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安 丘 市 检 验 检 测 中 心
目 录
食品中水分含量的测定（直接干燥法） 1
食品中水分含量的测定（真空干燥法） 3
总灰分的测定 5
总酸的测定 7
pH值的测定 9
挥发酸的测定 11
脂肪的测定（索氏抽提法） 13
还原糖的测定（直接滴定法） 16
总糖的测定 19
蛋白质的测定（凯氏定氮法） 22
挥发性盐基氮的测定 24
氨基酸态氮的测定（酸度计法） 26
氯化钠测定（佛尔哈德法） 28
氯化钠测定（电位滴定法） 30
碘含量测定（氧化还原滴定法） 32
二氧化硫及亚硫酸盐测定 35
亚硝酸盐的测定（分光光度法） 37
食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定 40
食品中合成着色剂的测定 53
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 57
电感耦合等离子体质谱仪法测定食品中多元素含量 61
食品中铅的测定 67
食品中镉的测定 75
食品中总汞的测定 79
食品中甲基汞的测定 82
食品中总砷的测定 85
食品中无机砷的测定 89
气相色谱法测定食品中有机磷类农药残留量 94
气相色谱法测定食品中有机氯类、拟除虫菊酯类农药残留量 97
液相色谱法测定食品中氨基甲酸酯类农药残留量 100
食品中抗氧化剂的的测定 103
液相色谱法测定食品中苯并（a）芘 110
气相色谱-质谱法测定食品中N—亚硝胺类 114
黄曲霉毒素B1测定 118
动物性食品中青霉素类兽药残留测定 133
动物性食品中四环素类兽药残留测定 137
动物性食品中磺胺类药物残量的测定 140
动物性食品中β-受体激动剂残留的测定 144
动物性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量的测定 148
食品微生物学检验 菌落总数测定 152
食品微生物学检验 大肠菌群计数 157
食品微生物学检验 沙门氏菌检验 161
食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 169
食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验 173
食品微生物学检验 志贺氏菌检验 178
食品微生物学检验 霉菌和酵母计数 183
食品微生物学检验 商业无菌检验 186
附录1
标准
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滴定溶液的配制及标定 190
附录2 常用洗涤液的配制 195
附录3 常用指示剂的配制与变色范围 196
附录4 常用酸、碱的浓度表 197
附录5 不同标准溶液浓度的温度补正值 198
食品中水分含量的测定（直接干燥法）
一、实验目的
1.掌握直接干燥法测定水分的
方法
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。
2.掌握电热恒温鼓风干燥箱的正确使用方法。
二、实验原理
在101.3kPa(一个大气压)和温度101 ℃～105 ℃ 下采用挥发方法测定样品中干燥减失的重量，包括吸湿水、部分结晶水和该条件下能挥发的物质，再通过干燥前后的称量数值计算出水分的含量。
三、实验仪器
1. 电热恒温鼓风干燥箱
2. 玻璃称量皿或带盖铝皿
3. 电子天平（万分之一）
4.干燥器
四、实验步骤
1.将称量皿洗净、烘干1h，置于干燥器内冷却0.5h，称重，并重复上述步骤至前后两次质量差不超过2mg。记录空皿重量m1。
2.称取2g～10g样品(精确至0.0001g)，于已恒量的称量皿中（试样厚度不超过5mm，如为疏松试样，厚度不超过10mm），加盖，准确称重，记录重量m2。
3.将盛有样品的称量皿置于101℃～105℃的电热恒温鼓风干燥箱中，盖斜倚在称量皿边上，干燥2h～4h（在干燥温度达到101℃以后开始计时）。
4.在干燥箱内加盖，取出称量皿，置于干燥器内冷却0.5h，立即称重。
5.重复步骤3、4，直至前后两次称量之差小于2mg。记录重量m3。两次恒重值在最后计算中，取质量较小的一次称量值。
五、计算
式中 m1——干燥前样品与称量皿（或蒸发皿加海砂、玻璃棒）的质量，g；
m2——干燥后样品与称量皿（或蒸发皿加海砂、玻璃棒）的质量，g；
m3——称量皿（或蒸发皿加海砂、玻璃棒）的质量，g。
六、注意事项
1．固态样品必须迅速磨细至颗粒小于2mm，不易研磨的样品应尽可能切碎，混合均匀后方可测定。水分含量高的样品要采用二步干燥法进行测定。
2．油脂或高脂肪样品，由于油脂的氧化，而使后一次的质量可能反而增加，应以前一次质量计算。
3．对于黏稠样品（如甜炼乳或酱类），将10g经酸洗和灼烧过的细海砂及一根细玻璃棒放入蒸发皿中，在101℃～105℃干燥至恒重。然后准确称取适量样品，置于蒸发皿中，用小玻璃棒搅匀后放在沸水浴中蒸干（注意中间要不时搅拌），擦干皿底后置于101℃～105℃干燥箱中干燥4h，按上述操作反复干燥至恒重。
4．根据样品种类的不同，第一次干燥时间可适当延长。
5．易分解或焦化的样品，可适当降低温度或缩短干燥时间。
食品中水分含量的测定（真空干燥法）
一、实验目的
1.掌握真空干燥法测定水分的方法
2.掌握真空干燥箱的正确使用方法。
二、实验原理
用食品中水分的物理性质，在达到40kPa～53kPa压力后加热至60 ℃±5 ℃，采用减压烘干方法去除试样中的水分，再通过烘干前后的称量数值计算出水分的含量。
三、实验仪器
1.真空干燥箱
2.玻璃称量皿或带盖铝皿
3.电子天平（万分之一）
4.干燥器
四、实验步骤
1.干燥条件 温度为60℃±5℃。
2.压强 40kPa～53kPa。
3.样品测定
将称量皿在101℃～105℃下烘干至恒重，称量(精确到0.0001g)，取试样2～10g，置于称量皿内，再称重(精确到0.0001g)，将称量皿放人干燥箱内，关闭干燥箱门，启动真空泵，抽出干燥箱内空气至所需压力，并同时加热至所需温度，关闭通向水泵或真空泵的活塞，停止抽气，使干燥箱内保持一定的温度与压力。经过4h后，打开活塞，使空气经干燥装置慢慢进入，待干燥箱内压力恢复正常后再打开，取出样品，置于干燥器内0.5h后称重，重复以上操作至恒重。
五、计算
式中m1——干燥前样品与称量皿（或蒸发皿加海砂、玻璃棒）的质量，g；
m2——干燥后样品与称量皿（或蒸发皿加海砂、玻璃棒）的质量，g；
m3——称量皿（或蒸发皿加海砂、玻璃棒）的质量，g。
六、注意事项
1.适用于高温易分解的样品及水分较多的样品(如糖、味精等食品)中水分的测定，不适用于添加了其他原料的糖果(如奶糖、软糖等食品)中水分的测定，不适用于水分含量小于0.5g/100g的样品(糖和味精除外)。
2.称量皿有玻璃和铝质两种，前者适用于各种食品，后者导热性好、质量轻，常用于减压干燥法。但铝盒不耐酸碱，使用时应根据测定样品加以选择。
总灰分的测定
一、实验目的
1.掌握灰分测定的方法。
2.掌握箱式电阻炉的使用方法。
二、实验原理
一定量的样品炭化后放入箱式电阻炉内灼烧，使有机物质被氧化分解成二氧化碳、氮的氧化物及水等形式逸出，剩下的残留物即为灰分，称量残留物的质量即得总灰分的含量。
三、仪器与试剂
1．实验仪器
①电子天平(d=0.1mg) ②箱式电阻炉
③电炉 ④坩埚
⑤坩埚钳 ⑥干燥器。
2．实验试剂
①乙酸镁溶液（80g/L） ②乙酸镁溶液（240g/L）
③10%盐酸溶液
四、实验步骤
1．瓷坩埚的准备
1.1含磷量较高的食品和其他食品
取大小适宜的石英坩埚或瓷坩埚置箱式电阻炉中，在550℃±25℃下灼烧30min，冷却至200℃左右，取出，放入干燥器中冷却30min，准确称量。 重复灼烧至前后两次称量相差不超过0.5mg为恒重，记录重量m1。
1.2 淀粉类食品
先用沸腾的稀盐酸洗涤，再用大量自来水洗涤，最后用蒸馏水冲洗。 将洗净的坩埚置于高温炉内，在900 ℃±25 ℃下灼烧30min，并在干燥器内冷却至室温，称重，精确至0.0001g，记录重量m1。
2．准确称取2～10g样品于坩埚内，精确至0.0001g。将样品均匀分布在坩埚内，不要压紧，并记录重量m2。
3．炭化
将盛有样品的坩埚放在电炉上小火加热炭化至无黑烟产生。
4．灰化
将炭化好的坩埚慢慢移入箱式电阻炉（550 ℃±25 ℃），盖斜倚在坩埚上，灼烧4h，直至残留物呈灰白色为止。冷却至200℃以下时，再放入干燥器冷却，称重。反复灼烧、冷却、称重，直至恒量（两次称量之差小于0.5mg），记录重量m3。
五、结果计算
式中m1——空坩埚的质量，g；
m2——样品+坩埚的质量，g；
m3——残灰+坩埚的质量，g。
六、注意事项：
1．样品的取样量一般以灼烧后得到的灰分量为10～100mg为宜。通常奶粉、麦乳精、大豆粉、鱼类等取1～2g；谷物及其制品、肉及其制品、牛乳等取3～5g；蔬菜及其制品、砂糖、淀粉、蜂蜜、奶油等取5～10g；水果及其制品取20g；油脂取20g。
2．液样先于水浴蒸干，再进行炭化。
3．炭化一般在电炉上进行，半盖坩埚盖，对于含糖分、淀粉、蛋白质较高的样品，为防止其发泡溢出，炭化前可加数滴辛醇或植物油。
4．把坩埚放入或取出高温炉时，在炉口停留片刻，防止因温度剧变使坩埚破裂。
5．在移入干燥器前，最好将坩埚冷却至200℃以下，取坩埚时要缓缓让空气流入，防止形成真空对残灰的影响。
6．灼烧温度不能超过600℃，否则会造成钾、钠、氯等易挥发成份的损失。
总酸的测定
一、实验目的
1．掌握测定总酸的方法。
二、实验原理
样品中的有机酸用已知浓度的标准碱溶液滴定时中和生成盐类。用酚酞作指示剂时，当滴定至终点（pH=8.2，指示剂显红色）时根据标准碱的消耗量，计算出样品的含酸量。所测定的酸称总酸或可滴定酸度，以该样品所含主要的酸来表示。
三、试剂
1．0.1mol/L NaOH标准溶液
2．1%酚酞乙醇溶液
四、实验步骤
1．称取20g捣碎均匀的样品置于小烧杯中，用约150 ml新煮沸并冷却的蒸馏水将其移入250ml容量瓶中，加蒸馏水于刻度，混合均匀后，用棉花或滤纸过滤。
2．吸取20mL滤液于三角瓶中，加酚酞指示剂2滴，用0.1mol/LNaOH标准溶液滴定至粉红色，持续30秒不褪色为终点，记录氢氧化钠溶液消耗量。每个样品重复滴定3次，取其平均值。同时做空白实验。
五、结果计算
式中m——样品的质量或体积，g 或mL；
V——滴定时消耗氢氧化钠溶液用量，mL；
Vl——滴定时吸取样液的体积，mL；
V2——样品稀释液总体积，mL；
C ——NaOH溶液浓度，mol/L；
K—各种有机酸换算值（苹果酸0.067，乙酸0.060，柠檬酸0.064，酒石酸0.075，乳酸0.090，盐酸0.036，磷酸0.049），即1毫摩尔NaOH相当于主要酸的克数。
六、说明及注意事项
1．食品中的酸是多种有机弱酸的混合物，用强碱进行滴定时，滴定突跃不够明显。特别是某些食品本身具有较深的颜色，使终点颜色变化不明显，影响滴定终点的判断。此时可通过加水稀释，用活性炭脱色等处理，或用原试样溶液对照进行终点判断，以减少干扰，或者用电位滴定法进行测定。
2．总酸度的结果用样品中的代表性酸来计。一般情况下，水果多以柠檬酸（橘子、柠檬、柚子等）、酒石酸（葡萄）、苹果酸（苹果、桃、李等）计；蔬菜以苹果酸计；肉类、家禽类酸度以乳酸计；饮料以柠檬酸计。
3．样品浸渍、稀释用蒸馏水中不能含有CO2。
