA的详细过程。
97. 噬菌体整合到宿主基因组后，4,6个宿主 DNA的核苷酸被复制，这是为什么?这与转座
子插入新位点有何相似之处?另外，两个核苷酸从5?U3的5?和3?被切除，这意味着遗传信
息从反转录病毒中被丢失吗?
98(反转录病毒怎样获得像onc基因这样的细胞基因?获得此类基因会对反转录病毒基 因产
生影响吗?一个反转录病毒怎样才会丢失如 pol和 env这样的重要的基因而复制? 99(描述酵母 Ty元件的结构。它与反转录病毒有何相似之处?为什么它不形成感染粒子?
100(你如何证明 Ty元件在转座时经历了一个RNA中间体?
101(FB元件与copia因子有何不同?
102(列出病毒和非病毒超家族反转录转座子之间的4种差异。
103(为什么说 Alu元件可能作为 DNA复制的起点?有什么理由不支持这种假说呢?
104(描述两种转座子引起基因组重排的方式。
105( IS元件整合到靶位点时会发生什么?
106(一个复合转座子和一个 IS元件之间的关系是什么?
107(列出一个转座子插入到一个新位点所要求的步骤。
60
108(当(l)DNA在两个定向重复之间(2)DNA在两个反向重复之间发生重组的效应各是什么?
109(在什么过程中会形成一个共整合体?它的结构是什么?
110(Tn10元件只有在自己的转座酶基因具有活性时发生转座(与利用基因组中 Tn10元件表
达的转座酶的情况正好相反)，这种偏爱的原因是什么?
111(什么是杂种不育?是什么引起的?
112(即使不携带癌基因，反转录病毒依然会导致癌变转化。列举这种现象发生的三种方式。
113(简述大肠杆菌的插入序列，并指出它们对自发突变的重要性。
114(比较基因组的大小和基因组复杂性的不同:
—个基因组有两个序列，一个是 A，另—个是 B，各将2000bP长。其中—个是由400bp
的序列重复5次而成，另一个则由50bp的序列重复40次而成，问:
(1)这个基因组的大小怎样? (2)这个基因组的复杂性如何?
115. 一个基因如何产生两种不同类型的mRNA分子?
116. 在一个克隆基因的分析中发现:—个含有转录位点上游3.8kb DNA的克隆，其 mRNA
直接转录活性比仅含有3.1kb上游 DNA的克隆的转录活性大50倍。这表明了什么?
117(被加工的假基因与其他假基因有哪些不同?它是如何产生的,
118(非转录间隔区与转录间隔区分别位于 rRNA重复的什么位置?转录间隔区与内含子 有
何区别?
119(请描述 C值矛盾，并举一个例说明。
120(在酵母基因中，其生活必需基因占多大比例?为什么有些基因可能是不必要的? 121(酵母mRNA的大小一般与基因的大小相—致。而哺乳动物 mRNA比对应的基因明显小。
为什么?
122(在一个基因复制后，外显子发生突变的机率比内含子小。但是，所有 DNA的突变率是
相同的。请解释原因。
123(什么证据表明外显子与蛋白质的功能结构域相一致?这一证据如何支持外显子改
组 (exon shuffling)假说?
124(为什么卫星 DNA在密度梯度离心时会形成一个清晰的峰?
125. 为什么基因组 DNA在用限制性内切核酸酶消化时，哺乳类的卫星 DNA会产生特 异
的带?
126(举例说明什么是梯级重复，这样的序列是如何产生的?
127(跳跃复制的结果是什么?
128(重复序列并不是在选择压力下存在，因此能快速积累突变。这些特性表明重复序列相互
间应存在很大的不同，但事实并不是这样的。请举例说明。
129(哪些细胞器带有自身基因组?为什么这些细胞器带有自身的基因组?
130(线粒体 DNA的突变率与细胞核 DNA突变率有什么不同?为什么?
131(人线粒体 DNA的哪些特征表明了其基因组的组织方式具有经济性?
132( RNA分子能被运到细胞器中吗?
133(什么证据表明细胞器与原核生物关系比真核生物关系密切?
61
—134(酵母 rho小菌落突变株的线粒体DNA发生了什么变化?
135(除了自身免疫疾病，机体如何实现不对“自己”产生免疫?
136. 简述重链免疫球蛋白基因重排的步骤。
137(列举产生免疫多样性的途径。
138(当J区与 V区发生重排后，其5?端的命运如何?3?端呢?
139. 假设免疫球蛋白是由基因组中完整的基因编码，而不是多个片段组装而成，那么人 体识
别百万个不同的抗原需要多少个基因参与免疫反应?这些基因占人基因组的多 大比率? 140(地中海贫血症是一类因α和β珠蛋白合成降低而导致的疾病，什么类型的 DNA重排能
引发这些疾病?
141(列举一个已知的 DNA序列编码一种以上蛋白质的三种方法。 142(哺乳动物中，从母亲与父亲遗传而来的基因是差异表达的，这种现象的理论基础是什么?
143(简述 T—DNA转化所需的细菌及质粒基因。
144(氨甲蝶呤对哺乳动物细胞有何作用?细胞是如何对这种药物产生抗性的?其中稳定 和不
稳定抗性有什么不同?
145(一个tRNA基因的启动子序列突变将会分别对(l)基因产物和(2)细胞或生物体的表型有什
么影响?
146(列举原核生物同真核生物转录的差异。
147(增强子具有哪些特点?
148(哪些转录因子含有 TBP?为什么它们被称为定位因子?请用一个模型解释为什么所 有三
种RNA聚合酶都能与 TBP发生作用?
149(什么是转录起始前复合体?
150(RNA聚合酶的内部启动子位于起始位点下游50个核苷酸的位置，它是如何被定位并正
确起始转录的?
151(对带有内部启动子的RNA聚合酶?基因有什么样的编码限制因素?
152(当一段活性转录 DNA受损时，模板首先被修复。请用一个模型解释这一现象。
153(真核生物中，基因的表达受不同水平的调控，请列举其中3种。
154(甾醇类转录因子与锌指蛋白类转录因子的区别是什么?
155(亮氨酸拉链蛋白所识别的 DNA有何特点?如何理解亮氨酸拉链转录因子的二聚体结构
同识别位点的关系?
156(虽然同源异型蛋白与锌指蛋白差别很大，但是它们识别 DNA序列的结构元件相
似的，这个元件是什么?
157(协同控制(coordinate control)下的基因是如何被同时激活的?
158(列出调控转录因子被激活的7种途径，并各举一例。
159(许多转录因子是细胞原癌基因的产物，为什么突变的转录因子可能导致癌变?
160(转录因子能够与装配成核小体的 DNA序列结合吗?
161(有两个模型可以解释染色质中的基因是如何被转录的。优先模型(preemptive model)
中，转录因子和RNA聚合酶是如何与启动子结合的?为什么在动态模型中需要ATP?
62
162(为什么酵母SWI与SNF基因的突变会影响不同靶基因的转录? 163(一般认为，染色体中具有多个调控基因表达的结构域。每个结构域中可以找到哪些功能
位点，它们的作用如何?
164(MyoD是一种 bHLH蛋白，对肌肉细胞的发育很重要，它的活性是如何被调控的? 165(酵母 U6 sRNA基因有一个TATA盒位于上游，在基因内有一个弱的 A盒，基因下游
的远端还有一个保守的 B盒。体外实验时，RNA聚合酶?和?都可以转录这个基因，但
体内实验发现只有RNA聚合酶?可以转录它。如何确定该基因启动子的聚合酶特异性?
166(举例说明单链核酸中形成茎环结构的重要性。
167(用负超螺旋环状 DNA样品进行体外转录实验。但是预实验中并没有获得满意的结果，
试讨论改进实验的可行方法。
168(组蛋白 H2A基因在所有细胞中都进行表达，而免疫球蛋白基因只在淋巴样细胞中表达。
两类基因的启动子都含有转录因子 Oct-1的结合位点， Oct-1也存在于这两类细胞中，
但为什么免疫球蛋白只在淋巴样细胞中表达?
169(RNA聚合酶?起始转录后，起始复合物必须转变为延伸复合物。因此聚合酶复合 物
必须解旋一小段 DNA。在线性 DNA上，解旋需要ATP， TF?E， TF?H和解旋酶活
性。然而，超螺旋 DNA的转录并不需要这些因子。请解释这一现象。
170(RNA聚合酶?特异性地转录小分子RNA，但为什么不转录5.8S rRNA? 171(当剪接的分支位点被移到内含子内的另一个位置，其活性将会消失。相反，正确位置附
近隐藏的一个分支位点被激活。请作出解释。
172(请列举剪接体组装过程中的各个步骤，其中哪一个复合物是具有活性的剪接体?
173( Ul SnRNP与5?剪接位点间作用的基础是什么?如何证明?
174(列举前体mRNA剪接过程中发生的6种RNA-RNA相互作用? 175(通过遗传筛选，在酵母中分离得到许多与前体mRNA剪接有关的基因。其中几个基因
编码RNA解旋酶。如何解释前体mRNA的剪接需要多个RNA解旋酶?这些酶可能在哪
一步反应中起作用?
176(前体mRNA剪接体的催化中心是什么?它是如何形成的?有什么证据可以证明这 个模型? 177(据说前体mRNA的剪接是从?型剪接进化而来的。有什么证据可以证明这一点?是如何
发生的?这种进化为什么对生物体有利?
178(可变剪接如何控制果蝇中的性别分化?
179(比较RNA聚合酶 ?、?、?催化的转录终止过程和转录产物3?端的形成。 180(组蛋白mRNA3?端的加工需要什么样的RNA结构?如何证明所涉及的是RNA的二级结
构而不是初级结构?在其他反应中会形成类似的结构吗?
181(为什么把同样的第一外显子(SL外显子)加在所有mRNA上对锥虫是有利的?
182(如何确定在一个多内含子基因的剪接过程中，内含子被切除的顺序?
183(为什么mRNA的翻译起始密码子的上游必须含有不被翻译的核糖核苷酸? 184(在RNA编辑中，向导RNA(gRNA)的作用是什么?它的哪些部分分别与:(1)编辑前mRNA;
(2)编辑后的前体 mRNA互补?
63
185(指出下列序列中的3?剪接位点:
5?—ACGUACUAACAUUCUAUUCCUUAAG/UUCAUAAGUUGAGUC—3?
如果3?剪接位点的保守序列发生突变，附近的一个“隐藏”3?剪接位点通常取而代之。这个
位点在哪里?这将对该前体mRNA所编码的蛋白产生什么影响?
186(既然真核rRNA的 poly(A)尾不是由 DNA编码的，为什么能将它准确地加到3?末端上
呢?
187. 解释什么是“套索结构”，在内含子套索中的磷酸二酯键有什么特别之处?
188(哪一种真核生物RNA不需要加工?
189(为什么剪接是一个精确的过程?
191. 如果剪接发生在一个内含子的 GU序列与相邻内含子的AG序列间，会有什么结果?
192( N—甲酰甲硫氨酸—tRNA的功能是什么?
193. 解释核糖体肽基转移反应。
194(简述真核细胞中翻译终止的过程。
195(真核与原核核糖体的主要区别是什么?
196(简述真核与原核细胞中翻译起始的主要区别。
197(氨酰tRNA合成酶的功能是什么?
198(有两个系统发育上十分接近的物种，它们染色体中的(G十C)%含量不同， A株(G+C)
含量为55,而 B株是68,。同源及异源转化,重组实验表明:来自(G+C),低的DNA
易于转化入(G十C),高的生物体/基因组中，反之则不然。请说明原因。
199(根据翻译过程所涉及的各个步骤，设计出至少六种抑制翻译的
方案
气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载
。 200(根据遗传密码字典，将mRNA序列5?-AUGUUCCAGAGCACGGGCCCUAAA-3?翻译成
多肽，假定翻译从5?端的 AUG开始。如果:
(1) C改成 G;(2) C改成 A;(3) C被缺失。 上述变化对多肽有何影响? 201(在大肠杆菌的一个无细胞蛋白质合成系统中，耗尽内源 mRNA后与 poly(AG)的随机多
聚体共温育，其中 A?G=3?1。预测何种氨基酸能够掺人到多肽中，以及它们的相对掺
入频率。
202(为什么说翻译后氨基酸的化学修饰与蛋白质总体构象的形成有关?
203(说明氨基酸残基的磷酸化怎样调节蛋白质的活性?
204(比较并指出O-连接和N-连接合成途径的异同。
205(为什么大多数移码突变导致多肽链的提前终止?
206(为什么说基因工程技术是60年代末70年代初发展起来的?
207(重组 DNA的含义是什么?
208(如何理解基因工程的两个特点?
209(在 Cohen构建有生物功能重组体的第一步实验中，用EcoR ?切割了 R6—5质粒，然
后转化正E.coliC600，在卡那霉素抗性平板上筛选到了 pSC102，它是由 R6—5的三个
E.coR ?片段组成，请推测这个质粒具有什么遗传特性:
210(什么是动物乳腺生物反应器?
64
211(现分离到,82噬菌体的一个突变型，它同野生型的噬菌斑相当不同，并已分离到这两种
噬菌体的 DNA，请设计一个实验，初步鉴定是点突变、插人突变还是缺失突变?
212(说明 Sanger DNA测序法的原理。
213(在酶切反应缓冲液中加入 BSA的目的是什么?机理是什么?
214( Fredrick和 McClarin等用一个由13个碱基对的 DNA片段与EcoR ?反应，然后分离
到酶和 DNA共结晶的复合物，通过 X射线分析发现了什么?
