[doc] 中药果根素对人工感染鸡毒支原体病鸡的治疗试验

[doc] 中药果根素对人工感染鸡毒支原体病鸡的治疗试验 中药果根素对人工感染鸡毒支原体病鸡的 治疗试验 1062中国兽医2009年8月第29卷第8期ChinJVetSciAug.2009Vo1.29No.8 中药果根素对人工感染鸡毒支原体病鸡的治疗试验 王春元,韦旭斌,王鲁.,王秀敏.,褚秀玲,崔小霞.,申海清(1.吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春 130062;2.贵州大学动物医学系,贵州贵阳550025;3.北京生泰尔生物科技有限公司,北京100000;4.山东聊城大学 动物科学系,山东聊城252059) 摘要:采用鸡毒支原体 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 株感染健康的7日龄鸡毒支原体阴性鸡,用1.33‰(高剂量),0.67%.(中剂量),0.33%0 (低剂量)的果根素进行混水饮用治疗,以500rng/L的泰乐菌素饮水治疗为对照,通过治愈率,平均体质量,料肉比 和气囊损伤的减少率评价其治疗效果.结果表明:高,中剂量的果根素对鸡毒支原体感染的治愈率均在96.67以 上,且能明显提高感染鸡平均增重,降低料肉比,减轻MG对气囊的损伤,作用相当于泰乐菌素. 关键词:中药;鸡毒支原体感染;治疗 中图分类号:$852.62文献标识码:A文章编号:1005—4545(2009)08, 1062—04 ExperimentalstudyoncuringMycoplasmagallisepticuminchickensbyusing GuogensuofChineseherbmedicine WANGChun—yuan,WElXU—bin,WANGLu,WANGXiu—min.,CHU Xiu—ling,CUIXiao—xia., SHENHai—qing(1.CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,JilinUniversity, Changchun130062,China;2.CollegeofAnimalScience,GuizhouUniversity,Guiyang550025, China;3.BeijingCentreBiologyCo.,Ltd,Beijing102206,China;4.CollegeofAnimalScience, LiaochengUniversity,Liaocheng,Shandong252059,China) Abstract:ToobservethetherapeuticefficacyofGuogensu(GGS)onchickenartificiallyinducedbyMycoplasma gallisepticum(MG).Seven—day-agechickenwhichwerehealthyandhadno MGinfectionhadbeeninfectedbyMG typestrains.andweretreatedwithGGSof1.33%.(highdose),0.67%0(middledose)and0.33%0(1owdose)through drinkingwithwater,500mg/Ltylosinwasascontro1.ThetherapeuticefficacyofGGSwasevaluatedthroughcure rate,meanweight,feedconversionratioandballooninjury.Thecureratesofhi ghdoseandmiddledoseGGSwere 96.67,andobviouslyelevatedmeanweightofinfectedchickenanddegradedf eedconversionratioandlessenthe ballooni~urybyMG,indicatingthatGGSeffectwascorrespondedtotylosin. Keywords:Chinesetraditionalmedicine;Mycoplasmagallisepticuminfecti on;treatment *C0rrPsDgauthor 鸡毒支原体(Mycoplasmagallisepticum,MG) 感染是以咳嗽,流鼻液,喷嚏,气管哕音和全呼吸道 炎症为临床特征的传染病,临床上被称为鸡慢性呼 吸道病(Chronicrespiratorydisease,CRD).