4．含CO2的饮料、酒类等样品先置于40℃水浴上加热30分钟，除去CO2，冷却后再取样。不含CO2直接取样。
pH值的测定
一、实验目的
1．熟练使用酸度计。
二、实验原理
利用pH计测定溶液的pH值，是将玻璃电极和甘汞电极插在被测样品中，组成一个电化学原电池，其电动势的大小与溶液的pH值的关系为：
E= E0一0.059pH（25℃）
即在25℃时，每相差一个pH值单位，就产生59. 1 mV电极电位，从而可通过对原电池电动势的测量，在pH计上直接读出被测试的pH值。
三、仪器与试剂
1．仪器
pHS-3C型酸度计 复合电极
2．试剂
①pH=4.02标准缓冲溶液（20℃）：称取（115士5)℃烘干2～3h的优级纯邻苯二甲酸氢钾10.12 g溶于不含二氧化碳的蒸馏水中，稀释至1000mL。
②pH=6.88的标准缓冲溶液(20℃）：称取在（115土5)℃烘干2～3h的优级纯磷酸二氢钾3.39 g和优级纯无水磷酸氢二钠3.53 g溶于不含二氧化碳的蒸馏水中，稀释至1000 mL。
③pH=9.22的标准缓冲溶液(20℃）：称取硼砂3.80g溶于不含二氧化碳的蒸馏水中，稀释至1000 mL。
四、实验步骤
1.样品处理：
对于新鲜果蔬样品，将其各部位混合样捣碎，取均匀汁液测定。罐藏制品，将内容物倒人组织捣碎机中，加少量蒸馏水（一般100 g样品加蒸馏水的量少于20 mL为宜），捣碎均匀，过滤，取滤液进行测定。对于生肉和果蔬干制品，称取10 g（肉类去油脂）搅碎的样品，放人加有100 mL新煮沸冷却的蒸馏水中，浸泡15～20 min，并不时搅拌，过滤，取滤液进行测定。牛乳、果汁等液体样品，可直接取样测定。对于布丁、土豆沙拉等半固体样品，可以在100 g样品中加人10～20 mL蒸馏水，搅拌均匀成试液。
2.仪器校正：
开启酸度计电源，预热30分钟，连接复合电极。选择适当pH的缓冲溶液，将电极浸入缓冲溶液中，使酸度计显示的pH值与缓冲溶液的pH值相符。校正完后酸度计不得关机，否则必须重新校正。
3.样品测定：
用新鲜蒸馏水冲洗电极和烧杯，再用样品试液洗涤电极和烧杯，然后将电极浸入样品试液中，轻轻摇动烧杯，使试液均匀，酸度计显示的pH值即为被测样品试液的pH值。测量完毕后，将电极和烧杯洗干净，妥善保存。
五、说明
1．样品试液制备后，立即测定，不宜久存。
2．久置的复合电极初次使用时，一定要先在饱和KCl中浸泡24 h以上。
挥发酸的测定
一、实验目的
1．掌握挥发酸测定的原理和方法。
二、实验原理
挥发酸可用水蒸气蒸馏使之分离，加人磷酸使结合的挥发酸离析。挥发酸经冷凝收集后，用标准碱液滴定。根据消耗标准碱液的浓度和体积计算挥发酸的含量。
三、仪器与试剂
1．仪器 水蒸气蒸馏装置如下图：
水蒸气蒸馏装置图
2．试剂
①0.01mol/L NaOH标准溶液
②1%酚酞乙醇溶液
③10%磷酸溶液：称取10.0g磷酸，用无二氧化碳的蒸馏水溶解并稀释至100mL。
四、实验步骤
1．准确称取均匀样品2.00～3.00 g（根据挥发酸含量的多少而增减），用50 mL煮沸过的蒸馏水洗人250 mL烧瓶中。加人10%磷酸1 mL。连接水蒸气蒸馏装置，加热蒸馏至馏液达300 mL。在相同条件下做一空白试验。（蒸汽发生瓶内的水必须预先煮沸10 min，以除去二氧化碳）。
2．将馏液加热至60～65℃，加人酚酞指示剂3～4滴，用0.1 mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至微红色，并于30s不褪色为终点。
五、结果计算
式中：
C—氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L；
V1—样液滴定时氢氧化钠标准溶液用量，mL；
V2—空白滴定时氢氧化钠标准溶液用量，mL；
m—样品质量，g；
0.06—1 mmol醋酸质量，g/mmol。
脂肪的测定（索氏抽提法）
一、实验目的
1．了解索氏抽提法测定脂肪的原理。
2．掌握索氏抽提法测定脂肪的方法，学习使用索氏提取器。
二、实验原理
根据脂肪能溶于乙醚等有机溶剂的特性，将样品置于连续抽提器—索氏提取器中，用乙醚反复萃取，提取样品中的脂肪后，回收溶剂所得的残留物，即为脂肪或称粗脂肪。因为提取物中除脂肪外，还含有色素、蜡、树脂、游离脂肪酸等物质。
三、仪器与试剂
1.仪器
①索氏抽提器
②电热恒温鼓风干燥箱
2.试剂
①无水乙醚或石油醚（沸程30～60℃）；
②石英砂：粒度0.65～0.85mm，二氧化硅的质量分数不低于99%。
③滤纸筒
四、实验步骤
1．滤纸筒的制备
将滤纸剪成长方形8×15cm ，卷成圆筒，直径为6cm，将圆筒底部封好，最好放一些脱脂棉，避免向外漏样。
2．索式抽提器的准备
索氏抽提器由三部分组成，回流冷凝管、提取筒、提脂瓶组成。提脂瓶在使用前需烘干并称至恒重，其它要干燥。
3．精确称取烘干磨细的样品2～5g（精确到0.001g），放入已称重的滤纸筒（半固体或液体样品取5～10g（精确到0.001g）于蒸发皿中，加20g海砂，在水浴上蒸干，再于100±5℃烘干，研细，全部移入滤纸筒内，蒸发皿及附有样品的玻璃棒用蘸有乙醚的棉花擦净，棉花也放入滤纸筒内），封好上口。
4．抽提
将装好样的滤纸筒放入抽提筒，连接已恒重的脂肪烧瓶，从提取器冷凝管上端加入乙醚，加入的量为提取瓶体积的2/3。 接上冷凝装置，在恒温水浴中抽提，水浴温度大约为55℃左右，一般样品抽提6-10小时，坚果样品提取约16小时。提取结束时可用滤纸检验，接取1滴抽提液，无油斑即表明提取完毕。
5．回收乙醚
取下脂肪瓶，回收乙醚。待烧瓶内乙醚剩下1～2 mL时，在水浴上蒸干，再于100-150℃烘箱烘至恒重，记录重量。
五、结果计算
式中：m2——接受瓶和脂肪的质量，g
m1——接受瓶的质量，g；
m ——样品的质量，g。
六、注意事项与说明
1．索氏提取法适用于脂类含量较高，结合态的脂类含量较少，能烘干磨细，不宜吸湿结块的样品的测定。此法只能测定游离态脂肪，结合态脂肪需在一定条件下水解转变成游离态的脂肪方能测出。
2．样品含水分会影响溶剂提取效果，而且溶剂会吸收样品中的水分造成非脂成分溶出。装样品的滤纸筒要严密，不能往外漏样品，也不要包得太紧影响溶剂渗透。放入滤纸筒时高度不要超过回流弯管，否则样品中的脂肪不能提尽，造成误差。
3．对含多量糖及糊精的样品，要先以冷水使糖及糊精溶解，经过滤除去，将残渣连同滤纸一起烘干，再一起放入提提管中。
4．抽提用的乙醚或石油醚要求无水、无醇、无过氧化物，挥发残渣含量低。
5．提取时水浴温度不可过高，以每分钟从冷凝管滴下80滴左右，每小时回流6—12次为宜，提取过程应注意防火。
6．抽提时，冷凝管上端最好连接一个氯化钙干燥管。这样，可防止空气中水分进入，也可避免乙醚挥发在空气中，如无此装置可塞一团干燥的脱脂棉球。
7．提取是否完全，可凭经验，也可用滤纸或毛玻璃检查，由抽提管下口滴下的乙醚滴在滤纸或毛玻璃上，挥发后不留下油迹表明已抽提完全，若留下油迹说明抽提不完全。
8．在挥发乙醚或石油醚时，切忌用直接火加热，应该用电热套，电水浴等。烘前应驱除全部残余的乙醚，因乙醚稍有残留，放入烘箱时，有发生爆炸的危险。
9．反复加热会因脂类氧化而增重。重量增加时，以增重前的重量作为恒重。
10．索氏提取法对大多数样品结果比较可靠，但需要周期长，溶剂量大。
还原糖的测定（直接滴定法）
一、实验目的
1．了解费林试剂热滴定测定还原糖的原理。
2．能够准确测定果蔬中还原糖的含量。
二、实验原理
还原糖是指含有自由醛基或酮基的单糖和某些二糖。在碱性溶液中，还原糖将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化和降解。
费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。甲液含硫酸铜和亚甲基蓝（氧化还原指示剂）；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。将一定量的甲液和乙液等体积混合，生成可溶性的络合物酒石酸钾钠铜；在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀，氧化亚铜沉淀再与试剂中的亚铁氰化钾反应生成可溶性无色化合物，便于观察滴定终点。滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝，即达滴定终点。根据消耗样液量可计算出还原糖含量。
三、试剂
1．碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜(CuS04.5H20)及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释到1000ml。
2．碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000ml，贮存于橡皮塞玻璃瓶中。
3．乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3ml冰醋酸，加水溶解并稀释到100ml。
4．10.6％亚铁氰化钾溶液：称10.6g亚铁氰化钾溶于水并稀释至100ml。
5．葡萄糖标准溶液：准确称取1.0000g经过98—100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加水溶解后加入5ml盐酸(防止微生物生长），移入1000ml容量瓶中，用水稀释到l000ml。
6. 1 mol/L NaOH标准溶液。
7．15%Na2CO3溶液：称15g碳酸钠溶于水并稀释至100ml。
8．10%Pb(Ac)2溶液：称10g醋酸铅溶于水并稀释至100ml。
9．10%Na2SO4溶液：称10g硫酸钠溶于水并稀释至100ml。
四、试验步骤
1．样品处理
①含淀粉的食品：称取粉碎或混匀后的试样10g～20g(精确至0.001g)，置250mL容量瓶中，加水200mL，在45℃水浴中加热1h，并时时振摇，冷却后加水至刻度，混匀，静置，沉淀。 吸取200.0mL上清液置于另一250mL容量瓶中，缓慢加入乙酸锌溶液 5mL和亚铁氰化钾溶液5mL，加水至刻度，混匀，静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，取后续滤液备用。
②酒精饮料：称取混匀后的试样100g(精确至0.01g)，置于蒸发皿中，用氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积的1/4后，移入250mL容量瓶中，缓慢加入乙酸锌溶液5mL和亚铁氰化钾溶液5mL，加水至刻度，混匀，静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，取后续滤液备用。
③碳酸饮料：称取混匀后的试样100g(精确至0.01g) 于蒸发皿中，在水浴上微热搅拌除去二氧化碳后，移入250mL容量瓶中，用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶，加水至刻度，混匀后备用。
④其他食品：称取粉碎后的固体试样2.5g～5g(精确至0.001g)或混匀后的液体试样5g～25g(精确至0.001g) ，置250mL容量瓶中，加50mL水，缓慢加入乙酸锌溶液5mL和亚铁氰化钾溶液5mL，加水至刻度，混匀，静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，取后续滤液备用。