215. 有些噬菌体和质粒常常编码一些抗限制性酶的蛋白以中和宿主的限制系统。你认为 噬
菌体和质粒还有哪些可能的方式避免宿主的限制作用?
216(某学生在用EcoR ?切割外源片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因? 217(在序列5?—CGAACATATGGAGT-3?中含有一个6bp的 ?类限制性内切核酸酶的识别
序列，该位点的序列可能是什么?
218(下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是?类酶的识另别序列:
GAATCG，AAATTT， GATATC，ACGGCA?为什么?
219(用连接酶将Sau 3AI(?GATC)切割的 DNA与经BamH?(G?GATCC)切割的DNA连接起
来后，能够被BamH ?切割的机率有多大(用百分比表示)?
220(用Klenow酶填补的办法可使5?粘性末端转变成平末端。这种方法常使 DNA上的 某
些限制酶的识别位点消失。请问，对于下列限制酶，用这种方法处理会不会使它们的识
别序列都消失?BamH (G ? GATCC);Taq ?(T ? CGA)，BssH ?(G? CGCGC)。
221(请推测细菌的染色体上是否会有编码识别8个碱基的内切酶?怎样验证? 222(当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施?为什
么?
223(按适当的顺序，列出将一种mRNA的 cDNA克隆到表达载体所用到的酶。
224(为什么反转录酶在聚合反应中会出错?
TM225(什么是测序酶(sequenase)?
226. 什么是 S1核酸酶作图(S1 nuclease mapping)?
227. 基因工程中，为什么不喜欢用 BAP来脱去 DNA的5?端的磷酸基团?
228(RNase A和RNase H在催化活性和应用上有何不同?
229(切口移位(nick translation)标记 DNA前，用 DNase ?处理 DNA时，应注意什么?
230(核酸酶与外切核酸酶?用于系列缺失突变有什么不同?
231(YAC载体具有什么样的功能性 DNA序列?为什么在克隆大片段时，YAC具有优越性?
232(列举质粒载体必须具备的4个基本特性。
233(什么叫穿梭载体?
234(说明减少质粒和噬菌体载体上某种酶的识别位点的方法和原理。 235(虽然质粒的带动转移给质粒载体的安全性带来一定的困难，但是通过带动转移将质粒转
移到特定的受体菌中也是基因工程中常用的实验技术。请举一例说明之。
——236(为什么来自 Hfr× F的重组体几乎总是 F?
237(解释为什么不同的 Hfr菌株具有不同的转移起点和方向?
65
gal+238(怎样从一个 E(coli的 Hfr菌株中分离到一个 F?的菌株? 239(你已经分离了一个新的 F’因子，怎样用最简便的方法知道最初的 F因子的部分 DNA
已经被切除，并被一个外源 DNA(也就是细菌 DNA)所替代?
240(你能用哪一种基因转移的方法确定
(1) E(coli染色体上一个新发现的基因座在其染色体上的位置;
(2)一个新分离的突变在基因内的位置。
+—241(用加有注释的图表说明 F质粒是怎样从一个 F细胞转移到 F细胞。并简要说明转移
复制如何不同于营养体的复制。
242(在转导过程中，通常需要把受体菌和在供体中生长的噬菌体悬浮液分别铺在选择性培养
基上，为什么?
243(如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体?
244(用sal?切割从噬菌体 J2分离的 DNA时，得到8个片段，分别是:1.3、2.8、3.6、5.3、
7.4、7.6、8.1和 11(4kb。但是，用Sal ?切割从被感染的寄主细胞中分离到的 J2噬
菌体 DNA时，只得到7个片段，分别是:1.3、2.8、7.4、7.6、8.1、8.9和 11.4kb，根
据这些结果，您得到哪些信息?
245(在c?基因正常时为什么也会出现浑浊的噬菌斑?不正常则是清亮的噬菌斑?
246(λ噬菌体 DNA被包装到噬菌体的头部，需要哪些基本条件?为什么? 247( PCR反应包括引物与 DNA模板链间的解链与复性。讨论循环温度范围对引物—DNA
双螺旋稳定性的影响及对 PCR产率的影响。
248( Sanger的双脱氧法测序的原理。
249( 分离DNA时，为什么要在缓冲液中加入一定浓度的 EDTA和蔗糖?
250( PCR的基本原理是什么?用 PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息?
251( 说明合成接头在基因工程中的主要作用。
252( 从细菌中分离总 DNA，应采取哪些指施获得高分子量的 DNA?
253. 用酚抽提蛋白质时，离心后，为什么蛋白质总是会停留在水相和酚相之间? 254. 分离 pBR322 DNA可考虑用氯霉素扩增，分离 pUC18质粒 DNA则不必用氯霉素扩增，
为什么?
255(溶菌酶是破碎细菌细胞的有效方法。但有些细菌的孢子对溶菌酶不敏感，应该如何处理? 256(假定你从粘质沙雷氏菌中克隆了一个基因，并推测可能是依赖于锌的金属蛋白酶， 因
为它含有两个组氨酸和一个谷氨酸与锌形成锌指结构。请你设计一个方案，改变其中一
个组氨酸看看是否改变蛋白酶的活性?
257(你打算扩增下图所示的两段序列之间的 DNA，请从所列出的引物中选出合适的一
对。
5?-GACCTGTGGAAGC-----CATACGGGATTG-3?
3?-CTGGACACCTTCG-----GTATGCCCTAAC-5?
引物 1 引物2
5?-GACCTGTGGAAGC 5?-CATACGGGATTG
66
5?-CTGGACACCTTCG 5?-GTATGCCCTAAC
5?-CGAAGGTGTCCAG 5?-GTTAGGGCATAC
5?-GCTTCCACAGGTC 5?-CAATCCCGTATG
258. cDNA克隆与基因组克隆有何不同?
259(怎样将一个平末端 DNA片段插入到EcoR ?限制位点中去?
260(有哪些可能的原因使一个基因在 DNA库中丢失?
261(简述以粘粒为载体构建基因文库的原理。
262(一个双链 DNA分子(为5?突出端)可采用哪些方法使之加上 dA100,120的尾巴?
263(酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在，必须有哪些基本的结构?
264(何谓YAC?主要特性是什么?
265. Muller的 PCR反应同大肠杆菌体内的 DNA复制有哪些不同?你认为根本的差别在哪里?
266(在构建 CDNA文库时，为什么常用GC接尾而不用 AT接尾法连接? 267(用限制性内切核酸酶切割 DNA后，经电泳检查，发现有拖尾现象，其可能的原因是什
么?
268(欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核生物(如Ecoli助中进行表达，克隆时应注
意哪些问题?
—269(假定你分离到一个Ecoli的 Thy突变体，并推测有可能是ThyA基因突变。请设计一个
方案用 PCR从染色体 DNA扩增突变的ThyA基因，测定突变的序列。(注:E.coli 野
生型的ThyA基因的序列是已知的)
270. 点印迹与 Southern印迹相比，有何优点和缺点?
271(你在做 Southern印迹分析，并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案，下面一步骤是
用 NaOH溶液浸泡凝胶，使 DNA变性为单链。为了节省时间，你略过了这一步，直接
将 DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上。然后用标记探针杂交，最后发现放射自显影片是
空白。错在哪里?
272(切口移位(nick translation)标记探针的主要步骤有哪些?
273(插人失活和插入表达法筛选重组体的主要差别是什么?
274(一个携带有氨苄和卡那霉素抗性基因的质粒被仅在卡那霉索基因中有识别位点的 EcoR
?消化。消化物与酵母 DNA连接后转化对两种抗生索都敏感的E coli菌株。
(l)利用哪一种抗生素抗性选择接受了质粒的细胞?
(2)怎样区分接受了插入酵母 DNA的质粒的克隆?
275(用互E.coR ?和Hind?分别切割同一来源的染色体 DNA，并进行克隆，在前者的克隆
中筛选到 A基因，但在后者的克隆中未筛选到 A基因，请说明原因。 276(什么是Western印迹?它与 Southern印迹有什么不同?
+r277. 用一限制性内切核酸酶切割 Lac Tet的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序列，并
产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在 lac基因内有切割位点，并在第二个氨基酸密
码子内，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用DNA聚
67
+r合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化 Lac Tet受体菌，筛
r选 Tet转化子，问:Lac的基因型是什么?并说明原因。
278(严谨杂交实验是如何控制的?
279(RNA与基因组 DNA复性已被广泛用于检测不同类 DNA的转录。 DNA驱动的复
性 实验与RNA驱动的复性实验有何不同?
280(在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用 cDNA
而不用基因组 DNA?为什么要在 cDNA前加上细菌的启动子?
281(从某种意义上讲，生物体的空间密码较三联体密码具有更广泛的简并性。
282(原核生物的RNA polymerase中δ(sigma)因子具正、负两方面的效应
283(?、?型Intron的Branch site中A具有高度保守性。
284(一般认为luxury gene才具Enhancer。
285(5BrU诱发“复制错误”(Replication error)的突变频率低于诱发“掺入错误”
(incorporation error)的突变频率。
+cc+/O部分二倍体的E. coli细胞中，O对O具有Cis286(Lac operon的O-dominant效应。 287(将重组的苏云金杆菌δ毒素基因转化到植物细胞内，可以正确表达，但毒素蛋白合成效
率较低。
288(采用“加、减法”进行DNA序列分析时，在“+A”系统中，所合成的片段末端均为A。 289(将CHS(色苷合成酶)反义DNA基因导入红花烟草原生质体中，诱导培养出白花植株，
并对红花植株具显性效应。
290(在具Spm转座系统的玉米籽粒中，发现在无色胚乳的背景上出现有色斑圈。 291(E. Coli trp合成酶操纵子的trp L突变株(第29dNt发生G的转换突变)表现型为29
trp缺陷型。
292(一段Poly dG-dc双链DNA分子在体外，4.0M NaCl及含有Br原子的条件下，可以形成
稳定的Z—DNA构型，转入体内生理条件下，也能保持其结构的稳定性并制备Z—DNA
抗体。
293(E. Coli在Histidine缺乏时，体内至少有三套调控系统启动，以控制对这种环境的
适 应。
294(利用改良的RNA Driven技术体系，可以估算出真核生物基因表达的数目及其丰富度。 295(利用某一随机引物分子进行某一生物总DNA的PCR反应时，选用45? anneal
temperature所显示的带纹数较选用35?所显示的带纹数要少。
296(λ E. Coli C λ—C E.Coli K λ—K eop=1 eop=1
297. 真核生物中，mRNA×DNA出现R—Loop的电镜图象。
298(原核生物中具有Direct Repeats的Tn9复合因子较具Inverted Repeats的Tn10复合
因子的稳定性差。
299(E. Coli在仅Arg饥饿时也会合成trp。
300(通过二点或三点测验测定的基因间的遗传图距与物理图距之间存在非对应的线性关系。
301(pseudo gene是重复基因家簇中无功能的基因成员。
68
302(原核生物基因转录的强终止子，在行使其功能时，不一定需要Rho因子。 303( 近代研究发现若干Anti-Central dogma的现象，从而丰富和发展了,,,,年,rick
提出的,entrol dogma理论。
304(将复制进行一半的E. Coli转接于含利福平的培养基上，E.Coli可以完成该周期的DNA
的复制，但不能进入下一周期的复制。
305(生物体的翻译体系能在mRNA中UCU, UCC, UCA, UCA, UCG,AGU,AGC等6个密码子处准
确聚合Ser。
306(并非所有氨基酰tRNA合成酶的Amino Acio Site都具有双筛功能。 307(yeast Alg4具有7个非全同等位基因，研究表明它们发生基因转换的频率，从5ˊ?3
ˊ呈递减的趋势。
308(E. Coli的SOS修复系统的表达，必须受到紫外线诱导。
309(将转导噬菌体P(h-a、H-b)?Fla感染沙门氏菌(H—c、h—d)fla菌株，获得3311212
个Fla转导子，血清反应检测其中11个为H—a相，22个为H—c相。 11
提示:Fla:鞭毛蛋白基因，与H基因紧因紧密连锁，控制沙门氏菌的运动。 1
(H—a、h—b)为H相基因表达，血清型为a型 122
(H—c、h—d)为H相基因表达，血清型为c型 121
310(从λphage溶源，裂解途径选择的分子机制中，你得到哪些有关生物基因表达调控的启
示。
311(E. coli在含有Glucose和Lactose的培养基中，Lactose不被分解利用。 312(E. coli,K菌株被T phage的r?a,r?b两种突变体双重感染后，细菌裂解，并放出正4
常数量的T phage。 4
313(羟胺(HA)不能使终止突变的a基因发生回复突变。
314(从寄主菌中分离提取PBR322质粒DNA，经电泳检则，出现了三条迁移率不同的带纹。
315(tRNA作为adaptor，保证了蛋白质合成过程中氨基酸的准确聚合。
316(核糖体可以准确地在mRNA5’端第一个AUG密码处起译蛋白质。 317(选用10个碱基的随机引物进行PCR反应时，在50?退火温度下较37?退火温度下扩增
出的带纹少。
318(DNA复制时，新生单链DNA总是从5’端向3’端延伸。
319(假基因也称为Retrogene，并且只在真核生物的重复基因家族中发现有假基因存在。 320.玉米中，由DS引起的插入突变基因，也称为Non-Autonomous mutable gene。 321(A，a, a, a是一组非全同复等位基因，研究发现它们发生基因转换的频率为a> a> a 123132322. 真核生物的基因在转录水平上的表达调控往往采用Positive control方式，而原核生
物多采用Negative control方式。
323. Z-DNA在活体细胞内能稳定存在。
324(两种GC%含量相同的DNA分子，分别在pH=12和pH=7的变性缓冲液中进行的变性反应，
测得的Tm值不同。
69
+325(进行DNA复性动力学研究时，应保持缓冲液的Na浓度为0.18,0.2M，复性反应的温度
一般控制在低于Tm值25?左右。
326(合成与高度重复的卫星DNA(satellite DNA)两侧序列互补的特异引物，进行PCR反应
的技术，是研究DNA多型性的一种分子标记技术(SSR，Simple Sequence Repeats)。 327(各种类型的转座因子均具有“限制转座频率的负控制”机制。
328(同相重叠基因可以产生长度不同，序列相似的isoform protein，而异相重叠基因仅能
产生结构与功能完全不同的蛋白质。
329(Enhancer的启动具有严格的组织特异性。
-11330(生物体能保证DNA复制的错误机率小于10。
331(E. coli 组氨酸合成酶操纵子的引导区内存在一个编码16氨基酸的orf，并且其中有7
个组氨酸的密码子连续排列。
332(Neuraspora A type 与a type杂交，形成的八核子囊孢子出现了A?a=5?3, 2?6, 6?
