外源基因在酵母中的表达

重组DNA技术与基因 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 的基本概念重组DNA技术与基因工程523416重组DNA技术所需的基本条件重组DNA技术的操作过程目的基因的克隆与基因文库的构建外源基因在大肠杆菌中的 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达外源基因在酵母中的表达A酵母作为表达外源基因受体的特征6外源基因在酵母中的表达酵母（Yeast）是一群以芽殖或裂殖方式进行无性繁殖的单细胞半知菌类（半知酵母），共由56个属、500多个种组成。如果说大肠杆菌是外源基因最成熟的原核生物表达系统，则酵母菌是最成熟的真核生物表达系统。酵母的分类学特征真核生物，分属于子囊菌纲（子囊酵母）、担子菌纲（担子酵母）、A酵母作为表达外源基因受体的特征6外源基因在酵母中的表达酵母表达外源基因的优势全基因组测序，基因表达调控机理比较清楚，遗传操作简便能将外源基因表达产物分泌至培养基中具有原核细菌无法比拟的真核蛋白翻译后加工系统大规模发酵历史悠久、技术成熟、工艺简单、成本低廉不含有特异性的病毒、不产内毒素，美国FDA认定为安全的基因工程受体系统（GenerallyRecognizedAsSafeGRAS）酵母菌是最简单的真核模式生物B酵母的宿主系统6外源基因在酵母中的表达提高重组蛋白表达产率的突变宿主抑制超糖基化作用的突变宿主减少泛素依赖型蛋白降解作用的突变宿主广泛用于外源基因表达的酵母宿主广泛用于外源基因表达的酵母宿主目前已广泛用于外源基因表达和研究的酵母包括：酵母属如酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）克鲁维酵母属如乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyceslactis）毕赤酵母属如巴斯德毕赤酵母（Pichiapastoris）裂殖酵母属如非洲酒裂殖酵母（Schizosaccharomycespombe）汉逊酵母属如多态汉逊酵母（Hansenulapolymorpha）其中酿酒酵母的遗传学和分子生物学研究最为详尽，但巴斯德毕赤酵母表达外源基因最理想。提高重组蛋白表达产率的突变宿主能导致酿酒酵母中重组蛋白产量提高或质量改善的突变类型：ssc1ssc2rgr1ose1ssc11rho-突变类型生物效应作用位点改善重组蛋白分泌钙离子依赖型的ATP酶提高重组蛋白表达转录后加工转录水平提高重组蛋白表达转录水平提高重组蛋白表达改善重组蛋白分泌羧肽酶Y转录水平提高重组蛋白表达抑制超糖基化作用的突变宿主能抑制超糖基化的突变类型mnnalgoch突变类型生物效应许多真核生物的蛋白质在其天门冬酰胺侧链上接有寡糖基团，它们常常影响蛋白质的生物活性。整个糖单位由糖基核心和外侧糖链两部分组成。酵母菌普遍拥有蛋白质的糖基化系统，但野生型酿酒酵母对异源蛋白的糖基化反应很难控制，呈超糖基化倾向，因此超糖基化缺陷株非常重要。甘露糖生物合成缺陷型天门冬酰胺侧链糖基化缺陷型外侧糖链添加缺陷型减少泛素依赖型蛋白降解作用的突变宿主泛素介导的蛋白质降解作用蛋白酶体LysUbiquitin76aaubiquitinligaseE3LysubiquitinligaseE3Lys靶蛋白靶蛋白靶蛋白减少泛素依赖型蛋白降解作用的突变宿主酵母菌泛素依赖型蛋白降解系统的编码基因酵母菌共有四个泛素编码基因：UBI1编码泛素-羧基延伸蛋白52（CEP52）对数生长期表达稳定期关闭UBI2编码泛素-羧基延伸蛋白52（CEP52）对数生长期表达稳定期关闭UBI3编码泛素-羧基延伸蛋白76（CEP76）对数生长期表达稳定期关闭UBI4编码泛素五聚体对数生长期关闭稳定期表达酵母菌共有七个泛素连接酶基因：UBC1、UBC2、UBC3、UBC4、UBC5、UBC6、UBC7减少泛素依赖型蛋白降解作用的突变宿主泛素降解途径衰减的酿酒酵母在酿酒酵母菌中，泛素主要由UBI4基因表达，UBI4-突变株能UBI4缺陷型：正常生长，但细胞内游离泛素分子的浓度比野生株要低得多，因此UBI4缺陷突变株是外源基因表达理想的受体。