拉尔文 RT3检测作业指导书 医学检验

拉尔文 RT3检测作业指导书 医学检验 K 广州金域医学检验中心 KM-SOP300.366 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 《文件已阅声明表》 《Procedure circulation form》 文件名称: 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书 表号: KM-MP03.02.02 已阅声明:本人承诺已了解此文件中的相关内容,今后的工作中将严格按照此文件执行,不随意对外传阅此文件,如有因与文件不相符的操作,责任由本人承担。 (I have understood the relevant content of the document. I will keep the document secret and be responsible to properly perform procedure) 阅读人签名表 姓名(NAME) 职务签名(SIGNATURE) 签名日期(DATE) (POSITION) STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 1/12 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 1/12 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP300.366 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 《文件修改 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 页》 《Procedure amendment form》 表号:KM-MP03.02.03 序号 页码内容更改说明(Description of Modified 审批人 批准生效日期 NO. (Page) contents) (Approved (Approved by ) date) 1 换版 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 2/12 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 2/12 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP300.366 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 《文件信息表》 《Procedure information form》 表号: KM-MP03.02.04 文件名 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书(KM-SOP0300. 366) Title of Doc.(Doc. Code) Edition 3.0 生效日期(Operative 2008-03-13 版本号 date) (Edition No.) 文控部门 实验室文控室 (Doc. Control Dept.) 回顾人签名/日期回顾日期(Review 回顾人员签名( Signature ) (Reviewed by : date) Signature/Review date) 替代文件(Replaces) 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书(KM-SOP0300. 366)Edition 2.0 存放地点(Location)/No. Location (Holder) No. Location (Holder) 1 诊断部文控室(陈彬) 持有人(Holder) 2 化学发光室(段学成) 作者签名/日期(Author 陈鲜美 signature/date) 审批人签名/日期陈建波 (Authorized by : Signature/Date) 接收人签名/日期 (Receptor/Date) 副本数(Copy No.) 本文件是第 个文件拷贝 / 共发放 2 个文件拷贝。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 3/12 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 3/12 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP300.366 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书 (Analysis of 3`,3`,5`Triiodothyronine RT3 by Radioimmunoassay) 1. 原理(Test Principle): 1.1实验方法:采用双抗体沉淀放射免疫分析法(RIA)。 1.2 实验原理:采用竞争性放射免疫分析方法测定人血清中rT3的含量,待测血清、 125125 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品中的rT3和I - rT3与有限量的抗体竞争结合，I - rT3一部分与抗体结合为复合物，另一部分游离。加入分离试剂，离心使复合物部分与游离部分分离，弃去上清液，由γ计数器测定沉淀物(含复合物部分)的放射性计数，待测血清和标准中的rT3含量与复合物的放射性强度呈负相关，作出标准曲线，从标准曲线上可查出血清中rT3的含量。 2. 样本收集和储存(Specimen Collection and Storage) : 标本收集(specimen collection): 不加防腐剂血清用量(serum volume)200μl，;单次加样最少100ul血清。 2.2标本储存条件(specimen storage conditions):室温(room temperature):24h, 2-8?7天; -20?3个月。使用后标本储存2-8?，十天后处理标本。 注意:不能储存在自动除霜的冰箱中，为了避免反复冻融引起的蛋白质变性。 2.3标本拒收的标准: 2.3.1拒收标本(Specimen rejection):严重脂血(lipoprotein), 严重溶血样本(hemolyzed sample)样本应拒收。 2.3.2一个月内接受了放射性治疗的病人样本不可用，严重溶血样本不可用。