2, 4?4的多种分离的类型。
333(DNA复制过程中，新生单链DNA的延伸是从5’端向3’端方向进行的。 334(将提取的某种DNA分别置于含有与不含EB(溴化乙锭)的琼脂糖凝胶中电泳，发现其迁
移率不同。
335(真核生物染色体的端粒结构有效地防止了染色体DNA复制中5’端短缩的问题。 336(E. coli在色氨酸缺乏的条件下至少有三种调控机制被启动。
337(codon usage既有物种的共性规律，又有物种的个性特点。
338(一个真核生物的基因要在受体菌(E. Coli)中将到准确的表达，一般是:
1)用该基因的cDNA导入，而不用分离出来的DNA。
2)导入的cDNA必须与载体的某一基因的启动子和引导序列组成重组DNA。
3)载体分子的连接末端一般接上3种不同长度的人工聚合的同聚核苷酸对
P O
G
C
P O
GG
CC
P O
GGG
CCC
当外来的目的基因连接的末端径S酶(专化性酶切S.SDNA)消化后，与载体连接，1
导入受体细胞后，即可筛选到准确表达的克隆。
70
ser339. 已知AGA是Arg的密码，AGC是Ser的密码，你认为tRNA的反密码子是否可能为ICA,
为什么,
340(分离真核生物基因的方法，以提出mRNA后制备cDNA的技术为主，其中有两条技术路线。
其一，利用固定有poly u的亲合柱层析分离mRNA。
其二，(以Adh基因为例)将Adh酶纯化，制备Adh抗体，再与翻译体系混合，离心收
集复合物，然后使复合物解体从中分离mRNA，它们的理论据是什么, 341(利用分离到的mRNA制备成cDNA,但这种cDNA不能代表真正的基因，加以利用，必须将
它制成探针与总DNA进行分子杂交。才能获得真正的目的基因，这是为什么, 342(采用双脱氧法进行DNA序列分析时，A系统反应液中每一DNA片段的3’—末端都为A，
为什么,
343(一般都利用限制性核酸内切酶和连接酶将质粒DNA与目的基因构成重组DNA分子，理论
依据是什么,
344(将带有启动子和终止子在内的玉米Adh完整基因导入E. coli细胞内没有得到表达，其
主要原因是什么,
345(说明下列基因操作技术的分子遗传学原理。
A、运用Southern Blot技术在68?(High Stringency)的条件下杂交，洗膜，可以确
定真核生物单拷贝基因DNA酶切片段的电泳位置。
运用羟基磷灰石柱层析法法，对在50?(Low Stringency)条件复性的DNA分子进行层
析，可以分离出单拷贝基因的DNA分子。
BR322RRIBR322 B、E.coli的质粒P的Amp和Tct基因中分别具有PSt和 BamHI的切点，如果以P
I作外来目的基因的载体，制备目的基因的克隆，一般是将目的基因片段插入pSt或
BamHI的切口内。
C、载体分子的连接末端一般接上3种不同长度的人工聚合的同聚核苷酸对
P O
G
C
P O
GG
CC
P O
GGG
71
CCC 当外来目的基因的连接末端S酶(专化性酶切单链DNA分子)消化后，在连接酶作用下，1
与载体接头重组，导入受体细胞内，即可筛选到准确表达的克隆
346(Repetive gene 形成的三种假说。
347(复制型转座因子与逆转录型转座因子。
348(Prokaryotic promoter与Eukaryotic promoter的基本结构。
349(Enhancer与Attenuator的功能与原理。
350(paracodon与codon in codon的特点与功能。
351(Rifampin是RNA转录的抑制剂。
A C 352(反向重叠基， 同向重叠基因 各具有不同的基因表达方式。
B D 353(生活细胞内DNA分子在结构上的不均一性体现在:
dNt conformation, Helical form, Hydrogen bond, Superhelical direction,
Dnase Sensitivity, chromatin structure. 354(两种DNA分子的GC%相同，但Tm值不同。
值不同。 两种DNA分子的Tm值相同，但Cot1/2
两种DNA分子的Cot值相同，但Tm值不同。 1/2
两种DNA分子的经随机引物扩增的片段长度相同，但DNA Sequence不同。 355(Yeast的cyt. b gene在E. coli内不能表达。苏云金芽胞杆菌的ICP基因在E. coli内的表达量降低。
-11-4356(DNA复制的ε?10，蛋白质翻译的ε?10。
357(丝氨酸tRNA的anti-codon不会为ICU (AGA为Arg的codon, AGC为Ser的codon) 五、实验设计与分析
1.假定你在25?条件下用如下浓度的 DNase I:0，0.1，1.0及10.0mg,ml，对鸡红细胞细胞核的染色质进行酶切20分钟。将这些样品与分子量标记一起上样于6,变性聚丙烯酚胺凝胶，下图是凝胶电泳的结果。但由于你混淆了样品，因此弄不清每个泳道对应的样品是什么。惟一可以确信的是分子量标记上样于左边的泳道，但忘记了各带对应的分子量大小(图1.1)。
(l)请回忆起在各泳道分别使用的是哪一浓度的 DNase I?
(2)请指出分子量标记泳道(用 M表示)各带的大约分子量。
(3)描述各泳道所显示的染色质结构特征，证实所记忆的数字是正确的。
图1.1 DNase ?消化鸡红细胞细胞核染色质后的电泳图
2.从4种不同的物种分离出的核酸中各种碱基的比率(,)如下:
72
A+T(或A+G A+U) A T U G C C+T(或G+C C+U) 1 17 17 33 33 0.5 1.0 2 29 19 22 30 0.97 1.0 3 24 16 24 36 0.66 0.92 4 34 2.1 1.0
(1)对于每个物种，回答以下问题:
?核酸是 DNA还是RNA?
?它是双链还是单链?
(2)填充物种4中缺少的碱基百分比。
3(假定你从一新发现的病毒中提取了核酸。请用最简单的方法确定:
(1)它是 DNA还是 RNA?
(2)它是单链还是双链?
4. 某公司要招聘技术人员加入他们的抗病毒小组帮助设计新药对抗艾滋病病毒感染。 为了得到这份工作，要求应聘者设计一个方案来阻止艾滋病病毒基因表达但不影响宿主基因的表达。你能设计吗?
5. 假定你正在研究原核生物转座子 Tn1O，并已设计出一个很好的方法来确定 Tn1O在转座期间是否是通过复制还是不干涉 DNA复制直接移动。你的想法是根据这两种机制的主要不同点:如果不复制那么转座子的两条亲链将同时移动，如果复制则只有一条亲链移动(如图8.1)。你打算把来自两个不同 Tn10的链经退火后都标
图8.1一个转座子的复制与非复制转座
转座因子被示为一条杂合双链，由两条遗传上不同的链组成—条白色一条黑色。
在复制转座期间:一条链与供体 DNA留在一起，一条被转向受体DNA;非复制转座
时，转座子被从供体 DNA上切下，全部转到受体 DNA上
记上。为了把这些杂种 Tn10双螺旋足够地分配到细胞中。你用了含有 Tn10的λ噬菌体 DNA，它既能在体外操作又能包在病毒壳内成为有侵染力的噬菌体。你决定使用一个因为其他突变而失去活性的噬菌体基因组，因此它就不会复制整合，而且最终可被除去，这样噬菌体基因组可被忽略。你的噬菌体 DNA在同样位点插入了稍微不同的Tn10。两种 Tn1O都含有四环索抗性基因和乳糖代谢基因(lacZ)，但其中一种由于突变使lacZ 基因失活。这种差异为追踪两种 Tn10提供了一个很方便的方法，因为 lacZ+细菌克隆(与适当的
—底物共育时)会变蓝，而 lacZ克隆则还是白色。你把两种噬菌体 DNA的混合物变性后退火，得到两份相等的杂交双链与纯合双链的混合物(图8.2)。
图8.2把两种不同的含 Tn10的λ噬菌体基因组变性与复性后，杂交双链与纯合双链混合物的形成浅线
表示噬菌体 DNA，框表示 Tn10。两种 Tn10的突变不同点如黑片段和白片段所示
— 然后你将混合物包装到噬菌体外壳中，侵染 lacZ细菌，并把被侵染细菌涂布在含 四环素和可产生有色底物的平板上。一旦噬菌体 DNA进入了细菌，转座子将进入细菌基因组(频
73
率很低)，给细菌带来四环素抗性。获得一个 Tn10的稀有野生细菌，可以在选择条件下生存并形成克隆。统计大量这样的克隆会发现有25,为白色，25,为蓝色，50,为蓝色部分与白色部分的混合物。
(1)解释每种细菌克隆的来源并确定结果是否能说明 Tn10复制或不复制的转座机 制。 (2)你使用了一种无法修复 DNA错配的细菌菌株作为受体、来做这些实验。如果你用可以
修复错配的细菌菌株作为受体那么结果会有什么不同?
(3)λ噬菌体 DNA通过位点专一重组整合到细菌基因组上要比转座更常见，如果你用能复
制但不能整合的λ噬菌体突变体结果有什么不同?
6(分析比较细菌转座子的结构与特点。
六、分析题
1.有一个被认为是 mRNA的核苷酸序列，长300个碱基，你怎样才能:
(1)证明此RNA是mRNA而不是 tRNA或rRNA。
(2)确定它是真核还是原核mRNA。
2.如果两个RNA分子具有适当的序列以及配对恰当，就可以利用它们构建锤头型核酶。其中，“底物链”必须含有5?—GUN-3?(N代表任一种核苷酸)序列，而“酶链”则必须具有核酶催化中心的序列，同时与底物链配对。这样，酶链在 N核苷酸的3?端对底物链进行切割。提供适当的酶链，可以降解细胞中不能被锤头型核酶切割的RNA，这为把酶链作为阻断某些基因表达的治疗试剂提供了可能。例如，一些研究小组正在设计可以切割HIV RNA的酶链，将如何设计这种核酶的酶链?如何选择HIV RNA中的靶序列?该酶链应具有什么特点?另外，以RNA作为药物，将会碰到什么问题?
3(E. coli OH157生长得特别快。在正常(较差的环境)条件下，这些菌60-70分钟后分裂表明复制和细胞的分裂是连续的过程，一个仅在另一个完成后才起始。假如有机会生长在一个多汁的暖和的牛肉饼上，加倍的时间接近20分钟，这比复制过程所需的标准时间快 l倍。请解释原因。详细描述原核生物中 DNA的复制过程(如:结构和功能特征及一系列过程)。涉及多基因组拷贝的复制却没有发生碰撞，其复制机制如何?
4.图3.1中的 DNA片段两端为双链，中间为单链，上面一条链的极性已标出。
图3.1 一个具有单链缺口的双链 DNA分子
(1)下面一条链中所示的磷酸所连的是片段的5?端还是3?端?
(2)你能设想在细胞中这个缺口怎样在 DNA修复过程中被修复的?
(3)如果缺口在含有脱氧核营三磷酸和 DNA聚合酶的无细胞系统中被修复、那么底部那条
链将包括几个片段?
5.除了聚合作用外， DNA聚合酶 I还具有3??5?校正核酸外切酶的活性，在把错配碱基从新合成 DNA链末端切去的校正过程中发挥作用。为了鉴定这种活性，你制备了人工合成的
32polyA链和 polyT链作为底物，其中 polyT链上含一段P标记的 dT残基，同时其3?端还
3连了几个H标记的 dC残基，如图3.2所示。分别统计在没有任何 dTTP存在，DNA不可
74
能合成以及有 dTTP存在，DNA可以合成的两种情况下，标记 dT和 dC残基的丢失，结果如图3.3所示。
图3.2研究大肠秆菌 DNA聚合酶 I校正功能的人工底物
黑体字母表示被放射性标记的核苷酸
图3.3 DNA聚合酶 ?在含有(A)和缺少(B)dTTP时的校正功能
(1)为什么要用不同的同位素来标记 T，C残基?
(2)为什么在 dTTP不存在情况下，切除 T残基比切除 C残基需要更长的时间?
(3)为什么在 dTTP存在的情况下，没有一个T残基被切除，而无论是否有 dTTP， 残基
都被切除?
(4)若是加入了 dCTP和 dTTP。图3.3中的结果会改变吗?
