【word】 透射电镜制样中块染与片染的方法比较

【word】 透射电镜制样中块染与片染的 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 比较 透射电镜制样中块染与片染的方法比较 第23卷 2009年 第2l期 5月 五邑大学(自然科学版) JOURNALOFWUYIUNIVERSITY(NaturalScienceEdition) Vb1.23No.2 Mav2009 文章编号:l006.7302(2009)02.0020-03 透射电镜制样中块染与片染的方法比较木 周志涛,路艳蒙,朴英杰 (南方医科大学分析测试中心,广东广州5105l5) 摘要:为了克服传统切片染色中的切片污染和皱褶问题,尝试利用透射电镜制样中的标本块染 方法.使用传统染色液在组织处理过程中对标本块进行染色,与传统的片染方法相比,可以简 化制样步骤,减少切片污染和皱褶.但只有在样品浅层一定厚度范围内的切片才可以获得满意 的观察效果. 关键词:透射电镜生物样品制备;块染;片染;超薄切片 中图分类号:R329.4文献标识码:A AComparativeStudyofEnBlocStainingandStandardStainingfor TransmissionElectronMicroscopeObservation ZHOUZhi-tao,LUYan-meng,PIA0Ying1ie (InstrumentalAnalysis&ResearchCenter,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,China) Abstract:EnBlocstainingusedinspecimenpreparationfortransmissionelectronmicroscope observationwastriedtoreducecontaminationandwrinklesofultrathinsectionsoccurringduring standardroutinespecimenstainingfortransmissionelectronmicroscopeobservation.Comparedwith theroutinemethod,EnBlocstainingcouldsimplifytheprocessofpreparationandreduce contaminationofultrathinsections.Butsatisfactoryobservationeffectcouldonlybeachievedin thosesectionsfromsuperficiallayerofspecimen. Keywords:specimenpreparation;EnBlocstaining;standardstaining;ultrathinsections 透射电镜对动物组织类的样品制备大多采用切片后染色的方法.但 在切片后的染色过程中,由 于经过多次的液体置换,容易造成切片脱落,污染和皱褶.为解决这一问题,提高切片的连续性, 我室对透射电镜样品的块染与片染方法进行了初步的比较,尝试将传统的切片后染色改为锇酸后组 织块染色.现将结果报告如下. 1材料与方法 1.1材料一 小鼠,常规电镜试剂,双蒸水配制的饱和铀染液,50%L醇配制的饱和铀染液,乙醇配制的饱 和乙酸铅溶液,Reynold氏法配制的柠檬酸铅染液. 收稿日期:2008-l2-30 ?广东省电镜学会2008年学术年会入选论文. 作者简介:周志涛(1975一),男,辽宁大连人,实验师,博士研究生,主要从事超微形态学研究,E-mail: zzt2004@fimmu.corn. 第23卷第2期周志涛等:透射电镜制样中块染与片染的方法比较2I 1.2方法 4%多聚甲醛加1%戊二醛灌注小鼠后,开颅取海马组织,切成约1mm’的小块,投入预冷的2.5% 戊二醛中,在4”C继续固定4h后,置换PBS. 1.3样品制备 标本随机分为常规组和块染组.常规组标本使用常规电镜样品处理 程序包埋,切片,染色.块 染组在锇酸后固定,再按表1程序处理. 表1块染组样品处理程序 2结果 块染组包埋块修块时较脆硬,使用玻璃刀切片时连续性较好,不破碎,但容易产生刀痕.在组 织外周约1O,20gm范围内,切片良好,无掉片,镜下观察无叠片.电镜观察,超微结构反差良好, 染色均匀,没有染液形成的沉淀,细胞结构没有畸变,无细胞成分抽提(图l-a).靠近组织中心 的包埋块切片时较硬,反差弱,在电镜下观察结果接近常规样品的未染色标本.块染组的4种处理 方法在切片时无差异,电镜下观察,无组间差异. 常规组切片在染色过程中容易产生掉片.在电镜下观察超微结构,反差良好(图l-b),偶见污 染,有叠片. 3讨论 a.块染b.饱和铀染液过夜加柠檬酸铅,室温2h.片染 图1染色结果比较 片染方法应用广泛.但是在大批量载网染色过程中,操作比较繁复,容易使载网弯曲变形,影 五邑大学(自然科学版)2009年 响电镜观察时聚焦,同时由于多次液体更换,切片易出现皱褶.在染色过程中.铅染液容易与空气 中的二氧化碳结合产生污染,影响观察效果l”. 本次实验中,使用常用的铅,铀染色液对块染方法进行摸索,以寻找较好的染色条件,但是这 4种染色方法的结果并无明显差异.在实验中,首先使用了FI本学者串田弘的方法【I进行了室温2h 的染色试验,结果发现标本比较脆硬,较易产生刀痕,反差较弱,不能满足电镜观察要求,因此采 用上述改良方法进行比较研究. 在电镜样品制备过程中采用块染方法,有利于减轻染液在片染过程中形成的污染,减少在片染 过程中形成的切片皱褶,减少切片在染色过程中的掉片现象;有利于实现标本连续切片,有利于电 镜下的三维重构.在提高切片的电子束耐受方面,与片染差异不大,在铅,铀与细胞内结构结合方 面,与片染无显着差异. 块染方法的成功关键在于组织块的大小.实验结果显示染液只能渗透到组织10lam左右的范 围,在此范围内的超微结构反差良好,基本满足观察要求.但标本块中心部位的切片无法获得满意 的结果.在进一步探索实验中,我们拟结合组织化学中常用的震荡切 片,将块染标本的大小控制在 20m之内,继续改善染色方法,力求将块染方法能够运用到常规制样中,提高切片质量,以获得 满意的观察效果. 参考文献 【l】DYKSTRAMichaelJ,REUSSLauraE,eta1.Biologicalelectronmicroscopyt heory,techniques,and troubleshooting[M].2nded.【S.1.】:Springer,2003:l86-187. 【2】串田弘.超薄切片法【M】.日本:东京文光堂出版,1971:205.214. (上接第5页) 【责任编辑:熊玉涛】 参考文献 【l】向鹏,李绣峰,杜遥雪.全电动注塑机的特点及应用领域_【J】.现代塑料加工应用.2007,l9(I):52.54. 【2】王兴天.注塑技术与注塑机【M】.北京:化学工业出版社.2005. 【3】胡仁喜.张心俊.Pro/ENGINEERWildfire3.0中文版机械 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 高级应用实例【M】.北京:机械工业出版社. 2007. 【责任编辑:熊玉涛】