HE染色HmatoxylinEosinstains1脱蜡至水流水冲洗2苏木精染核20min左右流水冲洗镜观3盐酸酒精分化10—15s流水冲洗4弱氨水返蓝10—15s流水冲洗5伊红染色20min左右流水冲洗6系列酒精脱水7二甲苯I、II分别透明10min左右8树胶封固结果：细胞核呈紫蓝色，细胞浆、基底膜、胶原纤维、肌纤维成粉红色，可观察细胞的种类和数量。HE染色可充分显示肾小球的细胞增生，但不能区分内皮细胞、系膜细胞和上皮细胞的种类。可显示中性多核和嗜酸性粒细胞浸润。由于上皮细胞的被覆，肾小球基底膜呈略厚的假象。苏木素小体呈淡紫红色。纤维素样坏死呈深粉红色。碎核呈深蓝色细胞核碎片。微血栓呈粉色。HE染色可以很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间质水肿以及炎细胞浸润。PAS染色PriodicacidSchiffraction1脱蜡至水流水冲洗21%过碘酸溶液10min流水冲洗吹干3雪夫试剂37度孵浴镜观流水冲洗4苏木精染核5min流水冲洗5盐酸酒精分化10—15s流水冲洗6弱氨水返蓝10—15s流水冲洗7系列酒精脱水8二甲苯I、II分别透明10min左右9树胶封固结果：细胞核呈蓝色，肾小球和肾小管基底膜、细胞浆、肾小球系膜基质、胶原纤维和肌纤维等呈红色。PAS与HE染色一样可显示肾小球内的细胞增生和浸润，因其可很好的显示基底膜，可依细胞的位置区分内皮细胞、系膜细胞和上皮细胞。尚可观察基底膜是否增厚、皱缩和毛细血管塌陷。可观察肾小囊和肾小管基底膜是否增厚。尚可观察肾小球硬化、系膜基质增生、系膜溶解。PAS阳性的蛋白滴可见于蛋白尿患者的肾小球和肾小管上皮细胞浆内。可显示细动脉硬化时的玻璃样变。细胞性排异反应的肾小管炎在PAS染色中也可很好显示。注意：第四步染色时间过长容易，颜色过深不容易分辨，所以一定要把握时间！！！PAM染色六胺银套马松三色混合染色）1脱蜡至水流水冲洗21%过碘酸溶液10min流水冲洗3六胺银溶液65度1h镜观注：如果六胺银溶液染色过深就要用氯化金分化）43%硫代硫酸钠定影水洗5苏木精染核20min左右流水冲洗6盐酸酒精分化10—15s流水冲洗7弱氨水返蓝10—15s流水冲洗8Masson染色：(Masson溶液染色1min左右1%冰醋酸洗镜观(亮绿橘黄剂溶液染色10S左右1%冰醋酸洗9高浓度系列酒精脱水10二甲苯I、II分别透明10min左右11树胶封固结果：基底膜、网状纤维和IV型胶原呈黑色，细胞核呈蓝黑色，背景呈粉红色，免疫复合物呈红色，III型胶原呈蓝色或者绿色。由于基底膜可清楚而精确显示，所以免疫复合物定位精确，而对于肾小球内增生的胶原成分可区分III型蓝色或者绿色）和IV型黑色）Masson染色Masson'strichromstains1脱蜡至水流水冲洗2媒染剂染30min媒染剂配方：10%重铬酸钾+10%三氯醋酸。二者等量混合，有色融入无色里）流水冲洗3苏木精染核20min左右流水冲洗4盐酸酒精分化10—15s流水冲洗5弱氨水返蓝10—15s流水冲洗6Masson染色：(Masson溶液染色1min左右1%冰醋酸洗镜观(亮绿橘黄剂溶液染色10S左右1%冰醋酸洗7高浓度系列酒精脱水8二甲苯I、II分别透明10min左右9树胶封固结果：细胞核呈红色，免疫复合物呈红色，基底膜、胶原纤维呈蓝或者绿色染色液III中若为甲苯胺蓝则显蓝色，若为亮绿则显绿色）该方法优点是显示各部位的免疫复合物，呈红色或者嗜复红蛋白。可区分肾间质水肿和肾间质纤维化III型胶原），前者呈淡蓝色，后者显深蓝色并可见蓝色胶原纤维。直接免疫荧光1冰冻切片3um）2风扇吹干2h4度冷藏过夜风扇吹干1h左右或者4度冷藏过夜风扇吹干2h）3加稀释抗体[Antibody：PBS液(A=1：30、M=1：90、C3=1：80、C4=1：30、C1q=1：60、F=1:10、G=1：80)]437度孵浴1h左右5生理盐水I、II各洗片5min6甘油稀释液封片74度冷储结果：异硫氰荧光素显绿色，罗丹明显红色间接免疫荧光1冰冻切片3um）2风扇吹干2h4度冷藏过夜风扇吹干1h左右或者4度冷藏过夜风扇吹干2h）31抗437度孵浴1h左右5生理盐水I、II各洗片5min62抗737度孵浴1h左右8生理盐水I、II各洗片5min9甘油稀释液封片104度冷储结果：异硫氰荧光素显绿色，罗丹明显红色高锰酸钾刚果红染色1脱蜡至水流水冲洗切片厚度5um）2高锰酸钾—硫酸混合液处理3min流水冲洗高锰酸钾—硫酸混合液配制：5%高锰酸钾+0.3%硫酸等量混合，现配现用）35%草酸3min处理水洗4苏木精染核2min流水冲洗5碱性刚果红染色10—20min无需水洗直接镜观碱性刚果红配制：0.3ML1%NaOH+30ML80%酒精氯化钠+饱和刚果红）6快速高浓度酒精脱水7二甲苯I、II分别透明10min左右8树胶封固注意：刚果红染色是在阴性的基础上做此染色去掉2、3步骤），检测鉴别蛋白质的性质，若为阳性系膜区和小动脉有砖红色物质沉积）则加上2、3步骤从新做此染色。注解Explanation1文中说左右意思是时间可以随情况把握，苏木精和伊红可以适当延长时间，不必拘泥于课本。2PAM染色第3步，洗片时候:蒸馏水、蒸馏水、3%硫代硫酸钠、氯化金3系列酒精脱水浓度依次：70%80%90%95%100%100%4高浓度系列酒精脱水：90%95%100%100%5六胺银溶液配制顺序依次由上到下）：25ML3%六次甲基四胺2.5ML5%硝酸银22.5ML蒸馏水4.5ML5%四硼酸钠数滴硼酸6Masson染液的配制方法：3.2g磷钨酸4ML冰醋酸400ML蒸馏水2.4g变色液2R1.2g亮绿。
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