高效液相操作注意事项
(1)色谱柱:
1、 使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相
类型等;
2、 如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水(如
5,甲醇水溶液)，再用甲醇冲洗。
3、 色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存. 4、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱; 使用过程中注意轻拿轻放。
(2)先以所用流动相冲洗系统一定时间(如所用流动相为含盐流动相，必须先用水
冲洗20分钟以上再换上含盐流动相)，正式进样
分析
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前30min 左右开启D灯
或W灯，以延长灯的使用寿命;
(3)溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变
脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤;
(4)实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再
用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯;
(5)关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机
常见故障排除:
1、 操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。当出现错误警告
(各组件指示灯均为红色)，一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故
障排除后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再
点击操作界面中的Instrument/System On即可。
2、 连接柱子与管线时，应注意拧紧螺丝的力度，过度用力可导致连接螺丝断裂。
柱接头处易发生漏液，可能情况为接头Fittings中间的管子未和接口处贴紧。
不同厂家的管线及色谱柱头结构有差异，最好不要混用，必要时可使用PEEK
管及活动接头;
3、 操作过程若发现压力非常高，则可能管路已堵，应先卸下色谱柱，然后用分段
排除法检查，确定何处堵塞后解决。若是保护柱或色谱柱堵塞，可用小流量流
动相或以小流量异丙醇冲洗，还可采用小流量反冲的办法(新柱不提倡)，若还
是无法通畅，则需换柱;
4、 运行过程中自动停泵，可能为压力超过上限或流动相用完;
5、 样品瓶中样品较少，自动进样器进样针无法到达液面，可采用调低进样针进样
高度的办法，注意设置时不要使进样针碰到瓶底，微量样品分析应使用微量样
品瓶;
6、 自动进样器进样针未与样品瓶瓶口对准时，需重新定位。
7、 泵压不稳或流量不准，可能为柱塞杆密封圈问
题
快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题
或seal wash垫圈问题，需更
换;
8、 基线产生不规则噪声，可能原因为系统不稳定或没达到化学平衡(使其平衡， 若
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用离子对试剂，在首次使用使需要足够的时间和溶剂体积，色谱柱才能达到足够的平衡)，流动相被污染(更换流动相，清洗储液器、过滤器，冲洗并重新平衡系统)，色谱柱被污染(为证明可能的原因更换系统的色谱柱或使用一根同类的被证明性能好的色谱柱)，检测器不稳定;
9、 短期有规则的噪声，可能原因为泵压不稳或泵脉冲，调节溶剂不适当(如两种
溶剂的互溶性问题)，泵入口管路松或堵塞，泵太脏，泵柱塞磨损，检测器不稳
定;
10、 长期有规则噪声，可能原因为室温不稳(未使用柱温箱)或使用柱温箱不当; 11、 基线漂移，可能原因为系统不稳或没有达到化学平衡，室温不稳(未使用柱温
箱)，流动相污染或分解，柱污染，检测池泄漏，系统泄漏，固定相流失(另
选流动相，另选色谱柱)，测定的波长选择错误(对溶剂有吸收)，样品组分保
留太长(用强度合适的溶剂清洗色谱柱)，检测器不稳定; 12、 每次进样时的保留时间不重复，可能原因为系统不稳或未达到化学平衡，由于
气泡、各部件磨损等原因引起的泵压或泵脉冲输液不稳定，进样体积太大或样
品浓度太高平衡被破坏，溶剂配比不合适，柱被污染;
13、 无峰，可能原因为检测器选择错误，使用错误的流动相，样品降解; 14、 色谱峰比预计的小，可能原因为进样体积错误，检测器灯故障，进样问题(瓶
号错、进样体积不合适、进样错误、针头堵塞);
15、 峰变宽，可能原因为进样体积太大或样品浓度太高，过滤器、保护柱入口、柱
入口或连接管路有部分堵塞，检测器时间常数设置错误，进样器问题(如阀漏、
针头堵塞或损坏)，柱或保护柱被污染，对流动相来说样品溶剂太强，使用错误
的色谱柱，温度变化;
16、 出现双峰/肩峰，可能原因为保护柱或柱入口部分阻塞，柱或保护柱被污染，
柱性能下降，保护柱失效，进样体积太大或样品浓度太高(样品过载)，平衡
破坏;
17、前沿峰，可能原因为进样体积太大或样品浓度太高(样品过载)，平衡破坏，
对于流动相来说样品溶剂非极性太强(对于反相柱)，柱或保护柱被污染，性
能下降，保护柱失效;
18、 脱尾峰，可能原因为柱或保护柱被污染，柱性能下降，保护柱失效，进样器问
题(如阀漏等)，检测器时间常数设置错误;
19、 出现鬼峰，可能原因为流动相被污染，样品预处理时产生降解或混入杂质，先
前进样的流出物，样品定量管清洗不当，注射器脏，柱被污染，进样装置被污
染，流动相中含有稳定剂/稳定剂变化。
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浙公网安备 33021202002483