Septin 基因甲基化检测试剂盒使用说明

Septin9基因甲基化 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 试剂盒（PCR荧光探针法）EpiproColon2.0CE——使用 说明 关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书 【产品名称】Septin9基因甲基化检测试剂盒（PCR荧光探针法）EpiproColon2.0CE【包装规格】32人份/盒【预期用途】本产品用于体外定性检测人外周血血浆中Septin9基因甲基化。在大肠癌病人中，基因Septin9的V2区域的胞嘧啶会发生甲基化，而正常人中不发生甲基化。外周血中Septin9基因发生的甲基化可以通过DNA的特异扩增而被检测到。在针对多个经肠镜确诊的大肠癌病例和阴性对照的研究报道中，都表明可以在大肠癌病人的血浆中通过检测Septin9基因的甲基化而查到早期癌细胞的DNA。对于那些由于害怕而拒绝进行肠镜检查的患者，我公司研究开发的基于外周血检查的Septin9基因甲基化检测试剂盒（PCR荧光探针法）使病人多了一种无创性大肠癌诊断方法的选择。本产品用于临床对大肠癌的辅助诊断，检测结果阳性不作为大肠癌确诊的证据，检测结果阴性也不能排除大肠癌的可能。【检验原理】Septin9基因甲基化检测试剂盒（PCR荧光探针法）包括2个步骤。第1步，先用血浆提取试剂盒(M5-02-001)从血浆中把游离的DNA提取出来后再用亚硫酸盐进行转化；第2步，用PCR试剂盒(M5-02-002)对亚硫酸盐转化的DNA（bisDNA）进行多重PCR扩增，从而检测发生甲基化的Septin9基因DNA片段和内对照ACTB(ß-actin)。内对照ACTB基因是用来评估检测中DNA量是否满足检测要求。在质控品试剂盒(M5-02-003)中提供了甲基化的阳性和阴性对照，在每一次检测中都需要同时加入阳性和阴性对照。提取病人血浆中DNA的原理是通过磁珠来吸附血浆中游离的DNA而把DNA从血浆中分离出来。通过清洗磁珠步骤除去杂质。纯化的DNA溶液通过与亚硫酸盐的化学反应把没有发生甲基化的胞嘧啶进行转化，然后通过脱氨基反应产生尿嘧啶磺酸盐。转化的过程是亚硫酸盐离子通过亲核反应添加到胞嘧啶上，但是发生了甲基化的胞嘧啶是不会被亚硫酸盐转化的。试剂盒PCR反应中的阻断剂和探针能区分甲基化和非甲基化的序列。Septin9基因甲基化检测试剂盒能检测Septin9基因V2区域发生甲基化的CpG岛中的bisDNA序列，以及内对照ACTB基因的部分区域中全部bisDNA。在Septin9基因不含CpG双碱基的序列区域设计PCR引物；在没有发生甲基化而被亚硫酸盐转化后的序列区域设计阻断剂，这样就让被转化的甲基化序列得到优先扩增。针对发生了甲基化的Septin9基因序列设计的特异性荧光素探针可以在PCR反应中专一地检测出甲基化的序列。【样本要求】1、血样的收集和保存抽血用Vacutainer®K2EDTA10ml采血管或S-Monovette®9mlPotassium-EDTA采血管。按照生产厂家建议采血，血样应该立即处理。血浆制备前，血液保存在2～8℃，不超过24小时，不要冰冻血样。2、血浆的制备和保存禁止使用离心机的刹车功能，以防止血细胞层的破坏；离心装有血样的采血管12分钟，转速1350±150rcf。参考离心机操作手册将rpm换算为rcf；从离心机中取出采血管；用一个新鲜的15cm一次性移液管把血浆转移到聚丙烯材质，圆锥底的15ml离心管中；离心血浆12分钟，速度1350±150rcf；用新的长为22.5cm一次性移液管或者血清移液管把3.5ml的血浆加入标记好的圆锥底的离心管中；血浆样本可以保存在-15～-25℃，不超过4周。【检测流程】【产品性能指标】1、分析灵敏度：测定企业灵敏度参考品RC，PCR重复6次，至少3次为Septin9阳性，且内对照扩增正常；由相同的试验方法在LightCycler480InstrumentI确定该反应的灵敏度与ABI机型一致。