注射用间苯三酚的制备_质量控制及稳定性考察

·286 · China Pharmacy 2007 Vol . 18 No . 4 中国药房 2007 年第 18 卷第 4 期 Phloroglucinol f or Inject ion : Preparation , Qual ity Control and Stabil ity Study L I J ianhe ,L I Yinbo ,CU I Wei (Dept 1of Pharmacy , The Seco nd Xiangya Hospital ,Cent ral Sout h U niversit y , Changsha 410011 ,China) HU Hongxia (Deshan Division of Human Changde No1 1 People’ s Hospital , Changde 415001 ,China) ABSTRACT OBJ EC T IV E : To prepare p hloroglucinol for injection , establish it s qualit y cont rol and determine it s stability1 M E THODS : The type and dosage of t he adjuvant in t he formula were optimized and t he p hloroglucinol for injection was p re2 pared , wit h it s content determined by HPL C1Meanwhile it s stability was tested1R ESUL TS : Mannitol 10010g was determined as t he adjuvant in t he formula1The linear range of p hloroglucinol was 0113～1104mg1mL - 1 ( r = 11000 0) 1No obvious changes were observed at 6 mont h of an accelerated test or 12 mont h of long - term storage test 1 CONCL U SION S : The p reparation is reasonable and feasible in techniques ,cont rollable and stable in qualit y ;and t he established met hod is recurrent ,specific and t he determination result s are wit hin defined margin1 KEY WO RDS Phloroglucinol for injection ; Preparation ;Qualit y cont rol ;Stability ·医院制剂 · 注射用间苯三酚的制备、质量控制及稳定性考察 李健和 1 * ,胡弘霞 2 ,黎银波 1 ,崔 巍 1(11 中南大学湘雅二医院药剂科 ,长沙市 410011 ;21 湖南常德市第一人 民医院德山分院 ,常德市 415001) 中图分类号 R927111 文献标识码 A 文章编号 1001 - 0408 (2007) 04 - 0286- 03 摘 要 目的 :制备注射用间苯三酚 ,建立其质量控制方法并考察其稳定性。方法 :对处方中填充剂的种类、用量进行选择 ,并制备 注射用间苯三酚 ;采用高效液相色谱法测定其中间苯三酚的含量 ,并对制剂进行稳定性试验。结果 :确定了以甘露醇 10010g 为填充 剂的制剂处方 ; 间苯三酚检测浓度在 0113～1104mg ·mL - 1 范围内线性关系良好 ( r = 11000 0) ; 恒温加速试验 6mo 及长期留样 试验 12mo 时主药含量及有关物质检测未见明显改变。结论 :该制剂处方工艺合理可行 ,质量可控 ,稳定性良好 ;所建立的含量测定 方法重现性好、专属性强 ,测定结果在规定限度内。 关键词 注射用间苯三酚 ;制备 ;质量控制 ;稳定性 * 主管药师。研究方向 : 新药研发。电话 : 0731 - 5292093。