第二章DNA复制(DNAReplication)第一节基本概念第二节复制概况第三节DNA复制的酶学第四节DNA复制的半不连续性第五节DNA复制第六节DNA损伤修复第五节DNA的复制(DNAreplicationinProkaryote)DNA复制结构的研究利用突变
表
关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
型来考察基因的功能但只能利用条件型突变温度敏感突变体材料:E.coli或噬菌体 一、复制的起始 二、复制的延伸 三、复制的终止一、复制的起始AntibodiesofdnaAoriC♦四个9bp的重复序列dnaA结合位点♦三个13bp的重复序列若干GATC位点一、复制的起始点oriC一、复制的起始点一、复制的起始13-OH引发末端的产生2单链DNA的产生3复制复合体的形成1、3-OH引发末端的产生φX174噬菌体的DNA在三种功能蛋白先后作用下分开成为单链：在复制起始点，噬菌体A蛋白使病毒（+）链产生缺口。A蛋白（gpA）：♦Φx174基因A的产物♦结合到RFⅠDNA的复制原点的结合位点（引发体的帮助）♦诱导相邻的识别位点的熔解(负超螺旋、富含A/T)♦其核酸内切酶活力切割（＋）链的4305与4306碱基的酯键，并共价连接于5’端（A），另一端为自由的3’－OH（G）*在引发体的帮助下结合到RFⅠDNA的复制原点的结合位点诱导相邻的识别位点的熔解(负超螺旋、富含A/T)2单链DNA的产生解旋酶(helicase):使DNA的两条链分开，它通常利用ATP水解来提供必需的能量φX174噬菌体的DNA在三种功能蛋白先后作用下分开成为单链：Rep蛋白提供解旋酶活性，它使两链分离。Rep蛋白－－解旋酶1)3)2)起始需要解旋酶、单链结合蛋白和引物酶3复制复合体的形成*DNA双链复制起始点dnaAdnaB/dnaCDNA双链解开成单链DNASSB引物酶RNA引物/3’-OHDNA聚合酶ⅢdNTP和3’-OH形成3’5’磷酸二酯键解旋酶解链酶SSBSSB3’3’5’5’引发体解链、解旋酶拓扑异构酶涉及的主要酶系：DnaA、RNApol是必不可少的，此外涉及到DnaB（解旋酶）、DnaC、Hu、Gyrase、SSB、DnaG、TopІ和DNApolШ全酶二、延伸过程进入的标志：DNApolШ把第一个核苷酸加到引物的3’－OH端1.在DNA聚合酶Ⅲ的作用下，2.前导链合成1000-2000个核苷酸后，3.随从链开始合成，岗崎片段的长度为1000-2000个（大肠杆菌）4.PolⅢ为不对称二聚体，一个作用于前导链，另一个作用于随从链(loop)。参与复制延伸的蛋白质因子(DnaG)(DnaB)复制体*图12-14 位于复制叉处的多酶复合体（引发体）必须快速从一个冈崎片段移到另一冈崎片段 InlaggingStrand上多酶系统必须完成多次反复的启动与扩展E.coli启动2000—4000次的冈崎片段复制前导链和后随链的协同合成PriA清除SSB提供引发体移动动力极性3‘→5’*PriA清除SSB提供引发体移动动力（Φx型引发体－－后随链）oriC型引发体清除SSB？？？？？DnaA代替了PriA、PriB、PriC和dnaTDnaB移动极性5‘→3’PriA移动极性3‘→5’一分子的DNApolIII.协同合成前导链和后随链***5’3’3’5’图12-13三、复制终止1、环形DNA复制的终止a、终止序列E.coli有两个终止区域，分别结合专一性的终止蛋白序列一：terEterDterA序列二：terFterBterC每个区域只对一个方向的复制叉起作用*ReplicationterminiinE.coliarelocatedbeyondthepointatwhichthereplicationforksactuallymeet.b、专一性终止蛋白E.coli中由tusgene编码通过抑制DNA螺旋酶而发挥终止作用每次复制时只使用一个终止位点2染色体DNA的末端复制3’5’5’3’RNA引物3’3’RNA引物水解即DNA复制过程不能"自始至终"完整地复制整个线性染色体，而是每次都在其5'末端留下一个空缺未能填补（即RNA引物降解），如果细胞没有办法添补这些空隙，染色体DNA将随着每一次的细胞分裂而不断缩短，直至这种缺隙侵蚀到染色体的结构基因而使细胞消亡。5’5’U端粒的功能端粒给染色体末端提供了一个保护性的“帽子”，防止染色体的融和、丢失和降解，并参与染色体和核基质的结合。DNA复制模型中存在“末端复制问题”。真核细胞DNA复制需要RNA引物，复制完成时，RNA引物被水解。这必然导致复制的随从链5’端有一段缺损，而DNA聚合酶无法填补。根据此复制模型，染色体DNA面临5’端缩短的趋势。端粒的存在以其长度的缩短来阻止遗传信息的丢失，从而维持了基因组的完整性，解决“末端复制问题”。3’5’5’3’RNA引物水解端粒染色体DNA端粒末端复制补齐过程通过TG链的回折形成发夹结构（G·G氢键）－－－尺蠖模型*尺蠖－－移种爬行动物，爬行时身体呈弓形端粒酶（Telomerase）1985.CarolGreider&Blackburn,1986.Gottchling四膜虫端粒酶（telomerase）将T2G4末端重复延伸游扑虫Telomerase=RNACAAAACCCC链+末端结合蛋白（TBP）端粒酶－－－逆转录酶a、核蛋白（ribonucleoproteinRNP）b、含约长150NT的RNA，其中含1～5拷贝的CxAy重复序列，是合成端粒T2G4的模板c、延长的3’-T2G4端（一段cDNA）作为5’-端DNA合成的模板端粒酶以自身含有的RNA作为模板，合成和补充端粒的重复序列，具有逆转录酶性质，是一种RNA依赖的DNA聚合酶，又称为端粒末端转移酶。可以催化端粒3’端的游离-OH基上连接新的dNTP以延长端粒序列。端粒酶的功能端粒酶以其自身的RNA组分为模板，以原有的一条DNA单链的3’端游离-OH为引物，在端粒末端添加新的端粒重复序列使端粒延长。端粒酶的作用解决了“末端复制问题”，保证真核细胞线性染色体DNA复制得以完全。端粒酶的活性决定了端粒的长度。无论单细胞或多细胞真核生物都存在各自特异的端粒酶RNA模板。染色体DNA端粒端粒* 去除RNA引物 补充空缺 连接 DNA聚合酶Ⅰ的小片段5’3’外切酶 DNA聚合酶Ⅰ的大片段3’5’外切酶5’3’聚合酶 DNA连接酶复制忠实性的保证*在引发体的帮助下结合到RFⅠDNA的复制原点的结合位点诱导相邻的识别位点的熔解(负超螺旋、富含A/T)*PriA清除SSB提供引发体移动动力（Φx型引发体－－后随链）oriC型引发体清除SSB？？？？？DnaA代替了PriA、PriB、PriC和dnaTDnaB移动极性5‘→3’PriA移动极性3‘→5’**ReplicationterminiinE.coliarelocatedbeyondthepointatwhichthereplicationforksactuallymeet.U*尺蠖－－移种爬行动物，爬行时身体呈弓形
浙公网安备 33021202002483