磺胺氯吡嗪钠二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除研究（可编辑）

磺胺氯吡嗪钠二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除研究（可编辑） 磺胺氯吡嗪钠二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除研究 磺胺氯吡嗪钠.二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除研究 . 研究生:郝增坤 专业:基础兽医学 导师:\仕金教授 扬州大学兽医学院 年月摘要 摘 要 磺胺氯吡嗪钠,属于磺胺类广谱抗菌药,在兽医临床上主要 用于球虫病的治疗,此外还可用于球虫病爆发时继发禽伤寒、禽霍乱的防治。随着磺胺氯 吡嗪钠在临床的广泛应用,目前球虫对磺胺氯吡嗪钠耐药性较严重。二甲氧苄啶 ,为动物专用抗菌增效剂,与磺胺氯吡嗪钠合用能使磺胺氯吡嗪钠的抗 菌效力增强,呈现杀菌作用,而且可减少耐药菌株的产生。本研究旨在通过对磺胺氯吡嗪 钠一二甲氧苄啶溶液在鸡体内的残留消除规律进行研究,确定该药物在鸡体内的休药期,为 磺胺氯毗嗪钠一二甲氧苄啶溶液临床合理用药提供参考。 、鸡组织中磺胺氯吡嗪和二甲氧苄啶残留量的 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 鸡组织中磺胺氯毗嗪采用乙腈和丙酮提取,正己烷脱脂,固相萃取小柱净化, 流动相为乙/. /磷酸水溶液/,/,紫外检测器检测,外标法定量。检测 结果表明,磺胺氯吡嗪在.~/浓度范围内,线性关系良好.;检测限 为./,定量限为./;磺胺氯吡嗪在./、./、./添加 浓度范围内,平均回收率.%一.%,批内变异系数.%.%,批间变异系数 .%.%。本实验建立的鸡组织中磺胺氯毗嗪残留量的提取、净化和检测方法能 满足 鸡组织中磺胺氯吡嗪残留量的检测要求。 鸡组织中二甲氧苄啶采用乙腈和丙酮提取,正己烷脱脂,固相萃取小柱净化, 流动相为乙/. /磷酸二氢钾溶液/,/,紫外检测器检测,外标法定量。检 测结果表明,二甲氧苄啶在../浓度范围内,线性关系良好。;检测 限为./,定量限为./;二甲氧苄啶在./、./、./添 加浓度范围内,平均回收率.%.%,批内变异系数.%.%,批间变异系 数 %~.%。本实验建立的鸡组织中二甲氧苄啶残留量的提取、净化和检测方 法能满 足鸡组织中二甲氧苄啶残留量的检测要求。 、磺胺氯吡嗪钠一二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除研究 只健康白羽肉鸡,磺胺氯吡嗪钠.二甲氧苄啶溶液以临床推荐剂量的高限给 药,连 续饮水给药。停药后分别于即零休药期、、、、、共个时间点进行 采样。利用建立的检测鸡组织中磺胺氯吡嗪和二甲氧苄啶残留量的法,测定该药在 鸡组织中的标示残留物??磺胺氯吡嗪和二甲氧苄啶的残留量。停药后磺胺氯毗嗪在 鸡各组织中的残留量以肾脏最高,达到.士./,其次为皮脂和肝脏,残留量摘要 分别为../和..?‖,肌肉中最低为..‖。停 药后二甲氧苄啶在鸡各组织中的残留量以肾脏最高,达到../,依次为 肝脏和皮脂,残留量分别为../和../,肌肉中最低为 ..肛‖。 研究表明:停药后磺胺氯吡嗪在肌肉和肝脏中消除最快,在肾脏和皮脂中消除最慢, 说明肾脏和皮脂是磺胺氯吡嗪的残留靶组织,磺胺氯吡嗪在肌肉、肝脏、肾脏、皮脂组织 中的残留量分别于停药后、、、时降至以下;停药后二甲氧苄啶在肝脏中 消除最快,在肾脏中消除最慢,说明肾脏是二甲氧苄啶的残留靶组织,二甲氧苄啶在肌肉、 肝脏、。肾脏、皮脂组织中的残留量分别在停药后、、、时降至以下。根据 磺胺氯吡嗪、二甲氧苄啶的,将实测数据采用.计算软件拟合。结果显示,磺 胺氯吡嗪在肾脏和皮脂中的休药期较长,分别为.和.,休药时间基本一致。二甲 氧苄啶在肾脏中的休药期则最长,为.。有鉴于此,磺胺氯吡嗪钠一二甲氧苄 啶溶液按 推荐剂量饮水给药控制鸡球虫病,建议休药期可定为。 关键词:肉鸡;磺胺氯吡嗪钠.二甲氧苄啶溶液;残留;消除;休药期, ., , ., . , ,? . ? , . . . .. / ? /,/. , . . .~/. ./../. ... .%~ ./ .%。.% .%, .%~.%, ? . . . .. / /,/. ,...~/. ./. ./. ... .%~ ./ .%.% .%,.%.%,. ..,,,,, . . . ..肛/,, .士../,.:./,../ .土../, .. . ,,, .士. /,. 士.肚/,. / ,. ,. . , .。 ,, 、、 . .、 .., . . . . ?. :;. ;;; 目录 一 目录 摘要?. 。??. 符号说明第一章文献综述磺胺类药物研究概述??. .理化性质、作机理与抗菌活性 .毒理学特性.临床应 .药动学研究.残留检测 抗菌增效剂类药物研究概述 .理化性质、作用机理与抗菌活性 .