E - mail :lijianhexy @1261com 表 1 填充剂用量的选择及试验结果Tab 1 Results of test and optimizat ion of adjuvant处方 主药/ mg 甘露醇/ mg 颜色 成型性 复溶性 p H值 可见异物1 40 0 白色 可以成型 ,振摇即散 较差 4180 不合格2 40 50 白色 疏松饱满 ,表面不平整 良好 4192 合格3 40 100 白色 疏松饱满 良好 5105 合格4 40 200 白色 疏松饱满 ,裂瓶较多 良好 5110 合格 间苯三酚 ( Phloroglucinol) 是国外新近开发并应用于临床 的新型亲肌性非阿托品非罂粟碱类纯平滑肌解痉药 ,其能直接 作用于胃肠道和泌尿生殖道的平滑肌。与其它平滑肌解痉药相 比 ,间苯三酚不具有抗胆碱作用 ,在解除平滑肌痉挛的同时 ,不 会产生一系列抗胆碱样副作用 ,也不会引起低血压、心率加快、 心率失常等症状 , 对心血管功能没有影响 , 主要用于消化系统 和胆道功能障碍引起的急性痉挛性疼痛 , 急性痉挛性尿道、膀 胱、肾绞痛 ,妇科痉挛性疼痛的治疗 [1 ]。我国于 2001 年批准进 口法国 Lafon 大药厂的间苯三酚注射液 (商品名 : 斯帕丰) , 而 将其制成注射用灭菌粉末更增加患者用药安全性 ,且有利于提 高药品稳定性 [2 ]。为此 ,笔者研发了注射用间苯三酚 ,同时建立 其质量控制方法并考察了其稳定性。 1 仪器与试药 L C - 10A 高效液相色谱仪、SPD - 10A 紫外检测器 ,均为 日本岛津公司提供 ; p HS - 3C 型精密酸度计 (上海雷磁仪器 厂) 。间苯三酚原料药 (南京恒生制药厂 ,批号 : 31Z0E3F) ;间苯 三酚对照品 (用间苯三酚原料药经二次精制而得 , 含量 : 99199 % ,有关物质未检出) ;注射用间苯三酚 (中南大学湘雅二 医院自制 ,批号 :20050215、20050310、20050313、20050316) ;甘 露醇 (广东台山新宁制药厂) ; 乙腈为色谱纯 , 其余试剂均为分 析纯。 2 处方工艺研究 211 填充剂的选择及用量的确定 通常注射用灭菌粉末为解决产品外形不饱满或萎缩成团 粒的问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ,可适当添加填充剂 ,如甘露醇、氯化钠、葡萄糖等。考 虑选用氯化钠作填充剂 , 对药品渗透压影响较大 , 且不适于肾 盂肾炎等患者 ;选用葡萄糖作填充剂 ,不适于糖尿病患者 ,故注 射用灭菌粉末通常选用甘露醇作填充剂。为降低生产过程中的 能耗 , 缩短冻干时间 , 同时保证待冻溶液能顺利过滤并在冻干 前不会析出 ,配制适宜浓度的待冻溶液较为重要。另要求冻干 制品的性状良好、复溶快、p H 值适宜、可见异物检查合格。故拟 定处方设计不同的冻干药液进行配制 , 配制方法为 : 按下述处 方称取相应的主药和辅料 , 先加 80 %的注射用水搅拌溶解 , 再 补加注射用水至全量 ,分装后进行冻干 ,而后观察产品颜色、成 型性、复溶性、可见异物 ,测定药液 p H 值 ,结果详见表 1。 由表 1 可知 , 将间苯三酚直接冻干 , 其冻干制品的物理强 度太低 ,振摇即散。添加不同量的甘露醇作为骨架支撑剂 ,可改 善制品的物理强度 ,其中选用甘露醇的处方 3 制得的冻干制品 中国药房 2007 年第 18 卷第 4 期 China Pharmacy 2007 Vol . 18 No . 4 ·287 · 较好 ,所有检查项合格。故填充剂用量选定处方 3。 212 共熔点的测定 采用电阻法测定该制剂的共熔点。处方 : 间苯三酚 1010g 和甘露醇 2510g ,加注射用水 800mL ,不断搅拌使之溶解 ,补加 注射用水至 1 000mL , 插入量程范围为—40～50 ℃的温度计和 电极 ,置于低温冰箱中冻结过夜 ,取出置于室温下溶化 ,同时记 录电阻和温度的变化 ,结果在—2 ℃左右电阻急剧变化 ,故确定 该制剂的共熔点在—2 ℃左右。 213 冻干工艺的研究 21311 预冻 : 将制品置于经洗涤和灭菌合格的冻干箱内 , 采 用速冻法 , 设定冷冻干燥机导热油 (搁板) 温度为 —50 ℃, 开机 制冷 ,使制品温度降至—45 ℃以下 ,保温 4h。 21312 匀速升华干燥 :将冻干机的捕水冷凝器降温至 —55 ℃, 然后开始抽真空和搁板升温 ,升温速率为 012 ℃·min - 1 左右 , 使搁板升温至—3 ℃左右 ,升华干燥时间设定为 12、15、18、21h , 考察升华干燥时间与冻干制品含水量的关系 ,测得其水分分别 为 718 %、416 %、315 %、217 %。可见 ,当升华干燥时间在 15h 以上时 ,冻干制品含水量小于 5 % ,符合规定要求 [3 ]。