UBA1缺陷型：UBA1编码泛素激活酶E1，UBA1突变株是致死性的，但其等位基因缺陷是非致死性的，而且也能削弱泛素介导的蛋白降解。Ubc4-ubc5双突变型：七个泛素连接酶基因的突变对衰减蛋白降解作用同样有效。C酵母的载体系统6外源基因在酵母中的表达酵母克隆表达质粒的构建酵母中的野生型质粒酵母中的野生型质粒酿酒酵母中的2m环状质粒几乎所有的酿酒酵母中都含有2m双链同源重组REP1RAFSTBoriREP2FLPIRIRAB环状质粒，拷贝数达50至100个。IRs反向重复序列，600bp，重组FLP编码产物驱动IRs的同源重组REP编码产物控制质粒的稳定性STBREP的结合位点接合酵母属中的pSR1和pSB1，以及克鲁维酵母属中的pKD1等均与2m质粒类似。酵母克隆表达质粒的构建含有ARS的YRp质粒的构建ARS为酵母菌中的自主复制序列，0.8-1.5kb，染色体上每30-40kb就有一个ARS元件。酵母菌自主复制型质粒的构建组成包括复制子、标记基因、提供克隆位点的大肠杆菌质粒DNA。以ARS为复制子的质粒称为YRp上述两类质粒在酿酒酵母中的拷贝数最高可达200个，但培养几代以2m质粒上的复制元件为复制子的质粒称为YEp后，质粒的丢失率高达50%-70%，主要是由于分配不均匀所致。酵母克隆表达质粒的构建含有CEN的YCp质粒的构建CEN为酵母菌染色体DNA上与染色体均匀分配有关的序列将CENDNA插入含ARS的质粒中，获得的新载体称为YCpYCp质粒具有较高的有丝分裂稳定性，但拷贝数只有1-5个含有TEL的YAC质粒的构建酵母克隆表达质粒的构建含有酵母菌染色体DNA同源序列的YIp质粒的构建在大肠杆菌质粒上组装酵母菌染色体DNA特定序列和标记基因，构建出来的质粒称为Yip。目的基因表达盒通常插在染色体DNA特定序列中，这样目的基因就能高效整合入酵母菌特定的染色体DNA区域。D酵母的转化系统6外源基因在酵母中的表达转化质粒在酵母细胞中的命运酵母菌的转化程序用于转化子筛选的标记基因酵母的转化程序酵母原生质体转化法早期酵母菌的转化都采用在等渗缓冲液中稳定的原生质体转化法在Ca2+和PEG的存在下，转化细胞可达原生质体总数的1-2%。但该程序操作周期长，而且转化效率受到原生质再生率的严重制约。原生质体转化法的一个显著特点是，一个受体细胞可同时接纳多个质粒分子，而且这种共转化的原生质体占转化子总数的25-33%。酵母的转化程序碱金属离子介导的酵母完整细胞的转化酿酒酵母的完整细胞经碱金属离子（如Li+等）、PEG、热休克处理后，也可高效吸收质粒DNA，而且具有下列特性：吸收线型DNA的能力明显大于环状DNA，两者相差80倍共转化现象极为罕见酵母的转化程序酵母电击转化法酵母菌原生质体和完整细胞均可在电击条件下吸收质粒DNA，但在此过程中应避免使用PEG，它对受电击的细胞具有较很大的负作用电击转化的优点是不依赖于受体细胞的遗传特征及培养条件适用范围广，而且转化率可高达105/mgDNA。转化质粒在酵母细胞中的命运单双链DNA均可转化酵母菌，但单链的转化率是双链的10-30倍；含有复制子的单链质粒进入细胞后，能准确地转化为双链并复制；不含复制子的单链质粒进入细胞后，能高效地同源整合入染色体这对于体内定点突变酵母基因组极为有利；克隆在YIp整合型质粒上的外源基因，如果含有受体细胞的染色体DNA的同源序列，会发生高频同源整合，整合子占转化子总数的50-80%。用于转化子筛选的标记基因用于酵母菌转化子筛选的标记基因主要有营养缺陷型互补基因和显性基因两大类：营养缺陷型互补基因主要有氨基酸和核苷酸生物合成基因，如：LEU、TRP、HIS、LYS、URA、ADE但对于多倍体酵母来说，筛选营养缺陷型的受体非常困难。