6.大肠杆菌的 dnaB基因编码一个在复制叉上可将 DNA解折叠的解旋酶(DnaB)。已利用如图3.4所示的人工底物对它的特性进行了研究。实验方法是在多种条件下培养底物，然后把样品进行琼脂糖凝胶电泳。如果短单链 DNA与长的 DNA已退火结合在一起，那么泳动速率就会快些，但如果它已解折叠且已变性，则泳动速率就会慢些。把短链进行放射性标记就可选择性地跟踪它的迁移，然后用放射自显影检查它的位置。
图3.5所示为几个实验的结果，底物 l没有尾巴的杂交体，不被 DnaB解折叠(图3.5，第 1，第2泳道);但是有尾的底物和 DnaB、ATP在37?下温育同样能释放出大量解折叠的小片段(第6，第10泳道)。对于底物3，只有3?半片段是解折叠的(第10泳道)，所有的解折叠产物都绝对依赖于 ATP的水解。加 DNA单链结合蛋白(SSB)可在一定程度上加强这种解折叠(比较一下第5泳道第9泳道与第10泳道)。有趣的是， SSB必须在 DnaB加后3分钟加入，否则会抑制解折叠。
(l)为什么解折叠需要 ATP水解?
(2)DnaB沿长单链 DNA的哪个方向移动?这个方向和它在先导链还是后随链上的移动方向
是否一致?
(3)为什么在加入 DnaB前加入 SSB会抑制解折叠而在其后加人 SSB又会促进解折叠?
图3.4 用来检测 DnaB的底物
图3.5几个检测 DnaB解折校实验的结果，只有单链片段被放射性标记，
它们各自的位置已在图中标明
7.一个研究小组正在利用一个环状双链 DNA作为一种动物病毒的基因组来研究它的生命周期。实验的第一步是要确定复制区的位置，同时决定复制是沿起点的单向还是双向进行。为此目的，先分离出复制中的分子,用限制酶在一个位点切割病毒基因组使其成为一个线性分子，然后用电镜来观察所得到的分子。
8.实验结果表明所研究细菌的一个操纵子具有三个相似拷贝，它编码一个关键酶的亚基。由于没有检测到第三个碱基简并性(摇摆性)现象，由此说明接近的相同性(99,)是由于 DNA修饰作用的结果。请问这涉及哪些可能的机理?
9.根据对细菌限制和修复系统的知识，设计一个简单的实验来检测你收集的菌株是否有原噬菌体的存在。
75
10.大肠杆菌中的几个基因包括 uvrA、 uvrS、 uvrC和 recA都与紫外线损伤的修复有关，含有一个有缺陷的上述基因的大肠杆菌细胞系比起野生型细胞对紫外光的射线更敏感，就如图4.3A所示的 uvrA与 recA突变株。单个不同基因的突变可以成对联合起来形成所有可能的双突变体。比起单突变体，双突变体的敏感性变化很大。相对uvr单突
图4.3紫外光不同剂量作用下的细胞存活曲线
(A)野生型uvrArerA单突变体， uvrArecA硬朗双突变体的存活曲线 、
(B)uvrArecA存活曲线的放大图
变体，两个uvr突变形成的双突变体对紫外光的敏感性并无多大增加，但recA缺陷和任一种 uvr突变体形成的双突变体却使一个细胞株对紫外光极度敏感，如图4.3B所示的 uvrArecA双突变体放大图。
(1)为什么一个recA突变和一个uvr突变的结合会产生一个对紫外光极其敏感的细菌菌株，
而不同 uvr基因突变的结合却和单个突变没有差别?
(2)根据泊松分布，当一个细菌种群平均受到一个致命“轰击”，37,(e-1)的个体将存活下来，
2的剂量使37因为它们实际上并没有受到轰击。对于 uvrArecA双突变体，0.04J,m,
的个体存活(如图4.3B)。计算对 uvrArenA双突变体细胞株来说，多少嘧啶二聚体会组
6成致死轰击，假设大肠杆菌的基因组有4×10个碱基对，包括50,的GC，而且把 DNA
2暴露在400J/m的紫外线下，会使1,的嘧啶对(TT、 TC、 CT和 CC)变成嘧啶二聚
体。
11(除了uvrABC内切核酸酶修复、重组修复和 SOS修复，细菌还具备一种对嘧啶二聚体更
有效的修复系统。这个现象是在一个关于紫外线对细菌影响的调查中为了确定一个失控
的数量而发现的。发现过程可以假设为:
你与你的同事正试图利用紫外线作为诱变剂来分离大肠杆菌中的突变体，为得到足够的突
变子，你觉得有必要使用对细菌杀伤率为99.99,的辐射剂量。比起你的同事你已经获得
了更可靠的结果，而他要用10倍至100倍的辐射剂量才能获得同样的杀伤率。因为你常
在晚上他离开后才做实验，所以他有点怀疑你结果的可靠性，他坚持你早上来做一个平
行实验。当你们都得到同一结论时你们两人都感到惊奇，你有些懊恼，因为结果更接近
你同事的结论;当你在晚上重复平行实验时，你的同事对结果感到很惊奇，结果正如你
以前所描述的一样。
你发现在下午要取得同样的杀伤率需要用比早上更高的辐射剂量，晴天比阴天需要的剂量
高，你的实验室朝西，是什么因素影响着你的实验?
12(噬菌体 T4编码一个对重组和 DNA复制很重要的单链 DNA结合蛋白(SSB蛋白)。含有
编码 SSB蛋白温度敏感型基因的噬菌体 T4突变体在升高温度时会快速地终止重组和
DNA复制。
噬菌体T4 SSB蛋白是分子量为35 O00Da的单体蛋白，它和单链而不是双链 DNA紧密
结合，结合体中 DNA与蛋白质的重量比为 1?12。然而 SSB蛋白和 DNA的结合显示
出一个很特别的性质，如图4.4所示。当单链 DNA过量时(10μg)，而 SSB蛋白为0.5μg
76
时则完全检测不到结合体(图4.4A)，然而当 SSB蛋白为7.0μg时，可以看见许多二者的
结合体(图4.4B)。
(1)饱和的情况下，单链 DNA与 SSB蛋白分子的分子比为多少(单核苷酸的平均分子量为
330Da)?
(2)当 SSB蛋白和 DNA结合达饱和时，邻近的 SSB蛋白单链能收缩吗?假设结合时，一个
SSB单体绕 DNA延伸12nm，同时与SSB结合后，单链DNA中的碱基空间排布与在
双链 DNA中是否一样(即每3.4nm有10个核苷酸)?
(3)为什么SSB与单链 DNA结合对 SSB的量有很强的依赖性(图4(4所示)? 13. 大肠杆菌中 lacI基因的紫外诱导突变模式已被广泛地分析。图5.1所示为独立分离到的
错义(氨基酸替换)突变(线以上)和移码突变(读码框改变)突变(线以下)的总量，每类突变
的数量几乎都相等。错义突变可以通过对 lacI基因所编码蛋白(乳糖的阻遏物)功能的丧
失的情况来鉴定;而移码突变可以由基因融合进行测定，这种测定与 乳糖阻遏物的功能
无关。
(1)为什么在基因的尾部比在基因的中间有更多的错义突变?根据什么可以判定移码突变
或多或少地平均分布在整个基因上(除一两个“热点”之外)?
图4.4 噬菌体 T4 SSB蛋白与单链DNA的结合通过蔗糖梯度离心分析 SSB蛋白与DNA
的结合，发现 DNA较蛋白重得多，沉得快，因此更靠近梯度的底部
图5.1 大肠杆菌 lacI中紫外光诱导突变的模式
(2)对热点(图5.1 I)的 DNA序列分析发现，它的野生型序列为TTTTTC，而突变序列为
TTTTC。另一很普遍的突变(图5(1 II)是 GTTTTC向GTTTC的转变。对其他移码
的分析表明:它们几乎都是由于失去一个碱基造成的，没有发现插入。根据所知的
紫外损伤本质，请提出一个可以解释单碱基对缺失的分子机制。 14(由 MNNG(亚硝基胍)引起的诱变损伤的本质以及它从 DNA上被修复的机制可以用下面
的实验来鉴定。为了确定诱变损伤的本质，未经处理的细菌和已用低剂量 MNNG 处理
的
图5.2 层析法分离未被处理和已被低剂量 MNN0处理的细菌 DNA中被标记的甲基化嘌呤
实线表示未被处理细菌 DNA中的甲基化嘌呤;虚线表示MNNO处理的细菌所得结果
3细菌都在含50μg,mlH-MNNC的培养物中培养10分钟。分离它们的 DNA并水
解成核苷酸，然后经过纸层析分析放射性的嘌呤，结果如图5.2所示。
为了研究诱变损伤切除的机制，首先纯化负责切除的酶，把不同量的酶(分子量1900O)和
3已被H标记含0.26pmoI突变碱基的 DNA一起温育，分析切除动力学。在不同时间取
样，分析 DNA以确定还存在多少突变残基(图5.3)。当在5?而不是37?重复这个实验
时，虽然最初的切除速率较慢，却得到—样的终点。
(l)哪一种甲基化的是 MNNO的致突变作用位点?
(2)突变碱基中甲基的切除动力学有何特异之处?这是由于酶的不稳定造成的吗?
(3)计算每个酶分子除去的甲基数，看看计算结果是否有助于解释这种特异的动力学
77
15(已经分离得到一个所研究的特定基因内的一系列琉璃突变。如何利用这些系列突变证实
一个基因与它编码的多肽是共线性的?
3图5.3纯化的甲基转移酶把H标记的甲基从 DNA上切除所示为纯化酶的量 16(trp-1、trp-2、trp-3和 trp-4是链孢霉属不同基因中的突变，而且都导致色氨酸缺陷。这
些突变体对色氨酸合成途径的假设中间产物有如下反应:
trp-1 在添加邻氨基苯甲酸、吲哚甘油磷酸、 吲哚和色氨酸时能生长;
trp-2 添加吲哚和色氨酸可生长;
trp-3 添加吲哚甘油磷酸，吲跺和色氨酸可生长;
trp-4只有添加色氨酸时可生长。
问:色氨酸合成的可能途径是什么?
17.表5.1显示三种硫胺素(thiamine)缺陷型的链孢霉突变株效应的可能前体化合物。
请推测硫胺素的生物合成途径是什么。
表5.1 三种硫胺素的缺陷型在不同培养基上生长情况
生 长 于 存 在
基本培养基 噻唑 嘧啶 硫胺素
thi-1 - - - +
thi-2 - - + +
thi-3 - + - +
18.可衡量单个侵染周期中病毒数量增加的一步生长曲线对确定噬菌体和细菌相互作用基本参
数是很重要的，请思考下面 T4噬菌体的一步生长曲线。
107 少量(0.1ml)T4噬菌体的悬浮液(10个,ml)与100ml大肠杆菌的培养物(10个,ml)混在
一起在37?下共培养。混合后5分钟，两份被侵染的细菌重复样品中加入氯仿振荡以杀
死细菌，一份样品中加入溶菌酶破裂细胞，另一份不加酶，氯仿和溶菌酶对T4都无影响，
测定所有样品中噬菌体的效价，结果如图6.1所示。
图6.1 T4噬菌体的一次生长曲线
(1) T4与大肠杆菌培养物混合后的初始效价为多少?
(2)为什么5分钟后噬菌体的效价少于初始效价?
(3)解释为什么在没有用溶菌酶处理过的样品中噬菌体效价升高比较慢而最后却达到和溶菌
酶处理样品同样的水平?
(4)计算每个被侵染细菌中产生多少个噬菌体?
19(把少量 T4噬菌体与过量的大肠杆菌细胞系 B混在一起，然后在含—层厚营养琼脂细菌
培养基的表面上铺一层薄的软琼脂层，细菌长成一片连续的菌苔。但在被噬菌体侵染的
细菌到达的地方，噬菌体增殖并杀死周围的细菌，在云状的菌落中形成—个中圆形清晰
的“噬菌斑”。一种已观察到的病毒突变可以改变噬菌斑的形状，噬菌体 T4的“ r”突变体
首先被注意到，因为它们可以在大肠杆菌 B的菌落中形成更大的噬菌斑(r代表快速溶
菌)。 r突变体中的 r?类型在大肠杆菌菌株 K中并不形成噬菌斑，虽然它们可以起始
78
侵染大肠杆菌 K，但侵染不成功，不产生子代病毒。它们在大肠杆菌 B上可辨的噬菌斑
形态及无法在大肠杆菌 K中生长的特性，很早就被用于鉴定突变的一般性质和遗传密码
的三联结构。为进一步了解这些经典研究，绘出8个r?型突变子让你鉴别。首先，你做
了—系列斑点测试，用高浓度的突变1和突变分别侵染两个大肠杆菌 K平板，这样，每
个平板上大部分细菌都被侵染了，然后你在平板上依次滴一滴每种突变型和野生型 T4
噬菌体使之排列成环状。作为对照，你在一未被侵染的大肠杆菌 K平板上也做了同样的
处理，过夜培养后你观察如图6(2的结果。
这些结果很有意义，但你觉得迷惑。为了确定在清晰斑上出现的是哪种噬菌体，你从野生斑和突变5形成的清晰斑中收集一些噬菌体并检测它们的生长情况。如你所料。从野生斑上收集的噬菌体在大肠杆菌 B和 K上都可形成正常的噬菌斑。在突变5斑块上收集来的大多数噬菌体仍显示出突变体的性质:它们可以在大肠杆菌 B上形成 r噬菌斑，但不能在大肠杆菌 K上生长;但来自突变5斑块上的某些噬菌体却表现为野生型:它们可在两个细胞株中形成正常的噬菌斑，野生型出现的频率很高，不可能来自反向突变(回复突变)，因为反向突
一5-6-10 。变即使发生，频率也只有10
图6.2 多种 r?突变体的斑块测试
(1)为什么斑块试验中有的突变噬菌体混合物可以生长而有的不行?