再延长升 华干燥时间 ,冻干制品含水量下降幅度不大。故选用升华干燥 的时间为 15h ,该过程制品温度逐渐升至 —5 ℃。 21313 升温解吸附干燥 : 搁板按“21312”项下速率升温 , 至 35 ℃后保温 6h ;制品在该条件下温度逐渐升至 35 ℃左右。然后 向干燥箱内充入无菌氮气破坏真空及保护制品。自动全压塞 , 密闭制品瓶口 ,然后进入扎盖工序 ,即可。本冻干工艺总耗时在 40h 左右。 214 活性炭用量及保温温度的考察 在上述试验基础上 ,进一步考察活性炭的用量对主药间苯 三酚的吸附情况。本试验以活性炭对性状、间苯三酚含量、p H 值和细菌内毒素的影响为指标进行考察。 处方 :间苯三酚 20010g ,甘露醇 50010g ,注射用水加至 20 000mL 。 工艺 :在 10 000 级洁净区域内进行 ,称取间苯三酚 20010g 和甘露醇 50010g ,加注射用水 16 000mL ,不断搅拌使之溶解 , 补加注射用水至 20 000mL , 测定药液 p H 值 , 并将其控制在 415～515 范围内。然后等分成 5 份 ,每份 4 000mL ,其中第 1 份 不加活性炭 ,第 2 份加 0103 % ( W / V ) 针用活性炭即 112g ,第 3 份加 0105 % ( W / V ) 针用活性炭即 210 g , 第 4 份加 011 % ( W / V ) 针用活性炭即 410g ,第 5 份加 012 % ( W / V ) 针用活 性炭即 810g ,搅拌均匀 ,然后将上述样品均等分成 4 份 ,每份 1 000mL ,分别置 40、60、80、100 ℃条件下放置 30min 后 ,抽滤 脱炭。分别取样 4mL ,分装于 10mL 低硼硅玻璃管制注射剂瓶 中进行冷冻干燥 ,得成品后 ,分别取样进行检查。结果 ,活性炭 对间苯三酚有所吸附 , 且随活性炭用量的增大 , 其影响较为明 显 ,但温度影响不明显 ,随温度的升高 ,溶液颜色变黄加深。为 防止生产过程中带入热原 ,确定活性炭去除热原的条件为加配 液量的 0105 %( W / V )针用活性炭 ,40 ℃条件下保温静置 30min 后 ,抽滤脱炭。 215 药液 p H值范围的确定 为保证注射用间苯三酚的稳定性及人体生理适应性 ,对其 p H 值范围的确定尤为重要。根据上述确定的最佳制剂处方 ,称 取处方量间苯三酚和甘露醇 , 加约处方量 80 %的注射用水搅 拌溶解后 ,以 011mol ·L - 1 盐酸和氢氧化钠溶液分别调节药液 p H 值至 315、410、415、510、515、610、615 , 40 ℃条件下放置 30min ,考察间苯三酚溶液的性状及于 430nm 波长处溶液透光 率的变化情况 ; 分装后冻干 , 考察不同 p H 值条件下制备的冻 干制品的性状和复溶性情况。结果 ,p H 值对间苯三酚的溶液稳 定性有一定影响 , 在 40 ℃条件下放置时随药液 p H 值的增加 , 间苯三酚溶液的稳定性逐渐下降 ,溶液颜色变黄加深。根据注 射剂的质量要求和上述考察结果 , 本品配制的溶液 p H 值应控 制在 410～610 范围内 ,生产中一般控制在 510 左右。 216 生产工艺的确定 由上述试验结果得到最佳工艺为 :称取间苯三酚 4010g 和 甘露醇 10010g , 加 40 ℃注射用水 3 200mL , 不断搅拌使之溶 解 ,补加注射用水至 4 000mL ,测定药液 p H 值 ,并将其控制在 415～515 范围内。加“214”项下确定的针用活性炭 ,搅拌 ,静置 30min ,使用孔径为 0145μm 滤膜 ,用氮气作为压力源进行平板 压滤脱炭 ,将滤液保存备用 ,然后使用灭菌完毕、完整性试验合 格 (气泡点试验确定孔径为除菌级 ,压力条件 : 013 ×106kPa) 的 0122μm 筒式滤器进行除菌过滤。检查药液可见异物 ,测定药液 p H 值和主药含量 , 合格后分装于 10mL 已灭菌处理的低硼硅 玻璃管制注射剂瓶中 ,每瓶灌装 410mL 。将制品置于经洗涤和 灭菌合格的冻干箱内 ,采用速冻法 ,将液体制品按“21311”项下 方法预冻 , 再按“21312”项下方法操作至真空度示数符合产品 水分设计参数要求 ,最后按“21313”项下方法扎盖、灯检、贴签 , 即可。 3 质量控制 本品为间苯三酚加适量赋形剂 ,经冷冻干燥制成的无菌冻 干制品。按平均装量计算 ,含间苯三酚应为标示量的 9010 %～ 11010 %。 311 性状 本品为白色或类白色疏松块状物或粉末。 