【doc】PAPD和POD分析技术在金银花品种鉴定中的应用

【doc】PAPD和POD 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 技术在金银花品种鉴定中的应用 PAPD和POD分析技术在金银花品种鉴定 中的应用 第25卷 2001 第2期 3月 山东中医药大学 JOURNALOFSHANDONGLINNERSITYOFTCM ,oI.25.No.2 Mal".2OOl ? 中药研究? PAPD和POD分析技术在金银花品种鉴定中的应用 石俊英,于燕莉,卢燕 (山东中医药大学,山东济南250014) [摘要]采用RAPD标记与POD分析 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 对金银花两品系进行了分析,试图从DNA分子水平上为两品系的 鉴别提供依据.实验结果表明.RAPD技术可有效用于金银花两品系的分类与鉴剐,POD图谱亦有一定的差异. [关键词]金银花l大毛花忍冬|鸡爪花忍冬tRAPD'P0D [中圈分类号]R282.710.3[文献标识码]B[文章编号]1007—659X(2001)02—0137-02 APPLICATIONOFMOLECULARBIOLOGICALTECHIQUEINAPPAISINGVARIE TIESOFLONICERA JAPONICASHIJun-ying,州Yah—li,LUYah(ShandongUmv.ofTCM,Jinan250014,China) EASSTRACr]DNAfingerprintsofthetwovarietiesofLonfc:e~'ajaponicawereanalysedby RAPDandPODtol— dentifythem.TheresultsshowedthatRAPDwaseffectivehelassifnganddistinguishhagthed ifferentvarietiesof Zo~icerajaponica,andthetwovarietiesofjjaponicawerealsodifferentinelectrophorogram ofPOD isozyme. EKeYWORDS]Lonicerajaponica~RAPD~POD 金银花(忍冬)LonicerajaponicaThunb是山东 的道地药材0],又名"东银花","济银花",产量大,质 量好,是国内药材市场上的畅销产品.山东金银花主 产于』}缶沂地区平邑县,主流产品有大毛花忍冬和鸡 爪花忍冬两种栽培品系,两者的药材品质,产量存在 一 定差异,但其药材性状,原植物形态十分近似.本 文采用RAPD(随机扩增的DNA多态性技术)标记 与同工酶分析方法对金银花两品系的DNA指纹图 谱和过氧化物同工酶图谱进行分析,试图从分子水 平上为两品系的中药材鉴别提供依据. 1 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与仪器 1.1实验材料 本实验选用山东临沂地区平邑县栽培金银花 (LonicerajaponicaThunb.)品系,从多年生群体中 各随机选取大毛花忍冬,鸡爪花忍冬为试材.原植物 标本存于山东中医药大学中药学院标本室. [收稿日期]2000—08-25 [作者简介]石俊英(1950一),女,山东青州^,教授一博士生导 师,主要从事中药质量与贷源研究 l-2实验仪嚣 PCR仪:PTC-150型(购自美国),紫外透射反 射仪:WD-9403型(北京六一仪器厂)j引物;10-mer (购自澳大利亚);Taq酶:购自美国PE公司;电泳 仪:DYY一?稳流稳压电泳仪(北京六一仪器厂) 2RAPD分析 2tl样品DNA的提取 取各样品嫩叶50mg,置研钵中,加液氟少许 研磨成匀浆状,移入eppendod管中,再加入i00rnl 预热至6O?的cTAB提取缓冲液(2cTAB?1.4 mol/LNaC1,0.2巯基乙醇?20mmol且ED1'A, 100mmol/LTris,pH值8.0),于6OC保温3O rain?用等体积的氯仿:异戊醇(291)提取两次, 9000r/min离心l0min,将水相移入新离心管中, 加入2/3体积的冷异丙醇混匀,于4000r/rain离心 6min,弃去上清液,用0.6ml洗缓冲液(70乙醇, lOmmol/L乙酸钠)悬浮,9000r/min离心10min, 弃去上清液,定淀置冰箱中冷冻干燥后,用s01TE 液悬浮,加1/10体积的乙酸钠溶液(pH值5.2), 95乙醇沉淀DNA,1400r/mln离心5rain,弃去 137 2001年3月山东中医药大学第25卷第2期 上清液,用70乙醇洗沉淀,净化台中自然干燥,用 超纯水溶解后,置一20?