鹅绒委陵菜再生体系的建立.doc

鹅绒委陵菜再生体系的建立.doc 鹅绒委陵菜再生体系的建立 史丽 杜广明 韩玉静 (黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江 大庆 163319) 摘要:为探讨鹅绒委陵菜的快繁新途径，我们以鹅绒委陵菜的茎尖为外植体，采用MS培养基，附加不同的植物激素进行了实验研究。结果表明，以茎尖为外植体，通过诱导愈伤组织途径可以达到快速繁殖的目的。其中愈伤组织诱导的最-1-1佳培养基配方是MS+6-BA1.0mg/L+2、4—D0.5mg/L，并添加微量赤霉素，不定-1芽诱导的最佳培养基配方是MS+6-BA1.0mg/L+2、4—-1-1-1D0.5mg/L+FeNaEDTA50mg/L+肌醇100mg/L，不定根诱导的最佳培养基配方是-1-1MS+1.0NAA+FeNaEDTA50mg/L+肌醇100mg/L。 关键词:鹅绒委陵菜;组织培养;外植体;激素浓度 地被植物是园林绿地的基础材料，是城市园林植物群落中不可缺少的部分。引种野生地被植物对美化和保护环境，丰富园林景观，提高园林绿化水平，起着[3]十分重要的作用 ，特别是在园林绿地中，要求乔、灌、草相结合的复层绿化， L.)为蔷薇科委地被植物的作用更为明显。鹅绒委陵菜(Potentilla anserine,1,2,陵菜属多年生草本植物，又称蕨麻、人参果，含有多种营养成分及药用成分。鹅绒委陵菜具有表型可塑性强、生态幅度宽、气候适应性广泛、喜水耐涝且具有一定的耐旱能力、耐瘠薄、抗盐碱等特性，另外还具有匍匐性强、地面覆盖性好等特点，可作为优良的地被植物在园林绿化中加以应用。鹅绒委陵菜虽然分布比较广泛，但对其达生理成熟和开始脱落的种子采摘后进行播种，并不能取得成功，使这一优良的野生地被植物资源在园林绿化中的应用受到了限制，建立快繁体系是园林绿化中应用鹅绒委陵菜这一地被植物资源亟待解决的问题。本试验针对鹅绒委陵菜种子繁殖繁殖率低的问题，利用组织培养快繁技术，探讨鹅绒委陵菜快繁新途径，旨在为今后开发和利用这一地被植物奠定前期的研究基础，为大庆盐碱地及其类似地区在园林绿化中利用鹅绒委陵菜提供参考依据。 1、 材料与方法 1.1 材料 供试植物材料为2008年6月采自黑龙江八一农垦大学草业科学系实验 基地带有茎尖的匍匐茎段。 1.2 方法 ?无菌外植体的获得:将带有茎尖的鹅绒委陵菜匍匐茎段用湿纱布保 湿带回实验室，剪去叶柄及其他多余部分，保留带有茎尖约3cm长的茎段， 经流水冲洗2h，在超净工作台中，无菌条件下用70%酒精灭菌30s，再用0.1% 的升汞灭菌，最后用无菌水摇晃冲洗4-5次，用无菌水冲洗干净后置于解剖 镜下，剥取 0.5mm 左右的茎尖生长点进行接种。?培养条件:培养条件为 MS培养基，附加培养基中添加3%蔗糖, 0.6%琼脂,pH值5.8。培养室温度为 27 ?2 ?,每天光照12h ,光照强度1000,1500Lx。 2、 结果分析 2.1 激素对愈伤组织诱导的影响 将鹅绒委陵菜茎尖分别接种于含有不同激素配比的1,5号添加了少量的赤霉素的培养基。培养20天后统计各处理愈伤组织诱导情况。结果见表1. 表1 不同植物激素配比对诱导愈伤组织的影响 培养基 培养基及激素浓度 愈伤数量 愈伤组织生长情况 -1编号 (mg/L) (块) 1 MS+6-BA0.5+2、4-D0.5 12 愈伤为深绿色，质地较硬 2 MS+6-BA1.0+2、4-D0.5 19 愈伤黄绿色，表面有突起的芽点 3 MS+6-BA2.0+2、4-D0.5 25 愈伤淡黄色，有明显的玻璃化 4 MS+6-BA1.0+2、4-D1.0 12 愈伤黄绿色，表面有少量突起的芽点 5 MS+6-BA0.5+2、4-D1.0 8 愈伤块小，绿色 由表1可以看出，植物激素浓度越高越容易诱导出愈伤组织，但当细胞分裂素与生长素浓度达到2.0/0.5时，愈伤组织色浅不易分化芽，而且玻璃化严重;当细胞分裂素与生长素比例小时，愈伤组织分化率也降低，试验结果表明诱导愈伤组织的最佳培养基配方是MS+6-BA1.0+2、4-D0.5，所诱导出的愈伤组织黄绿色，且表面有突起的芽点。 