【word】 铁线莲品种Warszawska

【word】 铁线莲品种Warszawska 铁线莲品种Warszawska 贵州农业科学2011,39(5):32~33 GuizhouAgriculturalSciences [文章编号]1OOl一3601(2011)05—0283—03202 铁线莲品种WarszawskaNike的愈伤组织及不定芽诱导 吴荣,樊国盛,林萍,王锦,李宗艳,陈泽英 (西南林业大学园林学院,云南昆明650224) [摘要]为加快引种铁线莲X--厂化生产,以铁线莲品种WarszawskaNike的顶芽,茎节和茎段为外植 体,在MS基本培养基中添加0,1.0,2.0mg/L6-BA和0,0.01,0.05mg/LNAA,对其进行初代诱导和继代 增殖培养.结果表明:最适诱导培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.05mg/LNAA,诱导率可达81;增殖 培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.05mg/LNAA,增殖倍数达2.72. [关键词]铁线莲;WarszawskaNike;愈伤组织;不定芽;组织培养 [中图分类号]$687.3[文献标识码]A lnductionOfCalIusandAdventitionsBudsOfaClematis VarietyWarszawskaNike WURong,FANGuo—sheng,LINPing,WANGJin,LIZong—yan,CHENZe—ying (FacultyofLandscapeArchitecture,SouthwestForestryUniversity,Kunming,Yunnan650224,China) Abstract:InordertoacceleratetheindustrializedproductionofWarszawskaNike,aClematisvariety, theexperimenttooktermina1budandstemasexplants.whichwasculturedontheMSnutrientmedium addedwith6-BA(0mg/L,1.0mg/Land2.0mg/L)andNAA(0mg/L,0.01mg/Land0.05mg/L) respectivelytoselectthebesttissueculturemediumthroughtheinductionofearlygenerationandthe multiplicationtrainingoffollowinggeneration.Theresultsshowedthatthebestinducedmediumwas MS+6一 BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L,theinductionratewas81,multipliedmediumWaSMS十6一BA 2.0mg/L+NAA0.05mg/L,andtheproliferationtimeswasupto2.72. Keywords:Clematis;WarszawskaNike;callus;adventitionsbud;tissueculture 毛茛科铁线莲属(Clematis)植物是世界着名的 观赏植物,为多年生木质藤本,花朵艳丽,花型多,栽 培品种丰富且花期长,观赏性强,有”攀援植物皇后” 的美称,不仅应用于园林领域,还有较高的药用价 值,国内外对其研究较早.国内的研究虽多,但大部 分是对国内铁线莲属一些资源的分布或药用价值的 研究[1.],对于从国外引进的铁线莲的繁殖及其在园 林上的应用研究较少. 目前我国铁线莲主要以扦插繁殖为主,但因母 穗量少,繁殖系数低,繁殖速度慢,且受价格限制,国 外引种的也不适宜大量扦插,阻滞了新品种的快速 繁殖和大面积推广应用.近年来,在铁线莲属植物 的组织培养方面国内外学者也进行了一些研究,主 要集中在我国原产或本地品种方面_8.,仅有张启 香等对国外引种的栽培品种Multi—Blue进行了不 定芽及体细胞胚发生的初步研究l_1.;Mandegara和 Sieber以C.integrifolia×C.viticella的节间进行 培养,获得了体细胞胚,但周期长达l8个月n;Le- ifert等使用1/2MS培养基对c.montana’Rubens’ 进行培养,获得了丛生芽口. 研究以铁线莲品种WarszawskaNike为材料, 对6-BA和NAA不同浓度配比的效果进行分析比 较,以确定铁线莲品种WarszawskaNike组织培养 中初代和继代的最佳配方,为加快引种铁线莲工厂 化生产提供参考,进而推进在城市园林绿化中的推 广和应用. 1材料与方法 1.1试验材料 以引自欧洲3年生铁线莲栽培品种Warszaw— skaNike当年生枝条的顶芽,茎节和茎段为外植体. 1.2试验方法 剪取当年生嫩茎10cm左右,用自来水冲去表 面尘垢后,去除所有叶片,只留叶柄基部0.5cm左 右,用洗衣粉水浸泡3Omin后用自来水冲洗,并经 流水漂洗1h以上.在无菌操作台上用0.1升汞 浸泡消毒3min,用无菌水冲洗3,5遍后切成lcm 左右小段,接种于培养基上进行培养. 