营养缺陷型的互补基因用于转化子筛选的标记基因显性标记基因显性标记基因的编码产物大都是毒性物质的抗性蛋白aph氨基糖苷转移酶抗G418cat氯霉素乙酰转移酶抗氯霉素dhfr二氢叶酸还原酶抗氨甲喋呤和磺胺cup1铜离子螯合物耐受铜离子suc2蔗糖转化酶耐受高浓度蔗糖ilv2乙酰乳糖合成酶抗硫酰脲除草剂标记基因编码产物遗传表型E酵母的表达系统6外源基因在酵母中的表达外源基因在酵母菌中表达的限制因素酵母菌启动子的可控性酵母菌表达系统的选择酵母启动子的可控性温度控制型启动子a-a型启动子：酿酒酵母有a和a两种单倍体，分别由MATa和MATaa型启动子hmla2-102MATaa1Sir3-8TSa型启动子受体细胞基因组重组质粒a型启动子hmla2-102MATaa1Sir3-8TSa型启动子a2a125℃35℃两个等位基因决定。a1因子决定a细胞特征表达a2因子阻遏a细胞特征表达a1-a2阻遏a细胞特征表达编码a2因子的基因突变型hmla2-102能产生a2变体，它能灭活a1，同时阻遏a型酵母启动子的可控性酿酒酵母超诱导型启动子GAL1GAL7GAL10UASGAL4GAL80半乳糖诱导效果不明显，基因基底水平表达GAL1GAL7GAL10UASGAL4GAL80半乳糖诱导时，GAL4高效表达，GAL1、GAL1、GAL10超高效表达GAL10Promoter的半乳糖利用酶系由GAL1GAL7和GAL10基因编码外源基因在酵母中表达的限制因素外源基因稳态mRNA的浓度外源基因mRNA的翻译活性酵母菌对密码子的偏爱性在酿酒酵母中，高丰度的蛋白质（如甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH、磷酸甘油激酶PKG、乙醇脱氢酶ADH）中96%以上的氨基酸是由25个密码子编码的。酵母表达系统的选择酿酒酵母的基因表达系统最为成熟，包括转录活性较高的甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因GAPDH、磷酸甘油激酶基因PKG、乙醇脱氢酿酒酵母表达系统酶基因ADH所属的启动子，多种重组外源蛋白获得成功表达。酿酒酵母表达系统的最大问题在于其超糖基化能力，往往使得有些重组蛋白（如人血清白蛋白等）与受体细胞紧密结合，而不能大量分泌。这一缺陷可用非酿酒酵母型的表达系统来弥补。酵母表达系统的选择乳酸克鲁维酵母的双链环状质粒pKD1已被广泛用作重组异源蛋白生产的高效表达稳定性载体，即便在无选择压力的条件下，也乳酸克鲁维酵母表达系统能稳定遗传40代以上。乳酸克鲁维酵母表达分泌型和非分泌型的重组蛋白，性能均优于酿酒酵母表达系统。酵母表达系统的选择巴斯德毕赤酵母是一种甲基营养菌，能在低廉的含甲醇培养基中生巴斯德毕赤酵母表达系统长，甲醇可高效诱导甲醇代谢途径中各酶编码基因的表达，因此生长迅速、乙醇氧化酶基因AOX1所属强启动子、表达的可诱导性是巴斯德毕赤酵母表达系统的三大优势。但甲醇易挥发，操作条件差。由于巴斯德毕赤酵母没有合适的自主复制型载体，所以外源基因的表达序列一般整合入受体的染色体DNA上。在此情况下，外源基因的有经济价值的重组蛋白在巴斯德毕赤酵母系统中获得成功表达。高效表达在很大程度上取决于整合拷贝数的多寡。目前已有50余种具酵母表达系统的选择多型汉逊酵母也是一种甲基营养菌。其自主复制序列HARS已被克多型汉逊酵母表达系统隆，并用于构建克隆表达载体，但与巴斯德毕赤酵母相似，这种载体在受体细胞有丝分裂时显示出不稳定性。所不同的是，HARS质粒能高频自发地整合在受体的染色体DNA上，甚至可以连续整合100多个拷贝，目前，包括乙型肝炎表面抗原在内的数种外源蛋白在该系统中获得因此重组多型汉逊酵母的构建也是采取整合的策略。成功表达。