ﻪ精子常规
分析
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与形态学染色ﻪ河南省人口和
计划
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生育科学技术研究院ﻪ孕前优生健康检查临床检验操作技术培训ﻪ精液常规检验采集：采集前必须禁欲2~7天,采集后立即送检,存放时间不要超过1小时,运送时温度与体温相近。外观和气味:正常呈灰白或乳白色，厚稠胶冻状，液化后呈乳白色半透明状.精子数量少,精液透明且稀薄；精液中有较多红细胞，可呈红褐色;黄色精液见于精液中有较多脓细胞，或服用药物.量:正常〉=２mL，下限是1。5mL,小于１mL，视为异常,见于精囊腺和前列腺病变．液化：室温正常5~10分钟液化,２0～４0分钟可完全液化,1小时仍不液化应视为异常，一般与缺乏蛋白水解酶有关.粘稠度:精液粘稠度异常可影响精子的活力和穿透力.用吸管吸入精液,滴落精液观察,粘稠度增加时,精液悬滴可形成〉2cｍ的拉丝.PH值:正常精液ＰH呈弱碱性，〉=7。２（滴PH试纸<３0秒)。精液的PH过低,可影响其对阴道酸性环境的调节作用，影响精子活力.亦可能与精囊发育不良有关.精子浓度的参考值下限为:15X１０6／ｍL精子总数的参考值下限为：3９X106／mL精子密度过低或无精见于:１、睾丸生精功能异常2、输精管、射精管、精囊存在缺陷3、精索静脉曲张４、生殖道炎症５、流行性腮腺炎并发睾丸炎6、绝育手术后7、放射性照射，有害化学物质污染及药物作用等。精子存活率:活精子数量在精子总数量中所占的比例。伊红－苯胺黑染色:50uL精液与等体积的染液混匀,等待30秒;采用拉薄技术制成涂片,空气中干燥,高倍镜观察，活精子头部成白色或淡粉红色，死精子头部呈红色或暗粉红色.正常参考值:(参考下限是58%) 〉=70%(射精后1ｈ) 〉=40~50%(射精后3ｈ） ＞=2０~30%(射精后6ｈ）精子活力:正常精子的活动力，精子向前运动的能力。计数200个精子的分级情况。WHO把精子的活动力分为４级.（５版分３级)ｄ：不动 ＰＲ:前向运动c：非前向运动 NP:非前向运动b：慢速或呆滞的前向运动 IM：不活动a：快速向前运动正常为:ａ级>25%或ａ+b〉５0％(５版）的参考值下限是前向运动精子(PR)：3２%精子总活力（PR+ＮP)：４0%临床意义:活力下降、弱精子症:见于液化不良、粘稠度增高、精液凝集，精子结构异常，内分泌功能异常，精索静脉曲张等。精子细胞形态学检查1、正常精子形态:正常在精液中占15％(５版）参考下限为：4％2、畸形精子：头部形状、大小异常；体部异常;尾部异常。临床意义：精子形态异常与生殖系统的感染、外伤、雄激素变化、化学药物中毒及遗传因素有关。3、生精细胞、精原、初级精母、次级精母、精子细胞。正常时少量,当曲精管的生精能力受到损害时，精液中可出现较多的病理性幼稚细胞。4、其他成分红细胞(极少）:血精症、睾丸瘤、前列腺瘤白细胞(<＝１Ｘ106/mL):生殖道炎症癌细胞：输精管恶性肿瘤人精子形态模式图头部:轮廓规则,顶体清楚，顶体帽至少覆盖头部表面的1／3。中段:细长，不超过头宽1／3，轮廓直而规则。尾部:细长，弯曲不卷曲.正常形态精子的概念把“具备潜在受精能力精子”(亚群）的外观作为形态正常的
标准
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。人为设定临界标准,规定“临界形态精子都是异常”。操作前准备一侧有磨砂载玻片盖玻片(２4ｍmX50ｍm)10uL移液器及吸头纱布或纸巾记号笔巴氏染液或Dｉff染液精液涂片的制备每份新鲜的精液标本应制备两张或更多的涂片，以防染色发生问
题
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或载玻片破碎。每次取样前要充分混匀精液。对于未稀释的精液,采用拉薄技术;对于已洗涤的精液,采用移液管法。涂片前准备:１。用纱布或纸巾擦干净载玻片的两面2。用记号笔在载玻片的磨砂处标记上编号、日期。涂片的
方法
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充分混匀待涂片精液标本，根据精子浓度,用移液器去5~１0uＬ的精液滴在载玻片的一端，立即用第二张载玻片的非磨砂端以45°角（角度越小，涂片越薄)沿第一张载玻片的表面移动并接触精液滴,然后沿载玻片的长轴缓慢拖回拉片（约一秒;速度越快,涂片越厚），制成一张涂片.对于高粘稠或低密度或充满碎屑精液：稀释精浆或离心去精浆。方法:取0。2~0．5ｍL精液,加１0mＬ生理盐水,800g离心10分钟，除去大部分上清液，轻轻拍打试管，使精子团重新混悬于剩余的上清液中。必要时可加生理盐水重复洗涤一次。洗涤后的精子浓度在２０—５0X１0６/ml为好。洗涤的目的是减少背景杂质，并减少背景着色。如图:取5～1０uL悬浮液于清洁载玻片上，用滴管使精液在载玻片上展开。然后在400倍光镜下扫视一下确保精液涂片均匀,400倍下每个视野20-５０个精子，并且没有精子成团或重叠．注意：１。精液标本完全液化，充分混匀；2。快速取样,使精子没有时间从混悬液中沉降下来;3.重复取样前,再次混匀精液标本；4.精液滴在载玻片上，立即涂片,不要放置数秒后再涂片。染色步骤１.精子悬液涂片制备完成后，水平放置,空气中自然干燥;２。加A液覆盖组织片室温反应１5秒,将玻片直立吸水纸上除去多余染液；３。加B液覆盖组织片室温反应10秒,将玻片直立吸水纸上除去多余染液;4 .加C液覆盖组织片室温反应15秒,将玻片直立吸水纸上除去多余染液;5.流水中浸洗1０~１5次以除去多余染液;6.将玻片垂直竖立以去除水分,待完全干燥;7。油镜下观察精子形态．结果观察1．精子顶体区染淡紫色，顶体后区染深紫色,精子体尾区染成淡红色.２.世界卫生组织(WHＯ)精子缺陷类型分类如下: １ 正常精子形态2小头梨形头顶体区〉70％顶体后区空泡〉2过多残留胞浆中段粗、弯曲插入双尾弯曲3圆形头锥形头不定形头大头针状顶体区>70％顶体区〈40%顶体后区空泡＞２中段粗不规则插入4扁平底不规则头顶体区<４0%中段粗不规则插入弯曲5顶体区〉70%顶体后区空泡中段弯曲粗、不规则插入尾环状卷曲、弯曲双尾精子形态分析６-１6－２７—17—２8-１8-29—19-210—１１0—２11-111-２12-112-2谢谢大 家！
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