1.3培养基及培养条件 分别将WarszawskaNike的顶芽,茎节,茎段 [收稿日期]2Ol1—03—17;2011-0413修回 [基金项目]国家林业局948项目”铁线莲优良品种与繁育技术引进”(2008-4一?);云南省教育厅科研基金项目”两个铁线莲品种的引种与 快速繁殖研究”(09Y0308);西南林业大学面上科研基金项目”观赏铁线莲品种组织培养中褐变问题的研究”(2009M28) [作者简介]吴荣(1980一),女,讲师,硕士,从事园林植物与观赏园艺植物研究.E—mail:bassie.rong@gmail.corn *通讯作者:樊国盛(1963一),男,教授,博士,从事园林植物研 究.E—mail:274955551@qq.corn 林萍(1958一),女,教授,学士,从事园林植物与观赏园艺植物研究.E—mail:LP2418@swfu.edu.cn 第5期吴荣等铁线莲品种WarszawskaNike的愈伤组织及不定芽诱导 表1试验材料所接种的培养基配方 Table1Theformulaofmediumusedinthetest 接种到添加了不同浓度6-BA(0,1.0,2.0mg/L)和 NAA(0,0.01,0.05rag/L)的MS培养基中(表1), 并附加0.3%蔗糖和0.6卡拉胶,pH5.8.培养室 温度为(25?2).C,光照时间为12h/d,光照强度为 1500,2000lx. 2结果与分析 2.1不同激素配比对外植体诱导的影响 铁线莲品种WarszawskaNike外植体接种5d 后,切口处逐渐呈现局部膨大,同时开始出现丛生芽 的启动生长,6d后形成幼叶,10d后丛生芽生长迅 速且健壮,部分茎节和茎段基部形成黄色至黄绿色 颗粒状愈伤组织,15d后丛生芽长出3个茎节,愈伤 组织继续膨大,20d后丛生芽不再伸长生长而进行 增粗生长.从第3O天统计的全部诱导率及生长状 况(表2)看出,将外植体接种在没有添加任何激素 的培养基上培养3Od,诱导率仅为33,远低于其 他4组添加了激素的培养基,说明激素对Warszaw— skaNike的诱导有促进作用.当6-BA浓度不变 时,随着NAA浓度的提高,诱导率也随之提高;当 NAA浓度为0.01mg/L时,随着6一BA浓度的提 高,诱导率增大,但当NAA浓度为0.05mg/L时, 诱导率随6一BA浓度升高而降低.当细胞分裂素和 生长素比值低时不仅能形成侧芽,还能形成较多的 愈伤组织;比值高时形成的侧芽较多,愈伤较少;若 比值介于两者之间只形成侧芽而且量多.表明,可 以通过激素浓度配比来控制所形成的诱导类型.在 5个处理中,以处理3的诱导效果最好,不仅形成的 侧芽和愈伤组织量多,诱导率达81,而且形成的 愈伤组织为疏松型,有利于进一步分化诱导形成完 整植株. 2.2不同激素配比对丛生芽增殖的影响 将初代培养20d后各培养基中的无菌材料转 接到与初代培养基一一对应的继代培养基中进一步 培养.6d后开始出现新芽萌动,12d时长出幼叶, 15d后增殖效果无明显变化,新生嫩叶开始有变黄 趋势,部分叶片出现黑色斑点,各处理均无愈伤组织 产生.从第3O天统计的增殖倍数和生长表现(表 3)看出,增殖倍数随着6-BA与NAA比值的增高呈 先上升后下降的趋势,说明对丛生芽的增殖而言,两 者之间的比值并非越高越好,两者比值合适时才能 达到最大增殖倍数.5个处理的增殖倍数依次是处 理2>处理5>处理4>处理1>处理3.从生长表 现看,处理4和处理5明显优于其他3个处理.综 合分析比较得出,处理5产生的丛生芽不仅数量较 多,而且丛生芽较大,生长健壮,是铁线莲品种 WarszawskaNike增殖的适宜配方. 表2不同激素配比的外植体诱导情况 Table2Effectsofdifferenthormoneratiooninductionofexplants 表3不同激素配比的丛生芽增殖情况 Table3Effectsofdifferenthormoneratioonclusterbudsproliferation 3结论与讨论 3.1结论 1)铁线莲品种WarszawskaNike初代诱导的 最适培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.05mg/L NAA,诱导率可达81%.各处理诱导出的愈伤组织 呈疏松型和致密型两类,致密型的愈伤组织不利于 进一步分化诱导形成完整植株. 2)铁线莲品种WarszawskaNike继代增殖的 最适培养基为MS+2.0mg/I6-BA+0.05mg/L NAA,增殖倍数达2.72.丛生芽不仅数量较多,而 (下转第36页) 贵州农业科学 计检测,OD26./OD280比值为1.8,2.0.表明,DNA丐x陬 即DNA量越少,酶切时间越长,酶浓度越高,酶切.fDNAmethylationinArabidopsisEJ]?Cell,2006, 1 , 89 F - . 12 g 0 , zhgx,...sgbi一(具有目标位点以外的酶切活性) ,而酶量过多,可能…:…….…’.:…:.,一…………: 使反应体系中的甘油超过5影响酶切活性与准NA:thyltiptt.g[JNuure’2OO8,452 物应该是弥散状态,且有主带,大小一般不超过[4]AdamsKL,CronnR,PercifieldR,etal?Genesdu一 要:曼曼反应,篓.hegt[rJ_J.anscPriptomNea”dAordgasn-sipuecsifAic,re.c.ip.r,oca.l.si.[e n 因为即使是基因组DNA,其电泳位置也应在点样之:……’ 外,但点样孔位置存在扩增产物,似乎说明其分子量[5]Xi.gLz,XCG,sghiMaroofMA,t1.Pt一 证实这一假设,至于为什么扩增产物无法与聚合酶(责任编辑:杨林) 3.2讨论属植物资源的开发利用_J].山东林业科技,2003(3): ,曼曼麦要:难,[6]P2B,,~3t5,普春霞.云南省铁线莲属药用资源调查[J].些孽消苎璺 . 孽养.的?矍矍:云南中$,1~,200盖:,31…-33.毒时间过长, 造成接种厦不生长甚至死亡,消毒时间[7]俞,,.浙江省铁线莲属药用植物资源口]. 过短又会污染严重,如何掌握最佳的消毒时间和方江西科学,2006,24(1):90—92. d后的增殖效果不明显,而且伴随着新叶变黄和部[9]泽仁旺姆,尼珍,潘多.西藏甘青铁线莲的再生植 萎妻象的原因以及最m萎蕊铁线莲的组织培养佳增殖培养基还有待进一 步研究.写蒜五’辜通. [参考文献][11]张涛,周琼,张丽琼,等.重瓣铁线莲愈伤组织诱