F利用重组酵母生产乙肝疫苗6外源基因在酵母中的表达由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的急慢性乙型肝炎是一种严重的传染病，每年约有200万病人死亡，并有3亿人成为HBV携带者，其中相当一部分人可能转化为肝硬化或肝癌患者。目前对乙型肝炎病毒还没有一种有效的治疗药物，因此高纯度乙型疫苗的生产对预防病毒感染具有重大的社会效益，而利用重组酵母大规模生产乙型疫苗为其广泛应用提供了可靠的保证。乙型肝炎病毒的结构与性质乙肝病毒是一种蛋白包裹型的双链DNA病毒，具有感染力的病毒颗乙型肝炎病毒的结构粒呈球面状，直径为42nm，基因组仅为3.2kb。病毒颗粒的主要结构蛋白是病毒的表面抗原多肽（HBsAg）或S多肽，它具有糖基化和非糖基化两种形式。颗粒内的蛋白成份包括核心抗原（HBcAg）、病毒DNA除此之外，被乙肝病毒感染的人的肝脏还能合成并释放大量的22聚合酶、微量病毒蛋白。nm的空壳亚病毒颗粒，其免疫原性是未装配的各种包装蛋白组份的1000倍。包装蛋白共有三种转膜糖蛋白：S、M、L多肽。乙型肝炎病毒的结构与性质乙型肝炎病毒的包装蛋白编码基因ATGATGATGTAA108aa55aa226aapreS1preS2SS多肽226aaM多肽281aaL多肽399aa乙型肝炎病毒的结构与性质乙肝病毒在体外细胞培养基中并不能繁殖，因此第一代的乙肝疫传统乙肝疫苗的制备苗是从病毒携带者的肝细胞质膜上提取出来的。虽然这种质膜来源的疫苗具有较高的免疫原性，但由于原 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 的限制难以大规模产业化。产乙肝表面抗原的重组酿酒酵母20世纪80年代开始选择酿酒酵母表达重组HBsAg，主要工作包括将S多肽的编码置于ADH1启动子控制下，转化子能表达出具有免疫活性的重组蛋白，它在细胞提取物中以球形脂蛋白颗粒的形式存在，平均颗粒直径为22nm，其结构和形态均与慢性乙肝病毒携带者血清中的病毒颗粒相同。目前，由酿酒酵母生产的重组HBsAg颗粒已作为乙肝疫苗商品化重组产物的最终产量可达细胞总蛋白量的1%-2%。进一步的研究表明，M多肽和L多肽对S型疫苗具有显著的增效作用，由三者（或两者）构成的复合型乙肝疫苗还可以诱导那些对S抗原缺乏响应的人群的免疫反应。产乙肝表面抗原的重组巴斯德毕赤酵母整合型重组巴斯德毕赤酵母的构建PARS2BglII5’AOX1HBsAgPHIS43’AOX1BglIIpBSAG15111kbBglII5’AOX1HBsAgPHIS43’AOX1his+的转化子重组分子转化his-的受体细胞染色体DNA产乙肝表面抗原的重组巴斯德毕赤酵母重组巴斯德毕赤酵母的性能由于巴斯德毕赤酵母染色体DNA上还拥有第二个乙醇氧化酶基因AOX2，所以整合型重组菌仍能在含有甲醇的培养基上生长。重组菌首先在含有甘油的培养基中培养，待甘油耗尽后，加入甲醇诱导HBsAg表达，最终S蛋白的产量可达细胞可溶性蛋白总量的3%在大规模的生产过程中，巴斯德毕赤酵母工程菌在一个240L的发酵罐中培养，最终可获得90克22nm的HBsAg颗粒，足够制成900万份乙肝疫苗。G酵母糖蛋白生产的人源化改造6外源基因在酵母中的表达除抗体外，哺乳动物绝大多数糖蛋白的半衰期和功能依赖于糖链末端的唾液酸，其它裸露的末端糖（如甘露糖、N-乙酰葡糖胺、半乳糖等）会被糖特异性的受体或凝集素清除。由于不少药用糖蛋白需要唾液酸化，因此其生产目前只能依靠哺乳动物受体，因为后者能进行人样化的N-糖基化反应，包括在末端加唾液酸的能力。酵母和丝状真菌作为重组蛋白表达系统，与哺乳动物细胞相比，具有较高的重组蛋白表达率、较短的发酵周期、能在化学成分确定的培养基中生长等很多优势。然而，野生型酵母往往将高甘露糖型的多糖链加在蛋白质上，直接影响表达产物在人体内的稳定性与功效。两种多糖合成途径的比较人类糖蛋白侧链多聚糖的成熟，涉及下列基因编码的酶系：MnsI：-1,2-甘露糖苷酶IMnsII：-1,2-甘露糖苷酶IIGnTI：-1,2-N-乙酰葡糖胺转移酶IGnTII：-1,2-N-乙酰葡糖胺转移酶IIGalT：-1,4-半乳糖苷转移酶SiaT：-2,6-唾液酸苷转移酶巴斯德毕赤酵母细胞中不存在上述酶系。