毒理学特性.临床应用 .药动学研究.残留检测 研究目的和意义参考文献.. 第二章磺胺氯吡嗪钠一二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除研究? 研究一鸡组织中磺胺氯吡嗪残留量的检测. 材料?” .受试药品 .试剂” .仪器及其它.试液的配制方法 .试料的制备?. .提取与净化. 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线的绘制??” .色谱条件 .检测限和定量限的测定? .回收率及变异系数的测定?.. .空白试验 结果与分析.色谱行为 .标准曲线及线性范围一 .检钡限和定量曼 .添加回收率及变异系数??” 讨仑.前处理方法优化??“ .液相条件的选择与优化??一 .检测方法的 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 ??.. 研究二鸡组织中二甲氧苄啶残留量的检测? 材料“ .受试药品 .试剂一 .仪器及其它日录 .试液的配制?. 方法.试料的制备?. .提取与净化.标准曲线的绘制??” .色谱条件??. .检测限和定量限的测定? .同收率及变异系数的测定?.. .空白试验??. 结果与分析?. .色谱行为? .标准曲线及线性范围.. .检洌限矛定量曼 .添加同收率及变异系数??.. 讨仑?. .前处理方法优化??.. .液相条件的选择与优化??.. .检测方法的评价??.. 研究三磺胺氯吡嗪钠.二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除规律 材料? .受试药品 .试剂.仪器及其它?. .试液的配制?. 方法?.. .实验动物与给药 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 ” .样品采集??. .组织中磺胺氯吡嗪残留量的测定.组织中二甲氧苄啶残留量的测定.鸡组织 中磺胺氯吡嗪和二甲氧苄啶残留量的计算与表述?. 结果?.. .磺胺氯吡嗪残留消除测定结果 .二甲氧苄啶残留消除测定结果 讨论? .磺胺氯吡嗪钠一二甲氧苄啶溶液在鸡体内的残留消除规律? .磺胺氯吡嗪钠一二甲氧苄啶溶液休药期的确定 参考文献.. 全文结论??. 致 谢. 扬州大学学位论文原创性声明和版权使用授权书符号说删 ????????????????????????????????????????????????????????????????? ??????????????????????????????????????????????????????????????????? 一一 符号说明 磺胺类药物 磺胺氯毗嗪 二甲氧苄啶 三甲氧苄啶 高效液相色谱 联合国食品法典委员会食品残留专家委员会欧洲药品局 , 食品和药物管理局 毛细管电泳法 酶联免疫分析法质谱 固相萃取 最大残留限量休药期 半数致死量生物利用度兽用药品委员会 ,检测限定量限/ 信噪比 / 变异系数 标准差. 微克 毫克 千克 微升 天 小时 分钟 郝增坤磺胺氯吡嗪钠.二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除研究 第一章文献综述 磺胺类药物研究概述 磺胺类药物,是化学合成抗菌药的一种,指具有对氨基苯磺酰胺 结构一类药物的总称,主要用于预防和治疗细菌感染性疾病。年,人们发现首次合成 的偶氮染料一百浪多息对葡萄球菌、链球菌和其它细菌感染性疾病都具有很 好的疗效。年,多马克报道将百浪多息注射进被链球菌感染的小鼠体内,能够杀死链 球菌’。年,报道了中的有效成分主要是对位氨苯磺胺。至今已 合成的磺胺类药物达到了多种,在临床上常用的仅有多种【’】。磺胺类药物分子结 构见图 \. / 厶 刚《 图磺胺类药物结构 . 磺胺类药物抗菌谱很广,性质比较稳定,使用方便,价格低廉,而且较易人工合成, 并能抑制大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,在降低动物发病率和死亡率等方面都具有 良好的作用。磺胺类药物常与抗菌增效剂三甲氧苄啶和二甲氧苄啶联用, 可使磺胺类药物的抗菌活性增强数倍至数十倍,甚至会使抑菌作用转为杀菌作用,同时可 减少耐药菌株的产生【,。磺胺类药物与增效剂联用在临床上还广泛用于治疗由单一磺胺药 耐药而引起的细菌感染,成为防止和延缓耐药性出现的一种有效的手段。此外,饲料中添 加磺胺类药物还可用于畜牧业促进动物的生长。因此,在兽医临床上和畜牧业生产中磺胺 类药物的应用仍然十分广泛。 .理化性质、作用机理与抗菌活性 磺胺药为白色或淡黄色结晶性粉末,不易溶于水,具有芳伯胺基,溶于丙酮和乙醇。 分子量一般在之间。磺胺药性质比较稳定,遇光易变质,颜色加深。制成钠 盐后性质稳定且易溶于水,水溶液呈碱性。磺胺类药物因含有磺酰胺基和伯氨基而呈酸碱 两性,因此易溶于酸性和碱性溶液中。各种磺胺药均含有苯环等发光基团,因此具有不同 程度的紫外吸收。