2. 碱性酒石酸铜溶液的标定
吸取碱性酒石酸铜甲液 5.0mL和碱性酒石酸铜乙液 5.0mL，于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒～4粒，从滴定管中加葡萄糖约9mL，控制在2min中内加热至沸，趁热以每2秒1滴的速度继续滴加葡萄糖，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖的总体积，同时平行操作3份，取其平均值，计算每10mL(碱性酒石酸甲、乙液各5mL)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量(mg)。
3. 试样溶液预测
吸取碱性酒石酸铜甲液5.0mL和碱性酒石酸铜乙液5.0mL于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒～4粒，控制在2min内加热至沸，保持沸腾以先快后慢的速度，从滴定管中滴加试样溶液，并保持沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以1滴/2s的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样品溶液消耗体积。
4. 试样溶液测定
吸取碱性酒石酸铜甲液5.0mL和碱性酒石酸铜乙液5.0mL，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒～4粒，从滴定管滴加比预测体积少1mL的试样溶液至锥形瓶中，控制在2min内加热至沸，保持沸腾继续以1滴/2s的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积(V)。
五、结果计算
式中：
X —试样中还原糖的含量(以某种还原糖计)，单位为克每百克(g/100g)；
m1 —碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)相当于某种还原糖的质量，单位为毫克(mg)；
m —试样质量，单位为克(g)；
F —系数，对5.1.1、5.1.3、5.1.4为1；5.1.2为0.80；
V —测定时平均消耗试样溶液体积，单位为毫升(mL) ；
250 —定容体积，单位毫升(mL)；
六、注意事项
1．费林试剂甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。
2．滴定必须是在沸腾条件下进行，保持反应液沸腾可防止空气进入，也可加快还原糖与Cu2＋的反应速度；
3．滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定，以防止空气进入反应溶液中。
总糖的测定
一、实验目的
掌握直接滴定法测定总糖的原理和方法。
二、实验原理
样品经处理除去蛋白质等杂质后，加入盐酸，在加热条件下使蔗糖水解为还原性单糖，以直接滴定法测定水解后样品中的还原糖总量。
三、试剂
1．6mo1/mL盐酸溶液
2．0.1甲基红乙醇溶液：称取0.lg甲基红，用60%乙醇溶解并定容至100ml。
3．20%氢氧化钠溶液。
4．0.1%转化糖标准溶液：称取105'C烘干至恒重的纯蔗糖1.9000g，用水溶解并移入1000m1容量瓶中，定容，混匀。取50m1于100m1容量瓶中，加6mol/L盐酸5m1，在68～70℃水浴中加热15min，取出于流动水下迅速冷却，加甲基红指示剂2滴，用20%NaOH溶液中和至中性，加水至刻度，混匀。此溶液每毫升含转化糖lmg。
5．费林氏A液：称取15g (CuS04·5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水并稀释到1L。
6．费林氏B液：称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1L，贮存于橡皮塞玻璃瓶中。
7．乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌（Zn（CH3COO）2·2H2O），加3m1冰醋酸，加水溶解并稀释至1 00ml。
8．10.6%亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾[K4Fe（CN）6·3H2O]，溶于水，稀释至100m1。
四、实验步骤
1.样品处理
取适量样品，移入250m1容量瓶中，慢慢加入5m1乙酸锌溶液和5m1亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，摇匀后静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，收集滤液备用。
吸取处理后的样液50mL于l00mL容量瓶中，加入5mL6mol/L盐酸溶液，置68～70℃水浴中加热15min，取出后迅速冷却，加甲基红指示剂2滴，用20%NaOH溶液中和至中性，加水至刻度，混匀。
2.碱性酒石酸铜溶液的标定
准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5mL，置于250mL锥形瓶中，加水l 0mL，玻璃珠3粒。从滴定管滴加约9m1转化糖标准溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以每2秒1滴的速度继续滴加转化糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗转化糖标准溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值，按下式计算。
F＝C·V
式中：F— I0ml碱性酒石酸铜溶液相当于转化糖的质量，mg；
C—转化糖标准溶液的浓度，mg/ml；
V—标定时消耗转化糖标准溶液的总体积，ml。
3．样品溶液预测
准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5m1，置于250m1锥形瓶中，加水l0ml，玻璃珠3粒，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，滴定时要始终保持溶液呈沸腾状态，待溶液兰色变浅时，以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录样品溶液消耗的体积。
4．样品溶液测定
准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml，置于250m1锥形瓶中，加水l0ml，加玻璃珠3粒，从滴定管滴加入比预测时样品溶液消耗总体积少lml的样品溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以每2秒1滴的速度继续滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗样品溶液的总体积。同法平行操作3次，取平均值。
五、结果计算
式中：F— I0ml碱性酒石酸铜溶液相当于转化糖的质量，mg；
V1—样品处理液总体积，ml；
V2—测定时消耗样品水解液体积，ml；
m一样品质量，g。
六、说明
总糖测定的结果一般以转化糖计，但也可以葡萄糖计，要根据产品的质量指标要求而定。如用转化糖表示，应该用标准转化糖溶液标定碱性酒石酸铜溶液，如用葡萄糖表示，则应该用标准葡萄糖溶液标定。
蛋白质的测定（凯氏定氮法）
一、实验目的
1.掌握凯式定氮法测定蛋白质的方法。
2.了解凯式定氮装置的原理及应用。
二、实验原理
样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。硫酸氨用氢氧化钠中和生成氢氧化铵，加热又分解为氨，用硼酸吸收。吸收氨后的硼酸再以标准盐酸或硫酸溶液滴定，根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。
三、仪器与试剂
1．仪器
微量凯氏定氮蒸馏装置
2. 试剂
①硼酸溶液(20g/L)：称取20g硼酸，加水溶解后并稀释至1000mL。
②氢氧化钠溶液(400g/L)：称取40g氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至100mL。
③硫酸标准滴定溶液[c(1/2H2SO4)]0.0500mol/L或盐酸标准滴定溶液[c(HCl)]0.0500mol/L。
④甲基红乙醇溶液(1g/L)：称取0.1g甲基红，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100mL。
⑤亚甲基蓝乙醇溶液(1g/L)：称取0.1g亚甲基蓝，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100mL。
⑥溴甲酚绿乙醇溶液(1g/L)：称取0.1g溴甲酚绿，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100mL。
⑦A 混合指示液：2份甲基红乙醇溶液与1份亚甲基蓝乙醇溶液临用时混合。
⑧B混合指示液：1份甲基红乙醇溶液与5份溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合
四、实验步骤
称取充分混匀的固体试样0.2g～2g、半固体试样2g～5g或液体试样10g～25g(约当于30mg～40mg氮)，精确至0.001g，至消化管中，再加入0.4g硫酸铜、6g硫酸钾及20mL硫酸于消化炉进行消化。 当消化炉温度达到420℃之后，继续消化1h，此时消化管中的液体呈绿色透明状，取出冷却后加入50mL水，于自动凯氏定氮仪(使用前加入氢氧化钠溶液，盐酸或硫酸标准溶液以及含有混合指示剂A 或 B的硼酸溶液)上实现自动加液、蒸馏、滴定和记录滴定数据的过程。
五、计算
式中：
X —试样中蛋白质的含量，单位为克每百克(g/100g)；
V1 —试液消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升(mL)；
V2 —试剂空白消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升(mL)；
c —硫酸或盐酸标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；
0.0140—1.0mL硫酸[c(1/2H2SO4)=1.000mol/L]或盐酸[c(HCl) =1.000mol/L]标准滴定溶液相当的氮的质量，单位为克(g)；
m —试样的质量，单位为克(g)；
V3 —吸取消化液的体积，单位为毫升(mL)；
F —氮换算为蛋白质的系数。
挥发性盐基氮的测定
一、实验目的
1．了解挥发性盐基氮测定的意义。
2．掌握挥发性盐基氮测定的原理和方法。
二、实验原理
挥发性盐基氮在测定时遇弱碱氧化镁即被游离而蒸馏出来，馏出的氨被硼酸吸收后生成硼酸铵，使吸收液变为碱性，混合指示剂由紫色变为绿色。然后用盐酸标准溶液滴定，溶液再由绿色返至紫色即为终点。根据标准溶液的消耗量即可计算出样品中挥发性盐基氮的含量。
三、仪器与试剂
1． 仪器