本病 广泛分布于世界各国,在我国的感染率也很高,部分 地区可达75以上口],给各国养禽业带来巨大经济 损失,所以世界上许多国家都很重视该病的研究. 为了寻求安全有效的抗CRD的中药,去试验拟观察 果根素对人工感染鸡毒支原体病鸡治疗的有效性及 收稿日期:200803一lO 作者简介:王春元(1982一),女,硕士. *通讯作者 安全性 1 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1.1标准菌株及诊断试剂鸡毒支原体BG44T 株,鸡毒支原体血清平板凝集抗原及标准阳性血清 (批号:200401),购自中国兽医药品监察所. 1.2试验药品果根素是由纯中药制成的口服液, 由北京太空城生物科技有限公司2007年3月16日 生产,批号:07030161,成分:板兰根,合成牛黄,甘黄 等中药组成:i00mL/瓶,每毫升相当于生药3g;酒 石酸泰乐菌素可溶性粉,石家庄征宇动物药业有限 公司生产,批号070721,每毫克含泰乐菌素800单 位. 中国兽医2009年8月第29卷第8期 ChinJVetSciAug.2009Vo1.29No.81063 1.3培养试剂PPLO基础培养基,BD公司产品; 酵母浸出物,OXoID公司产品;醋酸铊,Sigma公司 产品;NAD,Genview公司产品,北京鼎国生物公司 分装;马血清,自制:其他均为国家分析纯试剂. 1.4试验动物240只1日龄海兰褐蛋鸡,购自长 春市北方种鸡场,未经MG疫苗免疫,饲喂至713 龄,经血清学检测为鸡毒支原体血清学阴性,取3O 只用于临床药物安全性试验,剩余210只用于鸡毒 支原体感染的治疗试验. 1.5主要仪器CO培养臬,型号:MCO一17AI,13 本三洋公司;高速冷冻离心机,型号:KUBOTA 7930,日本久保田;普通光学显微镜,日本OLYM— PUS. 1.6临床用药安全性试验取30只7日龄海兰褐 鸡公为3组,每组10只,分别以0.25,0.5,1mL/只 (相当于生药量0.75,1.5,3g/只)的剂量灌服果根 素,2次/d,连用5d,每天观察并 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 鸡的临床表 现,5d后每组任选5只剖检,观察内脏变化. 1.7病理模型的复制 1.7.1MG的复壮,分离及攻毒菌液的制备24h 在液体培养基中达到对数生长高峰期(采用毕丁仁 等[2方法测定培养物含菌浓度约为10CFU/mL) 的3代MGBG44T株培养物,经点眼,滴鼻和胸腔 注射接种于7日龄海兰褐蛋鸡,0.5mL/只,待出现 临床症状时用灭菌棉拭子擦拭鼻后裂或喉头接种于 PPLO培养基上,再纯化培养2代,收集菌体并调整 菌体密度到2×10CFU/mL用于本试验. 1.7.2试验分组与攻毒将试验鸡分为果根素高 剂量组(1.33‰),果根素中剂量组(0.67%o),果根素 低剂量组(0.33%o),泰乐菌素组,感染对照组和健康 对照组,每只鸡气囊接种MGBG44T株培养物0.3 mL,点眼滴鼻共0.2mL,健康组以生理盐水作对 照. 1.8建立诊断依据I临床症状鉴别,病理学变化和 实验室综合诊断. 1.8.1病理剖检按常规方法进行. 1.8.2病原的分离鉴定活鸡从鼻后裂,喉头取 样,死鸡从鼻腔,眶下窦,气管或肺采样接种于PP— LO液体培养基中,依次1O倍稀释至10一,密封, 37?培养,同时接种于固体培养基上进行培养,纯化 和鉴定.于37?,含5CO,80,909/6的相对湿 度培养箱中培养.每天检查液体培养基酸碱度,发 现pH值变化后立即接种于固体培养基中培养,如 经3,5d仍未出现颜色变化,则要传代,盲传5代 后仍无变化者弃去.固体培养基上的菌落隔3d用 低倍显微镜观察1次,1周后仍无可疑菌落者弃去. 取典型菌落在液体培养基中扩大培养,进行生物学 特性观察.