关于HE染色细胞核发灰的补救方法
杨春青
江苏省妇幼保健院病理科210036
摘要
目的探讨HE染色细胞核发灰的补救方法
方法常规技术基础上增加磷酸盐缓冲液高温修复
结果利用我科50例不合格切片重新染色修复,其中40例达到满意效果,核浆对比清晰
结论磷酸盐缓冲液高温修复可以有效的补救常规HE染色发灰的情况。
关键词
HE染色磷酸盐缓冲液高温修复
病理技术工作主要是利用技术手段为病理诊断作出提供必要条件,而一张优质的病理切片,细胞核和细胞浆的对比染色必须是清晰的,在日常病理外检工作中,有时一些人为因素,比如脱水时间不够,固定不及时,会出现细胞核发灰现象,即细胞核内染色质和核仁不清,给诊断带来一定的困难,苏木素-伊红染色是最经典的常规染色方法,苏木素染色的关键是细胞核,而伊红染的是细胞浆,引起此现象的因素主要有以下几种,如术后固定不及时,细胞有自溶现象,取材的大小,影响组织的固定,脱水,浸蜡不足,组织在脱水机中固定,脱水,浸蜡时间不足,试剂浓度不够,处理时间不够,笔者主要针对脱水浸蜡时间不够,引起细胞核发灰,进行实践摸索,并找到一种正确的补救方法。
1.材料与方法
1.1组织与材料:收集江苏省妇幼保健院病理科外检中,因为脱水和浸蜡时间不足,引起HE染色发灰的石蜡蜡块。
1.2仪器设备小天鹅高压蒸汽锅染色架一个塑料修复盒一个
1.3试剂PBS磷酸盐缓冲液0.5%盐酸Harris苏木素醇溶性伊红
1.4方法具体步骤(1)石蜡切片3-4微米厚,烘烤10-20分钟,脱蜡至水。(2)将切片放入有PBS缓冲液,PH6.0-8.0,煮沸10-15分钟,自然冷却至常温,取出切片,用蒸馏水洗。(3)切片入Harris苏木素5-8分钟,用自来水冲洗,(4)0.5%HCL分化,水洗兰花,直至细胞核内染色质及核仁清晰可见,细胞浆基本无蓝色为止。(5)入伊红Y染色,梯度酒精,二甲苯透明,中性树胶封固,显微镜下观察。
2结果经磷酸盐PBS缓冲液为修复液,用高压蒸汽锅处理的切片,整个细胞的基本形态清晰可见,核,浆染色对比鲜明,清晰度好,HE染色效果好。
3讨论常规石蜡切片,镜检中因细胞核发灰即核质结构不清而影响诊断的,本文采用的方法是磷酸盐PBS缓冲液高温蒸汽处理。其基本原理是,细胞内的物质为酸性和碱性两种,部分酸性物质能与溶液中阳离子结合,碱性物质与阴离子结合,细胞核内染色质多为酸性成分组成能与碱性染料结合,易于作色,蛋白质即可呈酸性又可成碱性,为两性物质,当染液的PH值>组织的等电点时,酸性的组织容易被碱性染料着色,反之,PH<等电点时,碱性物质容易被酸性染料所染。
病理标本通过固定,脱水,透明,浸蜡,包埋,切片,染色等步骤,才能制出一张优质切片,其中任何一个环节都不能出错,如固定不及时,细胞发生自溶,细胞内PH值会发生改变,还有当组织脱水浸蜡时间不足,细胞内蛋白质没有完全变性,组织在PH6.0-8.0的PBS中高温修复后,酸碱物质部分恢复,或接近等电点状态,易于染料结合,同时组织充分水化,组织间隙变大,染料易于渗透,促进组织与染料的化学反应。
作为一名优秀的技术人员,除掌握常规的病理技术制作规范外,还要做到遇到问
题
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,要认真科学的对待,处理制片过程中每一个环节,现在大的三甲医院病理科工作量大,技术人员少,工
作中难免会出差错,只要我们能用简便,快捷的方法来解决核灰现象,对于应付日常巨大的外检工作还是有不可忽视的作用。
参考文献
1王泊云,李玉松,龚高昂等主编。病理学技术,北京:人民卫生出版社,2000:88
2冷水梅等,HE染色细胞核发灰的处理方法,论断病理学杂志,2000,12(7):305
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