微量凯氏定氮蒸馏装置、微量滴定管。
2．试剂
①硼酸溶液(20g/L)：称取20g硼酸，加水溶解后并稀释至1000mL。
②盐酸标准滴定溶液(0.1000mol/L)或硫酸标准滴定溶液(0.1000mol/L)： 按照 GB/T601制备。
③甲基红乙醇溶液(1g/L)：称取0.1g甲基红，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100mL。
④溴甲酚绿乙醇溶液(1g/L)：称取0.1g溴甲酚绿，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100mL。
⑤混合指示液：1份甲基红乙醇溶液与5份溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。
四、实验步骤
将除去脂肪、骨、腱后的样品切碎搅匀，准确称取10g置于锥形瓶中，加100mL水，不时振摇，浸渍30min。过滤，滤液置于冰箱中待用。
向接收瓶内加入10 mL 硼酸溶液，5滴混合指示液，并使冷凝管下端插入液面下，准确吸取10.0mL滤液，由小玻杯注入反应室，以10 mL 水洗涤小玻杯并使之流入反应室内，随后塞紧棒状玻塞。再向反应室内注入5mL氧化镁混悬液，立即将玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。5min后移动蒸馏液接收瓶，液面离开冷凝管下端，再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下蒸馏液接收瓶。以盐酸或硫酸标准滴定溶液(0.0100mol/L)滴定至终点。使用1份甲基红乙醇溶液与5份溴甲酚绿乙醇溶液混合指示液，终点颜色至紫红色。使用2份甲基红乙醇溶液与1份亚甲基蓝乙醇溶液混合指示液，终点颜色至蓝紫色。同时做试剂空白。
五、结果计算
式中
X —试样中挥发性盐基氮的含量，单位为毫克每百克(mg/100g)或毫克每百毫升(mg/100mL)；
V1 —试液消耗盐酸或硫酸标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL)；
V2 —试剂空白消耗盐酸或硫酸标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL)；
c —盐酸或硫酸标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；
14 —滴定1.0mL盐酸[c(HCl)=1.000mol/L]或硫酸[c(1/2H2SO4)=1.000mol/L]标准滴定溶液相当的氮的质量，单位为克每摩尔(g/mol)；
m —试样质量，单位为克(g)，或试样体积，单位为(mL)；
V —准确吸取的滤液体积，单位为毫升(mL)，本方法中V=10；
V0 —样液总体积，单位为毫升(mL)，本方法中V0=100；
100—计算结果换算为毫克每百克(mg/100g)或毫克每百毫升(mg/100mL)的换算系数。
六、说明及注意事项
1.定氮蒸馏装置参照蛋白质的测定。
2.滴定终点的观察，应注意空白试验与样品测定色调一致。
3.每个样品测定之间要用蒸馏水洗涤仪器2～3次。
氨基酸态氮的测定（酸度计法）
一、实验目的
1.了解酸度计法测定氨基酸态氮的原理。
2.熟练使用酸度计。
二、实验原理
利用氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，以酸度计测定终点。
三、仪器与试剂
1．仪器
酸度计、磁力搅拌器
2.试剂
①甲醛(36%～38%)
② 0.05mol/L氢氧化钠标准溶液
四、实验步骤
称量5.0g试样于50mL的烧杯中，用水分数次洗入100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取20.0mL 置于200 mL 烧杯中，加60 mL 水，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液[c(NaOH) =0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH为8.2，记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数，可计算总酸含量。加入10.0mL甲醛溶液，混匀。再用氢氧化钠标准滴定溶液继续滴定至pH为9.2，记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数。 同时取80mL水，先用氢氧化钠标准溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]调节至pH 为8.2，再加入10.0 mL 甲醛溶液，用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至 pH 为9.2，做试剂空白试验。
五、计算
式中：
X ———试样中氨基酸态氮的含量，单位为克每百克(g/100g)；
V1 ———测定用试样稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL)；
V2 ———试剂空白实验加入甲醛后消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL)；
c ———氢氧化钠标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；
0.014———与1.00mL氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=1.000mol/L]相当的氮的质量，单位为克(g)；
m ———称取试样的质量，单位为克(g)；
V3 ———试样稀释液的取用量，单位为毫升(mL)；
V4 ———试样稀释液的定容体积，单位为毫升(mL)；
100 ———单位换算系数。
氯化钠测定（佛尔哈德法）
一、实验目的
1．了解C1-或NaCl含量测定的原理。
2．掌握NaCl含量测定的方法。
二、实验原理
样品经水或热水溶解、沉淀蛋白质、酸化处理后，加入过量的硝酸银溶液，以硫酸铁铵为指示剂，用硫氰酸钾标准滴定溶液滴定过量的硝酸银。 根据硫氰酸钾标准滴定溶液的消耗量，计算食品中氯化物的含量。
三、实验仪器与试剂
1．仪器 滴定管
2．试剂
①硫酸铁铵饱和溶液：称取50g硫酸铁铵，溶于100mL水中，如有沉淀物，用滤纸过滤。
②硝酸溶液(1+3)：将1体积的硝酸加入3体积水中，混匀。
③乙醇溶液(80%)：84mL95%乙醇与15mL水混匀。
④硝酸银标准滴定溶液(0.1mol/L)
⑤硫氰酸钾标准滴定溶液(0.1mol/L)
3.样品测定
A.试样氯化物的沉淀
移取50.00mL试液 (V8)，氯化物含量较高的样品，可减少取样体积，于100mL比色管中。加入5mL硝酸溶液。 在剧烈摇动下，用酸式滴定管滴加20.00mL～40.00mL硝酸银标准滴定溶液，用水稀释至刻度，在避光处静置5min。 用快速滤纸过滤，弃去10mL最初滤液。
加入硝酸银标准滴定溶液后，如不出现氯化银凝聚沉淀，而呈现胶体溶液时，应在定容、摇匀后，置沸水浴中加热数分钟，直至出现氯化银凝聚沉淀。取出，在冷水中迅速冷却至室温，用快速滤纸过滤，弃去10mL最初滤液。
B.过量硝酸银的滴定
移取50.00mL滤液于250mL锥形瓶中，加入2mL 硫酸铁铵饱和溶液。 边剧烈摇动边用0.1mol/L硫氰酸钾标准滴定溶液滴定，淡黄色溶液出现乳白色沉淀，终点时变为淡棕红色，保持1min不褪色。记录消耗硫氰酸钾标准滴定溶液的体积(V9)。 同时做空白试验，记录消耗硝酸银标准滴定溶液的体积(V0)。
五、结果计算
式中
X———试样中氯化物的含量(以氯计)，%；
0.0355———与1.00mL硝酸银标准滴定溶液[c(AgNO3)=1.000mol/L]相当的氯的质量，单位为克(g)；
c2 ———硫氰酸钾标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；
V0 ———空白试验消耗的硫氰酸钾标准滴定溶液体积，单位为毫升(mL)；
V8 ———用于滴定的试样体积，单位为毫升(mL)；
V9 ———滴定试样时消耗0.1mol/L硫氰酸钾标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL)；
V ———样品定容体积，单位为毫升(mL)；
m ———试样质量，单位为克(g)。
六、注意事项
1．本方法测定的酸度范围为pH值6.3-10，当样品溶液的pH值过高或过低时，应先用酸或碱调节，再进行滴定。
2．由于滴定时生成的氯化银沉淀容易吸附溶液中的氯离子，使溶液中的氯离子浓度降低，终点提前到达，故滴定时必须剧烈摇动，使被吸附的氯离子释放出来以减少误差。
3．不能在含有氨或其他能与银离子生成配合物的物质存在下进行滴定，以免AgCl和Ag2Cr04的溶解度增大而影响测定结果。
氯化钠测定（电位滴定法）
一、实验目的
1．了解C1-或NaCl含量测定的原理。
2．掌握电位滴定法测定NaCl含量的方法。
二、实验原理
经酸消化后的样品溶液，插入银电极和饱和甘汞电极组成工作电池，在磁力搅拌器的搅拌下，用硝酸银标准溶液滴定溶液中的Cl-。绘制与滴定量相对应的电位变化曲线(E-V曲线），所得曲线的拐点即为滴定终点。由硝酸银标准溶液的用量和浓度可计算出样品中氯的含量。
三、实验仪器与试剂
仪器 自动电位滴定仪；银电极（指示电极）；饱和甘汞电极（参比电极）。
试剂 硝酸银标准溶液「c(AgN03)=0.05mo1/L〕。
四、实验步骤
1．样品处理同硝酸银滴定法。
2．样品测定
移取10.00mL试液 (V2)，于50mL烧杯中，加入5mL硝酸溶液和25mL丙酮。 将玻璃电极和银电极浸入溶液中，启动电磁搅拌器。从酸式滴定管滴入V'mL硝酸银标准滴定溶液(所需量的90%)，测量溶液的电位值(E)。继续滴入硝酸银标准滴定溶液，每滴入1 mL立即测量溶液电位值(E)。 接近终点和终点后，每滴入0.1mL，测量溶液的电位值(E)。 继续滴入硝酸银标准滴定溶液，直至溶液电位数值不再明显改变。记录每次滴入硝酸银标准滴定溶液的体积和电位值。以硝酸银标准滴定溶液的体积(V')和电位值(E)，用列表方式计算 ΔE、ΔV、一级微商和二级微商。 按式(1)计算滴定终点时消耗硝酸银标准滴定溶液的体积(V3)。或电位滴定仪自动滴定、记录硝酸银标准滴定溶液的体积和电位值。同时做空白试验，记录消耗硝酸银标准滴定溶液的体积(V'0)。
五、结果计算
式中
X ———试样中氯化物的含量(以Cl-计)，%；
0.0355———与1.00mL硝酸银标准滴定溶液[c(AgNO3)=1.000mol/L]相当的氯的质量，单位为克(g)；
c ———硝酸银标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；
V'0 ———空白试验时消耗的硝酸银标准滴定溶液体积，单位为毫升(mL)；
V2 ———用于滴定的滤液体积，单位为毫升(mL)；
V3 ———滴定试液时消耗的硝酸银标准滴定溶液体积，单位为毫升(mL)；
V ———样品定容体积，单位为毫升(mL)；
m ———试样质量，单位为克(g)。
六、注意事项