扬州大学硕士学位论文 磺胺药的作用机理:叶酸是微生物生长的必需物质,磺胺类药物一般都通过干扰敏感 菌的叶酸代谢而起到抑制敏感菌生长繁殖的作用。对磺胺药敏感的细菌在生长繁殖过程中 并不能从周围的生长环境中直接利用外源叶酸,而是通过利用对氨基苯甲酸、谷 氨酸和喋碇等物质,在二氢叶酸合成酶的催化作用下合成二氢叶酸,二氢叶酸在二氢叶酸 还原酶的作用下被还原为四氢叶酸,而四氢叶酸作为一碳基团转移酶的辅酶参与了嘧啶、 嘌呤和其它一些氨基酸的合成。磺胺类药物的化学结构与的化学结构非常相似,因 此能和竞争二氢叶酸合成酶,从而抑制二氢叶酸的合成,或形成以磺胺代替 的伪叶酸,从而阻碍敏感菌核酸合成,使细菌生长繁殖受阻从而发挥抑菌作用?图。 国曹体 二氢时含成冀 墨塞、 『 ? ? 舳:电一鼢一 合成蛋白质 ?糜类 图磺胺类药物作用机理示意图 . 磺胺类药物的基本结构是对氨基苯磺酰胺,不同的杂环可以取代磺酰胺基上的一个氢 原子,增强其抗菌效果,变成口服易吸收并用于预防和治疗全身感染性疾病的药物如磺胺 噻唑、磺胺二甲嘧啶等以及外用的磺胺醋酰钠和磺胺嘧啶银. 等【】。对位氨基的一个氢原子还可以被体内的其它基团取代会变成口服难吸收并用于肠道 感染的药物如磺胺脒等。 磺胺类药物的抗菌作用范围很广,对一些革兰氏阴性菌和大多数的革兰氏阳性菌均有 不同程度的抑制作用,同时对衣原体、某些原虫及少数真菌也有一定的抑制作用。对磺胺 药高度敏感的病原菌主要有肺炎球菌、链球菌、化脓棒状杆菌和脑膜炎球菌等;次敏感的 主要有金黄色葡萄球菌、变形杆菌、大肠杆菌和放线菌等。一些磺胺药还能够有效的抑制 兔和家禽的球虫病,如磺胺氯吡嗪、磺胺二甲氧嘧啶等。磺胺嘧啶在脑郝增坤 磺胺氯比嗪钠.二甲瓴苄啶溶液存鸡的残留消除研究 脊液中的含量较高,因此更适于治疗脑部细菌感染。磺胺药还对一些弓形虫、放线菌和猪 痢疾密螺旋体均有一定的抑制作用,但对螺旋体、立克次氏体、结核杆菌和 病毒等基本无 效。近年来随着磺胺药的广泛应用,产生了不少对磺胺药耐药的菌种,包括葡萄球菌、大 肠杆菌和链球菌等。各种磺胺药之间也可产生不同程度的交叉耐药性,但与其他抗菌药物 之间并无交叉耐药现象的存在。不同磺胺药的抗菌作用不尽相同,比如内服易吸收磺胺药 的作用强度依次为磺胺问甲氧嘧啶,磺胺甲恶唑,磺胺嘧啶,磺胺 地索辛,磺胺对甲氧嘧啶,磺胺二甲嘧啶,氨苯磺胺【,】。 .毒理学特性 磺胺类药物在临床上的应用十分广泛,但由于在临床上的一些不合理的使用,会造 成药物在组织内的残留,药物累积到一定的浓度会对人体造成一定程度的危害,磺胺药毒 性作用主要体现在急、慢性中毒方面: 急性中毒主要是由于静脉注射磺胺类药物钠盐时的速度过快或剂量过大引起的。主要 表现为神经症状,例如兴奋、昏迷、精神沉郁、腹泻共济失调、肌无力等,严重者会导致 迅速死亡。其它还可能会出现过敏反应【】,表现为皮炎、过敏性心肌炎和水肿等,严重过 敏的也会导致人或动物的死亡列。 慢性中毒主要是由于剂量过大和用药时间过长引起的。主要表现为泌尿系统的损伤, 磺胺药主要经肾脏排泄,药物浓度过高时会出现不同程度的结晶尿、血尿、蛋白尿和尿路 阻塞等症状;多发性肠炎和消化机能紊乱;造血机能的破坏,抑制骨髓细胞、红细胞和血 小板的生成,导致红细胞的减少,出现溶血性贫血、凝血时间延长、毛细管渗血和血红蛋 白尿等症状的出现;幼畜免疫系统受到抑制,出现免疫器官的出血及萎缩;家畜生长缓慢, 蛋鸡产蛋率降低,生产性能降低【,。宋喜山【报道某养殖户大剂量使用三字球虫粉磺胺 氯吡嗪钠后发现鸡群采食量下降,精神沉郁,肾脏肿大,尿酸盐沉积等中毒症状。 】报道磺胺二甲嘧啶具有致肿瘤的倾向。磺胺二甲嘧啶对大鼠具有毒性和潜 在的致癌性,连续用药会引起甲状腺的损伤,诱发啮齿类动物甲状腺增生和甲状腺滤泡细 胞腺癌,其它损害还包括卵细胞畸形生长和多室囊肿等,同时随着磺胺二甲嘧啶剂量的增 加,视网膜萎缩、和子宫内腔扩张发生率也逐渐增加。 为防止磺胺类药物的各种毒副作用,除减少药物用量或停药外,应充分增加饮水量以 促进药物的排出,还可以在服用磺胺药的同时配合等量碳酸氢钠,以碱化尿液,促进药物 的排出。同时还应注意,磺胺类药物禁用于产蛋期【引。 扬州入学硕学位论文 .临床应用 磺胺类药物在兽医临床上是一类重要的抗菌药,至今仍为畜禽抗感染治疗中的重要药 物之一。磺胺药主要的临床应用有以下几个方面】。 全身感染:常用的药物有、、、、、等,可用于禽 巴氏杆菌病、腹膜炎、乳腺炎、链球菌病、大叶性肺炎、鸡传染性鼻炎、禽霍乱、禽副伤 寒及球虫病等的预防和治疗。磺胺药常与抗菌增效剂如和合用,可提高药物的 疗效并缩短疗程。首次用药需加倍,也可以选用磺胺嘧啶钠或磺胺噻哗钠等磺胺药物的钠 盐用作静脉注射。 肠道感染:肠道感染一般选用酞磺胺噻哗、磺胺脒和琥磺噻哗 等,此类药物因内服吸收很少,肠道难吸收,因此药物在肠道内的浓度会较高,可用于大 ‘ 肠杆菌病、肠炎和菌痢的治疗。通常与抗菌增效剂如合用。 原虫感染:通常选用磺胺喹恶啉、磺胺氯吡嗪、磺胺间甲氧嘧啶 等,此类磺胺药对禽、兔球虫病、禽霍乱、禽伤寒鸡卡氏白细胞虫病和猪弓形虫 体病均有较好的疗效。 