其它样本处理请参照《生化样本收集程序》、《生化处理病人样本程序》、《生化拒收样本程序》要求进行。 其他(others):脂血(lipoprotein)可能会干扰检测。推荐使用超速离心法清除脂血样本. 2. 试剂(Reagent): STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 4/12 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 4/12 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP300.366 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 3.1试剂厂商:深圳拉尔文生物工程技术有限公司，试剂批准文号:国药准字S1997300。 3.2试剂组分(components): 3.2.1 RT3标 准 品:(6瓶)冻干品(去激素血清配制)和缓冲溶液(1瓶)。其浓度 为(单位:nmol/L): A B C D E F 缓冲溶液 (S) (S) (S) (S) (S) (S) buffer 123456 0.15 0.31 0.62 1.23 2.46 4.93 0.00 1251253.2.2 I - rT3标记物(I- Prolactin Tracer) (红色液体) 1瓶 (Anti Prolactin antibody) (蓝色液体)1瓶 3.2.3 rT3抗体 3.2.4 rT3质控品(高、中、低)三瓶 3.2.5分离试剂( Precipitating Reagent) (悬浮液)1瓶 3.3试剂的贮存: 本试剂有效期限为一个月，故在收到试剂的时候注意检查试剂的效期并做好登记，避免使用过期试剂;收到的试剂请及时置于2-8?环境中贮存，切勿冷冻。 3.4试剂准备(reagent preparation): 将试剂从冰箱中取出并平衡至室温;不同批号的试剂不能混用;新试剂与前一批号 试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。Put reagent from refrigeratory to room temperature for proper time; New reagent lots must be tested in parallel with old lots before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of the new lot of reagent has maintained consistent results for patient specimens. Record the results. , RT3标准品冻干品，每瓶用1.0ml缓冲溶液，溶解需要冷存，用时轻轻摇匀。rT3 质控品(高、中、低)为冻干品，分别用生化室纯水机中的纯水0.5ml溶解，轻轻 混匀。 , 抗体及标记物直接使用。所有试剂用前均应放置室温平衡，所有试剂用前均轻轻 摇匀，注意避免产生气泡。 , 使用后剩余试剂应尽快放回2-8?贮存。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 5/12 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 5/12 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP300.366 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 4. 仪器(Instrument): a) 名称:科大创新股份有限公司中佳分公司的GC-2016γ放射免疫计数器 b) 注册号:皖药管械(准)字2001第2330068号(更) c) 仪器准备(Prepare apparatus):使用前先预热20分钟，本底计数校准合格 后方可进行使用,本底检查合格标准参见《GC 放免计数器维护程序》中规定。 5.校准(Calibration ): GC-2016 放免计数器每天测量前进行本底计数校准，各探头不能应大于100CPM， 否则应用无水酒精清洗后重新校准。每个月进行一次计数率和一致性的校准。各 探头一致性应<2%,每个探头重复性3倍头误差应>99.7%。 6.安全防范(Safety precautions): 1256.1因实验过程有关放射性同位素I的使用，故其搬运，使用必须小心慎重，做好必要的安全防范，操作必须由具有资格的技术人员在配戴防护工具下进行。试剂含有人源性的物质, 虽然对HIV、HBV、HCV呈阴性，但它们仍可能会传播疾病，请视为传染性物质进行使用和处理。 6.2试剂含有叠氮钠，叠氮钠可以与铅或铜管起反应形成具有高度爆炸性的物质，故在进行废液排放时需用大量的水冲洗。 6.3废物处理: , 当天所有检测任务完成后必须将被放射性同位素污染的实验管、垃圾等物品按 照公司制定的放射性废物、废水处理方法进行处理; , 严格区分生活垃圾及医疗垃圾:黑色垃圾袋内为生活垃圾按普通垃圾处理，黄 色垃圾袋内为医疗垃圾由专业医疗垃圾处理机构收走处理。 6.4其它更多的内容请参照《放射免疫室放射性安全手册》进行处理 7.操作步骤(Procedural Steps) 7.1编管:本实验采用放免专用试管，按照下表的要求依次编管，开始为标准曲线管，(T NSB S0 S6 质控品)，然后为样本管1 N(N代表当天本项目的编号)。注意:每一架的第一管必须标明项目名称，便于识别。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 6/12 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 6/12 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP300.366 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 7.2样本准备:从检验系统内打印当天样本清单，从标本室签收样本,认真核对样本 数量和试管与清单上的条形码、姓名等相关信息是否一致，发现不对时及时 通知 关于发布提成方案的通知关于xx通知关于成立公司筹建组的通知关于红头文件的使用公开通知关于计发全勤奖的通知 标本室人员核对，并要求标本室及时处理;对已经凝固的样本轻微搅动,室温内 3500rpm转离心3分钟至血清完全出来。