冰箱中保存备用. 2.2PCR反应务件与电泳分析 扩增反应液总体积l5l,其中含buffer(缓冲 液)1.5l,3mmol/LMgC121.5l,4种核苷酸 (dATP,dCTP.dGTP,dTTP)各250m/L随机引物 15"g.样品DNA50ng,TaqDNA聚合酶 (PromegaIne.)lunit.反应程序如下:第一个循环 在95?变性5rain,35?退火2min,72C延伸3 rainI后44个循环于94?i0s,38?i0s一72.C 5Os,最后于72?保温5rain,25?退火5s.取扩 增产物7,12l在l~TBE缓冲液l琼脂糖凝胶 中上样,电泳3,4h,溴化乙锭染色,紫外灯下观察 和照相. 3POD分析 3.1样品液制备 取大毛花忍冬与鸡爪花忍冬茎尖嫩芽,加适量 电极缓冲液,冰浴研磨成匀浆,冷冻离心(3000r/ min)15mln,上清液加等体积蔗糖液混匀,备点样 用.整个过程保持样品不超过4.C. 3.2电泳操作 电泳按文献方法进行.胶板用醋酸联苯胺显 色,按 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 计算样品谱带泳动率,并照相留存. 4结果与讨论 随机选用lO-merOpcronprimer35个.对2个 金银花品种的DNA进行PCR扩增后,产生RAPD 标记的随机引物及序列为:OPJ14--CACCCGGAT— G|OPJ16--CTGCTTAGGG;OPJ20一AAGcGGD CTC 使用35个随机引物进行扩增实验,结果有3个 引物扩增出谱带.大毛花忍冬共扩增DNA谱带24 条:OPJ14(9条),POJ16(9条),0J20(6条);鸡爪花 忍冬共扩增DNA谱带26条:OPJl4(8条),OPJ16 (11条),OPJ20(7条).研究结果表明,RAPD技术 可有效地用于中药材的分类与鉴别. 同工酶分析结果表明,大毛花忍冬与鸡爪花忍 冬的过氧化物同工酶谱带数目和集团均有所差异. 同工酶的结构差异主要来源于基因差异,并能稳定 地遗传给后代,因此利用它可以鉴别诸多遗传变 异. DNA分子由G,A,c,T4种碱基构成,生物体 特定的遗传信息便包含在特定的碱基排列顺序中一 不同的物种其遗传性不同,表现在4种碱基排列顺 序的变化之中,这就是生物的遗传多样性(genetic diversity).由于DNA分子作为遗传信息的直接载 体,不受外界因素和生物体发育阶段及器官差异的 影响,每一个体的任一细胞均含有相同的遗传信息, 因此,采用DNA分子遗传标记(DNAmolecularge— neticmarker)进行物种鉴别更为准确可靠.本文采 用RAPD技术对金银花两个晶系从分子水平上进 行了遗传标记研究,为金银花的种质资源描述,评价 及鉴定提供了依据. (RAPD分析得到山东大学夏光敏教授,向风 宁副教授的指导,特此致谢.) [参考文献] [1]李隶实.中药鉴定学CM].上海上海科学技术出版社. 1998.955. [2]石俊英.双全,束广运.山东鬼针草眉种子的PAGE分析 [刀.中国药学杂志.1992.27(12):717. [3]张志良.黑光耀.植物生物化学技术和方法[M].北京农业出 版杜,1986.92. 中医药治脑病疗效突t:l:t 近日,高士真基金会脑病医学现场研讨会在北京藏医 院举行.数十位因中枢神经系统发育受阻'受损患者,用亲 身经历肯定了中医药对脑病治疗的突出作用.参加现场治 疗的高士其基金会脑病专家委员会主任,广东高明脑病研 究隗院长李子中教授指出,脑病治疗的难点之一是药物难 以通过血脑屏障,而我国特有的某些中药具有这种功能. 经过十多年努力,李教授已研制出了能治疗多种脑病的李 匠五号方,经兰州医学院,中国药科大学,广州中医药大学 实验证实,该药易于透过血脑屏障,可提高脑内援糖援酸 含量一促进脑蛋白合成一增强多巴胺功能一调节脑内激素, 改善微循环等I研究还显示,它对中枢神经细胞的增殖率 达63.9,对神经细胞缺血,缺氧损伤保护率达93,从 而起到良好的治疗作用.目前,该药已为众多脑病患者解 除了痛苦.高士其基金会已决定,将以此项技术作为扶残 助残 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 之一,为北京地区的弱智残疾人服务. (擅自(健康报~'2001年9月1日第3版) l38