生物学特性的观察方法为:将分离的纯 培养物涂于载玻片上,瑞氏染色,油镜下观察菌体形 态;将纯培养物在不加青霉素和醋酸铊的液体培养 基中连续传5代,接种于固体培养基上,观察菌落形 态,进行Dienes染色[2,观察结果;取经洗涤调整为 0.3的鸡红细胞生理盐水混悬液注入菌落发育的 培养皿中,室温作用15min,用生理盐水冲洗3次, 40,100倍光镜下观察. 1.8.2血清学诊断感染1周后每组抽10只鸡采 血作血清快速平板凝集试验,做进一步确诊. 1.9治疗接种后用果根素实施治疗,以泰乐菌素 作为对照药物,剂量分别为:高剂量1.33‰,中剂量 0.67‰,低剂量0.33‰,泰乐菌素组500mg/L,兑 水后让患鸡自由饮服,连用5d,药液每天配换1次, 停药后观察21d. 1.10疗效评价记录各试验组鸡的病死数,治愈 数,初体质量,末体质量和饲料消耗量,计算病死率, 治愈率,平均增重和料肉比,以统计学方法比较各组 问的差异.试验结束时每组抽10只鸡剖检做气囊 损伤计分,评价气囊损伤率,计分方法参照文献E33 计分标准,将气囊病理损伤分为5级: 0级,气囊正常,薄而透明; 1级,气囊仅有稍增厚的灰色区或黄色渗出斑 点; 2级,部分气囊易见到灰至黄色渗出,有时出现 泡沫,气囊增厚; 3级,大部分气囊增厚,布满大量黄白色干酪 物; 4级,几乎整个气囊布满黄白色干酪样渗出物, 气囊严重增厚. 鸡平均气囊病理损伤度(计分):所有鸡气囊损 伤度总和/被检鸡数. 气囊损伤减少率一(感染对照组每只鸡气囊损 伤平均分一试验组每只鸡气囊损伤平均分)/感染对 照组每只鸡气囊损伤平均分. 2结果 1.1临床药物安全性试验结果3组试验鸡精神 状态均良好,饮食欲正常,试验期间未出现临床症 状,每组随机抽5只进行剖检,未见异常.结果表 明,使用0.67%o的15倍(1.005)剂量果根素兑水 饮用5d对鸡安全. 2.2病理模型复制感染对照组鸡于接种后第2 1064中国兽医2009年8月第29卷第8期 ChinJVetSciAug.2009Vo1.29No.8 天部分鸡表现精神不振,食欲减退,羽毛松乱,第5 天个别鸡出现甩头,喷嚏症状,在接种后第7天普遍 出现呼吸困难,喷嚏.死亡鸡剖检,气囊增厚,浑浊, 内有少量黄白色干酪样渗出物,部分鸡喉头,气管积 有粘液,气管粘膜充血,出血变化.从感染鸡的喉 头,气管和肺脏中分离出微生物,经生物学特性鉴定 完全符合MG的生物学特性;对感染7d后鸡,采血 进行鸡毒支原体平板凝集试验,结果呈阳性,证明感 染成功. 2.3实验室诊断从感染鸡喉头,气管和肺脏分离 病原,对分离物进行纯化,涂片瑞氏染色,油镜观察 可见典型的球形菌体(图1A);分离物在不加青霉素 和醋酸铊的培养基中连续传5代,再接种到固体培 养基上,可见典型的”煎蛋样”菌落(图1B);用 Dienes染色法染色,菌落边缘呈淡蓝色,中央隆起 部呈深蓝色,且在30min内不退色(图1C),可以排 除L型细菌;菌落吸附鸡红细胞试验结果显示,在 低倍镜下可见菌落周围吸附了大量的红细胞(图 1D).试验结果表明,分离物生物学特性与MG相 吻合. 对感染7d后鸡进行血清平板凝集试验,结果 呈阳性.通过综合诊断结果证明,感染成功. 2.4治疗结果各用药组在开始用药的第2天症 状有所缓解,病鸡饮食欲增加,精神状态好转,第3 天大部分鸡呼吸困难和下痢症状减轻,部分鸡症状 消失,到第5天饮食欲,精神状态好转,呼吸困难和 下痢也基本消失,1周后,病鸡恢复正常. 2.4.1治愈率,平均体质量和料肉比试验结果显 示,果根素高剂量组,预防组和泰乐菌素组病鸡完全 成活,而中剂量组的成活率高于96.79/6,明显高于 感染对照组和低剂量组(90).感染后第7天,感 染组平均体质量显着低于健康组(P<0.05),其余 各组间差异不显着(P>0.05);感染后第2l天,果 根素高,中剂量组,泰乐菌素组和健康组间平均体质 量差异不显着(P>0.05),但显着高于果根素低剂 量组和感染组(P<0.05),果根素低剂量组显着高 于感染组(P<0.05).料肉比以感染组最高 (2.36),各用药组与健康组相当(表1). 图1MG形态及部分生物学特征A.鸡毒支原体光学显 微镜下瑞氏染色(1000×);B.光学显微镜下鸡毒支 原体菌落形态(100×);C.光学显微镜下鸡毒支原体 的菌落形态(Dienes染色)(100×);D.