泌尿道感染:治疗泌尿道感染通常选用尿中药物浓度较高且排泄快、乙酰化低 的药物,如、等,一般与合用。 脑部细菌感染:宜选用在脑脊液中含量较高的,是脑部细菌感染的首选 药物。 局部和创面感染:一般选外用磺胺药,如磺胺酯酰钠、氯苯磺胺 和磺胺嘧啶银?和醋酸磺胺米隆,较其它磺胺药碱性低,局部应用无 刺激性,常用于眼部感染;?常用于烧伤感染;适用于烧伤大面积创伤后感染。 在应用磺胺药的同时,应配合使用抗菌增效剂或,两者按:的比例 用药,效果最理想。磺胺药在治疗细菌感染性疾病时,药物在血中的最低有效浓度需达到 。 /,才能达到有效治疗效果,严重感染期血药浓度则需达到~./ .药动学研究 大多数口服易吸收,对全身系统的细菌感染均有特效,而用于肠道感染的, 口服吸收程度虽然很差,但在肠道内仍能够保持较高的浓度,从而起到抑菌作用。目前临 床上常用的主要分为肠道易吸收的磺胺药、肠道难吸收的磺胺药和外用磺胺药三类。 肠道易吸收的磺胺药主要有:磺胺噻唑,磺胺二甲嘧啶,磺胺对甲氧嘧啶,磺胺喹恶啉和 磺胺氯吡嗪等;肠道难吸收的磺胺药主要有:磺胺脒,酞磺醋胺等:外用磺胺药主要有:郝增坤磺胺氯吡嗪钠.二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除研究 磺胺醋酰钠和磺胺嘧啶银等。各种内服易吸收的,生物利用度的大小会因动物种属和 药物种类的不同而有一定差异,顺序为:禽犬猪羊牛;。肉食动 物口服磺胺药后~血药达峰浓度,草食动物,牛、羊等反刍动物~。此 外,胃肠机能减退时会影响药物的吸收。磺胺药还可制成钠盐进行腹腔注射、肌注、子宫 及乳管注入,吸收程度均很高。据报道磺胺甲嗯唑片口服后易被胃肠道吸收,吸收完全, 但吸收较慢,给药后~血药浓度达到高峰【】。 吸收后可分布于全身体液和各组织中。以血液、肝脏和肾脏中含量较高,在神经、 皮脂和肌肉中的含量较低,药物在乳腺、腹膜、胎盘、胸膜、及滑膜腔内也有少量的分布。 磺胺药进入血液后会与血浆蛋白结合,但程度不一,虽然结合后药物会暂时失去抗菌活性, 但由于药物与蛋白结合比较疏松,能逐步的将药物释放出来,从而发挥抑菌作用。与 血浆蛋白的结合率低,因此进入脑脊液的浓度较高,故可将作为脑部细菌感 染的 首选药物【, 。与血浆蛋白结合率高的磺胺药其排泄也较缓慢,因此血中有效药物浓度的 维持时间也会较长【 ,发挥药效的时间也会延长。 肝脏是磺胺类药物在体内的主要代谢部位,最常见的代谢方式是对位氨基的乙酰化, 其次为羟基化和结合三种代谢途径。对位氨基经乙酰化灭活是比较常见的代谢方式,乙酰 化程度与动物种属和药物种类有一定的关系,由于犬科类动物缺乏对芳香胺的乙酰化能 力,因此犬的乙酰化程度极低,必须要依靠其它的代谢方式将磺胺药转化为活性低的产物。 磺胺药乙酰化物溶解度较低,因此易在肾小管析出结晶,给泌尿系统造成一定程度的损害。 因此应在用药期间给予等量的碳酸氢钠同服,以碱化尿液,这样可以提高磺胺药及其代谢 物的溶解度,利于药物的充分吸收。磺胺间甲氧嘧啶的乙酰化率较低,且溶解度 较大,因此不易引起血尿和结晶尿。磺胺甲基异恶唑与磺胺噻唑的乙酰化 率均较高,其中是最容易引起肾脏损害的一种磺胺药,由于其毒性大,如今已被其它的 磺胺药所取代,而在人体内发生乙酰化后主要是以.乙酰基.磺胺甲恶唑. ?的形式从体内排出【。 世纪年代我们就已经得知磺胺类药物的羟化代谢,到现在为止人类已经研究了各 种羟化物及其衍生物【】,但羟基化所占的比例并不高。除此之外,部分磺胺药的原形及 其代谢产物还会与葡萄糖醛酸结合而由尿液排出。除这三种代谢方式外,氧化作用、脱氨 基作用、杂环断裂的途径也存在于动物或人体内,其它还有可能的代谢方式包括甘氨酸和 鸟氨酸的结合等【圳。 钟平【 研究了磺胺氯吡嗪在鸡体内的药动学特征,结果显示,口服给药后的血药浓度 扬州大学硕:二学位论文 .时间曲线符合一级吸收一室开放模型。磺胺氯毗嗪在鸡体内分布广泛而迅速,消除缓慢, 内服吸收完全,绝对生物利用度较高,达到了.%。】报道了磺胺氯吡嗪 钠在鸡体内的药动学特征,试验鸡静注和嗉囊给予相同剂量的磺胺氯吡嗪钠 /.,利用法检测血浆中磺胺氯吡嗪的药物浓度,数据分析结果显示, 磺胺氯吡嗪的绝对生物利用度并不高,仅为。%,建议此药仅作肠道寄生虫感染用, 而不是全身系统的感染。在两种不同的给药方式下,磺胺氯吡嗪在鸡体内均具有较长的半 衰期,分别为.和.,由于半衰期很长,因此在应用磺胺氯吡嗪治疗畜禽疾病感 染时要重视休药期的问题。曾报道公鸡静注磺胺氯吡嗪钠/.的消除 半衰期为.,消除半衰期较长,药物有效浓度维持时间较长,因此能够充分发挥药效。 王柄璋等研究了两种口服磺胺氯毗嗪钠饮水剂在鸡体内的药动学特征,实验鸡按 /.的剂量进行磺胺氯吡嗪钠溶液和磺胺氯吡嗪钠可溶性粉内服给药,利用 法测定血浆中磺胺氯吡嗪的浓度,结果表明,药时曲线符合一级吸收二室开放模型,可溶 性粉和溶液剂中的磺胺氯吡嗪消除半衰期分别为.和.,分别为 、. 、 ./‘和./?,达峰时间和峰值浓度分别为. /和. . /,磺胺氯吡嗪钠溶液中磺胺氯吡嗪的相对生物利用度为.