气相色谱法同时测定生物样品中甲醇乙醇含量

气相色谱法同时测定生物样品中甲醇、乙醇含量 摘要: 目的 建立运用顶空-气相色谱法同时测定生物样品中甲醇、乙醇含量的方法。方法 对生物样品进行顶空处理，取1.00 ml顶空气体进样，选择GDX-102柱进行色谱分离，以保留时间定性，峰面积定量。结果 本方法检测血液样品甲醇相对标准偏差2.32%~5.28%，乙醇相对标准偏差2.29%~6.15%。不同生物样品在0.2mg~1.0mg添加范围内甲醇加标回收率92.0%~105%,乙醇加标回收率92.0%~102%。结论 采用本方法同时检测检测生物样品中甲醇、乙醇的含量具有快速、准确、灵敏度高的特点，并适宜于推广、应用。 关键词:顶空-气相色谱法;生物样品;甲醇；乙醇。 Gas chromatography and determination in biological sample methanol, ethanol content Chen Hong，en Zhao Xintao center for disease control and prevention of he nan Wu yang Abstract: aim to establish the top empty-using gas chromatography and determination in biological sample methanol, ethanol content method. Method of biological samples top empty processing, take 1.00 ml top air body sample, select the GDX-102 column chromatography separation, to save time qualitative, quantitative peak area. The results of this method sample of blood methanol relative standard deviation is 2.32% ~ 5.28%, ethanol relative standard deviation is 2.29% ~ 6.15%. Different biological samples in 0.2 mg ~ 1.0 mg add range methanol is prevented.the recovery of 92.0% ~ 105%, ethanol is prevented.the recovery of 92.0% ~ 102%. Conclusion this method and testing detection in biological sample methanol, ethanol content is fast, accurate, and the characteristics of high sensitivity, and suitable for popularization and application. Key words: top empty-gas chromatography; Biological samples; Methanol; Ethanol. 甲醇、乙醇属挥发性醇类，具有麻醉作用。临床上饮酒过量、误饮假酒或工业酒精引起甲醇或乙醇中毒的情况发生。本文研究了顶空-气象色谱外标法同时测定生物样品中甲醇、乙醇含量，操作简单，精密度高，定量准确，适于实际样品的测定。 1. 材料和方法 1.1 仪器与试剂 GC 4010A型气相色谱仪（北京东西电子研究所，FID检测器）及配套A 5000气相色谱工作站；600型恒温水浴箱（江苏金坛市中大仪器厂）；25 ml顶空瓶；橡胶塞；铝封；1 ml进样器。甲醇（色谱纯）；乙醇（色谱纯）；氯化钠（分析纯）；蒸馏水。 1.2. 标准溶液配制准确吸取1.26ml甲醇，1.27ml乙醇于100ml容量瓶中用纯水定容至刻度，配成浓度为10.0mg/ml的甲醇标准溶液和乙醇标准溶液。取10ml上述液于100ml容量瓶中，用纯水定容至刻度，配成1.0mg/ml的甲醇、乙醇标准使用液[1]。 1.3仪器参数 色谱柱：GDX-102柱（4 mm×2 m不锈钢柱，60目~80目）；载气：高纯氮气，流速为40.0 ml/min；氢气流速为40.0 ml/min；空气流速为450 ml/min；气化室温度为190 ℃；检测器温度为190 ℃；柱温为170 ℃[2]。 作者单位：河南省舞阳县疾病预防控制中心，河南 舞阳 462400 邮箱：chenhongen888@163.com 作者简介：陈红恩（1974-），男，主管技师，本科，主要从事理化检验工作 1.4 样品处理 1.4.1血液、尿液等液体样品 取1.00 ml于顶空瓶中，加入1g氯化钠，4.00 ml水，加橡胶塞和铝封，并混匀，于60 ℃水浴加热15 ~20 min后，取1.00ml顶空气体进样，外标法定量。 