P300/CBP相关因子和P53在宫颈癌组织中的 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达及其相关性

李 蕾 张俊涛 曹淑萍

1.山东省东营市东营区人民医院病理科，山东东营 257000；2.山东省东营市东营区人民医院妇科，山东东营 257000

宫颈癌作为女性第四大常见的恶性肿瘤，严重影响女性健康。在我国每年宫颈癌新发病例13.15 万，宫颈癌已成为我国中青年女性的第二大高发恶性肿瘤，发病人群趋于年轻化，每年大约有5 万人死于该病。P300/CBP 相关因子（P300/CBP-related factor，PCAF）是组蛋白乙酰转移酶GNAT 家族中的重要一员，与多种恶性肿瘤的发生发展有关，并且在肿瘤细胞的发生发展、凋亡、侵袭转移和肿瘤中血管的生成发挥重要作用。P53 被认为是迄今发现与人类肿瘤的发生相关性最高的抑癌基因。本研究通过检测宫颈癌组织内PCAF 和P53 的表达水平，探讨PCAF、P53 与宫颈癌病例特点之间的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年6月至2020年6月东营市东营区人民医院病理科保存并经病理证实的宫颈癌组织79例（鳞状细胞癌57 例，腺癌22 例）作为实验组，选取同期20 例正常宫颈组织作为对照组。实验组患者年龄38～70 岁，平均（46.2±5.23）岁；≥50 岁37例，

1.2 主要试剂和实验方法

PCAF 单克隆抗体购自美国Santa Cruz 生物公司，批号：sc-13124。P53 单克隆抗体购自迈新生物技术开发有限公司，批号：MX008。采用免疫组化SP 法染色：组织石蜡块5 μm 切片，二甲苯进行常规脱蜡，然后依次放入浓度由低到高的乙醇中脱水，蒸馏水冲洗3 次，每次3 min，待充分水化后，用PBS 洗3 次，每次5 min，加入3%过氧化氢灭活内源性的过氧化物酶10 min，再用PBS 洗3 次，每次5 min，20%山羊血清室温下封闭30 min，滴加一抗，恒温培养箱内37℃下1～2 h 或4℃过夜，PBS 洗3 次，每次5 min，然后加入二抗，37℃孵育30 min，PBS 洗3 次，DAB 显色，苏木素复染，1%盐酸酒精分化，常规脱水、透明，中性树胶封片。

1.3 结果判定

阳性细胞标准为细胞内出现棕色或棕黄色颗粒，PCAF 定位在细胞质和细胞核，P53 定位在细胞核。根据细胞质、细胞核染色强度以及着色阳性细胞所占百分率进行综合 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 计分，随机选择每张切片中10 个高倍镜视野（400×），每个视野计数100 个细胞，切片的着色阳性细胞百分率为所有视野中阳性细胞的平均百分率。染色强度评分标准（A）：0 分为无色，1 分为黄色，2 分为棕黄色，3 分为棕褐色。着色阳性细胞所占百分率评分标准（B），阳性细胞75%为4 分。最终以A+B 所得分数作为评判标准：≤2 分为阴性，≥3 分为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0 统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，两组间比较采用χ检验；采用Spearman 等级相关分析对数据进行相关性分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈癌组织中P53 蛋白和PCAF 的表达及与临床病理特征的相关性

实验组的PCAF 阳性表达率为41.8%，低于对照组的80.0%，差异有统计学意义（P0.05）。实验组的P53 阳性表达率（78.5%）高于对照组（0%），差异有统计学意义（P0.05）（表1）。

表1 宫颈癌组织中P53 蛋白和PCAF 的表达及与临床病理特征的相关性

2.2 P53 和PCAF 在宫颈癌中表达的相关性

P53 和PCAF 在宫颈癌中的表达呈中度负相关（r=-0.493，P<0.05）（表2）。

表2 P53 和PCAF 在宫颈癌中表达的相关性（例）

3 讨论

PCAF 是真核细胞内一种重要的组蛋白乙酰转移酶，可以乙酰化核心组蛋白H3 和H4，组蛋白被PCAF 乙酰化后与DNA 结合能力降低，核小体结构松弛，各种转录因子更易与DNA 结合，从而调控相应基因的转录水平。PCAF 还是一种转录辅激活子，当结合在启动子或增强子附近位点时，促进下游基因转录。除此之外，PCAF 还可以使一些非组蛋白发生乙酰化，从而参与DNA 损伤修复、细胞分化、增殖以及凋亡等细胞过程。另有研究发现PCAF 不仅具有乙酰转移酶的活性，也具有E3 连接酶的功能，可以促进有关蛋白泛素化修饰，进而参与细胞代谢，调节细胞周期。