巴斯德毕赤酵母糖链合成的人源化改造JC308WTRDP750YSH557YSH597Y11430WTYSH551StephenR.Hamiltonetal.Science313.1441.2006敲除4个基因，摧毁巴斯德毕赤酵母原有的超糖基化系统：Doch1，pno1，mnn4B，bmt2导入9个基因，构建人的糖基化系统：UgnT：小鼠的UDP-N-乙酰葡糖胺转运蛋白UgnT：克鲁维酵母的UDP-N-乙酰葡糖胺转运蛋白MnsI：小鼠的-1,2-甘露糖苷酶IMnsII：果蝇的-1,2-甘露糖苷酶IIGnTI：人的-1,2-N-乙酰葡糖胺转移酶IGnTII：大鼠的-1,2-N-乙酰葡糖胺转移酶IIGalE：裂殖酵母的半乳糖差向异构酶GalE：果蝇的UDP-半乳糖转运蛋白GalT：人的-1,4-半乳糖苷转移酶YSH577rEPO巴斯德毕赤酵母糖链合成的人源化改造JC308WTRDP750YSH557YSH597Y11430WTYSH551StephenR.Hamiltonetal.Science313.1441.2006YSH577rEPOJC308WTRDP750b-1,N-GlcNAcb-1,4-GlcNAcb-1,2-GlcNAcb-1,4-Mana-1,6-Mana-1,3-Mana-1,2-Manb-1,4-Gal巴斯德毕赤酵母糖链合成的人源化改造JC308WTRDP750YSH557YSH597Y11430WTYSH551StephenR.Hamiltonetal.Science313.1441.2006YSH577rEPO再导入5个基因，构建末端唾液酸的添加系统：GNE：人的UDP-N-乙酰葡糖胺-2-差向异构酶/SPS：人的N-乙酰甘露糖胺丙酮酸-9-磷酸合成酶CSS：人的CMP-唾液酸合成酶CST：小鼠的CMP-唾液酸运输因子ST：人的唾液酸转移酶与酵母II型转膜定位肽遗憾的是，YSH577株并未像预期的那样在糖基末端有效添加唾液酸。N-乙酰甘露糖胺激酶融合体巴斯德毕赤酵母糖链合成的人源化改造JC308WTRDP750YSH557YSH597Y11430WTYSH551StephenR.Hamiltonetal.Science313.1441.2006YSH577rEPO改善唾液酸化反应的效率：优化GNE、SPS、CSS、CST基因的密码子；构建其它形式的唾液酸转移酶（ST）融合肽，发现来自小鼠-2,6-ST的催化功能域与酿酒酵母甘露糖基转移酶1将上述五个基因全部克隆在一个表达载体上，并用该表（Mnt1）的靶向信号肽相融合的嵌合体，特别有效；达载体转化YSH577株，获得YSH597株。巴斯德毕赤酵母糖链合成的人源化改造JC308WTRDP750YSH557YSH597Y11430WTYSH551StephenR.Hamiltonetal.Science313.1441.2006YSH577rEPOJC308WTYSH597b-1,N-GlcNAcb-1,4-GlcNAcb-1,2-GlcNAcb-1,4-Mana-1,6-Mana-1,3-Mana-1,2-Manb-1,4-Gala-2,6-SiaRDP750重组巴斯德毕赤酵母分泌的rEPO的鉴定JC308WTRDP750YSH557YSH597Y11430WTYSH551YSH577rEPO重组rEPO的HPLC图谱分析：重组巴斯德毕赤酵母分泌的rEPO的鉴定JC308WTRDP750YSH557YSH597Y11430WTYSH551YSH577rEPO重组rEPO的血细胞比容分析：YSH551株YSH597株注射第8天注射第15天H酵母转录机器的基因工程综合改造6外源基因在酵母中的表达化石能源的日益消耗大大促进了可再生型生物燃料（如乙醇等）的开发与生产。