1.滴定开始时，每次所加滴定剂的体积可以多些，但在计量点附近时，每加0. 1～0. 2mL就要测定一次电位值。
2.确定滴定终点的方法
a如果滴定曲线对称而且电位突跃部分陡直，可直接由电位突跃的中点确定滴定终点。
b.如果电位突跃不陡又不对称，则可绘制一次微商曲线，即△E／△V- V曲线，曲线的最高点对应于滴定终点，但有一定的误差。如果做二次微商曲线，以二次微商等于零的一点作为滴定终点就更为准确。
碘含量测定（氧化还原滴定法）
一、实验目的
1．了解碘含量测定的原理。
2．掌握氧化还原滴定法测定碘含量的方法。
二、实验原理
样品经炭化、灰化后，将有机碘转化为无机碘离子，在酸性介质中，用溴水将碘离子氧化成碘酸根离子，生成的碘酸根离子在碘化钾的酸性溶液中被还原析出碘，用硫代硫酸钠溶液滴定反应中析出的碘。
I- +3Br2+3H2O→IO3- +6H+ +6Br-
IO3- +5I- +6H+ →3I2+3H2O
I2+2S2O32- →2I- + S4O62-
三、实验仪器与试剂
1．仪器
①组织捣碎机
②高速粉碎机
③
分析
定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析
天平：感量为0.1mg
④电热恒温干燥箱
⑤马弗炉：≥600 ℃
⑥瓷坩埚：50mL
⑦可调电炉：1000W
⑧碘量瓶：250mL
⑨棕色酸式滴定管：25mL，最小刻度为0.1mL
⑩微量酸式滴定管：1mL，最小刻度为0.01mL
2．试剂
①碳酸钠溶液(50g/L)：称取5g无水碳酸钠，溶于100mL水中。
②饱和溴水：量取5mL液溴置于涂有凡士林的塞子的棕色玻璃瓶中，加水100mL，充分振荡，使其成为饱和溶液(溶液底部留有少量溴液，操作应在通风橱内进行)。
③硫酸溶液(3mo1/L)：量取180mL硫酸，缓缓注入盛有700mL水的烧杯中，并不断搅拌，冷却至室温，用水稀释至1000mL，混匀。
④硫酸溶液(1mo1/L)：量取57mL硫酸，缓缓注入盛有700mL水的烧杯中，并不断搅拌，冷却至室温，用水稀释至1000mL，混匀。
⑤碘化钾溶液(150g/L)：称取15.0g碘化钾，用水溶解并稀释至100mL，贮存于棕色瓶中，现用现配。
⑥甲酸钠溶液(200g/L)：称取20.0g甲酸钠，用水溶解并稀释至100mL。
⑦硫代硫酸钠标准溶液(0.01mol/L)：按 GB/T601中的规定配制及标定。
⑧甲基橙溶液(1g/L)：称取0.1g甲基橙粉末，溶于100mL水中。
⑨淀粉溶液(5g/L)：称取0.5g淀粉于200mL烧杯中，加入5mL水调成糊状，再倒入100mL沸水，搅拌后再煮沸0.5min，冷却备用，现用现配。
四、实验步骤
1.样品处理：
a.将样品调成匀浆状，称取试样2g～5g(精确至0.1mg)，置于50mL瓷坩埚中，加入5mL～10mL碳酸钠溶液，使充分浸润试样，静置5min，置于101 ℃～105 ℃电热恒温干燥箱中干燥3h，将样品烘干，取出。
b.在通风橱内用电炉加热，使试样充分炭化至无烟，置于550℃±25℃马弗炉中灼烧40min，冷却至200 ℃左右，取出。 在坩埚中加入少量水研磨，将溶液及残渣全部转入250mL烧杯中，坩埚用水冲洗数次并入烧杯中，烧杯中溶液总量约为150mL～200mL，煮沸5min。
d.对于碘含量较高的样品(海带及其制品等)，将b得到的溶液及残渣趁热用滤纸过滤至250mL容量瓶中，烧杯及漏斗内残渣用热水反复冲洗，冷却，定容。 然后准确移取适量滤液于250mL碘量瓶中，备用。
e.对于其他样品，将 b 得到的溶液及残渣趁热用滤纸过滤至250mL碘量瓶中，备用。
f.在碘量瓶中加入2滴～3滴甲基橙溶液，用1mo1/L硫酸溶液调至红色，在通风橱内加入5mL饱和溴水，加热煮沸至黄色消失。 稍冷后加入5mL甲酸钠溶液，在电炉上加热煮沸2min，取下，用水浴冷却至30 ℃以下，再加入5mL3mo1/L硫酸溶液，5mL碘化钾溶液，盖上瓶盖，放置10min，用硫代硫酸钠标准溶液滴定至溶液呈浅黄色，加入1mL淀粉溶液，继续滴定至蓝色恰好消失。 同时做空白试验，分别记录消耗的硫代硫酸钠标准溶液体积V、V0。
五、结果计算
式中：
X ———试样中碘的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；
V ———滴定样液消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，单位为毫升(mL)；
V0 ———滴定试剂空白消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，单位为毫升(mL)；
c ———硫代硫酸钠标准溶液的浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；
21.15———与1.00mL硫代硫酸钠标准滴定溶液[c(Na2S2O3)=1.000mol/L]相当的碘的质量，单位为毫克(mg)；
V1 ———碘含量较高样液的定容体积，单位为毫升(mL)；
V2 ———移取碘含量较高滤液的体积，单位为毫升(mL)；
m1 ———样品的质量，单位为克；
1000———单位换算系数。
二氧化硫及亚硫酸盐测定
一、实验目的
1．了解二氧化硫及亚硫酸盐测定的原理；
2．掌握二氧化硫及亚硫酸盐测定的方法。
二、实验原理
在密闭容器中对样品进行酸化、蒸馏，蒸馏物用乙酸铅溶液吸收。 吸收后的溶液用盐酸酸化，碘标准溶液滴定，根据所消耗的碘标准溶液量计算出样品中的二氧化硫含量。
三、实验仪器、
材料
关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料
与试剂
1．仪器：全玻璃蒸馏器：500mL，酸式滴定管（25mL或50mL），剪切式粉碎机
2．试剂
①盐酸溶液(1+1)：量取50mL盐酸，缓缓倾入50mL水中，边加边搅拌。
②硫酸溶液(1+9)：量取10mL硫酸，缓缓倾入90mL水中，边加边搅拌。
③淀粉指示液(10g/L)：称取1g可溶性淀粉，用少许水调成糊状，缓缓倾入100mL沸水中，边加边搅拌，煮沸2min，放冷备用，临用现配。
④乙酸铅溶液(20g/L)：称取2g乙酸铅，溶于少量水中并稀释至100mL。
标定：
①硫代硫酸钠标准溶液(0.1mol/L)：称取25g含结晶水的硫代硫酸钠或16g无水硫代硫酸钠溶于1000mL新煮沸放冷的水中，加入0.4g氢氧化钠或0.2g碳酸钠，摇匀，贮存于棕色瓶内，放置两周后过滤，用重铬酸钾标准溶液标定其准确浓度。 或购买有证书的硫代硫酸钠标准溶液。
②碘标准溶液[c (1/2I2)=0.10mol/L]：称取13g碘和35g碘化钾，加水约100mL， 溶解后加入3滴盐酸，用水稀释至1000mL，过滤后转入棕色瓶。 使用前用硫代硫酸钠标准溶液标定。
③重铬酸钾标准溶液[c (1/6K2Cr2O7)=0.1000mol/L]：准确称取4.9031g已于120℃±2℃电烘箱中干燥至恒重的重铬酸钾，溶于水并转移至1000mL量瓶中，定容至刻度。 或购买有证书的重铬酸钾标准溶液。
④碘标准溶液[c (1/2I2)=0.01000mol/L]：将0.1000mol/L碘标准溶液用水稀释10倍。
四、操作步骤
1．样品蒸馏：称取剪碎均匀的样品5g(精确至0.001g，取样量可视含量高低而定)，液体样品可直接吸取5.00mL～10.00mL样品，置于蒸馏烧瓶中。 加入250mL水，装上冷凝装置，冷凝管下端插入预先备有25mL乙酸铅吸收液的碘量瓶的液面下，然后在蒸馏瓶中加入10mL盐酸溶液，立即盖塞，加热蒸馏。 当蒸馏液约200mL时，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min。 用少量蒸馏水冲洗插入乙酸铅溶液的装置部分。同时做空白试验。
2．向取下的碘量瓶中依次加入10mL盐酸、1mL淀粉指示液，摇匀之后用碘标准溶液滴定至溶液颜色变蓝且30s内不褪色为止，记录消耗的碘标准滴定溶液体积。
五、结果计算
式中：
X—试样中的二氧化硫总含量(以SO2 计)，单位为克每千克(g/kg)或克每升(g/L)；
V —滴定样品所用的碘标准溶液体积，单位为毫升 (mL)；
V0 —空白试验所用的碘标准溶液体积，单位为毫升(mL)；
0.032—1mL碘标准溶液[c (1/2I2)=1.0mol/L]相当于二氧化硫的质量，单位为克(g)；
c —碘标准溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；
m —试样质量或体积，单位为克(g)或毫升(mL)。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，当二氧化硫含量≥1g/kg(L)时，结果保留三位有效数字；当二氧化硫含量<1g/kg(L)时，结果保留两位有效数字。
亚硝酸盐的测定（分光光度法）
一、实验目的
1．了解亚硝酸盐测定的原理和意义。
2．掌握亚硝酸盐测定的方法。
二、实验原理
亚硝酸盐在酸性条件下，与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与盐酸萘乙二胺发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。其颜色深浅与亚硝酸含量成正比，故可比色测定。
三、实验仪器与试剂
1． 仪器
紫外可见分光光度计、组织捣碎机。
2．试剂
①饱和硼砂溶液：5g硼酸钠（Na2B4O7·10H2O)溶于100 mL热的重蒸水中，冷却备用。
②亚铁氰化钾溶液：称取106 g亚铁氰化钾溶于水，并稀释至1000 mL。
③乙酸锌溶液：称取220 g乙酸锌，加30 mL冰醋酸溶于水，并稀释至1000mL。
④果蔬抽提液：溶解50 g氯化汞（HgCl2）和50 g氯化钡（BaC12）于1000 mL重蒸水中，用浓盐酸调整pH值为1。
⑤氢氧化铝乳液：溶解125 g硫酸铝于1000 mL重蒸水中，滴加氨水使氢氧化铝全部沉淀（使溶液呈微碱性）。用蒸馏水反复洗涤，真空抽滤，直至洗液分别用氯化钡、硝酸银溶液检验不发生混浊。取下沉淀物，加适量重蒸水使之呈薄糊状，搅拌均匀备用。
⑥0．4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于100 mL 20%的盐酸溶液中，避光保存。
⑦0.2%盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2 g盐酸萘乙二胺，溶于100 mL重蒸水中。
⑧亚硝酸钠标准溶液(5μg/mL)：精确称取0.1000 g亚硝酸钠（优级纯），以重蒸水定容到500 mL。再吸取此溶液25 mL，以重蒸水定容到1 000 mL，此工作液每毫升含亚硝酸钠5μg。
四、实验步骤
1．样品处理：
A.干酪：称取试样2.5g(精确至0.001g)，置于150 mL 具塞锥形瓶中，加水80 mL，摇匀，超声30min，取出放置至室温，定量转移至100mL容量瓶中，加入3%乙酸溶液2mL，加水稀释至刻度，混匀。 于4 ℃放置20min，取出放置至室温，溶液经滤纸过滤，滤液备用。
