瓜蒌薤白白酒汤活性成分研究Ⅳ 含氮及其它类化合物(可编辑)
瓜蒌薤白白酒汤活性成分研究? 含氮及其它类化合物
天然产物研究与开发
2003 Vo1. 15 No. 1 NATURAL PRODUCT RESEARCH AND DEVELOPMEN T
9
瓜蒌薤白白酒汤活性成分研究 ?:
含氮及其它类化合物
3
何祥久 邱 峰 姚新生
沈阳药科大学中药学院 辽宁 沈阳 110016
摘 要 在药理活性指导下 ,利用各种化学和色谱手段从瓜蒌薤白白酒汤
活性部位中分离得到 10 个化
合物 ,通过化学及波谱手段鉴定了它们的化学结构 ,分别为 thymidine
1 ,adenosine 2 ,2 ,3 ,4 ,92tetrahy2
dro212methyl21H2pyrido[3 ,42b]indole232carboxylic acid 3 ,2 ,3 ,4 ,92tetrahydro21H2pyrido [ 3 ,42b ]indole232
β
carboxylic acid 4 ,D2tryptophan 5 ,syringin 6 ,daucosterin
7 ,stigmasterol232O2 2D2glucoside 8 ,succinic
β
acid 9 , 2sitosterol 10 。
关键词 瓜蒌薤白白酒汤 ;活性成分 ;含氮化合物
瓜蒌薤白白酒汤是汉代名医张仲景的著名经典 道。鉴于上述研究现状 ,
计划
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用我们研究中药复方
[2 ,3 ]
方剂 ,出自《金匮要略》 ,主治胸痹。在临床上 ,瓜蒌 的思路 ,对瓜蒌薤白白酒汤的活性成分进行研
薤白白酒汤主要用于冠心病、 心绞痛、 急性心肌梗 究 ,以期能阐明其作用的物质基础及组方依据。
塞、 心律失常及心肌炎等疾病 ,是中医治疗心血管系 在活性指导下我们对此复方进行了系统分离。
[1 ]
统疾病的重要方剂 。国内外 ,人们对其研究主要 我们从此复方的活性部位正丁醇层中分离到 10 个
局限于临床和药理活性研究的报道 ,而对其基础研 化合物。通过化学及波谱学手段 ,对这 10 个化合物
究特别是此复方发挥作用的物质基础研究尚未见报 进行了结构鉴定。
小板聚集仪。
1 实验部分
制备型 HPLC为 LC210 日本分析工业株式会
111 仪器与材料
社 ,示差检测器。色谱柱为 Econosphere C 22 18
熔点在 Yanaco 显微熔点测定仪上测定 未校
mm ×250 mm , Alltech , USA ,流动相为 MeOH2 正 ,NMR 在 500 MHz 核磁共振仪上测定 , IR 在
H O ,流速 6 ml/ min。HPLC用熔剂为色谱纯 ,其余
2
Bruker 红外测定仪上测定。柱层析和薄层层析用
溶剂为分析纯。
硅胶为青岛海洋化工厂产品 ,ODS和 Sephadex L H2 中药栝楼和薤白购自辽宁省药材站 ,由沈阳药
20为 Pharmacia 公司产品 ,预制硅胶板为 Merck 公
科大学中药学院孙启时教授鉴定为 T richosanthes 司产品。上海医科大学博高实业公司 M G2196 型血
ki rilow ii .和 A llium m acrostemon Bge. 。
112 化学成分的提取分离
收稿日期 :2002209202 修回日期 :2002209216 栝楼 15 千克和薤白 10 千克混合 ,用 10 倍量的
3通讯联系人 Corresponding author1995-2005 Tsinghua Tongfang
Optical Disc Co., Ltd All rights reserved. 1 0 天然产物研究与
开发 2003 Vo1. 15 No. 1
[4 ,5 ]
60 %乙醇回流提取 3 次 ,合并 60 %乙醇提取液 ,减 献 报道 Thymidine 的数据 ,发现化合物 1 的数
压回收溶剂得提取物浸膏。浸膏用水溶解后 ,依次 据与其基本一致。因此化合物 1 鉴定为胸腺嘧啶脱
用等体积的乙酸乙酯、 水饱和正丁醇萃取 3 次 ,得乙
氧核苷 Thymidine 。从该化合物的二维图谱分析
酸乙酯层、 正丁醇层和水层等三部分。经抗血小板 发现 ,文献中的 3′ 与 4′ 碳信号的归属有误 ,应按表 1
聚集活性测试表明 ,正丁醇层抗血小板聚集活性最
归属。
强 ,因此对正丁醇层作了进一步分离。正丁醇层
212 Adenosine 2
448克上 D101 大孔吸附树脂 ,水2乙醇梯度洗脱 ,得 白色粉末 ,熔点 231~232 ?,碘化铋钾显桔黄
水、 10 %、 30 %、 50 %和乙醇洗脱等五部分 ,其中 色 ,提示该化合物分子中可能含有氮原子。IR
- 1
10 %、 30 %乙醇2水溶液及乙醇洗脱部分活性最强。
KBr 中 ,3334 cm 强尖峰说明分子中可能含有 -