然而，大规模发酵生产燃料乙醇的关键是酵母对高浓度乙醇和葡萄糖的耐受性。长期以来，人们普遍关注的是对乙醇生物合成基因和耐受基因的遗传操作，这些努力虽然取得了显著的进步，但似乎触及了极限。基因工程改良能否突破这一极限呢？HalAlper等人提出的所谓转录机器综合基因操作战略（Globaltranscriptionmachineryengineering，gTME）让我们看到了新的希望。酿酒酵母转录机器的定向改造在酿酒酵母中，乙醇生物合成基因与其他看家基因一样，由RNA聚合酶II负责转录。RNA聚合酶II系统包含75种一般转录因子或共激活因子，其中最关键的是TFIID复合物，包含TATA-BOX结合蛋白（TBP，由基因SPT15编码）及其及14种激活因子（TAFs）。有证据显示，TATA-BOX结合蛋白的突变会改变RNA聚合酶对启动子的特异性识别性质，进而影响众多不同基因的表达谱。这便是转录机器综合基因操作战略的HalAlperetal.Science314.1565.2006理论基础。TATA-BOXTBPTAFsTFIIDcomplex酿酒酵母转录机器的定向改造HalAlperetal.Science314.1565.2006利用易错PCR技术构建SPT15的突变文库，转入酿酒酵母标准单倍体BY4741株，该单倍体含有内源性野生型的SPT15染色体拷贝。然后在逐次提高的高浓度乙醇和葡萄糖存在下筛选耐受突变株。当筛选压力增加到6%的乙醇和120g/L的葡萄糖时，获得spt15-300突变株，它相对野生株的耐受倍数达13倍。酿酒酵母转录机器的定向改造HalAlperetal.Science314.1565.2006利用易错PCR技术构建SPT15的突变文库，转入酿酒酵母标准单倍体BY4741株，该单倍体含有内源性野生型的SPT15染色体拷贝。然后在逐次提高的高浓度乙醇和葡萄糖存在下筛选耐受突变株。spt15-300突变株即使在15%的乙醇存在下，也显示出比对照野生株高出近1倍的耐受性。spt15-300突变株的鉴定HalAlperetal.Science314.1565.2006具有优良特性的spt15-300突变株包含三个突变位点，它们均集中在TBP的重复序列2结构域中。实验结果显示，任何单一或两两组合位点的突变，都不能产生显著的功效，巴斯德毕赤酵母TATA-BOX结合蛋白变体Spt15-300RepeatElement1RepeatElement2Helix2Helix2’F177SY195HK218R突变的相对累积效应1.00.80.60.40.20.0这充分表明三联突变的重要性。spt15-300突变株的鉴定HalAlperetal.Science314.1565.2006转录谱分析结果表明，在无压力的条件下，spt15-300突变株相对于野生株，展示出数百个基因不同程度的表达，但大多集中在氧化还原酶、胞质蛋白质、氨基酸代谢、电子传递链等功能范围内。突变株中表达最高的12个基因，如果被单独敲除，则由spt15-300突变造成的优势全部丧失spt15-300突变株的鉴定HalAlperetal.Science314.1565.2006spt15-300突变株乙醇发酵的性能参数性能参数突变株野生株改善效果起始干细胞重量（DCW，g/L）最终干细胞重量（DCW，g/L）体积生产率（g/Lh-1）比生产率（g/DCWh-1）转化率（6-12h）乙醇与生物量比值理论值为0.41（g/g）4.064.106.465.39+20%2.031.20+69%0.310.22+41%0.360.32+14%0.400.35+15%98%86%E酵母的表达系统6外源基因在酵母中的表达C酵母的载体系统B酵母的宿主系统A酵母作为表达外源基因受体的特征F利用重组酵母生产乙肝疫苗D酵母的转化系统G酵母糖蛋白生产的人源化改造H酵母转录机器的基因工程综合改造huizhzh@ecust.edu.cn64252515（O）13901874517