%,吸收完全。 伍莉【研究了磺胺间甲氧嘧啶在水牛体内的药动学特征,试验水牛按照/. 的剂量肌注单方和复方缓释型注射液,法检测血浆中的药物浓度,结 果表明,在水牛体内的药时数据符合一级吸收二室开放模型,复方缓释型注射 液肌注给药后,消除缓慢,达峰时间延迟,血浆药物浓度较稳定,具有缓释和增效 的作用。 赵丽艳【 】等研究了磺胺甲恶唑及其乙酰化代谢物在人体内的药动学特征, 实验测定人口服磺胺甲恶唑后磺胺甲恶唑及其乙酰化代谢产物。.乙酰基.磺胺甲恶唑 ..的血药浓度,采用反相高效液相色谱法测定和.的血浆浓 度,结果显示,和..的消除半衰期分别为.和.,达峰时间分别 为.和.,峰浓度分别为./和./,给药后乙酰化代谢多态性的现象 并没有在人体内出现。 .残留检测 随着磺胺类药物在临床上的广泛应用,磺胺类药物在动物源性食品中的残留问题已逐 渐引起人们的关注,为了避免食品安全问题的发生和监控动物源性食品中磺胺类药物的残 留,国内外对磺胺类药物在可食性组织中的残留监控越来越重视,联合国食品法典委员会 郝增坤磺胺氯吡嗪钠.二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除研究 和许多国家规定,动物源性食品中磺胺类药物的最大残留限量为./, 我国规定食品中磺胺类药物总量亦均不得超过./。一些国家的要求更严,如同本则 规定食品中不得检出磺胺类药物。 近年来对磺胺类药物在动物源性食品中的残留检测已目渐成熟,目前国内外检测动物 源性食品中磺胺类药物残留的方法有微生物法、固相萃取一高效液相色谱法 .、高效液相色谱法、酶联免疫测定法、 液相色谱串联质谱法?/等,其中法是最常用的方法。 林海丹【报道了动物源性食品中磺胺嘧啶等四种磺胺药的固相萃取.高效液 相色谱残 留检测方法,样品经二氯甲烷提取,甲醇.乙酸.『己烷液液萃取脱脂,固相萃 取小柱 净化,甲醇.%乙酸/,/作为流动相,种磺胺药添加浓度范围在~/内 线性关系良好,.,方法的检测限为./~./,添加回收率%~ %,满足检测要求。 报道利用法检测鸡肌肉和肝脏中磺胺氯吡嗪的残留,样品经二 氯甲烷.甲醇.乙酸::,//提取,利用.柱进行进一步的提纯,二氯甲烷洗脱药 物,流动相为%的氨化乙腈.,检测波长为,结果表明,磺胺氯吡嗪在鸡 肌肉和肝脏中的检测限是./,肌肉组织中的添加回收率为.%~.%,肝脏组织 中的添加回收率为.%~.%。 庞国芳【峙艮道利用液相色谱.串联质谱法同时测定家禽组织中种磺胺药的 残留,样 品经乙腈提取,正己烷脱脂,乙腈.. /乙酸铵溶液/,/为流动相,利用 分离,电喷雾串联四级杆质谱进行检测,方法的检测限为../,定量 限为.~./。 岳秀英【】报道利用法测定动物肌肉中磺胺间甲氧嘧啶和磺胺地索辛 等磺胺类药物的残留,样品经乙腈提取,正己烷去脂,碱性氧化铝柱净化。 结果表明,几种磺胺药的线性范围在../内线性相关,相关系数均大于., 方法的最低检测限为/,批内和批间变异系数均小于%。 贺亮【删建立了直接竞争方法检测牛奶中磺胺二甲嘧啶的残留,该方法的最小检 出限为./,检测范围为//,添加回收率为./旷.%,批内和 批间变异系数均小于%。利用微生物检测法检测动物组织中磺胺类药物,检测 限与接近,满足检测要求。 】报道了磺胺氯哒嗪在火鸡组织中的残留消除规律,实验鸡按扬州大学硕:学位论文 /./的口服剂量,连续给药天,在停药第七天开始检测组织中的药物残留量, 检测结果显示,磺胺氯哒嗪在肌肉中的残留浓度最高,磺胺氯哒嗪在火鸡的休药期定为 ,可以保障消费者的安全。 抗菌增效剂类药物研究概述 抗菌增效剂 是人工合成的二氨基嘧啶类药物。此类药物能 够增强磺胺类药物和其它多种抗生素的疗效,因此被称为抗菌增效剂。常用的抗菌增效剂 有三甲氧苄氨嘧啶、二甲氧苄胺嘧啶、二甲氧甲基苄胺嘧啶。国 内常用和,而为动物专用。国外应用的此类药物还有阿地普林 。 和巴喹普林,国内较少应用【 .理化性质、作用机理与抗菌活性 抗菌增效剂类药物均为淡黄色或白色结晶性粉末,味微苦,难溶于水,可溶于酸。此 类药物的抗菌谱与磺胺类药物相似,效力较强。对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有 较强的抗菌作用,但对结核杆菌、丹毒杆菌和钩端螺旋体等基本无效。抗菌增效剂主要是 通过抑制二氢叶酸还原酶,使二氢叶酸不能还原为四氢叶酸,从而妨碍了菌体核酸和蛋白 质的合成。本类药物与磺胺药或者其他抗菌药物联合应用时,可从两个不同环节同时阻断 叶酸代谢而起到双重阻断作用,使抗菌作用增强数倍至数十倍,甚至使抑菌作用转变为杀 菌作用,而且可减少耐药菌株产生【】。此类药物还能增强其他一些抗菌药物如红霉素、庆 大霉素的抗菌作用【】。赵振生嗣报道和均能明显提高磺胺喹恶啉和磺 胺氯吡嗪钠的抗球虫效果。新型抗菌增效剂巴喹普林同样具有抗菌谱广、活性强 的优点,体内抗菌活性是的倍,体内吸收迅速,消除缓慢,生物利用度高,属长 效制剂,与磺胺药尤其是长效磺胺药具有良好的配伍增效作用,同时对球虫等原虫感 染具有较强的抑制作用,但直到现在国内还没有申请有关于的新兽药,有待 进一步研 究【。 .毒理学特性 抗菌增效剂毒性非常低、副作用小。一般情况下不会出现任何的毒副作用,如果长期 使用或大剂量使用,可能会引起动物的白细胞和血小板的减少。盛大森报道一农村养殖 户因长期和过量应用导致家禽中毒,用药量是正常用药量的~倍,导致发生 家禽的中毒和死亡,造成了一定的经济损失。过敏反应和神经症状少见,且症状并不明显。 同时孕畜和初生仔畜在应用抗菌增效剂时可能会引起叶酸的摄取障碍,因此仔畜尽量不要 应用磺胺类药物和抗菌增效剂,同时大家畜在用药时也应严格掌握用药剂量,防止药物中 郝增坤磺胺氯吡嗪钠.二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除研究 毒。 吴雪红四报道对小鼠的为/,而对小鼠的则大于 】进行 /,按治疗剂量长期使用,并不会出现任何的不良反应。 了和的遗传毒性试验,实验证明对体内和体外哺乳细胞均具有一定的毒 性。报道利用和实验菌株进行沙门氏菌属和哺乳动物细胞微核试验, 以检测抗球虫药的致突变性,结果表明对任一菌株中不管有无大鼠混合物的 存在, 均无致突变性,但是在利用仓鼠混合物进行代谢激活后,发现对具 有一定的致突变作用。新型抗菌增效剂口服为~ /,且无肝脏毒性, 实验证明/剂量下基本无遗传毒性作用【。 .临床应用 抗菌增效剂对多数革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌都有作用。由于抗菌增效剂单独使用 易产生耐药性,因此临床上抗菌增效剂一般不单独使用,常以:的比例与磺胺药和其它 抗生素联合应用。临床上常用或与磺胺药制成复方制剂,如复方磺胺嘧啶口服 液、复方磺胺氯吡嗪钠溶液等,用于链球菌和革兰氏阴性菌引起的各种感染,对动物肠道 感染、球虫感染、鸡白痢禽大肠杆菌病等都有很好的效果。与也用于禽球虫病 的治疗】。 。药动学研究 内服吸收迅速且完全,达峰浓度时间较短,吸收后广泛分布于体液和各组织中, 半衰期在不同种属间存在较大差异,主要从尿液中排出,也有少量从粪便和胆汁中排出。 二甲氧苄啶内服吸收很少,血中药物浓度最高时仅为的/,在胃肠 道内浓度较高,主要从粪便排出,故主要用于治疗肠道细菌感染‘。 ?报道,按/,/;,/给药剂量进行三种不 同途径静脉注射、肌肉注射和口服给药后研究两种药物在鸵鸟体内的药动学和生物利 用度,结果表明肌肉注射后和的绝对利用度为.%和.%,口服绝对生物 利用度分别为.%和.%,吸收均较完全。 钟/占士【报道,肌肉注射给药,/、口服给药,/和复 方口服给药,/和,三种给药方式下,分析了和 在罗氏沼虾中的动力学和在组织中的分布特征,结果表明复方口服给药后的消除半 衰期为.,对的药动学特征并无显著影响。口服给药后,和在 肝胰腺中的药物浓度要高于同时间肌肉组织中的药物浓度,在肌肉和肝胰腺中的消除扬州大学硕二二学位论文 基本一致。 峙艮道了和在鸡的药动学和口服生物利用度的研究,雉鸡通过口服和 静脉两种方式给药后,利用法测定血浆中和的药物浓度,结果显示, 和的半衰期分别为.君.,消除迅速。表观分布容积分别为./和./, 表明在组织中较分布较广泛,两种药物的口服生物利用度约为%,吸收较完全。 .残留检测 目前欧盟和国内对的残留限量并没有严格的规定,但同本肯定列表中规定禽组 织肌肉、肾脏、皮脂、肝脏中的的最高残留限量为./。日本、欧盟和国 内等国对动物组织中的的残留限量都做了严格规定,为./。国内外有关动物 源性食品中抗菌增效剂类药物残留量的测定方法较多,主要包括分光光度法、毛细管电泳 ‘ 检测法、液质联用法【和高效液相色谱法【,高效液相色谱法因其特异性强、灵敏度高、 成本低等特点而成为首选检测方法。 陈丽【报道了一种测定动物源性食品中残留量的高效液相色谱法。样品经碱性 二氯甲烷提取,酸性条件下用乙酸乙酯、正己烷和阳离子小柱净化,高效液相色谱测定, 外标法定量。结果显示,在.~/的线性范围内,线性关系良好,., 样品添加回收率在.%~.%之间,相对标准偏差为.%~.%。方法的最低检出限 ./,可满足动物源性食品中残留检测。 报道利用法检测牛肉中的残留,样品经乙腈和水提取, 柱净化,.分离,进行高效液相色谱一二极管阵列分析。结果 表明,样品添加回收率范围为%~%,相对标准偏差范围为.%~%,方法检测限 和定量限分别为./和./,批内和批间变异系数均小于%, 相关系数为.。 徐建君【建立了毛细管电泳高频电导法测定药物和尿液中的,./一%甲 醇.为电泳介质,分离电压为.,在此条件下,的检出限为./。 本方法可用于临床检测和药物制剂的质量控制。 呔【报道利用法检测鸡蛋和鸡组织中的和的残留量,利用 反相色谱柱进行分析。的检测限为.~.,的检测限为 ..,和在鸡组织中的添加回收率范围为%%,满足检测要求。 研究目的及意义 磺胺氯吡嗪钠,,结构式见图是磺胺类药物中抗菌作用较郝增坤磺胺氯吡嗪钠.二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除研究 强的一种,化学名为..