(2)如果用突变3侵染大肠杆菌 K重复斑块试验，预计一下有怎样的生长模式。
(3)在突变5形成的清晰斑中少量野生型 T4是怎样产生的?
20(试证明一个基因中只有一条 DNA链作为模扳被转录。
21(经过测序分析，欲克隆的一段 DNA序列如下:
GAATTCCGGCGGCGGGGTTTTCATTATTATGATCGTTGACATGGGACAAGGGGC
TCCTATAATAGGTGC
ATTTGTAGGGGATGTGGCCACATGATAGCGCGTCGAGGCATTCAGGACCGATAT
TGTCATATTGCCAGC
ATGCTGCAGCGCGCCAACTTAGTTACAACTTATACGATGATTTTAAAAAAGAAT
ATCAAATAGCCATC
CACCCGAAAGACCACCGCAAGTATCGGTACGATCGTACCAGCACACACCACAG
TCGCCAGTCTGTTACC
AAATAATAAAGTTGATAATTAATTCACATCTACCTGGGTAACCCAGGTAGATGT
GAATTTTAGAATTC
这段序列被克隆到某多拷贝质粒的一个EcoR?限制性位点，并表达了一个小肽，请找出这
段序列中所含有的以下几个功能位点:
(l)两个EcoR?位点
(2)一个启动子
(3)一个转录起始位点
(4)一个转录终止子
(5)一个核糖体结合位点
79
(6)一个翻译起始密码子(
(7)一个翻译终止子
另请标出相应的调控序列及编码区的氨基酸。
22(现分离了一DNA片段，可能含有编码多肽的基因的前几个密码子。该片段的序列组成如
下:
5? C G C A G G A T C A G T C G A T G T C C T O T G 3?
3? G C G T C C T A G T C A G C T A C A G G A C A C 5?
(1)哪一条链作为转录的模板链?
(2)mRNA的顺序是什么?
(3)此mRNA能形成二级结构吗?
(4)翻译从哪里开始?朝哪个方向进行?
(5)此DNA最可能是从原核细胞还是真核细胞中分离的?
23(简述互补实验怎样区别突变是发生在 lac操纵子的结构基因上还是它的调控序列上? 24(用含中性碳源(例如甘油)的液体基本培养基培养 E(coli不能诱导lac Z操纵子。 一小时
后在培养基中加入乳糖和再隔一段时间加入过量的葡萄糖分别会对lac操纵子的表达有什
么影响?
——25(当 lacZ或 lacy突变体生长在含乳糖的培养基上时，lac操纵子中剩余的基因没有被诱
导，解释是何原因。
26(蜜二糖是 lac操纵子的弱诱导物，它通常在自己的透性酶作用下进入细胞。但如果细胞
在42?下生长，透性酶失去活性，则蜜二糖只有在lacY透性酶存在的情况下才能进入细
-—胞。这样，42?下lacY 和lacP的突变株不能在以蜜二糖为唯一碳源的培养基上生长。
如何通过这种特性分离lac操纵子的组成型突变?
27(图9.1绘出了基因组 DNA的一个区域和该区域相对应的 cDNA的限制性酶切图谱。 有
多少个内含子存在于该基因组 DNA上?
图9.1 —段基因组 DNA及其 cDNA的限制性酶切图谱
限制酶的字母缩写:B,BamH I;C.Cla I;H, Hind ?;R, EcoR I; S, Sal I AAA,poly(A)尾巴 28(现在对人类基因组的主要研究工作是进行基因组的序列测定。然而，有人根据人类基因
组是由重复序列组成为由。认为反复对同一种 DNA进行测序是不明智的。你能否拟定两
份计划，—份计划应保证仅仅单一序列 DNA被测序，第二个计划应允许仅仅转录的单一
DNA序列被测序。请简述你的两份计划。
29. 最初科学家是如何证明内含子两端的保守序列对正确剪接的重要性,
30(什么证据表明活性基因带有DNase I的超敏位点?
31(表面抗原的变异和哺乳动物免疫多样性都是 DNA重排的结果。锥虫通过 DNA重 排
选择表达所携带的一千多个不同的 VS,基因中的一个。而哺乳动物细胞则通过 DNA
重排产生成百上千个不同的抗体，包括与 VSG蛋白反应的抗体，尽管抗体在数量上的
优势，锥虫仍然能够成功地逃避宿主的免疫系统，为什么?
80
32(请解释酵母的交配型系统为什么可以作为DNA 重组、染色质结构对基因表达的调 控、
染色体结构域的保持、转录元件间的蛋白互作、基因表达的细胞类型特异性以及信号传
递激活基因的例子。
33(锥虫的表面抗原转变与酵母中的交配型转换有何相似之处?有何不同?
34(解释剂量补偿，在哺乳动物和果蝇中是怎样实现的?
35(列举证明雌性哺乳动物中 X染色体失活随机发生的证据。
36. 什么是可变剪接,它是怎样造成:
(1)在不同的组织中基因活性不同,
(2)单个基因翻译产生两个不同的多肽,
337(在RNA聚合酶的分析中，H—UTP作为标记的核苷酸，它的比活性是500μCi/μmol
63(1μCi=2.2×10计数,分钟)。温育10分钟之后，经三氯乙酸沉淀，用对H效率为60%
的液闪计数器测得放射险强度为692521计数每分钟。
(1)请计算掺入到RNA分子中UTP的量(nmol)。
(2)假定RNA分子中的尿嘧啶占30,，请计算RNA分子中掺入核苷酸总的纳摩尔数。
(3)如果 DNA摸板改用 poly(dGdC)，UTP是否可以掺入?
(4)如果新合成的RNA分子的核苷酸组成是:20%的 C，32,的G，30,的 U和18%的A，
写出转录的DNA链及双链DNA的核苷酸组成的百分比。
38(TF?A是5S rRNA基因表达所需的转录因子，这个蛋白含有9个锌指结构域，与5S rRNA
基因内的一段序列和5S rRNA本身结合。
(l)如何定位 TF?A蛋白的 DNA结合位点?
(2)什么样的突变可以证明锌指是 DNA结合所需的?
(3)有人发现 TF?A C端缺失19个氨基酸后与 DNA结合的能力与野生型一样，但是不能
激活5S rRNA基因的转录，请解释原因。
(4)XenoPus的卵母细胞中合成并贮存了大量的5S rRNA，随着5S rRNA的积累，TP?A与
之结合，这对5S rRNA基因的转录有何影响?调控这个过程的机制是什么? 39. 转录因子 SPl结合的序列是GGCGGG。图 11.1是 SV40早期启动子序列，其中有6个
用下画线标出的“GC”框。限制酶Nde ?和Sma ?的酶切位点也表示出来。请从该 DNA
片段和纯化的 SPl开始，详细描述如何用 DNase I定位出 SPl在 SV40早期启动子上的
结合位点。请注意说明起始物质是如何被标记的，以及所有必要的控制步骤，
如何利用这一信息揭示哪个位点对 SPl亲和性最高?
图 11.1 SV40早期启动子序列
40. 为什么被RNA聚合酶?识别的启动子不常见?
41. 什么是增强子?它们与其他调控序列有何不同?
42(在酵母中，上游激活序列是如何调控半乳糖基因的表达?
43. 最初科学家是如何证明内含子两端的保守序列对正确剪接的重要性,
44. 什么是可变剪接,它是怎样造成:
(1)在不同的组织中基因活性不同,
81
(2)单个基因翻译产生两个不同的多肽,
45(一段从E.coli中分离出来的DNA单链序列为:
5?—GTAGCCTACCCATAGG—3?
(l)假设mRNA是由这段 DNA单链的互补链作为模板转录而来， mRNA的序列怎样?
(2)如果转译从mRNA的5?端开始，将得到什么样的多肽(假设并不需要起始密码 子)?当
AlatRNA离开核糖体后，核糖体将结合什么样的tRNA,当Ala的氨基形成肽键后，
Ala如果有化学键断裂，是什么键?tRAN又将怎样?
(3)这个RNA可编码多少种不同的肽?如果以另一条 DNA单链作为模板，还会得到相同的
肽吗?
(4)假设这条 DNA链像 A中所说的那样被转录，但不知道用哪个可读框。请判断 这个
DNA是来自一个基因的头部?中部?还是尾部?
46(某研究小组正在研究单细胞纤毛虫——四膜虫的蛋白质合成，并获得有关四膜虫的一种
蛋白质C端氨基酸和核苷酸部分序列:
I M Y K Q V A Q T Q L *
AUU AUG UAU AAG UAG GUC GCA UAA ACA CAA UUA UGA GAC UUA
实验中遇到了一些困难，主要是不能利用网织红细胞(一种体外分析蛋白质合成的 标准系
统)的裂解产物来翻译经纯化的四膜虫mRNA。尽管 mRNA的质量很好，但翻译产物却
都是小分子多肽(图13.1，泳道1)。
(1)关于四膜虫蛋白质序列的数据有些什么不寻常之处?
(2)有人认为弱高分子量带是纯TMV mRNA在网织红细胞裂解产物中产生的你认为如何?
(3)解释一下单独加人四膜虫mRNA与四膜虫细胞浆同时加入情况下主 TMV蛋白质与次
TMV蛋白质比率变化的根据，四膜虫中的什么成分是四膜虫mRNA高效翻译所必需
的?
(4)这一结果在进化上暗示什么?
50(区别重叠遗传密码和非重叠遗传密码，何以证明遗传密码是非重叠的? 51(简述最初证明遗传密码一般性质的实验。
52. 在用 T4噬菌体 r?B 突变体进行的实验中， Crick和 Brenner将不同的单碱基插入或
单碱基缺失突变重组到单一基因型的菌株中。大多数双重突变体为野生型，而其他仍然是
r?B突变型，解释原因。
53. 在体外的蛋白质合成系统中，多聚(AC)刺激苏氨酸和组氨酸掺人多肽链，而多聚(AAC)
可产生多聚天冬氨酸，多聚苏氨酸和多聚谷氨酸。从中判断哪一个密码能被确定编码哪一
个特定的氨基酸?
54(MS2噬菌体含有一单链的RNA，既是染色体又作为信使。下面是编码蛋白质外壳基因开
始的一段序列及蛋白质外壳相应的 N端氨基酸序列:
密码 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
核苷酸 AUG GCU UCU AAC UUU ACU CAG UUC GUU CUC…
氨基酸 Ala -Ser -Asn -Phe -Thr -Gln –Phe -Val -Leu…
82
(1)为什么蛋白外壳的 N端没有甲硫氨酸残基?
(2)下列的突变将会对蛋白外壳的氨基酸组成有何影响?
?密码4中缺失一个 A。
?密码4中的 C缺失。
?密码6中的 U被 G替代。
?密码6中的 A被 G替代。
55(许多自发突变涉及 DNA中单碱基的置换，而且当它们发生在编码序列之内时可能引起
多肽中单个氨基酸的置换。当 Try被其他氨基酸替代时可能是由于哪些单碱基 的置换? 56(一种野生型E.coli，菌株的一种蛋白质的108位为Val残基，分离出三种突变体(A，B 和
C)发现它们在这个位置分别是 Gly,Glu和 Leu。A和 B的回复突变株中这个位置上的氨
基酸分别是Trp和 Lys，突变 C没有做进一步的实验，解释上述结果并推测六种菌株中
该位置上的密码。
57(上题中 A， B和 C中哪两个菌株的杂交将会由于108位密码内的交换而产生野生型重
组体?
58(在一个体外蛋白翻译系统， poly(UC)可被翻译成由 Phe和 Cys组成的蛋白，但其中没
有 Ala。1962年 Chapeville用拉内镍(Raney nickel)处理携带 Cys的tRNA，削弱了 Cys
与 Ala的连接，当这种被改变的氨酰tRNA用于体外系统中时， Ala能掺入蛋白中，解
释该结果的重要性，
59(种子在储藏过程中发生了某种变化，使得长成的水稻很容易被一种病原菌感染。据推测
可能是某一化学诱导的突变导致一个具有抗菌功能的关键酶丢失。请设计一个实验验证
这种推测是否正确，如何使种子重新获得对这种病的抗性?
提示:根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)具有通过其 Ti质粒将细菌 DNA带入植物基
因组的独特功能。
60(一个人类疾病基因被定位在7号染色体一段140kb的区域内，并已分离到此染色体区段
的克隆，但是并不知道该基因定位在此区域的哪一位置。可用什么方法找到该基因? 61(如何以大肠杆菌质粒 DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因，并使之在大肠杆 菌
中进行表达?简要说明实验中可能遇到的问题及可能的解决办法。
62(用BamH ?切割一重组质粒 DNA分子并从中分离纯化了两个 DNA片段，一段
长 400bp，另一段长900bp。现在希望将这两个片段重新连接起来，得到如图22(1所
示的结果。
于是将这两种片段混合起来，并在连接酶的存在下进行温育，分别在30分钟和8小时取样
进行凝胶电泳分析，令人惊讶的是，连接产物并非是理想中的1.3kb的重组分子，而是
一种复杂的片段模式(图22.2A)。同时发现随着温育时间的延长，较小片段的浓度逐渐降
低，大片段的浓度逐渐增加。如果用 BamH I来切割连接后的昆合物，则起始的片段可
以重新产生(图22.2A)。
从凝胶中分离纯化出1.3kb的片段，并取出一部分用 BamH I进行切割，以检查它的结构。
正如预料的一样，出现了两个原始的带(图22(2B)。但是用 ECoR I切割另一部分样品，
83
希望能够产生两个300bp和一个长度为700bp的核苷酸片段，然而，凝胶电泳的结果，令人惊奇(图23(2B)。
(1)在原始连接混合物中为什么有如此多的带?