312 鉴别 31211 取本品 1 支 , 加注射用水 5mL 使之溶解 , 滴加三氯化 铁试液 1～2 滴 ,溶液应呈蓝紫色。 31212 取本品 1 支 , 加注射用水 5mL 使之溶解 , 加甲醛 011mL 和 40 %氢氧化钠溶液 011mL ,溶液应呈红色。 31213 在“314”项下记录的色谱中 , 供试品溶液主峰应与对 照品溶液主峰的保留时间一致。 313 检查 31311 酸度 :取本品 5 支 ,各加注射用水 4mL 使之溶解后 ,合 并其溶液 ,摇匀 ,按 2005 年版《中国药典》(二部) 相关内容 [4 ]依 法测定 ,p H 值应为 410～610。 31312 溶液颜色与可见异物 : 取本品 5 支 , 分别加注射用水 制成每 1mL 中含 10mg 的溶液 , 溶液应澄清无色 ; 如显色 , 与 黄色 1 号 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 比色液 [4 ]比较 ,不得更深 ;如显浑浊 ,与 1 号浊度 标准液 [4 ]比较 ,不得更浑浊。 31313 有关物质 :取样品中的内容物 ,准确称取适量 ,加流动 相制成每 1mL 中含 1mg 的溶液 , 作为供试品溶液。精密量取 上述溶液 110mL , 置于 100mL 容量瓶中 , 加流动相稀释至刻 度 ,即得每 1mL 中含 10μg 的溶液 ,作为对照溶液。按“314”项 下方法 , 精密量取对照品溶液 20μL 注入高效液相色谱仪中 , 调节检测灵敏度 , 使主成分色谱峰的峰高为满量程的 20 %～ 25 %。再精密量取上述 2 种溶液各 20μL 分别进样 ,记录色谱至 主峰保留时间的 2 倍 , 供试品溶液如显杂质峰 , 各杂质峰面积 之和不得大于对照溶液主峰的峰面积 ( 110 %) 。 31314 干燥失重 : 取本品 ,在 105 ℃下干燥至恒重 ,减失重量 不得超过 510 % [4 ]。 31315 无菌 : 取本品 , 分别加 019 %无菌氯化钠溶液制成每 1mL 中含 4mg 的溶液 ,用薄膜过滤法处理后 ,依法检查 [4 ] , 应 符合规定。 ·288 · China Pharmacy 2007 Vol . 18 No . 4 中国药房 2007 年第 18 卷第 4 期 表 2 回收率试验结果( n = 9) Tab 2 Results of recovery tests ( n = 9) 加入量/ mg 测得量/ mg 回收率/ % 平均回收率/ % RSD/ % 4119 4110 9919 10016 01464111 4013 100114117 4110 100155119 5110 100145218 5211 10018 5119 5112 10018 6219 6215 10115 6219 6211 10019 6213 6114 10017 表 3 样品含量测定结果 Tab 3 Contents determination results of sample 批号 标示百分含量/ % 20050310 100. 6 20050313 99. 8 20050316 100. 8 31316 细菌内毒素检查 :取本品 ,依法检查 [4 ] ,每 1mg 含内毒 素的量应小于 115 EU 。 31317 其他 :应符合注射剂项下有关规定 [4 ]。 314 含量测定 31411 色谱条件与系统适应性试验 : 色谱柱为 Phenomenex C18 (用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 , 250mm ×416mm , 5μm) ,流动相为乙腈 - 水 (9 ∶91) ,检测波长为 265nm ,流速为 110mL ·min - 1 , 柱温为 30 ℃。理论塔板数按间苯三酚峰计应不 低于 3 000。 31412 标准曲线的绘制 : 准确称取经 105 ℃干燥至恒重的间 苯三酚对照品 52010mg ,置 100mL 容量瓶中 ,加流动相适量溶 解并稀释至刻度 , 摇匀。然后精密量取 0125、015、110、115、 210mL , 分别置于 10mL 容量瓶中 , 加流动相稀释至刻度 , 摇 匀。在“31411”项色谱条件下 , 精密量取上述溶液各 20μL 进 样 ,记录色谱。以间苯三酚浓度 ( C)为横坐标 ,峰面积 ( A )为纵 坐标进行线性回归 , 得回归方程 A = 31026 8 C + 231767 0 ( r = 11000 0) 。结果 , 间苯三酚的检测浓度在 0113～ 1104mg ·mL - 1 范围内与峰面积呈良好的线性关系。