1.4.2胃内容物、组织器官等固体样品 取1g经绞碎的样品于顶空瓶中，其余步骤同1.4.1。 2 结果 2.1 平衡温度的选择 取同一生物样品，做5个平行样，选择不同的平衡温度，15 min作为平衡时间，测定峰面积。由 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1可以看出，温度越高，分析灵敏度越高；然而过高的温度会在进样时进入太多的水蒸气，且峰面积变化不是太明显，在限定温度条件下,高沸点的组分不进柱,对色谱柱的污染少，从而延长色谱柱的使用寿命，因此， 60 ℃作为平衡温度。 表1 平衡温度与峰面积的关系 平衡温度（℃） 40 50 60 70 80 甲醇峰面积（μv·min） 23575 31909 50249 63144 72762 乙醇峰面积（μv·min） 74554 109872 163028 209582 237853 2.2 平衡时间的选择 取同一生物样品，做5个平行样，60 ℃水温作为平衡温度，选择不同的平衡时间，测定峰面积。由表2平衡时间和峰面积的关系可以看出，在15 min时峰面积保持不再增加，因此本试验选择平衡时间是15 min~20 min。 表2 平衡时间与峰面积的关系 平衡时间（min） 5 10 15 20 25 甲醇峰面积（μv·min） 25624 28052 34875 34908 34952 乙醇峰面积（μv·min） 70171 86648 112982 113087 112996 2.3方法的精密度试验 取18个25ml的顶空瓶，每6个一组，分别加入三个不同浓度血样，按样品处理方法处理并检测，由表3、表4可见甲醇相对标准偏差（RSD）为4.33%~7.60%；乙醇相对标准偏差（RSD）为4.33%~7.60%。 表3 气相色谱法测定血液样品中甲醇含量的精密度试验 样品 编号 甲醇测定值 /mg 平均值 /mg RSD /% A 0.23 0.23 0.25 0.24 0.23 0.26 0.24 5.28 B 0.82 0.84 0.86 0.88 0.82 0.82 0.84 3.02 C 1.32 1.35 1.38 1.30 1.33 1.30 1.33 2.32 表4 气相色谱法测定血液样品中乙醇含量的精密度试验 样品 编号 乙醇测定值 /mg 平均值 /mg RSD /% A 0.22 0.24 0.25 0.23 0.21 0.23 0.23 6.15 B 0.80 0.85 0.86 0.88 0.84 0.87 0.85 3.33 C 1.30 1.35 1.36 1.31 1.35 1.38 1.34 2.29 2.4方法的准确度测定 取9个25ml的顶空瓶，每3个一组，对血液、尿液、胃内容物分别做加标回收率试验，由表5可知不同生物样品在0.2mg~1.0mg添加范围内甲醇加标回收率92.0%~105%,乙醇加标回收率92.0%~102%。 表5 气相色谱法同时测定血液样品中甲醇、乙醇含量的加标回收试验 样品 甲醇/mg 乙醇/mg 本底值 加标量 测得量 回收率 本底值 加标量 测得量 回收率 血液 0.50 0.20 0.71 105% 0.50 0.20 0.69 95.0% 0.50 0.96 92.0% 0.50 0.97 94.0% 1.00 1.45 95.0% 1.00 1.44 94.0% 尿液 0.30 0.20 0.49 95.0% 0.30 0.20 0.49 95.0% 0.50 0.78 96.0% 0.50 0.76 92.0% 1.00 1.31 101% 1.00 1.26 96.0% 胃内 容物 0.60 0.20 0.79 95.0% 0.60 0.20 0.79 95.0% 0.50 1.08 96.0% 0.50 1.08 96.0% 1.00 1.57 97.0% 1.00 1.52 102% 2.5 实际样品测定 按方法1.4对血液样品中甲醇、乙醇进行测定，甲醇、乙醇的谱图能完全分离，且峰形完好，无杂峰干扰。见图1 图1气相色谱法同时测定血液样品中甲醇、乙醇含量色谱分离效果图 3.结论 采用本方法同时检测生物样品中甲醇、乙醇的含量，具有样品处理方式简单，对色谱柱污染小，快速、准确、灵敏度高的特点，并适宜于推广、应用。 4.参考文献 [1]GA/T105-1995血、尿中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、异戊醇的定性分析及乙醇、甲醇、正丙醇的定量分析方法［S］.中华人民共和国公安部. [2]GB/T5009.48-2003蒸馏酒与配制酒卫生标准的分析方法［M］.中国标准出版社， 2004：404.