2.2 激素对不定芽分化与继代增殖的影响 将诱导出的愈伤组织转接到含有不同激素配比的1,6号培养基中，培养1个周期后观察其生长情况，结果见表2. 表2 不同植物激素配比对不定芽分化及继代增殖的影响 培养基编号 培养基及激素浓度 不定芽生长状况 -1(mg/L) 1 MS+6-BA0.5+2、4-D0.5 苗高3-5cm，叶深绿， 生长健壮但苗少 2 MS+6-BA1.0+2、4-D0.5 苗高2-3cm，叶深绿 苗高2-3cm，苗子细 3 MS+6-BA2.0+2、4-D0.5 而密 与1号状况类似，但 -1-1 4 MS+6-BA0.5+2、4-D0.5+ FeNaEDTA50mg/L+肌醇100mg/L较1号苗多 苗高2-4cm，叶翠绿， -1-1 5 MS+6-BA1.0+2、4-D0.5+ FeNaEDTA50mg/L+肌醇100mg/L健壮且密 苗高2-4cm，叶深绿， -1-16 MS+6-BA2.0+2、4-D0.5+ FeNaEDTA50mg/L+肌醇100mg/L 苗少，有不定根 -1由表2可见，细胞分裂素6-BA浓度在0,2.0 mg/L之间均能诱导出不定芽，随着其浓度增高，诱导出的芽数增加，子苗相应变细弱。研究结果表明，随着继代次数的增加，较高浓度的细胞分裂素6-BA容易引起玻璃化，子苗不健壮。在生产过程中随着继代次数的增加应逐步降低细胞分裂素的浓度，直至为零。 2.3激素对不定根诱导培养的影响 经过一段时间的继代培养后，将丛生芽切分成带小量愈伤组织的单株转到含有不同激素配比的培养基中。半月后观察其生根情况，结果见表3. 表3 不同植物激素配比对诱导不定根的影响 培养及培养基及激素浓度 生根情况 编号 1 MS+1.0NAA 生根率72%，根粗壮，株均根数 3.2条 2 MS+1.06-BA 生根率69.3%，有少量侧根，株均 根数2.5条 -13 MS+1.0NAA+FeNaEDTA50mg/L+肌醇生根率78%，根粗壮，株均根数 -1. 100mg/L 4.2条 由表3可见，鹅绒委陵菜组培苗生根比较容易。试验结果表明，诱导不定根培养 -1-1.基的最佳培养基配方是MS+1.0NAA+FeNaEDTA50mg/L+肌醇100mg/L。 2.4组培苗的移栽 当组培苗幼根生长到1cm时，将培养瓶放在自然光照下炼苗3,5天后，轻轻取出组培苗，洗净培养基后，移栽到经0.1%KMnO溶液消毒过4的基质中，保持一定的温度和湿度，驯化后成活率可达80%以上，虽然成活率不高，但是呈稳定状态，2周后待长出新叶即可移栽到试验田，移栽成活率可达50%以上，呈稳定状态。 3.讨论 目前园林绿化中利用的鹅绒委陵菜均采自于野外 ,收获时从土中挖出块根 ,常常会导致植被大面积破坏 ,且自然生产量较低，种子繁殖率低。本文通过对鹅绒委陵菜的组织培养和植株再生的实验研究，建立了以鹅绒委陵菜茎尖为外植体，诱导愈伤组织、不定芽分化、生根培养及炼苗移栽的技术体系，该技术取材容易，消毒简便，移栽成活率高，是加快繁殖速度的有效途径，为今后开发和利用这一地被植物—鹅绒委陵菜，奠定前期的研究基础 , 对资源的保护和开发利用有重要的参考意义。 参考文献 [1]周华坤,周兴民,周立,等.鹅绒委陵菜(Potentilla anserina L.)生长特征[J].西北植物 学报,2002,22(1):9-11 [2]周华坤,周立等.两种生境下鹅绒委陵菜无性系形态的比较[J].西北植物学 报,2002,22(6):1406-1414. [3]李军乔,王立祥.鹅绒委陵菜(Potentilla anserina L.)生物学特性的初步研究[J],西北农 林科技大学学报(自然科学版),2003,31(3):190-192 基金项目:黑龙江省农垦总局攻关项目(HNKXIV-08-06-01),大庆市科技攻关项目(SGG2007-045)资助。 作者简介:史丽(1984-)，女，黑龙江齐齐哈尔人，在读硕士。杜广明为通讯作者。