(2)为什么用EcoR ?切割纯化的1.3kb连接物会产生那么多的片段?
图22.1 杂合基因的结构
图22.2 纯化DNA片段连接后电泳检测
63. 四膜虫是一种双核有纤毛的原生动物。小孩(微核)含有细胞染色体的主要拷贝，它 参与细胞的性接合，而并不在通常的基因表达中起作用。大核(巨核)含有细胞基因组的“工作”拷贝，由大量基因大小的双链 DNA片段(微染色体)组成，它们活跃地进行着转录。含有核糖体RNA基因的微染色体拷贝数很多，可以用梯度离心进行分离。
在电子显微镜下检查，每一个核糖体微染色体是一种长为21kb的线性结构。进行凝胶电泳时，核糖体微染色体的迁移也是21kb(图22.3的第一泳道)。但是，如果用限制性内切核酸酶 Bgl?切割微染色体，产生的两个片段(13.4kb和3.8kb)的总和不等于21kb(图32.3的第二泳道)，改用其他的限制性内切核酸酶切割，所产生的限制性片段
图22.3 四膜虫核糖体微染色体限制性分析数字指的是带的长度(kb)
的总和也都小于21kb，并且不同种酶切割产生的片段总和都不一样。如果把未经切割的微染色体先进行变性和复性处理，然后再进行凝胶电泳，所得到的双链DNA片段只有10.5kb(图22(3第三泳道);与此相似的是，将 Bgl?切割的微染色体进行变性和复性，电泳后，13(4kb的片段被6(7kb的片段所 取代(图22(3第四泳道)。请解释为什么限制性片段的总长度不等于21kb?为什么变性和复性之后电泳的结果有所改变?对于核糖体微染色体中的总序列组成你有什么看法?
64(X染色体的失活是一种独特的发育调控机制，它关闭了整个染色体上的所有基因的表达。
8在人类 X染色体中，失活作用涉及到1.5×10以上的碱基对和几千个基因。在女性中，两条 X染色体中的任何一条失活所造成的 X连锁基因的表达与正常男性单个 X染色体上基因表达的结果是相同的。虽然失活的机理仍不了解，一般认为失活作用是在染色体的特定区域即 X失活中心开始的，然后扩散到染色体的其他部分。
虽然失活染色体上的大多数基因被关闭了，但少数仍有活性，因此，可以推测 X的失活作用与 X连锁基因的表达模式有关。为了验证这种推测，分离了大量的人的 X染色体基因的 cDNA并用 Northern印迹法检查它们的表达。比较了这些基因在 X染色体正常的男性和女性细胞中的表达、在 X染色体异常的男性和女性个体中的表达、以及在啮齿动物:人细胞杂交株中的表达，这种杂交株保留了一个失活的人的 X染色体(Xi)或是一个有活性的人 X染色体(Xa)。
在四种 cDNA中，发现了三种表达模式， A、 B、 C三种 cDNA示于图22.4。
图22(4来自于不同细胞中不同数目、不同类型 X染色体的 Northern印迹分析 RNA先进行凝胶分离，吸印到硝酸纤维素膜上，同 A、B、 C三种 CDNA混合探针进行杂交，
84
最后进行放射自显影。对应于基因 A、 B、 C的RNA带的位置是通过不同实验决定的
(1)指出每一种表达模式中表达的基因是来自于活性染色体、非活性染色体，还 是二者
都有。哪一种是最普遍的，哪一种是最特殊的?
(2)根据不正常个体细胞的结果，归纳出一条规律以说明在 X染色体失活过程中，有多少
染色体被失活，多少保留活性。
65(许多引起人遗传病的突变都是由单个核苷酸的取代而造成的。寡聚核苷酸的连接作用可提供一个快速检测单个核苷酸差异的手段。这种分析方法要使用成对的寡聚核苷酸:其中一个被生物素标记，另一个具有放射性标记或荧光标记，图22(5B的一对寡聚核苷酸是为了检测镰形细胞白血病(图23(5A)而设计的。
在分析过程中，分别将不同个体的 DNA在有 DNA连接酶的存在下，两两配对进行寡聚核苷酸杂交。将生物素酰化的寡聚核苷酸结合到固相支持物的抗生物素链霉蛋白上，然后通过放射自显影检查杂交结果，如图22.4C所示。
AsAs与β寡聚核苷酸会同时与ββ DNA杂交吗? (1)你认为β
As (2)这种分析是怎样区别ββDNA的?
图22.5寡聚核苷酸连接分析
sA (A) β球蛋白基因的β镰形细胞(β)突变区的序列。(B)用于连接分析的特异性的寡聚核苷酸;(C) βs与β之间单个碱基差异的检测分析，将生物素酰化的寡聚核苷酸收集在一个点，然后测定放射性 66(RFLP能够用于跟踪特定染色体区域的遗传。在一定的条件下，可用靠近缺陷基因的RFLP来测定末出生胎儿是否有基因缺失。一对夫妇来进行遗传咨询，他们的第二个孩子出生后不久死于一种遗传性疾病，母亲又一次怀孕了。已夭折的孩子是家系中受此遗传病影响的第二例，另一例是孩子奶奶(父亲的妈妈)的一个兄弟。这对夫妇想知道这次所怀的孩子是否也有这种遗传病。你已经研究过这种病的遗传性，并且知道是由常染色体的隐性基因所引起。在这种致病基因所处的染色体区内，发现整个人群中有几个限制性位点的多态性，如图22.6A所示，多态性位点用符号表示。你分离了双亲、祖父母、以及正常孩子的 DNA样品，并用限制性图谱来分析它们的特性，结果示于图22.6B。现在开始检测胎儿，请预测什么样的限制性酶切 结果表明很可能具有遗传病?
图22.6 携带有致病基因染色体的限制性图(A)及来自不同家族成员的限制性模式(B)
在(B)中，A、B、C表示多态性位点，圆圈代表女性，方框代表男性，三角代表末出生的孩子 67(你打算将一个具有Kpn?末端的 DNA片段克隆到具有 BamH?末端的载体中。问题是 BamH?和Kpn?的末端是不匹配的，BamH?是5?突出端，Kpn ?则是突出的3?端(图32(7)。一位朋友建议用图22.7所示的寡聚核苷酸“片段”来进行连接。你并没有马上意识到这种方法是可行，因为你想到的连接作用需要邻近的5?磷酸和3?羟基。虽
图22.7 用一种寡聚核苷酸片段连接不互补的限制性末端的图解
然寡聚核苷酸分子被限制性内切核酸酶切割后会产生合适的末端，但是，合成的寡聚核
85
苷酸的末端都是羟基。另外，虽然图22.7中接头是BamH?-Kpn?，但另一个接头却是
Kpn?-BamH?，你怀疑相同的寡聚核苷酸是否能够适合这两种方式的连接。
(1)画出Kpn?-BamH?结合体和所需要的寡聚核苷酸片段的图，这种寡聚核苷酸 与图
22.7所示的是否相同?
(2)画出用连接酶处理过的分子图，指明被连接的缺口。
(3)你朋友的图解方法有效吗?
68(λYES(酵母—大肠杆菌穿梭载体)是构建 cDNA文库的高效载体，这种载体是λ噬菌体基
因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制的质粒巧妙结合而成，它兼有病毒和质粒载体
的优点。 cDNA被插入载体的质粒部分，然后它能在体外被包装人病毒颗粒中，包装起
来的载体感染大肠杆菌的效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌，λYES中的质
粒序列能够被诱导重组出λ基因组，并进行独立复制，这就可以从质粒中分离出来，以
便进行进一步的遗传操作。
为了最大限度地提高克隆效率，载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶Xho ?
(5’C?TCGAG)进行切割，然后在 dTTP存在的情况下、同 DNA聚合酶一起进行温育。
将一种具有平末端的双链 cDNA同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接
头连接起来，这两段寡聚核苷酸的序列是:5?—GGAGATTTACC和5?—GGTAAATC，
它们的5?端都是磷酸。然后将载体和 cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用2μg的
7载体和0.1μg的 cDNA，构建了一个有4×10个克隆的 cDNA文库。问:
(1)假定载体长为43kb， cDNA的平均长度是 1kb，请估计在连接混合物中，载体 分子同
cDNA的比例是多少?
(3)在此过程中，载体分子转变成重组体的频率是多少(每对核苷酸的平均分子量是660Da)?
(3)说明怎样处理载体和 cDNA分子，才能把它们连接到一起。处理过的载体本 身能自
连吗? cDNA呢,
(4)载体和 cDNA分子要经过怎样的处理才能提高产生重组 DNA分子的效率?
(5)能够用 Xho ?从重组质粒中切出 cDNA吗?
69(一个癌基因，从序列上看似乎编码一个转录因子。当放在细胞中表达时，该基因的产物
是完全不溶的，这阻碍了对其功能的直接检测，免疫染色表明，这种蛋白定位于细胞核
内，如同推测的一样，是一种转录因子。如果能够测出它所结合的 DNA 序列，就可以
通过现有的序列资料中查找已知基因启动子的天然位点，从而能够找到它所调节的基因。
有人建议用 PCR扩增同该蛋白结合的微量 DNA，思路(图22.8)是:(l)合成一组长为26
个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体，在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为
PCR扩增的引物位点(图22.8A);(2)把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取
物中，转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合;(3)用转录因子特异的抗体分离
同转录因子结合的寡聚核苷酸;(4)用 PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。
按照这一思路，用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验，这个寡聚核苷酸可
以同一个 PCR引物结合成部分双链，经过如图22.8B所示的四轮选择和复制后，用BamH
86
?和 EcoR ?消化分离到的 DNA，将片段克隆到质粒中去，并测定了10个独立的克隆
(表22.1)，问:
(1)转录因子结合的保守序列是什么?
(2)结合的保守序列具有对称性吗?也就是说，具有回文结构吗?据此，能否判断转录因子是
以单体还是以二聚体的形式同 DNA结合?
(3)在0.2ng的样品中有多少单链的寡聚核苷酸?(一个核苷酸的平均质量是330Da)。
图22.8用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的 DNA序列
A(用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸， N代表任何一种核苷酸; EcoR?和BamH ?位点有利于选择 DNA的克隆和序列分析。 B.同序列特异的 DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案
表22.1 10个克隆的序列
GAATTCGCCTCGAGCACATCATTGCCCATATATGGCACGACAGGATCC
GAATTCGCCTCTTCTAATGCCCATATATGGACTTGCTCGACAGGATCC
GGATCCTGTCGGTCCTTTATGCCCATATATGGTCATTGAGGCGAATTC
GAATTCGCCTCATGCCCATATATGGCAATAGGTGTTTCGACAGGATCC
GAATTCGCCTCTATGCCCATATAAGGCGCCACTACCCCGACAGGATCC
GAATTCGCCTCGTTCCCAGTATGCCCATATATGGACACGACAGGATCC
GGATCCTGTCGACACCATGCCCATATTTGGTATGCTCGAGGCGAATTC
GAATTCGCCTCATTTATGAACATGCCCTTATAAGGACCGACAGGATCC
GAATTCGCCTCTAATACTGCAATGCCCAAATAAGGAGCGACAGGATCC
GAATTCGCCTCATGCCCAAATATGGTCATCACCTACACGACAGGATCC
注:画线的序列是 PCR引物部位，两种序列都是从BamH ?末端开始，所有序列中结合位点的方向都是相同的。
(4)假定实验开始时所用的寡聚核苷酸混合物中，每一个中心部位的26个核苷酸组成确实是
随机的，那么有没有可能所有长14bp的序列都存在于开始的样品中呢? 70. 打算将一个 cDNA克隆到一个表达载体，以便在E.coli中大量制备相应的蛋白质。 这个
cDNA的两侧具有 BamH ?的位点，因此计划将它从BamH ?的位点插入载体中。实
验严格地按照克隆
手册
华为质量管理手册 下载焊接手册下载团建手册下载团建手册下载ld手册下载
中的方法进行:载体用BamH ?切割以后，立即用碱性磷酸酶处
理，除去5?磷酸。接着将处理过的载体同用BamH ?切割的 cDNA片段混合，加入DNA
连接酶后进行温育，连接之后，将 DNA同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细
胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生
索的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。
实验中同时设置了4个对照:
对照1:将末同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上;
对着2:将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上;
对着3:将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有 cDNA片段)的载体转化
过的细菌细胞涂布在培养平板上;
87
对照4:将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用 DNA连接酶连接(但没有 cDNA片段)的载
体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到
无法计数的菌落(表22.2)。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一 次，所有
的平板上都没有菌落生长(表22(2)。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子(表
22.2)。从实验平板上挑出12个菌落，分离了质粒 DNA，并用BamH ?进行切割，其中
9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带，另三个克隆中切出一个 cDNA片段，实
验终于获得成功。
(l)你如何看待第一次的实验结果?对照 1的目的是什么?
(2)影响第二次实验结果的原因是什么?对照2的作用何在?
(3)对照3和4各有什么作用?
(4)为什么要用碱性磷酸酶处理载体?