- 1
再经硅胶柱层析、 Diaion HP220、 ODS及 Rp18 HPLC
OH或 - N H ,1666 cm 处为 C C及 C N 双键伸 - 1
等分离手段 ,分别得到化合物 1~10。
缩振动的吸收 ,1604、 1572 和 1470 cm 为芳香环的 13
吸收。在 C NMR中 ,共有 10 个碳信号 ,其中在 60 2 结构鉴定
~90 ppm 之间的 5 个碳信号与核糖数据基本一 1
211 Thymidine 1
致。H NMR 中 ,最低场处有两个芳氢单峰信号 ,分 白色粉末 ,熔点 184~185 ?。在 IR 中 3312 别位于 8133 和 8112 ppm 处 ,在 7133 2 H ,s 处是 - 1
cm 尖峰表明分子中可能存在 - OH或 - N H ,1700 - N H 上二个质子信号 ,5186 H ,d , J 612 Hz为 2
- 1 - 1
cm 和 1659 cm 处的两个强峰说明分子中存在两 核糖上端基质子信号 ,通过分析该化合物碳谱及氢 [6 ]
个羰基 ,从它们的峰位分析 ,羰基应与供电基团相 谱数据 ,发现与文献 报道的腺苷基本一致。综上 13
连。从该化合物的 C NMR和 DEPT谱可以看出 , 分析 ,化合物 2 鉴定为腺苷 Adenosine 。
该化合物有 1 个甲基 ,2 个亚甲基 ,4 个次甲基和 3 213 2 ,3 ,4 ,92Tetrahydro212methyl21 H2pyrido[ 3 ,42
个季碳共 10 个碳信号。在 80~90 ppm之间有 4 个 b] indole232carboxylic acid 3 1 1
碳信号 3 个次甲基和 1 个亚甲基 ,分析其 H2 H 淡黄色粉末 ,碘化铋钾反应阳性。IR KBr 中 , COSY谱 ,可以得出如下片段 :
- 1 - 1
3295 cm 处尖峰为的 - N H 吸收峰 ,1643 cm 处 - 1
的基峰为 - COOH 吸收峰 ,1577 ,1454 cm 为芳环 1
的吸收峰。H NMR的低场区共有四个芳氢信号 ,它 表 1 化合物 1 的氢及碳信号归属
们分别位于 7169 H ,d ,J 710 Hz ,7150 H ,d ,J
1 13
Table 1 The H and C NMR chemical shifts of compound 1
710 Hz ,7124 H ,t , J 710 Hz 及 7119 H ,over2 1 1
氢信号 文献值 碳信号 文献值
编号
lapped ,通过它们之间的耦合常数及二维 H2 H2
a b a b
No. Proton Reference Carbon Reference COSY谱可以看出这四个芳氢为 1 ,22二取代苯环上
2 152. 4 154. 2
3 4. 5 H ,s 4. 65 H ,s
四个氢信号。在最高场 ,δ 1165 处是一个甲基信
4 166. 3 168. 9
1 1
δ
号。在 H2 H COSY谱中 , 3130 H ,ddd ,J 1210 , 5 111. 5 114. 0
6 7. 79 H ,q ,J 1. 4 Hz 7. 62 138. 1 140. 1 δ
810 ,214 Hz 的氢信号与 4110 H , dd , J 1210 , 7 1. 87 3 H ,d ,J 1. 4 Hz 1. 88 12. 4 14. 1 1’ 6. 26 H ,t ,J 6. 7 Hz 6. 25 88. 8 89. 2 810 Hz 是一对偕质子
信号 ,它们之间除了相互存在
2’ 2. 21 2 H ,m 2. 36 41. 2 41. 2
偕耦外 ,且同时与δ3155 H ,dd ,J 810 ,214 Hz处 3’ 4. 38 H ,m 4. 45 72. 2 87. 8 3
4’ 3. 88 H ,m 4. 01 86. 3 73. 1 3 δ δ
的质子耦合。 1165 处甲基与 4145 H , d , J 5’ 3. 70 H ,o ,3. 73 H ,o 3. 75 ,3. 83 62. 8 63. 9 13
419 Hz 之间为邻耦关系。在 C NMR 中共有 13 注 :1“a” 在 CD OD中测定“ , b” 在 D O 中测定。 3 2
个碳信号 ,其中最低场处 17216 ppm 为羧酸羰基信 2 3文献归属有误。
Note :1“a” measured in CD OD“ , b” measured in D O. 号 ,其余在
100~140 ppm之间的 8 个碳信号为芳香
3 2
[7 ]
2 3 are error in documents. 碳信号。通过上述分析 ,结合文献 ,该化合物鉴
1
定为 : 2 ,3 ,4 ,92tetrahydro212methyl21H2pyrido [ 3 ,42