对不符合中心所制定的《生化样本收集 程序》、《生化处理病人样本程序》、《生化拒收样本程序》的样本如本项目的严重 溶血，高脂肪血或其它要求时应在中心检验信息系统结果录入退单界面中注明标 本状态和退单原因，做退单处理，并注明建议重抽血送检。 ?7.3检测具体操作流程(Assay Procedure)见下表:单位 (μL) T NSB 标准品 样品 质控品 (Standards) (Samples) (QC) SS S S S S S 1 2 „ H M L 0 123456 buffer 200 100 100 100 100 标准品 100 100 100 (STD) S-S 16 100 100 100 100 100 质控品和 „ 样品 (QC&Samp les) 抗rT3血 100 清 (Anti-r T3) 125I- 100 rT3 混匀，置于37??2?温育1.5小时 (Vortex and Incubate 4 hours STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 7/12 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 7/12 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP300.366 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 ?at 37??2?) 分离剂 1000 (Pr) 混匀,室温放置15分钟 3500rpm,离心20分钟，(温度低于25?)Vortex,Centrifuge for 20 minutes at 3500RPM (Below25?) ? 吸去上清液(Aspirate the Supernate of the tubes) ? 沉淀物计数60秒钟(Count for 60 second) ? 连机及审核结果。 详细说明: ?A所使用的加样枪必须确保已经被校准并能正常使用;加不同组分时一定要求更换吸头(最好有刻度的吸头); B所有标准品、质控品、样品都必须垂直加入管底，并且注意加入量是否到达吸头的刻度处确保量的正确; 125C加入抗rT3血清及I- rT3时应垂直加入不能残留在管壁。 ?依据 表格 关于规范使用各类表格的通知入职表格免费下载关于主播时间做一个表格详细英语字母大小写表格下载简历表格模板下载 内容由上行下逐步进行。每次实验都必须标准品、质控和样品三者同时在同样的条件下进行检测操作，以保证结果的可比性。 125? 将抗rT3血清、I- rT3和分离剂加入各管时都必须在振荡器上逐个振荡混匀，并尽量把残 125留在管壁的抗rT3血清及I- rT3振下混匀，以保证各物质间的充分反应;加分离剂后放置 时间不宜过长，否则，可能影响测定结果。 ? A从低温离心机拿出各实验管时应轻拿轻放，以免沉淀的分散; B离心机停止运转后应马上拿出并立即使用真空泵吸引器吸去上清液，不可在室温下保存太 久，以免沉淀的溶解;吸去上清液时放免管先轻轻倾斜一点再将吸嘴插入放免管慢慢靠近上 清液面，当吸嘴接触液面后立即停止插入，然后慢慢把放免管倾倒让上清液逐步流下通过吸 嘴吸入吸引器的废液瓶中。 C真空泵吸引器吸引力不能太高或太低，不能把吸嘴靠近沉淀，特别注意不要将沉淀抽走， 同时应尽量吸干不可残留过多上清液，否则引起计数的不正确，影响测定结果的准确性。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 8/12 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 8/12 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP300.366 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 ?A计数前在计数仪参数设定内把rT3测定要求的各种参数设入，如项目名称、计数时间(60秒)、数据拟合(四参数数据处理模式)、各标准品、NSE管、样品、质控品平行测定的个数(均为1)、标准品的浓度、结果单位(nmol/L)。计数时先进行标准品的计数，当标准曲线符合数据处理的数据要求条件时确定即可进行样品管的计数，样品管按顺序逐架进行，当所有样品管计数完成后确定可以打印原始数据并进行结果连机。当不能正常打印原始数据时可进入计数仪离线分析内文件输入中选择所要求的rT3中当天日期逐步确定到打印为止，即可打印所测rT3原始数据。 B(应当保证足够的计数时间，可以通过不同时间内检测的统计分析来确定所计数的时间，以免因计数的不充分而不能正确反映当天的真实结果。 ? A(检测完毕应立刻在原始数据上编号，必须与检测时所排放到试管架上的样品管一一对照编号，确保原始数据单上的每一个结果的编号与试管架上样品管编号一一对应，确保病人结果的正确; B(原始数据编号的规定:原则上每一个原始数据都必须标明编号而且编号必须与样本上的实验号一一对应。第一个原始数据编号必须标明，如果连续性编号个数大于10，可以采取分段编号的方法，即只标明此段的开始号和结尾号(第二段的开始号)，中间的原始数据编号为开始号连续+1;如果因测量时样品管错拿、单个测量、连续性编号小于5时必须每个原始数据都应一一编号。 C(结果录入具体流程:在检验系统左侧界面内选择“设备管理”?选择“接口管理”命令?在菜单栏内选择检测的仪器(放免室选择GC-2016γ放射免疫计数器或GC-2016γ放射免疫计数器?)? 选择“开始”命令键 ? 在左边界面选择所检测的项目RT3并确定为当天的结果后确定 ? 修改时间为当天标本清单中接收最早标本的时间(有时可能为客户要求加做或复查标本原来的接收时间) ? 选择“刷新键及处理键”两命令，检查两边是否一一对应后点击“传送键”命令，当天样品结果就可以传入检测信息系统; D(结果校核具体流程:进入检验信息系统左边栏实验单内 “实验中” 界面， ? 选择菜单栏“结果录入” ? 按住Ctrl键选择实验号+检测项目后同时放开，原始结果将按实验号由小到大排列，便于进行结果的审核 ? 对照检验信息系统内结果与原始数据，两者必须相同 ? 使用鼠标拖动选择本项目所有结果 ? 选择菜单栏内“审核” 命令 ? 本项结果将自动审核。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 9/12 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 9/12 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP300.366 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 8.