鸡毒支原体菌 落吸附红细胞(100×) 表1果根素对鸡毒支原体感染的治疗效果 注:大写字母不同表示组间差异显着(P<O.05) 2.4.2气囊损伤情况试验结束时每组取10只 鸡,剖检观察气囊病变,作气囊损伤记分,计算气囊 损伤减少率. 从表2中可以看出,2种药物均能降低MG对 鸡气囊的损伤,其中以中剂量的果根素和泰乐菌素 作用效果最佳,气囊损伤减少率均为81.3. 3讨论 通过果根素对鸡毒支原体感染的治疗结果可以 表2毒支原体感染鸡气囊的病理损伤(n一10) 看出,在治愈率方面,高,中剂量的果根素与泰乐菌 素作用相当,明显高于低剂量组;感染后21d平均 (下转1084页) 1084中国兽医2009年8月第29卷第8期ChinJVetSciAug.2009Vo1.29No.8 体GH和PRL的调节途径来影响奶畜的泌乳活动, 其详细的调节作用有待于进一步研究. 参考文献: [1]KojimaM,HosodaH,DateY,eta1.Ghrelinisagrowth—hor— mone—releasingacylatedpeptidefromstomach[J].Nature, 1999,402:656—660. [2] E33 [4] E53 [6] [73 E8] Tena-SempereM,BarreiroML,GongalezLC,eta1.NoreI expressionandfunctionalroleofghrelininrattestis[J].En— docrinology,2002,l43:717-725. MalinG,ApostolosV,LindaM.Distributionofobestatinand ghrelininhumantissues:Immunoreactivecellsinthegastro— intestinaltract,pancreas,andmammaryglands[J].JHisto— chemCytochem,2008,56(9):793—801. HorvathTL,DianoS,SotonyiP,eta1.Minireview:ghrelin andtheregulationofenergybalance—ahypothalamicperspec— tire[J].Endocrinology,2001,142:4163—4l69. MasudaY,TanakaT,InomataN,eta1.Ghrelinstimulates gastricacidsecretionandmotilityinrats[J].BioehemBiophys RasCommun,2000,276:905—908. ArvatE,DiVitoI,BroglioF,eta1.Preliminaryevidence thatghrelin.thenaturalGHsecretagogue(GHS),receptor ligand.stronglystimulatesGHsecretioninhumans[J].JEn— docrinolInvest,2000,23:493-495. ArosioM,RonchiCL,CebbiaC,eta1.Ghrelinadministra— tionaffectscirculatingpituitaryandgastro—entereopancreatic hormonesinacromegaly[j].EuropeanJEndocrinol,2003, l50:27-32. Tena—SempereM,AguilarE,Fernandez—FernandezR,eta1. GhrelininhibitsprolactinsecretioninPrepubertalrats[J]. Neuroendocrin01ogy,2004,79(3):133—141. [9]GualilloO,CaminosJ,BlaneoM,eta1.Ghrelin,anovelpla— cental-derivedhormone[J].Endocrinology,2001,142:788— 794. [103GuanxM,YuH,PalyhaOC,eta1.DistributionofmRNA