B.液体乳样品：称取试样90g(精确至0.001g)，置于250mL具塞锥形瓶中，加12.5mL饱和硼砂溶液，加入70 ℃左右的水约60mL，混匀，于沸水浴中加热 15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。 定量转移上述提取液至200mL容量瓶中，加入5mL106g/L亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL220g/L乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。 加水至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，滤液备用。
C.乳粉：称取试样10g(精确至0.001g)，置于150mL具塞锥形瓶中，加12.5mL50g/L饱和硼砂溶液，加入70 ℃左右的水约150mL，混匀，于沸水浴中加热 15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。 定量转移上述提取液至200mL容量瓶中，加入5mL106g/L亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL220g/L乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。 加水至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。
D.其他样品：称取5g(精确至0.001g) 匀浆试样(如制备过程中加水，应按加水量折算)，置于250mL具塞锥形瓶中，加12.5mL50g/L饱和硼砂溶液，加入70 ℃左右的水约150mL，混匀，于沸水浴中加热 15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。 定量转移上述提取液至200mL容量瓶中，加入5mL106g/L亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入 5mL220g/L乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。 加水至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。
2．亚硝酸盐的测定：
吸取40.0mL上述滤液于50 mL 带塞比色管中，另吸取0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50 mL 亚硝酸钠标准使用液(相当于0.0μg、1.0μg、2.0μg、3.0μg、4.0μg、5.0μg、7.5μg、10.0μg、12.5μg亚硝酸钠)，分别置于50mL带塞比色管中。 于标准管与试样管中分别加入2mL4g/L对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3min～5min后各加入1mL2g/L盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15min，用1cm 比色杯，以零管调节零点，于波长 538nm 处测吸光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂空白。
五、结果计算
1．肉制品中亚硝酸盐含量：
式中：
X—试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；
m2 —测定用样液中亚硝酸钠的质量，单位为微克(μg)；
1000—转换系数；
m3 —试样质量，单位为克(g)；
V1 —测定用样液体积，单位为毫升(mL)；
V0 —试样处理液总体积，单位为毫升(mL)
食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定
1 范围
本标准规定了食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定方法。
本标准适用于食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定。
第一法 离子色谱法
2 原理
试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，采用相应的方法提取和净化，以氢氧化钾溶液为淋洗液，阴离子交换柱分离，电导检测器检测。以保留时间定性，外标法定量。
3 试剂和材料
3.1 超纯水：电阻率＞18.2 M ??cm 。
3.2 乙酸溶液(3%)：量取乙酸3mL于100mL容量瓶中，以水稀释至刻度，混匀。
3.3 氢氧化钾溶液(1 mol/L)：称取6g氢氧化钾，加入新煮沸过的冷水溶解，并稀释至100 mL，混匀。
亚硝酸盐标准储备液(100mg/L，以 NO2- 计，下同)：准确称取0.1500g于110℃～120℃干燥至恒重的亚硝酸钠，用水溶解并转移至1000mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
3.4 硝酸盐标准储备液(1000mg/L，以 NO3- 计，下同)：准确称取1.3710g于110℃～120℃干燥至恒重的硝酸钠，用水溶解并转移至1000mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
3.5 亚硝酸盐和硝酸盐混合标准中间液：准确移取亚硝酸根离子(NO2- )和硝酸根离子(NO3- )的标准储备液各1.0mL于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，此溶液每升含亚硝酸根离子1.0mg和硝酸根离子10.0mg。
3.6 亚硝酸盐和硝酸盐混合标准使用液：移取亚硝酸盐和硝酸盐混合标准中间液，加水逐级稀释，制成系列混合标准使用液，亚硝酸根离子浓度分别为0.02 mg/L、0.04 mg/L、0.06 mg/L、0.08 mg/L、0.10mg/L、0.15mg/L、0.20mg/L；硝酸根离子浓度分别为0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L。
4 仪器和设备
4.1 离子色谱仪：包括电导检测器，配有抑制器，高容量阴离子交换柱，50μL定量环。
4.2 食物粉碎机。
4.3 超声波清洗器。
4.4 天平：感量为0.1 mg 和1 mg。
4.5 离心机：转速≥10000 转/ 分钟，配5 mL或10 mL 离心管。
4.6 0.22 μm 水性滤膜针头滤器。
4.7 净化柱：包括C18 柱、Ag柱和Na柱或等效柱。
4.8 注射器：1.0 mL和2.5 mL 。
注：所有玻璃器皿使用前均需依次用2 mol/L 氢氧化钾和水分别浸泡4 h，然后用水冲洗3 次～5 次，晾干备用。
5 分析步骤
5.1 试样预处理
5.1.1 蔬菜、水果：将新鲜蔬菜、水果试样用自来水洗净后，用水冲洗，晾干后，取可食部切碎混匀。 将切碎的样品用四分法取适量，用食物粉碎机制成匀浆，备用。 如需加水应记录加水量。
5.1.2 粮食及其他植物样品：除去可见杂质后，取有代表性试样50g～100g，粉碎后，过0.30 mm 孔筛，混匀，备用。
5.1.3 肉类、蛋、水产及其制品：用四分法取适量或取全部，用食物粉碎机制成匀浆，备用。
5.1.4 乳粉、豆奶粉、婴儿配方粉等固态乳制品(不包括干酪) ：将试样装入能够容纳2 倍试样体积的带盖容器中，通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀直到使试样均一化。
5.1.5 发酵乳、乳、炼乳及其他液体乳制品：通过搅拌或反复摇晃和颠倒容器使试样充分混匀。
5.1.6 干酪：取适量的样品研磨成均匀的泥浆状。 为避免水分损失，研磨过程中应避免产生过多的热量。
5.2 提取
5.2.1 蔬菜、水果等植物性试样：称取试样5g(精确至0.001g，可适当调整试样的取样量，以下相同)，置于150mL具塞锥形瓶中，加入80mL水，1mL1mol/L氢氧化钾溶液，超声提取30min，每隔5min振摇1次，保持固相完全分散。 于75 ℃水浴中放置5min，取出放置至室温，定量转移至100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。 溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10000r/min离心15 min，上清液备用。
5.2.2 肉类、蛋类、鱼类、及其制品等：称取试样匀浆5g(精确至0.001g)，置于150mL具塞锥形瓶中，加入80mL 水，超声提取 30 min，每隔 5 min 振摇 1 次，保持固相完全分散。 于 75 ℃ 水浴中放置5min，取出放置至室温，定量转移至100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。 溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10000r/min离心15min，上清液备用。
5.2.3 腌鱼类、腌肉类及其他腌制品：称取试样匀浆2g(精确至0.001g)，置于150mL具塞锥形瓶中，加入80mL 水，超声提取 30 min，每隔 5 min 振摇 1 次，保持固相完全分散。 于 75 ℃ 水浴中放置5min，取出放置至室温，定量转移至100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。 溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10000r/min离心15min，上清液备用。
5.2.4 乳：称取试样10g(精确至0.01g)，置于100mL具塞锥形瓶中，加水80mL，摇匀，超声30min，加入3%乙酸溶液2mL，于4 ℃放置20min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。 溶液经滤纸过滤，滤液备用。
5.2.5 乳粉及干酪：称取试样2.5g(精确至0.01g)，置于100mL具塞锥形瓶中，加水80mL，摇匀，超声30min，取出放置至室温，定量转移至100mL容量瓶中，加入3%乙酸溶液2mL，加水稀释至刻度，混匀。 于4 ℃放置20min，取出放置至室温，溶液经滤纸过滤，滤液备用。5.2.6 取上述备用溶液约15mL，通过0.22μm 水性滤膜针头滤器、C18柱，弃去前面3mL(如果氯离子大于100mg/L，则需要依次通过针头滤器、C18柱、Ag柱和 Na柱，弃去前面7 mL)，收集后面洗脱液待测。固相萃取柱使用前需进行活化，C18柱(1.0mL)、Ag柱(1.0mL)和 Na柱(1.0mL)，其活化过程为：C18柱(1.0mL)使用前依次用10mL甲醇、15mL水通过，静置活化30min。 Ag柱(1.0mL)和 Na柱(1.0mL)用10mL水通过，静置活化30min。
5.3 仪器参考条件
5.3.1 色谱柱：氢氧化物选择性，可兼容梯度洗脱的二乙烯基苯-乙基苯乙烯共聚物基质，烷醇基季铵盐功能团的高容量阴离子交换柱， 4 mm×250 mm(带保护柱4 mm×50 mm)，或性能相当的离子色谱柱。
5.3.2 淋洗液
5.3.2.1 氢氧化钾溶液，浓度为 6mmol/L～70 mmol/L；洗脱梯度为6mmol/L30 min，70 mmol/L5min，6mmol/L5min； 流速 1.0mL/min。