质量控制(Quality control): , 使用拉乐文提供的质控品做质控，每工作日至少做两个浓度的值，二个浓度其靶 值和SD参阅质控图。最大允许误差ALE为60%,质控规则为3SD, 质控在控方可发 报告。 , 拒绝标准:13s，22s。(参照《室内质量控制程序》)，要求质控结果在3SD以内。 当质控失控时，应按照《室内质量控制程序》处理。 , 本项目检测采用深圳拉尔文生物工程技术有限公司提供的室内质控品，此质控品 为干粉试剂，使用前加0.50ml蒸馏水复溶,5-10分钟后充分混匀使用。 , 室内质控品为高(H)、低(L)二种，分别对应质控瓶上的6、4;实验过程中要 求二种质控品每天和临床样本一起进行检测。 , rT3质控高值靶值X为1.84，SD为0.31，X—3SD为0.91，X+3SD为2.77 , rT3质控低值靶值X为0.40，SD为0.08，X—3SD为0.16，X+3SD为0.64 9. 计算(Calculation): , 非特异性结合率:NSB/T%=[NSB管(CPM)-本底(CPM )]?[T(CPM )-本底(CPM )] , 零管结合率:Bo/T%=[Bo(CPM) -NSB管(CPM)]?[T(CPM)-本底(CPM)] ×100% , 样本结合率:B/Bo%=[标准管或样品管(CPM)-NSB管(CPM)]?[Bo(CPM) -NSB管 (CPM)] ×100% 以B/Bo%为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘出标准曲线。病人样本中所含的浓度由病人的B/Bo×100%值从标准曲线上查得。 10.参考范围(Expect Values):0.40-1.05nmol/L。 11.临床意义(Clinical Significance ) , 甲亢患者rT3和T3、T4都明显升高，故rT3可作为诊断甲亢的灵敏指标之一。 在使用抗甲状腺药物治疗的过程中，rT3的下降晚于T3、T4，如rT3低于正 常，提示用药过量。 , 慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者如出现rT3降低，提示患者有潜隐性或早期甲 减。其对轻度和亚临床甲减的诊断价值优于T3、T4但不及TSH。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 10/12 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 10/12 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP300.366 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 , 一些病情严重的疾病，如糖尿病、尿毒症、肝硬化、急性心脑血管疾病以及 恶性 肿瘤等，均可出现rT3增高，或同时出现T3降低，rT3/T3明显升高。 , 乙胺碘肤酮和丙基硫氧嘧啶等药物可使血清rT3浓度升高。 , 测定羊水和脐血的rT3含量，对了解有无先天性甲低有重要意义。 12方法的局限性(Method Limitations)(厂家提供技术参数) 12.1精密度: 批内变异 , 算术均数(Mean, M)= 1.1520 。 (Variance)= 0.0014 。 , 方差 , 标准差(Standare deviation, S)= 0.0368 。 , 变异系数(Coefficient of variation, CV)= 3.19% 。 批间 浓度一 月份 5 6 7 单位 测定例数(n) 16 21 26 --- 均值(Mean) 0.41 0.40 0.40 nmol/l 标准差(SD) 0.06 0.07 0.08 nmol/l 变异系数(CV) 14.63 14.46 20.0 % , 浓度二: 月份 5 6 7 单位 测定例数(n) 16 21 26 --- 均值(Mean) 1.93 1.66 1.84 nmol/l 标准差(SD) 0.43 0.24 0.31 nmol/l 变异系数(CV) 22.28 14.46 16.85 % 12.2敏感性:0.077 nmol/L. 12.3特异性:rT3抗体与T3的交叉反应<1%,与T4的交叉反应<0.01 12.4非特异性结合率:NSB<5% 12.5特异性结合率: (Bo/T)>30% 12.6分析检测范围(AMR):0.00-4.93nmol/L。 12.7结果报告范围为(CRR):0.00-4.93 nmol/L。 目前没有收集到大于4.93/L的定值标本，没有做稀释可靠性验证，在收集到合适的标本后再作验证，所以大于线性范围的目前直接报>4.93nmol/L。 13.注意事项(Notices): STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 11/12 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 11/12 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP300.366 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 , 放射性治疗和体内同位素诊断可影响该实验结果。 , 所有试剂均应避光2-8?保存，分离试剂和抗体两个月内有效。 , 血清正常值仅作参考。 , 不同药盒或不同批号的药盒中的组分不得混用 , 在加分离试剂前，将分离试剂充分摇匀 14.参考文献(References): 1)Laboratory Accreditation Manual,CAP. 2)NCCLS Document GP2-A4, Clinical Laboratory Technical Procedure Manuals. 3)WS/T 227-2002临床检验操作规程编写要求。 1254)深圳拉尔文生物工程技术有限公司碘[I]反三碘甲状腺原氨酸放射免疫分析药盒 说明书 房屋状态说明书下载罗氏说明书下载焊机说明书下载罗氏说明书下载GGD说明书下载 。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 12/12 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 12/12 反三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书(2008-03-13)