氯..吡嗪基..氨基苯磺酰胺钠盐一水化合物,分子式 ,分子量:.。本品为淡黄色或白色粉末状,易溶于水和甲醇, 不溶于氯仿。磺胺氯吡嗪钠在兽医临床上主要作抗球虫药用,磺胺氯吡嗪在胃肠道内吸收 较差,其抗球虫活性峰期是球虫的第二代裂殖体,同时对第一代裂殖体也有作用,但对有 性生殖周期无效?,由其制成的磺胺氯吡嗪钠可溶性粉三字球虫粉主要用于球虫病爆 发时的治疗,也可用于球虫病爆发时继发禽霍乱和禽伤寒的防治 。磺胺氯吡嗪内服后在 消化道被迅速吸收,达峰时间~,经尿排泄。本品长期应用会出现一定的磺胺药中毒 症状,一般只能按照推荐剂量应用,连用一般不超过天。产蛋鸡禁用。目前球虫对其耐 药性较严重,甚至产生了交叉耐药性,致使其抗球虫药效明显下降、甚至无 效。近期实验 结果表明,磺胺氯毗嗪钠可溶性粉的抗球虫指数已下降至左右,对鸡球虫病的防治效 果较差,如遇到治疗效果不佳的现象,应及时更换药物。因此,研究如何提高磺胺氯吡嗪 钠的抗球虫活性,将具有重要的现实意义。,、 / 一弋》 ? 图磺胺氯吡嗪纳结构式. 二甲氧苄啶,,结构式见图,又称二甲氧苄氨嘧啶,化学名为 一,仁二甲氧苄基.,.嘧啶二胺,商品名为敌菌净,分子式为,分子量为 .。为白色或淡黄色结晶性粉末,味微苦,熔点.?,溶于浓盐酸,微溶 于稀盐酸,极微溶于氯仿,不溶于乙醇、乙醚、水、稀碱溶液。二甲氧苄啶为动物专用抗 菌增效剂,主要用于防治兔、禽球虫病和畜禽肠道感染,同时也可用于呼吸道和泌尿道感 染。与合用可对球虫和细菌的叶酸合成产生双重阻断作用,具有增效作用,使 抗菌作用增强数倍至数十倍,甚至使抑菌作用转变为杀菌作用,以扩大抗虫谱和抗球虫效 应。二甲氧苄啶因内服吸收很少,因此尤适合与磺胺氯吡嗪钠联合制成复方制剂用于治疗 鸡球虫病。扬州人学硕学位论文 孛 沪 ? 一 叱‰ 图二甲氧苄啶结构式 . 磺胺氯吡嗪钠一二甲氧苄啶溶液剂为~种复方新制剂,主要用于鸡球虫病的防治,该 复方制剂的使用不可避免地将导致药物在动物体内的残留,为监控磺胺氯吡嗪钠.二甲氧苄 啶溶液剂在动物源性食品中的残留,本研究拟对磺胺氯吡嗪钠.二甲氧苄啶溶液剂在鸡体内 的残留消除规律进行研究,以便为制定该复方制剂在使用靶动物??鸡的休药期提供依 据。磺胺氯吡嗪钠一二甲氧苄啶溶液剂在鸡体内的残留消除研究,不仅对科学合理使用该药 具有指导意义,而且对保证动物源性食品的安全、维护消费者的健康也具有现实意义。 参考文献 陈杖榴主编.兽医药理学.北京:中国农业出版社,:.. .? . . , , :? 上海第一医学院等编.医学药理学.北京:人民卫生出版社,. 程培英.实用兽医药理学.长春:吉林科学技术出版社... 【孙积辉.药物化学【】.人民卫生出版社,.. 张德昌.医学药理学.北京:人民卫生出版社,:.. 吕惠序.猪场如何正确使用磺胺类药物及抗菌增效剂.养猪. ,:..】】. . : .?. , 】穆春兰.磺胺类药物致肾损害的研究.黑龙江医药,,:. 】宋喜山.肉鸡磺胺氯吡嗪中毒误诊侈.河北畜牧兽医.,,:. . , ,【 // : . .,:. 】谭现义.磺胺类药物对鸡的慢性蓄积作用及安全及安全使用方法.当代畜 牧.,, 郝增坤 磺胺氯吡嗪钠.二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除研究 . 陈士星,唐式校.磺胺类药物防治家禽疾病的几个注意事项.养殖技术顾 问.,: . ..: .:. . 】 ..,:?. 庄泽帅,程良.临床上合理应用磺胺类药物的要点.养殖技术顾问.,. 【】王应庄.磺胺药物六十年】.中国药房,,:?. 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美国公司 丙酮 分析纯 中国上海横利试剂厂 甲醇 色谱纯 天津市科密欧化学试剂开发中心 国药集团化学试剂有限公司 正己烷 分析纯 氨水 分析纯 上海苏懿化学试剂有限公司 磷酸 优级纯 天津市科密欧化学试剂开发中心 盐酸 分析纯 中国上海横利试剂厂 超纯水 扬州大学兽医学院药理教研室制备扬州大学硕、学位论文 .仪器及其它 色谱工 高效液相色谱仪: ,配有紫外检测器和 作站;色谱柱为依利特色谱柱×. /, 电子天平:感量. 电子分析天平:感量. ,德国赛多利斯天平公司 .型旋转蒸发仪:浙江余姚新波仪表公司 .型循环水真空泵:河南郑州长城科工贸有限公司 型旋涡混合器:上海医科大学仪器厂 一型离心机:上海安亭科学仪器厂 可调微量移液器:~、、、,德国睑司 进行固相萃取: / .试液的配制 ..磺胺氯吡嗪标准储备液的配制 .士. 精密称取磺胺氯毗嗪钠对照品 棕色容量瓶中,用甲醇溶解并 于 定容至刻度,配成浓度为?/的磺胺氯吡嗪标准储备液,置?冰箱中保存,有 效期六 个月。 ..其它试液的配制 ./磷酸水溶液:量取.磷酸,用超纯水定容到。 ./盐酸溶液:取 盐酸置于 容量瓶中,用超纯水定容至刻度。 %氨化乙腈:将乙腈氨水按:比例进行混合。 方法 .试料的制备 试料的制备包括: ??