5.3.2.2 粉状婴幼儿配方食品：氢氧化钾溶液，浓度为5mmol/L～50mmol/L；洗脱梯度为5mmol/L33min，50mmol/L5min，5mmol/L5min；流速1.3mL/min。
5.3.3 抑制器。
5.3.4 检测器：电导检测器，检测池温度为 35 ℃；或紫外检测器，检测波长为226nm。
5.3.5 进样体积：50μL(可根据试样中被测离子含量进行调整)。
5.4 测定
5.4.1 标准曲线的制作
将标准系列工作液分别注入离子色谱仪中，得到各浓度标准工作液色谱图，测定相应的峰高(μS)或峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰高(μS)或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
5.4.2 试样溶液的测定
将空白和试样溶液注入离子色谱仪中，得到空白和试样溶液的峰高(μS) 或峰面积，根据标准曲线得到待测液中亚硝酸根离子或硝酸根离子的浓度。
6 分析结果的表述
试样中亚硝酸离子或硝酸根离子的含量按式(1)计算：
X———试样中亚硝酸根离子或硝酸根离子的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；
ρ———测定用试样溶液中的亚硝酸根离子或硝酸根离子浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
ρ0 ———试剂空白液中亚硝酸根离子或硝酸根离子的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V ———试样溶液体积，单位为毫升(mL)；
f ———试样溶液稀释倍数；
1000———换算系数；
m ———试样取样量，单位为克(g)。
试样中测得的亚硝酸根离子含量乘以换算系数1.5，即得亚硝酸盐(按亚硝酸钠计)含量；试样中测得的硝酸根离子含量乘以换算系数1.37，即得硝酸盐(按硝酸钠计)含量。
第二法 分光光度法
1 原理
亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定，硝酸盐采用镉柱还原法测定。
试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐含量。采用镉柱将硝酸盐还原成亚硝酸盐，测得亚硝酸盐总量，由此总量减去亚硝酸盐含量，即得试样中硝酸盐含量。
2 试剂和材料
除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯。水为GB/T 6682 规定的二级水或去离子水。
2.1 亚铁氰化钾（K4Fe ( CN)6·3H2 O）。
2.2 乙酸锌（Zn(CH3 COO)2·2H2 O）。
2.3 冰醋酸（CH3COOH ）。
2.4 硼酸钠（Na2B4O7·10H2O）。
2.5 盐酸（ρ＝1.19 g/mL）。
2.6 氨水（25 %）。
2.7 对氨基苯磺酸(C6H7NO3S）。
2.8 盐酸萘乙二胺(C12H14N2·2HCl）。
2.9 硫酸铜(CuSO4·5H2O)。
2.10 硝酸钠（NaNO3）。
2.11 锌皮或锌棒。
2.12 硫酸镉(CdSO4·8H2O)。
2.13 亚铁氰化钾溶液(106g/L)：称取 106.0 g 亚铁氰化钾（2.1），用水溶解，并稀释至 1000 mL 。
2.14 乙酸锌溶液(220 g/L)：称取220.0 g 乙酸锌（2.2），先加 30 mL 冰醋酸（2.3）溶解，用水稀释至1000 mL 。
2.15 饱和硼砂溶液(50 g/L )：称取5.0 g 硼酸钠（2.4），溶于 100 mL热水中，冷却后备用。
2.16 氨缓冲溶液（pH 9.6 ～9.7）：量取 30 mL 盐酸（2.5），加 100 mL水，混匀后加 65 mL 氨水（2.6），再加水稀释至1000 mL ，混匀。调节pH至9.6～9.7。
2.17 氨缓冲液的稀释液：量取 50 mL 氨缓冲溶液（2.16 ），加水稀释至500 mL，混匀。
2.18 盐酸(0.1 mol/L)：量取5mL盐酸，用水稀释至600 mL。
2.19 对氨基苯磺酸溶液（4 g/L）：称取 0.4g对氨基苯磺酸（2.7），溶于 100 mL 20 %（V/V）盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。
2.20 盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：称取 0.2 g 盐酸萘乙二胺（2.8），溶于 100 mL水中， 混匀后，置棕色瓶中，避光保存。
2.21 亚硝酸钠标准溶液（200μ g /mL）：准确称取 0.1000 ｇ于110℃～120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解移入 500 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
2.22 亚硝酸钠标准使用液（5.0μ g/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液 5.00 mL，置于 200 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度。
2.23 硝酸钠标准溶液（200μg/mL，以亚硝酸钠计）：准确称取0.1232 g 于110 ℃～120℃干燥恒重的硝酸钠，加水溶解，移于入 500 mL 容量瓶中，并稀释至刻度。
2.24 硝酸钠标准使用液（5μg/mL）：临用时吸取硝酸钠标准溶液 2.50 mL，置于 100 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度。
3 仪器和设备
3.1 天平：感量为 0.1 mg 和1 mg。
3.2 组织捣碎机。
3.3 超声波清洗器。
3.4 恒温干燥箱。
3.5 分光光度计。
3.6 镉柱
3.6.1海绵状镉的制备：投入足够的锌皮或锌棒于 500 mL 硫酸镉溶液(200 g/L) 中，经过 3 h～4 h，当其中的镉全部被锌置换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出残余锌棒，使镉沉底，倾去上层清液，以水用倾泻法多次洗涤，然后移入组织捣碎机中，加500 mL 水，捣碎约2 s，用水将金属细粒洗至标准筛上，取20目～40 目之间的部分。
3.6.2镉柱的装填：如图 2 。用水装满镉柱玻璃管，并装入 2 cm高的玻璃棉做垫，将玻璃棉压向柱底时，应将其中所包含的空气全部排出，在轻轻敲击下加入海绵状镉至8 cm～10 cm 高，上面用1 cm高的玻璃棉覆盖，上置一贮液漏斗，末端要穿过橡皮塞与镉柱玻璃管紧密连接。
如无上述镉柱玻璃管时，可以 25 mL 酸式滴定管代用，但过柱时要注意始终保持液面在镉层之上。
当镉柱填装好后，先用 25 mL 盐酸(0.1 mol/L) 洗涤，再以水洗两次，每次 25 mL ，镉柱不用时用水封盖，随时都要保持水平面在镉层之上，不得使镉层夹有气泡。
图2 镉柱示意图
3.6.3镉柱每次使用完毕后，应先以 25 mL 盐酸（0.1 mol/L）洗涤，再以水洗两次，每次25 mL ，最后用水覆盖镉柱。
3.6.4镉柱还原效率的测定：吸取 20 mL 硝酸钠标准使用液，加入 5 mL氨缓冲液的稀释液，混匀后注入贮液漏斗，使流经镉柱还原，以原烧杯收集流出液，当贮液漏斗中的样液流完后，再加 5 mL水置换柱内留存的样液。取10.0 mL 还原后的溶液（相当10 μ g 亚硝酸钠）于 50 mL 比色管中，以下按11.4自“吸取0.00 mL、0.20mL、0.40mL 、0.60mL 、0.80mL、1.00mL……”起依法操作，根据标准曲线计算测得结果，与加入量一致，还原效率应大于98% 为符合要求。
3.6.5 还原效率计算
还原效率按以下公式进行计算。
式中：
X——还原效率，% ；
A——测得亚硝酸钠的含量，单位为微克（μg）；
10——测定用溶液相当亚硝酸钠的含量，单位为微克（μg）。
4 分析步骤
4.1 试样的预处理
同5.1。
4.2 提取
称取5g（精确至 0.01 g）制成匀浆的试样（如制备过程中加水，应按加水量折算），置于50 mL烧杯中，加 12.5 mL 饱和硼砂溶液（2.15），搅拌均匀，以 70 ℃左右的水约300 mL将试样洗入 500 mL容量瓶中，于沸水浴中加热 15 min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。
4.3 提取液净化
在振荡上述提取液时加入5 mL亚铁氰化钾溶液（2.13）， 摇匀， 再加入 5 mL 乙酸锌溶液（2.14）， 以沉淀蛋白质。加水至刻度， 摇匀， 放置 30 min， 除去上层脂肪， 上清液用滤纸过滤， 弃去初滤液 30 mL， 滤液备用。
4.4 亚硝酸盐的测定
吸取40.0 mL 上述滤液于50 mL 带塞比色管中，另吸取 0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL 亚硝酸钠标准使用液（相当于0.0μg、1.0μg、2.0μg、3.0μg、4.0μg、5.0μg、7.5μg、10.0μg、12.5μg亚硝酸钠），分别置于50 mL 带塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入2 mL对氨基苯磺酸溶液（2.19），混匀，静置 3 min～5 min 后各加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液(2.20) ，加水至刻度，混匀，静置15 min，用2cm比色杯，以零管调节零点，于波长 538 nm 处测吸光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂空白。
4.5 硝酸盐的测定
4.5.1 镉柱还原
4.5.1.1 先以25 mL 稀氨缓冲液（2.17 ）冲洗镉柱，流速控制在 3 mL/min～5 mL/min（以滴定管代替的可控制在2 mL/min ～3 mL/min ）。
4.5.1.2 吸取20 mL 滤液于50 mL 烧杯中，加5 mL氨缓冲溶液（2.16 ），混合后注入贮液漏斗，使流经镉柱还原，以原烧杯收集流出液，当贮液漏斗中的样液流尽后，再加5 mL水置换柱内留存的样液。
4.5.1.3 将全部收集液如前再经镉柱还原一次，第二次流出液收集于 100 mL容量瓶中，继以水流经镉柱洗涤三次，每次20 mL ，洗液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混匀。
4.5.2 亚硝酸钠总量的测定
吸取10 mL ～20 mL 还原后的样液于50 mL 比色管中。以下按4.4 自“吸取0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL……” 起依法操作。
5 分析结果的表述
5.1 亚硝酸盐含量计算
亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量按式（3）进行计算。
X1=