表22.2 cDNA克隆的结果
实验结果 制备的样品 1 2 3
对照1 只有细胞 TMTC 0 0
对照2 未切的载体 TMTC 0 >1000
对照3 省去磷酸酶处理，无cDNA TMTC 0 435
对照4 无cDNA TMTC 0 25
实验样品 TMTC 0 34
注:TMTC=too many to count, 多到无法计数
71. 打算在细菌中表达一种稀有的人类某种蛋白质，以便能够大量制备这种蛋白。为确保分离
纯化，决定将一段6个组氨酸的短肽加到该蛋白质的 N端或 C端。这些带有组氨酸标
2+签的蛋白质能够紧紧地同 Ni柱结合，但很容易被 EDTA或咪唑溶液洗脱。此法可以一
步完成大量蛋白质的纯化。
图22.9是编码该蛋白的核苷酸序列。请设计一对 PCR引物，各含有18个同该基因同源的核苷酸，能够用于扩增该基因的编码序列，另外，在 N端有一个起始密码，其后是6个组氨酸密码子。另设计一对引物，能够在C端加上6个组氨酸和一个终止密码。
图22.9 欲修饰蛋白质的 N端和 C端的核苷酸序列
编码的氨基酸序列用一个字母标在下面。星号(*)代表终止密码。
此图只标出了双链 DNA上面的一条链
72(从E.coli中分离到一种hemA突变体，这种突变是不可恢复的，并且需要生长在琥珀酸
的平板上才能利用δ—氨基乙酰丙酸合成血红素。希望利用该突变体去克隆E.coli的
hemA基因。首先用Sau3A部分酶切E.coli的 DNA，得到的 DNA片段平均为2kb，然
后将这些片段从BamH?位点克隆到质粒 pBR322中，连接后转化 hemA突变体。根据
氨苄青霉素抗性来选择重组体。将筛选到的氨苄青霉索抗性克隆重植在加有δ—氨基乙
88
r酰丙酸的平板上进行测试。请问:已经测试的 Amp抗性转化子中有多少不再需要在培养基中添加琥珀酸?( E.coli基因组的全长为4500kb)
73(raf—1基因编码一种对脊椎动物的发育有重要作用的丝氨酸,苏氨酸蛋白激酶。在果蝇中，当这个基因有缺陷时，胚胎在囊胚期的发育还是正常的，但此后的发育是不正常的，形成一个断尾的胚，也就是缺少后面的四段。在脊推动物中，成纤维细胞生长因子(FGF)刺激中胚层的诱导和后期的发育，同时认为， Raf-1蛋白参与了由FGF启动的信号传递。 Raf-1蛋白由两部分组成，一部分是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域，即分子的 C端(占该分子的1/2)，另一部分是N端的调节结构域，这个结构域在没有接受合适信号的情况下，抑制蛋白激酶的活性。
为了检查 Raf-l的作用，按照方案设想，改变了ATP结合区的一个关键氨基酸残基，构建一个显性负作用的raf—cDNA。这种突变的 cDNA编码一个有缺陷的激酶蛋白质，命名为 NAF(没有功能的 Raf)。从 raf-1 cDNA和 NAF的 cDNA制备了RNA，并将它们单独地或混合地注射到2—细胞蛙胚胎中，以确定它们对蛙发育的影响。实验结果列于表22.3中。在某些注射体中，短尾的表型非常明显。
表22.3 raf-1和NAF RNA对 2-细胞蛙胚的注射
蝌蚪的表型 总存活注射物质 其他异常数 正常(%) 短尾(%) (%)
raf-1 RNA 94 75 0 25
NAF RNA 80 40 36 24
raf-1 and NAF RNA 93 73 5 22
水 101 92 0 8
未注射 80 99 0 1 (1)请问实验结果能够提供证据证明 Raf-l参与脊椎动物后期发育的假设吗?如果可以，那
么它们是怎样证明的?
(2)请对 Raf—1蛋白进行一些描述，并提出为什么 NAF可以作为显性负作用蛋白的看
法。
(3)为什么raf-1 RNA和NAF RNA混合注射产生短尾表型的频率较低,
七、问答题
1(阐述原核生物的转录终止。
(1)转录终止的两种主要的机制是什么?
(2)描述翻译怎样能调节转录终止。
(3)为什么在细菌转录终止中很少涉及到Pho因子?
(4)怎样能阻止转录的终止?
2(复制 DNA的聚合酶(DNA依赖的 DNA聚合酶)也有校正功能，解释为什么RNA聚合酶没有这种功能。
89
3(讨论原核生物基因表达的聚合作用反应定向的重要性。假如核糖体从3?端到5?端读它的模板 mRNA的话，那么将会发生什么情况?
4(概括细菌细胞内的转录过程。
5. 概括典型原核生物启动子的结构和功能，并解释什么是保守序列。 6(转录如何在基因或基因组末端终止?
7((1)如何区分由启动子起始转录的RNA片段与5?端被加工过的RNA片段;
(2)证明多肽是从氨基端到羧基端方向合成的。
8(比较 E(coli rRNA和 tRNA的转录和加工。
9(区别可诱导和可阻遏的基因调控。
10(衰减作用如何调控E. coli中色氨酸操纵子的表达?
11(比较并指出细菌和真核生物RNA 翻译机理的异同。
12(什么是摇摆假说?
13(指出E.coli和真核生物翻译起始的不同。
14(S(N Cohen于1973年构建了三个重组体， pSC102， pSC105， pSC109请说明这三个重组体是如何获得的?各说明了什么?
15(基因克隆是如何使含有单个基因的 DNA片段得到纯化的? 16(什么是细菌的限制—修饰系统(restriction-modificaton system, R-M system)
17(细菌的限制—修饰系统有什么意义?
18(说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。
19(?类限制酶具有哪些特点?在基因工程中有什么作用?
20(?类限制酶有哪些特点?
21(何谓限制性内切核酸酶的切割频率?
22(什么是限制性内切核酸酶的星号活性?受哪些因素影响?
23(双酶消化法(double digests)绘制限制性内切核酸酶酶谱的原理。 24(什么是 DNA多态性(DNA polymorphism)? 25(限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)。 26(计算下列三种酶各自在某染色体 DNA序列上识别位点间的平均距离:
Alu ?:5?AGCT 3” EcoR ?: 5?GAATTC 3?
3 TCGA 5’ 3’CTTAGG 5’
Acy?:5?GPuCGPyC 3?
3’CPyGCPu5’
(注: Py=任何一种嘧啶; Pu=任何一种嘌呤)
图15.1酶切电泳图谱
1,2:Hind? 切割;3,4:,coRV 切割;5,6:Hind ?+,co RV;
1、3、5是质粒 DNA: 2、4、6是15号克隆。
R27(在细菌质粒 pBP1的四环素抗性基因 tet的中间有一个Hind?的切点。用Hind? 切割果蝇基因组 DNA，以 pBP1为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆15带有果蝇的
90
目的基因。用Hind?和EcoRV对克隆15进行了酶切分析，电泳结果如图15.1(用酶切的
pBP1质粒DNA作对照)，旁边标出了片段的大小。
(1)绘制含有插入片段和不含插入片段时的 pBPl的限制性图谱，并标明四环素抗性 基因
的位置—;
(2)如果用克隆在另一个与 pBP1完全不同源载体上的四环素抗性基因作为探针，进 行
Southern印迹杂交，预测上述电泳图会出现什么样的杂交带?
(3)如果用克隆15的果蝇 DNA片段作为探针进行 Southem印迹杂交，放射自显影 的结
果又是如何?
28(为什么大多数内切酶被称为“限制”酶。
29(据Science杂志报道:一种重要的遗传疾病可由导致 DNA中碱基替换的诱变剂在体外进行
人工诱导。设计一种快速用以鉴定疾病基因型的检测方法。
3
31(1967年，有5个实验室几乎同时独立发现了DNA 连接酶，每个实验室的实验有什么特
点?
32(简述 DNA和RNA连接酶的催化反应机制。
33. 影响 DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些?
34(什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?
35. 如何利用 T4 DNA聚合酶制备3?隐含末端或双链平末端?
36. 如何利用 T4 DNA聚合酶进行双链 DNA的3?末端标记?
37(如何利用 T4 DNA聚合酶制备平末端?
38(反转录酶有两种类型，一是来源于禽类骨髓母细胞瘤病毒(AMY, aviam myeloblastosis
virus)，另一种来源于鼠类莫洛尼氏白血病毒(M—MLV，Moloney murine leukemia virus)，
它们之间有什么不同?
39(与E.coli RNA聚合酶相比，细菌噬菌体的 SP6RNA聚合酶、 T7 RNA聚合酶和 T3 RNA
聚合酶具有哪些优越性?
40(什么是多核苷酸激酶的向前反应和交换反应?
41(细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同?在基因工程中有什么用途?
42(λ外切核酸酶(lambda exonuclease)基本活性是什么?在基因工程中有什么应用?
2+2+43(Mn、 Mg对 DNase ?(deoxyribonuclease ?)的活性有什么影响? DNase ?在基因工
程中有什么作用?
44(比较 S1-Mapping和 Footprinting在原理上、方法上、应用上有何不同?
45(什么是复制子(replicon)?
46(什么是质粒的相容性?什么是不相容群?机制是什么?
47(什么是质粒的带动转移?
48(说明变性定位法和限制性内切核酸酶定位法研究质粒复制起点的原理。
49( Co1El衍生质粒拷贝数调节机理的机理是什么?
91
50( R1质粒拷贝数受到怎样的调节控制?
51(质粒如何维持在细胞中的稳定?
52. 引起质粒不相容性的主要原因是什么?
53(由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全，进行 严格的监控，质粒载体的安全性是十分重要的。请问质粒载体的安全条件包括哪几个方面? 54(请指出质粒 pSC101的一些生物学特性(包括结构和遗传)及在基因工程中的作用。
55. 自然界中具备理想条件的质粒载体为数不多，即使是 Co1E1和 pSC101这两个自然质粒也不尽人意，通常需要进行改造，请问质粒改造包括哪些基本
内容
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? 56. 质粒改造的发展过程如何?
57. 在质粒中如何增减酶切点?
58(有人用限制性内切核酸酶EcoR I分别切割松弛型质粒 Co1E1和严紧型质粒 pSC101(各有一个切点)，然后重组连接形成一个杂种质粒 pSC134，请推测这种质粒有什么特性和用途。
59(现分离了4种新的大肠杆菌 Hfr菌株，通过中断接合实验，针对每一菌株确定了高频转
—移的标记基因和它们进入 F受体的时间分别为:
Hfr1 Hfr2 Hfr3 Hfr4
m1m2ly1p6 an 3min al 9 s 6 ur
trm1atr6 9 3 p et 4 rg p 标记基因和hi2thmth3第一次进入的时间 4 2 s 3 r al r 1
pu2hi3la23 ur vr 0 s 2 c 3
g1 al 4
(gal、lac、mal、man不能发酵半乳糖、乳糖、麦芽糖和甘露糖;arg、his、met、trp 生长需要精氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、嘌呤和色氨酸;uvr:紫外线敏感)。任何没有给出的标记都是不能高频转移的。上述数据能够说明大肠杆菌的染色体是环状的吗?以分钟表示图距构建一个大肠杆菌染色体的连锁图。假定整个染色体用了100分钟转移，而且苏氨酸被认为位于0分钟或10O分钟处。
60(YAC克隆载体常出现哪些问题?
61(为什么野生型的λ噬菌体 DNA不宜作为基因工程载体?
62(什么是蓝白斑筛选法?
63(蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性?
64(什么是c?筛选法?
65(λ噬菌体载体具有哪些优点与不足?
92
66(什么是 M13的IG序列区?有何特点和功能?
67(将野生型的 M13改造成基因工程载体，首先是进行酶切位点的改造，请问 M13中的EcoR
?最初是如何引入的?
68(以置换型λ噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说能够形成噬菌斑的就一定是重组体?
69( M13系列载体具有哪些优缺点?
70(粘粒载体具有哪些特点与不足?
71(辅助噬菌体 DNA和相应的噬菌粒是如何协同工作的?
72. 克隆的 DNA在质量上有什么要求?
73(为什么从细胞中分离 DNA时往往会断裂?
74(为什么苯酚要重蒸饱和后才能用于 DNA的分离?
75(为什么氧化变色的酚不能直接用于DNA的分离?应如何处置? 76. 在DNA分离过程中，酚通常与氯仿联合使用，即使不联合使用也要在苯酚抽提后用氯仿
再抽提一次，为什么?
77. 说明溴化乙锭—氯化钩密度梯度离心(ethidium bromide-caesium chloride gradient
centrifugation)纯化DNA的原理。
78. 采用什么措施保证 DNA化学合成的定时性和专一性?
79(何谓简并引物(degenerate primer)?
80(简并引物设计的一般原则是什么?
81(双脱氧法(dideoxynucleotide method)测序的基本原理是什么?
82(在古生物学中，尚不知道恐龙是否是温血爬行动物，而不像今天的变温爬行动物。 假
如你得到一些恐龙的 DNA，你如何通过 PCR和基因克隆来检测恐龙是否是温血 爬行
动物?
83(如果知道某一基因的功能及其相应的蛋白质的氨基酸序列组成，可以通过何种方法 克
隆该基因?
84(何谓定位克隆(positional cloning)?
85(何谓染色体步移(chromosome walking)?
86(在染色体步移中，用哪些方法获得克隆的末端?
87(何谓表型克隆(phenotype cloning)?
88(什么是基因文库?
