创新型实验报告宁波大学考核答题纸
(20 10 —20 11 学年第 1 学期)
常见食品防癌的机制研究
实验目的:证明枸杞多糖对癌细胞有抑制作用
实验原理:(1)PBS有冲洗旧培养液的作用
(2)DMSO可以溶解枸杞多糖
(3)MTT溶解在无酚红Hanks液中,作为显色剂
(4)DMSO可以溶解成色产物
(5)在一定波长下,用酶标仪可以测定未处理肿瘤细胞A值
实验材料:肿瘤细胞若干,胰蛋白酶液,枸杞多糖,DSMO,溶解在无酚红Hanks溶液中的MTT
实验步骤:一、肿瘤细胞培养:方法同实用细胞培养技术。
二、胰蛋白...
宁波大学考核答题纸
(20 10 —20 11 学年第 1 学期)
常见食品防癌的机制研究
实验目的:证明枸杞多糖对癌细胞有抑制作用
实验原理:(1)PBS有冲洗旧培养液的作用
(2)DMSO可以溶解枸杞多糖
(3)MTT溶解在无酚红Hanks液中,作为显色剂
(4)DMSO可以溶解成色产物
(5)在一定波长下,用酶标仪可以测定未处理肿瘤细胞A值
实验材料:肿瘤细胞若干,胰蛋白酶液,枸杞多糖,DSMO,溶解在无酚红Hanks溶液中的MTT
实验步骤:一、肿瘤细胞培养:方法同实用细胞培养技术。
二、胰蛋白酶消化:
1、加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37摄氏度。
2、显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连成片,表明此时细胞消化适度。
3、加入培养液:培养基可以终止消化,加入新鲜的培养液。
4、吹打分散细胞:吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
三、细胞计数:
1、盖好盖玻片:取一套血球计数板,将特制的盖玻片盖在血球计数槽上。
2、将细胞悬液滴入计数板 将待测细胞悬液吹均匀,然后吸取少量悬液沿盖片边缘缓缓滴入,要保证盖片下充满悬液,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。
3、统计四个大格的细胞数:将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察,并移动计数板,当看到镜中出现计数方格后,数出四角的四个大格(每个大格含有16个中格)中的细胞数目。
4、计算原细胞悬液的细胞数:按照下面公式计算细胞密度:
(细胞悬液的细胞数)/ml=(四个大格子细胞数/4)*10000
说明:公式中除以4因为计数了4个大格的细胞数。
四、药物配制
精密称取枸杞多糖5g,用10mlDMSO溶解,配制成500mg/ml的母液,实验时把母液加到培养液中制成终浓度为0mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、50mg/ml的含药培养液。
五、细胞增殖测定
将肿瘤细胞接种于96孔板中,每孔5000个细胞;24~48小时后,加入含有10mg/ml、 20mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、50mg/ml的不同浓度枸杞多糖的培养液100ul,分别在37摄氏度,5%CO2,饱和湿度条件下培养1、2、3、4、5天后,用快速翻转法除去培养液,加入MTT20ul/孔(MTT溶解在无酚红Hanks液中,浓度为2mg/ml),培养4小时后加入DMSO150ul/孔,摇床上震荡,待成色产物溶解后,用酶标仪测A值(波长=492nm单波长测定)。
六、结果比较
第一天:
浓度(mg/ml)
0
10
20
30
40
数据1
0.102
0.19
0.254
0.557
0.449
数据2
0.116
0.142
0.259
0.487
0.437
数据3
0.111
0.173
0.255
0.406
0.42
平均值
0.1097
0.1683
0.256
0.483
0.4353
抑制率
-53.4184%
-133.36%
-340.29%
-296.81%
第二天:
浓度(mg/ml)
0
10
20
30
40
50
数据1
0.289
0.224
0.344
0.532
0.511
0.682
数据2
0.277
0.256
0.39
0.515
0.577
0.641
数据3
0.266
0.276
0.331
0.493
0.547
0.673
平均值
0.277333
0.252
0.355
0.513333
0.545
0.665333
抑制率
9.13%
9.13%
9.13%
-96.51%
-139.90%
第三天:
浓度(mg/ml)
0
10
20
30
40
50
数据1
0.348
0.368
0.464
0.423
0.743
0.905
数据2
0.337
0.301
0.422
0.438
0.758
0.902
数据3
0.333
0.385
0.473
0.562
0.754
1.3
平均值
0.2545
0.351333
0.453
0.4305
0.751667
0.9035
抑制率
-38.05%
-78.00%
-69.16%
-195.35%
-255.01%
第四天:
浓度(mg/ml)
0
10
20
30
40
50
数据1
0.171
0.212
0.175
0.211
0.177
1.386
数据2
0.165
0.171
0.157
0.259
0.285
1.871
数据3
0.179
0.202
0.158
0.221
0.211
1.515
平均值
0.171667
0.207
0.1575
0.216
0.248
1.4505
抑制率
-20.58%
8.25%
-25.83%
-44.47%
-744.95%
第五天:
浓度(mg/ml)
0
10
20
30
40
50
数据1
0.584
0.246
0.201
0.123
0.226
0.974
数据2
0.498
0.226
0.19
0.151
0.222
0.295
数据3
0.545
0.228
0.198
0.165
0.213
0.387
平均值
0.5215
0.233333
0.196333
0.158
0.220333
0.341
抑制率
55.26%
165.62%
69.70%
57.75%
34.61%
七、结果讨论
1.第一天和第三天的抑制率为负值,说明枸杞多糖在第一天和第三天对癌细胞为促进作用。该结果可能是操作不当引起的实验误差导致的,也有可能枸杞多糖在第一天对癌细胞的作用时间短,表现为促进。
2.第二天枸杞多糖对癌细胞的作用为开始为抑制,当枸杞多糖达到一定浓度时转为促进。可能说明低浓度的枸杞多糖对癌细胞为抑制作用,高浓度促进。
3.第四天枸杞多糖在浓度为20mg/ml时对癌细胞起抑制作用,其余浓度均为促进作用,可能是由于实验操作不当引起的误差导致。
4.第五天枸杞多糖对癌细胞的作用均为抑制。该结果说明在一定时间后,枸杞多糖对癌细胞起抑制作用,既是无论高低浓度都为抑制作用,以20mg/ml的浓度为抑制率最高。
5.在全部五天的试验中,都会出现抑制率偏差较大的现象,可能是由于误差引起。
6.只有在第五天才出现全部抑制现象,可能说明枸杞多糖对癌细胞的作用与癌细胞的营养状态、生存状态有关。
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