色谱详见 图 1。 31413 精密度试验 : 准确量取浓度为 589μg ·mL - 1 的间苯 三酚对照品溶液 20μL , 注入高效液相色谱仪中 , 连续进样 6 次 , 测定其峰面积。结果 , 平均峰面积为 1 817155 ( RSD = 0119 %) ,表明该方法的精密度良好。 31414 稳定性试验 :取“31413”项下照品溶液 ,在室温避光条 件下分别于 0、1、2、4、6、8h 测定其峰面积。结果 ,8h 内间苯三 酚的平均峰面积为 1 820135 ( RSD = 0122 %) , 表明该待测溶 液在 8h 内室温避光放置 ,稳定性良好。 31415 回收率试验 :按处方比例准确称取 9 份辅料 ,分别置于 9 个 100mL 容量瓶中 , 另准确称取“31412”项下对照品 9 份 (60、50、40mg 各 3 份) ,分别置于上述容量瓶中 ,加流动相适量 溶解并稀释至刻度 ,作为供试品溶液 ,按“31416”项下方法进行 测定 ,结果详见表 2。 31416 样品含量测定 :取样品中的内容物 ,混匀 ,准确称取适 量 , 加流动相溶解并稀释制成每 1mL 中含间苯三酚 015mg 的 溶液 ,作为供试品溶液 ;另取“31412”项下对照品适量 ,准确称 定 , 加流动相溶解并稀释制成每 1mL 中含间苯三酚 015mg 的 溶液 ,作为对照品溶液。准确量取上述 2 种溶液各 20μL 进样 , 记录色谱 , 计算 , 结果乘以 11286 即得供试品中间苯三酚二水 合物的含量 ,详见表 3。 4 稳定性考察 411 影响因素试验 对按上述最佳处方工艺生产的批号为 20050215 的注射用 间苯三酚置于高温 ( (60 ±2) ℃) 、高湿 ( (90 ±5) %) 以及光照 ( (4 500 ±500) lx)条件下 ,分别于 0、5、10d 定期取样 ,然后进行 质量检测 ,并将 5、10d 数据与 0d 数据进行比较分析。结果 ,高 温及高湿条件下 , 5、10d 注射用间苯三酚的外观色泽、p H 值、 可见异物、干燥失重、有关物质及主药含量与 0d 比较基本无明 显变化 , 提示其在上述试验条件下较为稳定 ; 光照条件下 , 5、 10d 注射用间苯三酚的外观色泽、p H 值、可见异物、干燥失重、 主药含量无明显变化 , 有关物质与 0d 比较略有增加 , 但不明 显 ,表明光照对本品有一定影响 ,故贮存时宜避光保存。提示该 处方及工艺基本合理、可行。 412 恒温加速试验 取模拟上市包装批号为 20050310、20050313、20050316 的 注射用间苯三酚共 3 份 ,放入温度 (40 ±2) ℃、相对湿度 (75 ± 5) %的生化培养箱中 , 分别于 0、1、2、3、6mo 定期取样 , 按 “411”项下方法将 1、2、3、6mo 数据与 0mo 数据进行比较分 析。结果 , 1、2、3、6mo 的各项检测指标与 0mo 比较基本无变 化 ,加速 6mo 无菌和内毒素检查仍合格 ,表明本品在本加速试 验条件下放置 6mo 较为稳定。 413 长期留样试验 取“412”项下样品共 3 份 , 在温度 (25 ±2) ℃、相对湿度 (60 ±10) %条件下放置 12mo ,分别于 0、3、6、9、12mo 定期取 样 ,按“411”项下方法将 3、6、9、12mo 数据与 0mo 数据进行比 较分析 , 12mo 后仍须继续考察 ,检测结果与 0mo 比较 ,以便确 定药品的有效期。结果 , 3、6、9、12mo 的各项检测指标与 0mo 比较基本无变化 , 长期留样 12mo 无菌和内毒素检查仍合格 , 表明本品在本长期试验条件下放置 12mo 较为稳定。 5 讨论 本品处方工艺合理可行 ,质量可控 ,稳定性良好 ;采用高效 液相色谱法测定本品主药含量 ,重现性好、专属性强 ,测定结果 在规定限度内。 参考文献 [ 1 ] 汪艳红 ,韩炜珍 1间苯三酚在产妇自然分娩中的临床应用 [J ]1 中国医院药学杂志 ,2004 ,24 (2) :961 [ 2 ] 李小川 ,廉江平 ,扈本荃 1 注射用葛根素处方及工艺研究 [J ]1 中国药房 ,2004 ,15 (7) :4011 [ 3 ] 毕殿洲 1 药剂学[ M ]1 北京 :人民卫生出版社 ,1999 :2661 [ 4 ] 国家药典委员会编 1 中华人民共和国药典(二部) [ S]12005 年版 1北京 :化学工业出版社 ,2005 :附录ⅠB、ⅥH、ⅧL 、 ⅨA 、ⅪE、ⅪH1 (收稿日期 :2006- 05- 15 修回日期 :2006- 07- 18)