encodingthegrowthhormonesecretagoguereceptorinbrain andperipheraltissues[J].Molecularbrainresearch,1997, 48:23-49. [u]PapottiM,GheC,CassoniP,eta1.Growthhormonesecret— agoguebindingsitesinperipheralhumantissuesEJ].JClin EndocrinolMetab,2000,85:3803—3807. [12]ChengK,thanWW,BarretoJrA,eta1.Thesynergistic effectsofHis—_D-Trp—’Ala—’Trp-D-Phe-Lys??NH2ongrowth hormone(GH)一releasingfactor-stimulatedGHreleaseand intracellularadenosine3,5-monophosphateaccumulationin ratprimarypituitaryceltculture[J].Endocrinology,1989, 124:2791—2798. [13]GothMI,LyonsCE,CannyBJ,eta1.Pituitaryadenylate cyclaseactivatingpolypeptide.growthhormone(GH)一relea— singpeptideandGH—releasinghormonestimulateGHrelease throughdistinctpituitaryreceptors[J].Endocrinology, 1992,130:939—944. [14]Javedlqbal,YoheiKurose,BenedictCanny,eta1.Effectsof centralInfusionofghrelinonfoodintakeandplasmalevelsof growthhormone,luteinizinghormone,prolactin,andcortisol secretioninsheep[J].Endocrinology.2005,147(1):510— 519. (上接1064页) 增重显示,各用药组虽低于健康组,但显着高于感染 组(P<O.05),说明果根素和泰乐菌素能显着改善 因感染造成的增重迟缓.在感染后21d剖检发现, 用药组气囊病变较感染组轻,说明药物能阻止或减 轻支原体对气囊的损伤,其中以中剂量的果根素和 泰乐菌素作用效果最佳.综合以上结果,果根素高 剂量对降低感染鸡的死亡率优于中剂量,但感染后 21d平均体重和气囊损伤减少率等方面与中剂量 果根素相当,考虑到实际养殖中用药成本的问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ,因 此建议使用0.67Z0作为果根素治疗鸡毒支原体感 染的剂量. 鸡毒支原体感染在中兽医属外感火热之邪或风 寒之邪,郁而化热,肺气宣降失常范畴.肺脏积热, 煎津成痰,阻于气道,肺气不利,故咳嗽气喘,鼻流稠 涕.因此用清肺降火,化痰止咳方剂治之. 本中药依据中兽医对鸡毒支原体感染进行分析 进而成方,其方剂组成为板蓝根,合成牛黄,青黛,冰 片,玄明粉,猪胆汁粉和甘草.方中板蓝根,青黛具 有清热解毒之功;牛黄清热解毒,化痰开窍;冰片散 热利咽;猪胆汁清热解毒,清肺止咳;玄明粉解毒消 肿;甘草具有补脾益气,润肺止咳,清热解毒,调和药 性之功.诸药合用,共达清热解毒,止咳平喘之效. 大量药理实验表明,这些药物中大多数均有较强的 抗菌消炎,抗病毒,抗过敏功能,还能提高机体免疫 力等功能.一 参考文献: Eli [2] [3] 牟建青,艾武,张秀美,等.鸡毒支原体感染的诊断与 防治研究进展[J].山东农业科学,2000(4):54—55. 毕丁仁,王桂枝.动物霉形体及研究方法[M].北京:中 国农业出版社,1998:132—133. YoderHW.Alaboratorymannualfortheisolationand identificationofavianpathogensrM].3rded.New York:A1TIASSOCAvianPathol,1989:57—62.