取绞碎后的供试样品,做为供试试料。 ??取绞碎后的空白样品,作为空白试料。 ??取绞碎后的空白样品,添加适宜浓度的对照溶液,作为空白添加试料。 .提取与净化 准确称量绞碎并均匀的供试样品 聚丙烯离心管中,加入 .,置于 郝增坤磺胺氯吡嗪钠.二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除研究 , 无水硫酸钠,然后再加入 乙腈涡旋 匀浆~ ,超声提取, 。将上清液转移至 鸡心瓶中,再用 离一 丙酮清洗匀浆机刀头并转入残 渣中进行重复提取,超声提取 ,涡旋 后离一 正丙 ,合并上清液并加入 醇于?旋转蒸发至近干。 向蒸至近干的鸡心瓶中加入流动相 ,涡旋 ,残渣溶解后移至 聚丙烯离 , 心管中,再用正己烷洗涤鸡心瓶,合并洗涤液,涡旋振荡 离心, 弃去『己烷,保留下层液体备用。 采用小柱进行固相萃取,首先依次用 甲醇和 ./的盐酸活化、 平衡小柱。吸取上述流动相层,加入%的磷酸溶液后混匀上柱,自然重 /盐酸 力下流出,然后再依次用. 和甲醇 淋洗小柱,最后用%氨化乙腈 洗脱药物,洗脱液收集于 鸡心瓶中,于。下旋转蒸干。残留物用 流动相 溶解,过. 有机滤膜,收集滤液供分析。 .标准曲线的绘制 准确吸取..配制的标准储备液适量,依次用流动相稀释成,,,.,.和. /的标准工作液。在选定的色谱条件下,按浓度从低到高的顺序分别进样山作 分析。每个浓度重复次。以标准液浓度水平为自变量,各浓度水平的平均峰 面积 为因变量,作线性回归,绘制标准曲线,并求出其回归方程和相关系数。 .色谱条件 色谱柱:依利特色谱柱×. , 。 流动相:乙腈.. /磷酸水溶液/,/ 检测波长: / 流速: 进样量:“ 柱温:? 在上述检测条件下,能将磺胺氯吡嗪与组织中的其他组分完全分开,干扰少, 测得磺 胺氯吡嗪的出峰时间约为.左右。 .检测限和定量限的测定 取系列浓度磺胺氯吡嗪标准液.,.,. /各. 于士.空白匀浆 组织肝脏、皮脂、肌肉、’肾脏、中,制得.,.,.肛/个组织药物浓度,按扬州 人学颂学位论文 .方法处理,重复次,进行测定。 测得样品的峰高与噪音基线峰高,取信噪/时的浓度为检测限。 定量限通过标准曲线计算/芝,标准曲线的下限即定量限。 .回收率及变异系数的测定 准确称取份各士.均质的空白组织,置于 聚丙烯离心管中,分别加入磺 . 胺氯吡嗪标准液.,., ,使磺胺氯吡嗪在各组织样品中的浓度分别 /各. 为.,.幂. /。经.项下的方法处理后,取滤液进样作测定,同时用对 应浓度的磺胺氯吡嗪标准液.,.,. /进样“,作测定。将经过前处 理的各种样品的药物峰面积除以直接进样的药物峰面积,计算出磺胺氯吡嗪的绝对回收 率。每批每浓度平行设个重复样品,工作个批次,根据结果计算批内与批间变异系数。 .空白试验 空白试验除不加试料外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作。 结果与分析 .色谱行为 磺胺氯吡嗪标准品、各空白组织、空白添加样品分别见图~图。在试验选定的色 谱条件下,测得磺胺氯吡嗪的保留时间为.左右。 图磺胺氯吡嗪标准品色谱图./ . .,/ 郝增坤磺胺氯吡嗪钠.二甲瓴苄啶溶液:鸡的残留消除研究 ????????????????????????????????????????????????????????????????? ?????????????????????????????????一一 图空白肌肉色谱图 . 图空白肌肉添加磺胺氯吡嗪标准品./色谱图 ../ 图空白皮脂色谱图 . 扬州人学坝学位论文 图空白皮脂添加磺胺氯吡嗪标准品./色谱图 ../ 图空白肾脏色谱图.图空白肾脏添加磺胺氯吡嗪标准品./色谱图 . ./ 郝增坤磺胺氯吡嗪钠一二瓴苄啶溶液相:鸡的残留消除研究 洲 ?? \ ‘? \\ \?少?\ ; ; ; ;; ’ 图空白肝脏色谱图 图空白肝脏添加磺胺氯吡嗪标准品.?/色谱图 .../ .标准曲线及线性范围 磺胺氯吡嗪标准曲线及测定的线性范围结果见表。磺胺氯吡嗪平均浓度标准 曲线见 图。 表磺胺氯吡嗪标准曲线线性同归方程 . 扬州人学硕士学位论文 雁旧鲎 浓度/ 幽磺胺氯吡嗪标准液:作曲线. .检测禾定量 根据个空白样品的基线噪音值求其平均值,测得各样品的峰高与噪音基线峰 高, 取信噪时的浓度为最低检测限。最低定量限通过标准曲线计算/一般要芝, 标 准曲线的下限即是定量限。测得磺胺氯吡嗪的检测限为. /。 /,定量限为. 本检测方法的检测限能满足磺胺氯吡嗪残留检测的要求。 .添加回收率及变异系数 磺胺氯吡嗪在鸡不同组织中添加回收率和准确度见表~。不同组织添加磺胺 氯吡嗪, 回收率均在%以上,批间和批内变异系数都小于%。 表鸡肌肉中添加不同浓度磺胺氯吡嗪的测定结果 .. . . . . . . . . .. . . . . . . .. . . . . . . . .:. . . 郝增坤 磺胺氯吡嗪钠.二甲氧苄啶溶液在鸡的残留消除 研究 表鸡肾脏中添加不同浓度磺胺氯吡嗪的测定