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]实验二 MS培养基的配制与灭菌
实验二 MS培养基的配制与灭菌
一、实验目的
学会配置MS+I mg/L2.4-D+蔗糖 3% + 琼脂 0.8%
二、实验原理
2,4-D(二氯苯氧乙酸)属生长素的范畴。在自然界中,生长素可影响到茎和节间的伸长 向性 顶端优势 叶片脱落和生根等现象,在组织培养中,生长素被用于诱导细胞的分裂和根的分化,其中2,4-D(二氯苯氧乙酸)被广泛用于愈伤组织的诱导。
三、实验
材料
关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料
1.实验器械:灭菌锅, 电磁炉, 三角瓶量筒,酒精灯,镊子, 解剖刀, 超净工作台, pH, 试纸, 电子天平等。
2.实验药品:MS母液, 蒸馏水, 2,4-D, 升汞, 乙醇, 无菌水等。
四、(一)配置培养基(1L MS培养基的配置) 1.瓶塞制作
D(二氯苯氧乙酸)2.盖纸的准备及配置100mg/L(100ml)的2,4-
3.称取8g/L(0.8%)的琼脂置于不锈钢的锅中,加蒸馏水直到培养基最终容积的3/4,在电炉上加热溶解。待琼脂溶解后再加30/L(3%)的蔗糖,用玻璃棒搅拌均匀。 4.分别加入一定量的各种贮备液,包括生长调节物质和其他的特
殊补加物。
5.加蒸馏水定容。
6.分均匀后,用1.0或0.1mol/LNaOH或HCl调节培养基的pH (5.4~7.0)。
7.把培养基分装到所选用的培养容器中 (约25~30mL)。
8.用包在纱布中的棉塞(它不仅能阻止微生物污染,而且还可以使气体自由交换),然后再用牛皮纸套在棉塞上(防止棉塞在高温灭菌时吸湿)。
(二) 培养基的灭菌
1.把已经装入了培养基的培养容器置于灭菌锅中进行灭菌(在灭菌之前,必须注意水至吃水线,防止烧干,接通电源升温后,首
2先要排净锅内的冷空气,然后在121? 1.06kg/cm或者0.105MPa的条件下灭菌15至20min)。 2.灭菌结束后,切断电源,让锅内气体自然下降,待压力
表
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指针回到零后,再打开放气阀,排除剩余蒸汽,打开锅盖取出培养基(过早开阀放气会造成锅内气压骤降,引起培养基沸腾外溢)。
(三) 最后清理
实验室
17025实验室iso17025实验室认可实验室检查项目微生物实验室标识重点实验室计划
。
实验项目注意事项:
1.注意琼脂和蔗糖的称量。
2.注意2,4-D(二氯苯氧乙酸)配制与量取。 3.注意瓶塞的制作与包扎(相对于瓶口不应该过大或过松)。
4.注意灭菌锅里的水是否至吃水线。 5.灭菌后应该切断电源,让锅内气体自然下降,待压力表指针回到零后,再打开放气阀,排除剩余蒸汽,打开锅盖取出培养基(因为过早开阀放气会造成锅内气压骤降,引起培养基沸腾外溢)。
6.配置MS培养基时应该注意调节pH (5.4~7.0) 因为过酸培养基不易凝固 过碱培养基会变硬。
7.配置溶液时应注意定容到位。