……………………………………………………（3）
式中：
X1 ——试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
A1 ——测定用样液中亚硝酸钠的质量，单位为微克（μg）；
m ——试样质量，单位为克（g）；
V1 ——测定用样液体积，单位为毫升（mL）；
V0 ——试样处理液总体积，单位为毫升（mL）。
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。
5.2 硝酸盐含量的计算
硝酸盐（以硝酸钠计）的含量按式（4 ）进行计算。
X2=〔
-X1〕×1.232 ……………………………（4）
式中：
X2 ——试样中硝酸钠的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
A2 ——经镉粉还原后测得总亚硝酸钠的质量，单位为微克（μ g）；
m ——试样的质量，单位为克（g）；
1.232——亚硝酸钠换算成硝酸钠的系数；
V2 ——测总亚硝酸钠的测定用样液体积，单位为毫升（mL）；
V0 ——试样处理液总体积，单位为毫升（mL）；
V3 ——经镉柱还原后样液总体积，单位为毫升（mL）；
V4 ——经镉柱还原后样液的测定用体积，单位为毫升（mL）；
X1 ——由式（3）计算出的试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）。
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。
6 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。
第三法 蔬菜、水果中硝酸盐的测定 紫外分光光度法
1 原理
用pH9.6～9.7的氨缓冲液提取样品中硝酸根离子，同时加活性炭去除色素类，加沉淀剂去除蛋白质及其他干扰物质，利用硝酸根离子和亚硝酸根离子在紫外区219nm 处具有等吸收波长的特性，测定提取液的吸光度，其测得结果为硝酸盐和亚硝酸盐吸光度的总和，鉴于新鲜蔬菜、水果中亚硝酸盐含量甚微，可忽略不计。 测定结果为硝酸盐的吸光度，可从工作曲线上查得相应的质量浓度，计算样品中硝酸盐的含量。
2 试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯。 水为 GB/T6682规定的一级水。
2.1 试剂
2.1.1 盐酸(HCl，ρ=1.19g/mL)。
2.1.2 氨水(NH3·H2O，25%)。
2.1.3 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]。
2.1.4 硫酸锌(ZnSO4·7H2O)。
2.1.5 正辛醇(C8H18O)。
2.1.6 活性炭(粉状)。
2.2 试剂配制
2.2.1 氨缓冲溶液(pH=9.6～9.7)：量取20mL盐酸，加入到500mL水中，混合后加入50mL氨水，用水定容至1000mL。 调pH 至9.6～9.7。
2.2.2 亚铁氰化钾溶液(150g/L)：称取 150g亚铁氰化钾溶于水，定容至1000mL。
2.2.3 硫酸锌溶液(300g/L)：称取 300g硫酸锌溶于水，定容至1000mL。
2.3 标准品
2.3.1 硝酸钾(KNO3，CAS号：7757-79-1)：基准试剂，或采用具有标准物质证书的硝酸盐标准溶液。
2.4 标准溶液配制
2.4.1 硝酸盐标准储备液(500mg/L，以硝酸根计)：称取0.2039g于110℃～120℃干燥至恒重的硝酸钾，用 水 溶 解 并 转 移 至 250 mL 容 量 瓶 中， 加 水 稀 释 至 刻 度， 混 匀。 此 溶 液 硝 酸 根 质 量 浓 度 为500mg/L，于冰箱内保存。
2.4.2 硝酸盐标准曲线工作液：分别吸取0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL和1.2mL硝酸盐标准储备液于 50mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀。 此标准系列溶液硝酸根质量浓度分别为0mg/L、2.0mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L、10.0mg/L和12.0mg/L。
3 仪器和设备
3.1 紫外分光光度计。
3.2 分析天平：感量0.01g和0.0001g。
3.3 组织捣碎机。
3.4 可调式往返振荡机。
3.5 pH 计：精度为0.01。
4 分析步骤
4.1 试样制备
选取一定数量有代表性的样品，先用自来水冲洗，再用水清洗干净，晾干表面水分，用四分法取样，切碎，充分混匀，于组织捣碎机中匀浆(部分少汁样品可按一定质量比例加入等量水)，在匀浆中加1滴正辛醇消除泡沫。
4.2 提取
称取10g(精确至0.01g)匀浆试样(如制备过程中加水，应按加水量折算)于250mL锥形瓶中，加水100mL，加入5mL氨缓冲溶液(pH=9.6～9.7)，2g粉末状活性炭。 振荡(往复速度为200次/min)30min。 定量转移至250mL容量瓶中，加入2mL150g/L亚铁氰化钾溶液和 2mL300g/L硫酸锌溶液，充分混匀，加水定容至刻度，摇匀，放置5 min，上清液用定量滤纸过滤，滤液备用。 同时做空白实验。
4.3 测定
根据试样中硝酸盐含量的高低，吸取上述滤液 2 mL～10 mL 于50 mL 容量瓶中，加水定容至刻度，混匀。 用1cm 石英比色皿，于219nm 处测定吸光度。
4.4 标准曲线的制作将标准曲线工作液用1cm 石英比色皿，于219nm 处测定吸光度。 以标准溶液质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制工作曲线。
5 结果计算
硝酸盐(以硝酸根计)的含量按式(5)计算：
式中：
X ———试样中硝酸盐的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；
ρ ———由工作曲线获得的试样溶液中硝酸盐的质量浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V6———提取液定容体积，单位为毫升(mL)；
V8———待测液定容体积，单位为毫升(mL)；
m6———试样的质量，单位为克(g)；
食品中合成着色剂的测定
1 、实验目的
1．了解合成着色剂测定的原理。
2．能够准确测定食品中的合成着色剂的含量。
2 、实验原理
食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。
3、试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 甲醇(CH3OH)：色谱纯。
3.1.2 正己烷(C6H14)。
3.1.3 盐酸(HCl)。
3.1.4 冰醋酸(CH3COOH)。
3.1.5 甲酸(HCOOH)。
3.1.6 乙酸铵(CH3COONH4)。
3.1.7 柠檬酸(C6H8O7·H2O)。
3.1.8 硫酸钠(Na2SO4)。
3.1.9 正丁醇(C4H10O)。
3.1.10 三正辛胺(C24H51N)。
3.1.11 无水乙醇(CH3CH2OH)。
3.1.12 氨水(NH3·H2O)：含量20%～25%。
3.1.13 聚酰胺粉(尼龙6)：过200μm(目)筛。
3.2 试剂配制
3.2.1 乙酸铵溶液(0.02 mol/L)：称取1.54g乙酸铵，加水至1000 mL，溶解，经0.45μm 微孔滤膜过滤。
3.2.2 氨水溶液：量取氨水2mL，加水至100mL，混匀。
3.2.3 甲醇-甲酸溶液(6+4，体积比)：量取甲醇 60mL，甲酸 40mL，混匀。
3.2.4 柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸，加水至 100mL，溶解混匀。
3.2.5 无水乙醇-氨水-水溶液(7+2+1，体积比)：量取无水乙醇 70 mL、氨水溶液(3.2.2)20 mL、水10mL， 混匀。
3.2.6 三正辛胺-正丁醇溶液(5%)：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。
3.2.7 饱和硫酸钠溶液。
3.2.8 pH6的水：水加柠檬酸溶液调pH 到6。
3.2.9 pH4的水：水加柠檬酸溶液调pH 到4。
4、操作步骤
4.1 试样制备
4.1.1 果汁饮料及果汁、果味碳酸饮料等：称取 20g～40g(精确至0.001g)，放入100mL烧杯中。 含二氧化碳样品加热或超声驱除二氧化碳。
4.1.2 配制酒类：称取 20g～40g(精确至0.001g)，放入100mL烧杯中，加小碎瓷片数片，加热驱除乙醇。
4.1.3 硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等：称取5g～10g(精确至0.001g)粉碎样品，放入100mL小烧杯中，加水30mL， 温热溶解，若样品溶液pH 较高，用柠檬酸溶液调pH 到6左右。
4.1.4 巧克力豆及着色糖衣制品：称取5g～10g(精确至0.001g)，放入 100mL小烧杯中， 用水反复洗涤色素，到巧克力豆无色素为止，合并色素漂洗液为样品溶液。
4.2 色素提取
4.2.1 聚酰胺吸附法：样品溶液加柠檬酸溶液调pH 到6，加热至60 ℃，将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以 G3垂融漏斗抽滤，用60 ℃ pH 为4的水洗涤3次～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3次～5次 (含赤藓红的样品用4.2.2法处理)，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3次～5次，直至色素完全解吸，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至 5mL。 经0.45μm 微孔滤膜过滤，进高效液相色谱仪分析。
4.2.2 液-液分配法(适用于含赤藓红的样品)：将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加2mL盐酸、三正辛胺-正丁醇溶液(5%)10mL～20mL，振摇提取，分取有机相，重复提取，直至有机相无色， 合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗2次，每次10mL，分取有机相，放蒸发皿中，水浴加热浓缩至10mL，转移至分液漏斗中，加10mL正己烷，混匀，加氨水溶液提取2次～3次，每次5mL，合并氨水溶液层(含水溶性酸性色素)，用正己烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至5 mL。 经0.45μm 微孔滤膜过滤，进高效液相色谱仪分析。
4.3 仪器参考条件
4.3.1 色谱柱：C18柱，4.6mm×250mm，5μm。
4.3.2 进样量：10μL。
4.3.3 柱温：35 ℃。
4.3.4 二极管阵列检测器波长范围：400nm～800nm，或紫外检测器检测波长：254nm。
浙公网安备 33021202002483