PCAF 被认为是一种抑癌候选基因，既往研究发现其可以在一定程度上抑制多种恶性肿瘤的发生发展，PCAF 在多种肿瘤细胞中表达下调，并且与不良预后紧密相关。PCAF 在多数原发性肝细胞肝癌中呈现低表达，并发现PCAF 的下调与门静脉侵犯明显相关。PCAF 可以诱导肝癌细胞的凋亡和自噬、抑制肝癌转移。PCAF 对骨肉瘤细胞有正向调节作用，PCAF通过靶向自噬相关基因ATG5 和ATG7 调节骨肉瘤细胞组蛋白H3S28 磷酸化，进而促进瘤细胞的自噬。有研究发现，PCAF 的阳性表达率在食管癌组织中明显低于正常食管组织。PCAF 的低表达是胃癌发生的重要因素，PCAF 低表达患者的生存期明显低于PCAF 高表达患者，与患者不良预后显著相关。关于CAF 在宫颈癌中的研究较少，本研究通过免疫组化研究宫颈癌与正常宫颈组织中PCAF 的表达，发现宫颈癌组织中的PCAF 表达明显低于正常宫颈组织，并且随着宫颈癌临床分期和组织学分级的增高，其表达率显著下降，提示PCAF 有可能成为宫颈癌及其预测预后的一种重要的生物学分子标志物。同时随着肿瘤个性化治疗的发展，PCAF 亦被人认为是肿瘤治疗的潜在靶点。PCAF 通过促进锌指转录因子Gli1 的泛素化来抑制Hh 信号对DNA 损伤的应答，提示PCAF可能成为Hh 依赖性肿瘤的治疗靶点。PCAF 的高表达可以增强结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶的药物敏感性。

P53 基因是一种肿瘤抑癌基因，有突变型和野生型之分。野生型P53 是一种重要的抑癌基因，作为一个“分子警察”在细胞周期中起着重要的作用，调控细胞周期中的增殖细胞，通过控制G0 或G1 期细胞进入S 期，进而抑制细胞的增殖。在人类大约一半的肿瘤中，P53 基因发生突变。突变后的P53 基因失去抑制细胞增殖的功能，导致肿瘤侵袭力增加，容易发生转移，成为一种癌基因。野生型的P53 的表达极不稳定，因此无法用免疫组化的方法检测出，突变型的P53 容易堆积在细胞中，半衰期延长，可以用免疫组化检测出。既往研究发现，在宫颈上皮内瘤变时P53的阳性表达率随着瘤变程度的增加而逐渐增高，P53和Ki-67、p63 联合检测被认为是可靠地区分宫颈上皮内瘤变的生物标志物。在对401 例宫颈癌组织进行的研究发现中，高P53 蛋白水平与侵袭性表型和生存标记显著相关，认为高P53 水平可独立预测宫颈癌的低生存率。更有学者分析证实P53 的过度表达提示白种人宫颈癌的预后不良。本研究结果显示，P53的阳性表达率随着宫颈癌的临床分期和组织学分级的增高而逐渐增高，进一步证实了P53 可以作为评定宫颈癌预后的一种重要生物标志物。作为一种重要的抑癌基因，将野生型P53 转染瘤细胞而用于抑制肿瘤或者增强化疗药物的敏感性一直是人们研究的热点，外源野生型P53 导入宫颈癌HeLa 细胞后，可与羟喜树碱发挥协同作用，有效抑制宫颈癌HeLa 细胞增殖促其凋亡，发挥抗肿瘤作用。

本研究结果还显示，在宫颈癌中突变的P53 和PCAF 两种蛋白的表达紧密相关，随着突变型P53 蛋白的增加，PCAF 的表达逐渐降低。PCAF 是抑癌基因P53 的共激活子，它通过调节P53 的活性及其蛋白的稳定性来使细胞周期停滞和细胞凋亡，进而影响细胞分化、凋亡与肿瘤形成。PCAF 蛋白作为一种组蛋白乙酰转移酶可以直接对P53 进行乙酰化修饰，通过PCAF-P53-p21 轴来调节肿瘤细胞的增殖。PCAF蛋白亦可以通过其泛素化酶活性间接作用于P53，去乙酰化转移酶SIRT7 与PCAF 相互作用后促进了PCAF 与MDM2 的结合，进而促进MDM2 的泛素化降解，使得肿瘤细胞中的P53 更加稳定，有利于肿瘤细胞的周期阻滞，抑制肿瘤细胞的增殖。PCAF 还可以通过泛素化修饰调控Hdm2 进而影响细胞内P53 蛋白表达水平。敲除PCAF 的结肠癌HCT116 细胞，P53 的乙酰化水平明显降低，P53 依赖性P21 的转录明显降低，从而导致肿瘤细胞周期蛋白D1 和磷酸化增加。同时野生型的P53 可以诱导PCAF 的表达。总之，本研究发现在宫颈癌中P53 的高表达与PCAF表达的降低密切相关，提示这两种蛋白可能在宫颈癌的发生与发展中发挥协同作用。

综上所述，宫颈癌的发生是多个基因共同作用的复杂过程。本研究显示PCAF 在宫颈癌中表达水平低于正常宫颈组织，并且随着宫颈癌的临床分期和组织学分级的增高而逐渐降低，提示PCAF 可能作为宫颈癌及其预测预后的分子标志物。本研究还证实PCAF蛋白和P53 蛋白在宫颈癌中的表达紧密相关，并且与宫颈癌恶性临床病理特征相关，提示二者在宫颈癌的发生发展中发挥着协同作用，二者联合运用有望成为宫颈癌潜在预后不良的分子标志物，同时给宫颈癌的精准个性化治疗提供新思路和新方法。

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