2、可重复性：对1份人EDTA抗凝血浆混合大肠癌样品进行重复10次测试。全部为Septin9阳性，且内对照扩增正常。3、临床敏感性和特异性：选择149例没有证据表明疾病平均风险的检查人群及197例按临床分期设计组织学确诊的大肠癌样本和肠镜检测阴性的正常样本。经过亚硫酸盐转化的DNA样本来源于，Vacutainer®K2EDTA采血管(BectonDickinson)抽取并在4小时内处理的血浆。Septin9检测的有效率为100%。149例检查样本中有一个样本为阳性结果。这组病人中的假阳性率为1%（CI95%:0%-4%）。其临床特异性为99%（CI95%:96%-100%）。99例正常的对照受检者中，其中96例样本结果为阴性，其临床特异性为97%（CI95%:91%-99%）在98例被确诊大肠癌样本中，其中79例样本检测为阳性，其临床敏感度为81%（CI95%:72%-87%）。56个早期大肠癌患者中，Septin9基因甲基化检测试剂盒检测阳性的有43人（77%），其中I期18例，II期25例。4、两款Real-TimePCR仪器的一致性：通过48例病理确认不同临床分期大肠癌血浆样本，52例经结肠镜确认正常血浆样本对照，经AppliedBiosystems7500FastDxSystem和LightCycler480InstrumentI并行实验，两个系统样本检测结果一致性为93%（93/100）。5、其他干扰：在实验中，未甲基化DNA（100ng/ml），胆红素(0.20mg/ml)，血红蛋白(1mg/ml)，甘油三酯（12mg/ml），蛋白（血清白蛋白）(120mg/ml)，红细胞（0.4%v/v），K2EDTA(20mg/ml)，胆固醇(5mg/ml),尿酸(0.235mg/ml)和葡萄糖(10mg/ml)组量的提高，在实验控制和非反应或反应测试样本都没有对实验产生干扰。【参考值（参考范围）】本产品适用荧光定量PCR仪包括：AppliedBiosystems7500Fast；AppliedBiosystems7500FastDx；RocheLightCycler480I；RocheLightCycler480II四种机型，具体判断值见产品 说明书 房屋状态说明书下载罗氏说明书下载焊机说明书下载罗氏说明书下载GGD说明书下载 。【储存条件及有效期】1、储存条件血浆提取试剂盒：在15～30℃条件下储存。PCR试剂盒及质控品试剂盒：在-25℃～-15℃条件下储存。2、试剂盒有效期未开封的试剂盒有效期为12个月。不要使用过期的试剂。不要把不同批次的试剂进行混合。3、开瓶有效期⑴血浆提取试剂盒亚硫酸盐溶液对氧气敏感，只能使用未开封的溶液，丢弃剩余的残液；加无水乙醇后的浓缩洗液A和浓缩洗液B在15～30℃可储存6周；其他试剂在开封后，在15～30℃可储存6周。⑵PCR试剂盒及质控品试剂盒开瓶后在-25℃～-15℃可储存6周。每一管PCR反应液只能反复冻融一次。【生产企业】企业名称：EpigenomicsAG生产地址：KleinePräsidentenstrasse1,10178Berlin,Germany注册地址：KleinePräsidentenstrasse1,10178Berlin,Germany邮政编码：10178代理及售后单位：博尔诚（北京）科技有限公司售后服务地址：北京市北京经济技术开发区永昌北路甲7号100176产品客服热线：400-650-3186检测服务热线：010-56315063网址：www.biochainbj.comwww.biochaindiag.com【医疗器械注册证 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 编号】国械注进20143405186欢迎关注博尔诚微信号：BioChain