89(什么是基因组文库(genomic librarY)?构建基因组文库，涉及哪些基本过程?它同遗传学上
的基因库有什么不同?
90(什么是 cDNA文库(complement DNA libraly)?同基因组文库有何差别? 91(粘性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出 这些
不足之处，
92(什么是同聚物加尾连接法(homopolymer tails joining)?用何种方法加尾?具有哪些优缺点?
93(何谓接头连接法(Iinker ligation)?
94(什么是同裂酶?为什么说用同裂酶进行体外重组效率最高?
93
95(如何使用甲基化酶对克隆 DNA进行保护?有什么意义?
96(何谓稀有酶?(举例说明)
97(为了大量获得许多用于生化鉴定的产物，你想将拟南芥中的一个序列已知、编码单体酶
蛋白的基因在单细胞微生物中表达，你如何确保最终能得到产物?
98(若在进行 DNA重叠群分析时，你发现在一个编码有价值但不稳定蛋白质的可读框 之后，
紧接着另一个可读框，它可在蛋白质的 C末端加上一个稳定结构。举出至少两种获得被
修饰蛋白产物的方法。
rr99(某一质粒载体具有 Tet和 Kan的表型，在 Kan抗性基因内有一Bgl ?的切点。现用Bgl ?
切割该载体进行基因克隆，问:(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培养后长出的菌
落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插人片段的重组体?
100(限制性内切核酸酶 Bam H ?和 Pst ?切割某一DNA序列，结果示于图20.1。
图20.1 BomH ?和Pst ?识别序列处的切割，只显示识别位点的核苷酸序列
(1)指出被切割 DNA分子的5?端和3?端;
(2)如果你将切割后的 DNA同 DNA聚合酶、4种 dNTP 在一起温育，这些DNA末端会
有什么样的变化?
(3)经过 B中的反应后，你还能够用 T4 DNA连接酶将BamH ?末端连接起来吗? Pst ?
末端呢,(T4DNA连接酶能够连接平末端和黏性末端)
(4)(3)中的连接后，能够重新形成BamH I位点吗,Pst I位点呢,
101(什么是遗传学检测法?
102(以 pBR322 DNA作为载体，从四环素抗性基因区克隆外源 DNA时，可采用环丝氨酸
富集法筛选重组体，说明其基本原理和基本操作过程。
103(放射性抗体检测法(radioactive antibody test)的基本原理是什么?
104(何谓液相杂交?举例说明在分子生物学中的应用。
105. 什么是活体标记法(in vivo labeling)?
106. 单链RNA作为探针，具有哪些单链 DNA探针所没有的优点?
107. 什么是随机引物(random primer)?如何标记 DNA?
108(良好的固相支持物必须具备哪些优良特性?
109(以硝酸纤维素滤膜(nitrocellulose filter membrane)作为杂交的固相支持物具有哪些优缺点?
110(什么是印迹(blotting)杂交?
111(什么是斑点杂交(dot hybridization)与狭缝杂交(slot hybridizatlon)?
112(什么是原位菌落杂交(colony hybridization)?
113(说明 Southern杂交的原理和方法。
114(Northern印迹与 Southern印迹有什么不同?
115(建立了一个基因文库后，如何鉴定一个携带目的基因的克隆? 116(说明原核生物基因表达的正控制诱导型(positive inducible control)和负控制阻遏
型(Negative-represible control)调控的遗传机理。
94
117(一个四核苷酸序列的DNA分子，经羟胺处理后，再经过两次复制，会产生什么样的DNA
分子,(5分)
118(有一段多肽链的C端氨基酸残基的Tyr-Pro-Asn-Val-Thr-Cys-Glu,其对应的DNA序列为
(SS-1) GATAAGCGTGCATGTAAGCCCCAT
(SS-2) CTATTCGCACGTACATTCGGGGTA
68119. 已知E.Coli基因组DNA含有4.2×10bp，Cot/2为4。鸡管状细胞内DNA含有7×10，
其复性动力学曲线为:
请求出鸡细胞DNA中，中度重复序列组分每一重复单位的核苷酸,及重复频率, 120. 将一个重组质粒PMR分别感染三个被λphage溶原的E. coli菌株(三菌株的差别为λ1
——phage的pRoR区段分别为或w.t 或oR或oR)，培养于含ONPG(邻硝基苯—β—12
半乳糖苷)的培养皿中，在加入不同的IPTG(异丙基—β—D—硫代半乳糖苷，类似于
乳糖，作为效应物分子)的培养皿中，检测被LacZ酶分解ONPG的黄色色度，并换算
成Z酶酶活，请根据测定结果判断这三条曲线分别代表哪一个测验菌株,为什么,
8121. 某一生物DNA的chemicai complexity=8.82×10bp，复性动力学研究表明约有40%的
DNA其Cot=5, 请较详细地说明这部分DNA的特点。 (1/2)
8(E. coli DNA kinetic complexity=chemical complexity=4.2×10bp，Cot=4) (1/2)
122(分别说明λ phage以下突变型的表现型并简述其分子机理:
———— λ[c?] , λ[c?], λ[hfl], λ[cro]
123. 说明constitutive splicing与alternative splicing, cis-splicing与trans-splicing之间在概念及
机制上的区别。
124(E. Coli阿拉伯糖(Arabinose)分解酶操纵子(ara operon)的调节基因I发生突变后，即
—使在培养基中加入效应物(Arabinose)，操纵子仍处于关闭状态。将构建的i/I基因的
部分二部体E. Coli培养在含有阿拉伯糖的培养基中，操纵子处于开放状态。请说明ara
—operon的调控类型，并推测i突变基因的基因型。(简述推论的理由) 125(简述λphage选择溶原途径(lysogenic pathway)的分子生物学原理。 126. 请说明一种利用PCR技术进行目标基因定点突变的技术路线及原理。 127(拟应用苏云金秆菌中的一个毒素蛋白基因培育抗虫作物品种。请提出一个从基因分离开
始到品种推广为止的实验方案。并指出值得注意的关键问题。
128(说明不同种属的植物基因组共线性发现的理论和实践意义。
129(基因组研究对作物遗传改良将会产生哪些影响,
130(你正在克隆一个基因。现在你己得到了数个 DNA片段。下一步你将如何从中鉴定出你
所希望得到的目标基因。
131(谈谈基因工程的基本步骤，说明重要工具酶在各个步骤中的作用。
132(根据你对分子克隆载体的了解，对克隆载体的类别，用途及各自的特殊性加以简述。 133(以 E.Coli为例，简述其基因重组的类型，作用机理及其在分子生物学研究中的应用。
134(如何解释抗体生成多样性的分子机理。
95
135(如果你发现了一种新蛋白质，你将如何进行下一步研究?请按先后顺序列出基本方案。
136(应用生物技术创建作物新的种质有哪些途径和方法。
137(分子标记辅助选择在作物育种中有那些重要作用?如何实施?
138(说明真核生物前体 RNA加工的类别及机理。
139(说明原核生物与真核生物转录元件(cis and trans)的特点。
140(简述人类基因组研究近年来的进展。
141. 说明DNA芯片(含Oligonucleotide chip and cDNA microarray)技术的基本概念和可能的用
途。
142. 如何确定细菌的某一个遗传表型是由染色体控制还是由质粒控制的。
143. 简述 DNA重组的几种不同方式及分子机理。
144. 比较说明原核生物与真核生物在基因表达水平上的异同。
145(至少列举三例 (除 DNA双螺旋结构外)说明核酸分子结构的研究成果对分子生物学理
论发展的重要贡献(
146(说明生物体保证自身稳定遗传的机制。
147(说明蛋白质与 DNA之间序列非线性相关的因素。
148(在核苷酸测序的操作中，利用哪几个途径分别获得一个片段两条单链的序列?各自的理
论依据是什么?试言简意赅地加以论述。
149(到目前为止，在高等生物中根据性状表现分离未知产物基因采用哪些途径?请说明各种
途径的基本原理并各举一例。
150(请以基因组研究的新进展为例，讨论分子生物学发展与生物技术产业化的关系。
151(试述作物遗传资源的重要性，何谓作物遗传资源的创新?
152(利用分子标记进行基因定位的遗传群体有几种?各有什么优、缺点?
153(就你所熟悉的某一作物，简述作物杂种优势研究与利用的现状。
154(你对“基因工程育种”有何评价?
155(何谓断裂基因( split gene)?何谓重叠基因( overlapping gene)?它们在生物进化与适应上有
何意义?
156(何谓分子标记?分子标记的种类有哪些?可以开展哪些领域的研究?
157(自花授粉作物与异花授粉作物的育种方法有何异同?数量性状如何进行改良? 158(在提取由 ColEI所衍生的质粒(如pBR322)时，常在培养携带质粒的大肠杆菌摇瓶中加
入一定浓度的氯霉素或壮观霉素以扩增质粒DNA。质粒DNA扩增的理论依据是什么?
这种质粒DNA扩增的方法为何并不具有普遍性?
159(E. Coli K菌株的限制一修饰系统分别由R. M基因控制现有K的三个突变菌系，当用1212
A噬菌体分别感染三个突变株后，将放出的噬菌体再去感染这三个菌株。得到如下不同
的eop值，请判断这三个突变株的有关(R. M)基因型。
放出A的原始菌K K K 12-112—212—3
96
株
K 1 1 1 12-1
-2K 10 1 1 12—2
K 1 1 1 12—3
160(现有两种DNA片段:
1)ATTCCAGGATCCTGGCACCG
TAAGGTCCTAGGACCGTGGC
2)CGATCTCCTAGATCTCAC
GCTAGAGGATCTAGAGTG
分别用形成等列序列的同裂酶
MboI和Sau3A消化后，混合，加入连接酶，会形成什么样的DNA片段。
161(现有枯草杆菌dnaG基因的一个终止突变型菌株，当用HA处理后，会得到什么结果,说明理由。
162(下表中，a、b、c代表E. coli的Lac operon中的i、o、z三个基因。 A)根据不同试验菌株在效应物有无的条件下，测定Z酶的表达结果，说明a、b、c各
代表哪个基因。
B)用i、o、z三个基因代号写出第?、?菌株的可能基因型。
菌 株 基 因 型 有Lac 无Lac
-++? abc + +
++-? abc + +
+-+-+-? abc/F?-abc + +
++---+? abc/F?-abc + -
-=+=--? abc/F?-abc + +
163. 一位科学研究λ噬菌体的一个蛋白质的功能时，获得了以下几个试验结果。
+A、当用HA处理野生型λ噬菌体后，分离得到一个突变体a(mua)，它只产生该蛋白质
的一个片段。
++B、当用5Bru处量mut后，又分离出两个突变体，mub, muc，它们也只产生与mut后aa
相同长度的该蛋白质的一个片段。
++++ C、mua，mub, muc分别可以在不同的Su 基因型细胞内合成该蛋白质的正常多肽链。
-+++基因型 Su Su Su Su 246
5?CGA 3’ TTG CCA -+Su?Su的 3?GCT 5’ AAC GGT DNA序列突变 ? ? ?
97
5?CTA 3’ TTA TCA
3?GAT 5’ AAT AGT
+mua — — + —
+mub — + — —
+muc — — — +
++++++D、当感染有mua的Su细菌分别与感染有mub的Su感染有muc的Su细菌结合后，426
-+没有野生型重组λ噬菌体产生，不能在野生型Su受菌体内繁殖，但当感染有mub的
+++Su与感染有 muc的Su细菌结合后的极少数野生型λ噬菌体产生。 26
++++++请推测mua, mub, muc分别在su、su 、su细菌内产生的蛋白质与野生型λ合成426
的该蛋白质的差异，并解释A、B、C、D结果。
(CAA为谷氨酰胺的密码子:UCG为丝氨酸的密码子;UGG为色氨酸的密码子)
164(大豆phasealin(菜豆朊)是在种子内特异表达的一种分泌性蛋白，请用线段示意出该基因在DNA水平上的全部结构区域，以及Pre-mRNA，mature-mRNA，多肽链的对应区域，并标明各区域的名称。(提示:该基因的各区域包括:Promoter(含3个重要的Site 或 Box),Terminator, Leader Seq., Trailer seq., Signal seq., Chambon rule, Shine-Dalgarno seq., 2
个Intron, 3个Exon, Adding trailer signaler, Repeat seq. in CTU.)
cc165(有人错误地认为“E. coli trp synthetase operon i的突变型是由于i基因产物可以分解效应物分子所形成的”，正确的理解是什么,如何用遗传学试验否认这一说法,
166( 用HA处理W.t枯草杆菌，得到分别两个不同位点上发生了无意突变的菌株，mut1, mut2，并证明这两个无意突变的序列不同。当再用HA处理这两个突变株后得到了以下结果。
mut1 mut2
诱发DNA水平发生回复突变 - -
诱发一种无意序列变成另一种无意序列 + -
+167(将E.coli Lac operon中的IPO片段与yeast的HO基因构成的重组DNA分子与带Leu基因的质粒连接，转化到Yeast 27B菌株中(基因型为HML a Leu-MATα HMRa SIR. ho)将转化子涂于分别含有Lactose, Maltose, Lactose +Glucose的培养皿中，当长出菌苔后，再分别涂上DC14菌株(a 结合型)，DC17菌株(α结合型)，请判断在哪些培养皿中会出现二倍体的杂合菌落，并说明推论的依据。
27B
Mal
27B
Lac
27B
Lac+Gluc
27B
Mal
27B
Lac
98
27B
Lac+Gluc
A B C D E F
DC14(a) DC17(α)
99
浙公网安备 33021202002483