结合 H NMR中 6125 ppm H ,t ,J 618 Hz 的
信号 ,发现该分子中含有一个脱氧核糖。对照文 b ]indole232carboxylic
acid。1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd All rights
reserved.2003 Vo1. 15 No. 1 何祥久等 :瓜蒌薤白白酒汤活性成分研究 ?:含氮及其它类化合物 11
[7 ]
214 2 , 3 , 4 , 92Tetrahydro21 H2pyrido[ 3 , 42b] indole2
该化合物的氢谱及碳谱数据 ,与文献 报道的胡萝
32carboxylic acid 4
卜苷一致 ,因此化合物 6 鉴定为胡萝卜甙 Daucos2
淡黄色粉末 ,碘化铋钾反应阳性 ,提示该化合物
terin 。
可能含有氮原子。EI2MS 显示该化合物的分子量
218 Stigmasterol232O2β 2D2glucoside 8
- 1
为 216。IR KBr中 ,3343 cm 处强尖峰为 - N H
白色方晶 吡啶 ,熔点 264~ 265 ?,Lieber2
- 1
吸收信号 ,1635 cm 为羧酸羰基的吸收信号。比较 mann2Burchard及 Molish 反应均为阳性 ,酸水解检
化合物 4 与化合物 3 的氢谱 ,发现它们在低场区十 出葡萄糖 ,比较该化合物的氢谱及碳谱数据 ,发现与
[7 ]
分相似 ,在高场区化合物 4 较化合物 3 少了一个甲 文献报道 的
Stigmasterol232O2β 2D2glucoside 基本
基 ,提示化合物 4 可能是化合物 3 的 1 位去甲基的 β
一致 ,因此该化合物鉴定为 :豆甾烯醇232O2 2D2吡喃
β
化合物 ,其质谱中的分子离子峰证明了这一推论。 葡萄糖苷
Stigmasterol232O2 2D2glucoside 。
[7 ]
通过与文献 对照 ,结合上述分析 ,该化合物鉴定 219 Succinic acid 9
无色方晶 甲醇2水 ,熔点 181~ 182 ?。IR
为 :2 , 3 , 4 , 92tetrahydro21H2pyrido [ 3 , 42b ] indole232
- 1
carboxylic acid。 KBr 中 ,在 2500~3500 cm 之间有羧酸宽吸收 - 1 13
峰 ,1694 cm 为羰基伸缩振动的吸收峰。在 C
215 D2Tryptophan 5
化合物 5 为白色粉末 ,熔点 281~281 ?,溶于 δ
NMR中 ,只有两个碳信号 ,其中 17917 为羧酸羰
δ
水及甲醇。碘化铋钾和茚三酮反应阳性 , EI2MS显 基的碳信号 , 3115 是
亚甲基信号。通过与文献报
[7 ]
示分子量为 204。通过与
标准
excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载
品薄层及其质谱数据 道 的琥珀酸数据比较 ,两者基本一致 ,因此化合
对照 ,该化合物鉴定为 :D2tryptophan D222amino232 物 9 被鉴定为琥珀酸 succinic acid 。
indole propionic acid 。 2110 β 2Sitosterol 10
化合物 10 为无色片状结晶 氯仿2甲醇 ,熔点
216 Syringin 6
白色针晶 氯仿2甲醇 ,熔点 192~193 ?,在薄 139~140 ?。在薄层上 10 %硫酸喷雾显紫红色。
β β
层上该化合物具有很强的紫外吸收 ,提示分子中有 通过与标准品共薄层 ,鉴定为 2谷甾醇 2sitos2
- 1
较长的共轭体系存在。在红外图谱中 ,1586 cm 及 terol 。
- 1
致谢 栝楼和薤白由沈阳药科大学中药学院孙启时
1508 cm 的吸收显示分子中存在苯环结构 ,3391
- 1 1
教授鉴定 ,在此深表感谢 !
cm 处的强吸收说明分子中多羟基的存在。H
1 1
NMR及 H2 H COSY谱显示 ,分子中存在反式耦合
参考文献
的烯氢 ,化学信号分别为 6160 ppm H ,dt ,J 1610 , 1 许沛源.方剂学.北京 :人民卫生出版社 ,1995. 371~373 510 Hz ,6184 ppm H ,d ,J 1610 Hz ,其中δ6160
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δ
处的质子与 4157 处的质子有较强的相关峰 烯丙
学进展 ,2001 ,13 6 :481~485
耦合 。此外 ,在低场区δ 6188 2 H ,s 的芳氢信号
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Tongfang Optical Disc Co., Ltd All rights reserved.