天然药物化学实验

天然药物化学实验 一、前言 天然药物化学实验是整个天然药物化学课的重要组成部分。其主要目的是： 通过试验，检验在课堂上所学的理论知识。使学生对理性知识的理解更加深入，掌 握得更加牢固。 通过试验，训练学生的基本操作技能，培养学生分析问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 和解决问题的能力，使学 生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练。 在实验中，重点是要加强对学生基本操作技能的训练。天然药物化学实验要求 学生掌握以下技能： 提取分离方面 要求掌握常用的经典方法的原理及操作。其中包括液-固提取法（浸渍、渗漉、 回流提取等）、液-液萃取法（简单萃取法、梯度萃取法、反流分布法）、重 结晶法等。 掌握纸色谱、柱色谱（包括吸附柱、离子交换柱等）的原理和基本操作。 鉴定方面 化学方法 ?掌握一般定性反应在鉴定中的用 ?掌握重要衍生物（乙酰化物、甲基化物生物碱盐类等）的制备方法及其在结 构鉴定中的应用。 ?了解重要降解反应的原理及应用。 光谱方法 了解UV、IR、NMR、MS在天然物结构测定中的应用。目前要求学员能了解黄 酮类化合物的UV、NMR波谱、蒽醌的IR以及麻黄生物碱的NMR谱特征。 二、天然药物化学实验须知 在天然药物化学实验中，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、 刺激性、甚至爆炸性药品，试验操作又常在加温加压等情况下进行，需要各种热源、 电器或其他仪器，操作不慎易造成火灾、爆炸、中毒、触电等事故。但只要加强爱 护国家财产和保障人民生民安全的责任心，提高警惕，消除隐患，注意实验规则， 事故是可以避免的。 试验前必须预习实验内容，了解原理和操作规程。随时记录试验应记的项目，以作 正式报告。 试验前应清点并检查仪器是否完整，装置是否正确，合格后方可进行试验。试验时 不准做无关的事情，严禁吸烟，不得擅自离开，并应随时注意反应情况，仪 器有否漏气，破裂等。 药品仪器都是国家财产，须节约爱护使用，公用物品，用完后立即放回原处。不可 调错瓶塞，以免污染，仪器要洗刷干净。 操作易燃性有机溶剂，回流、蒸馏、减压蒸馏时，不能明火直接加热，要放沸石或 一端封死的毛细管，若在加热时发现无沸石则应冷却后再加，防止爆沸冲出。 减压系统应装有安全瓶。加液时应停火或远离火源，一般无漏气开口，冷凝 水要通畅。起封易挥发溶剂瓶盖时，脸面要避免开瓶口慢慢启开，以防气体 冲脸上。 有毒具腐蚀药品应妥善保管，操作后要立即洗手。勿粘及五官和创口，以免中毒。 实验中，有毒气或腐蚀性气体发生适应在通风橱中进行操作。必要时可戴好防护用 具进行工作。 若将玻管插入塞中时，可在塞孔中涂些水和甘油等润滑剂，用布包住波管使其旋转 而入，防止折断割伤。 试验台上不放无用的药品、仪器，在实验时要做到水槽、仪器、桌面、地上清洁整 齐。 试验结束时，应将门、窗、水、电、煤气关好，室内打扫干净，并清点仪器后方可 离去。 实验室存放易燃性有机溶剂时要远离火源，不得超过500ml。 在进行易燃性有机溶剂实验时，一定要按着操作规程进行。不可将易挥发、易燃性 有机溶剂倒入水槽或废液缸内。 烘箱内不能烘盛有易燃性溶剂的器皿。 消防器材，沙箱、石棉布、灭火器等应放在方便固定的地点，不能随意移动，均应 处于备用状态。 万一不慎着火，要沉着冷静积极抢救，应立即切断室内电源和火源，用石棉布将着 火部位盖严，使其断绝空气而熄灭。或是火势情况选用适当灭火器材进行灭 火。在实验室使用二氧化碳灭火器较好，它具有不腐蚀不导电之优点。 在实验室中常发生的事故如下，应予以特别注意。 蒸馏或回流加热时，发现未放沸石，未等溶液冷却就补加沸石，结果溶液冲出瓶外 于是引起火灾。 蒸馏易燃物时，忘记通冷凝水，大量蒸汽逸出亦易引起火灾。 蒸馏易燃物时塞子漏气引起火灾。 用三角烧瓶作减压装置的受器结果炸裂。 加压操作结束后，放气太快，使压力记冲破。 使用真空干燥器时，用完就直接开干燥器的放气阀，结果使泵内的机油被吸到干燥 器中，样品被污染。 实验室水槽易发生用抹布和碎拖布条堵塞而造成水灾。 三、试验方法（选编） 测定黄酮类化合物UV光谱用的诊断试剂及其配制方法 黄酮类化合物光谱测定程序 黄酮类化合物UV光谱特征与结构解析方法 结构解析示例 氧化 还原 脱水 水解 卤代 酶的催化作用 酯化 硝化 衍生物的制备 混合反应 吸附柱色谱法 吸附力 吸附等温线 线性容量 常用吸附剂 吸附剂的规律 洗脱剂的规律 溶剂的吸附亲和性 （二）柱色谱的操作 1. 掌握渗漉法的原理、操作与影响因素，了解离子交换树脂的结构、性质及使 用方法。 2. 掌握连续回流提取法的原理、特点及仪器的使用方法。 3. 学习粗提物的纯化方法，学会分析纯化过程中所应用的原理。 4. 进一步理解对粗品进行检识的意义及方法。 5. 学习制备性薄层色谱及闪柱色谱的操作，了解色谱条件的选择方法及影响分 离度的因素。 中药苦参是豆科植物苦参(Sophora flavescens Ait)的干燥根，有清热燥湿、杀虫、 利尿之功效。苦参在临床上用于杀虫、治疗痢疾、肝炎、荨麻疹、湿疹、气管炎等。 药理实验证明苦参总生物碱有抗心律失常及抗癌活性等。苦参中主要含生物碱和黄 酮类成分。苦参中主要生物碱有：苦参碱(1)、氧化苦参碱(2)、槐定(3)、槐果碱(4)，结构如图1。氧化苦参碱有抗癌、抗衰老等作用。 13氧化苦参碱C-NMR数据： , 68.7(C-2), 17.0(C-3), 25.9(C-4), 34.3(C-5), 66.6(C-6), 42.4(C-7), 24.4(C-8), 17.0(C-9), 69.1(C-10), 52.8(C-11), 28.3(C-12), 18.5(C-13), 32.7(C-14), 169.8(C-15), 41.6(C-17)。 O14OOO1513 HHN16NNN 121711 HH57 486HHHH 9NNNN31 210 o 苦参碱 氧化苦参碱 槐定 槐果碱 表11-1 主要苦参生物碱的理化性质 中英名称 分子式 性状 mp(?) 旋光 溶解度 白色针状 易溶于醇、氯仿，溶于苦参碱 CHNO 76 +39.11? 15242(matrine) 结晶 乙醚、苯，难溶于水 氧化苦参碱 易溶于水、乙醇、甲醇、CHNO 207-208 +47.7? 白色方晶 152422(oxymatrine) 氯仿，不溶于乙醚、苯 槐定 CHNO 106-108 白色棱晶 15242(sophoridine) 槐果碱 CHNO 80-81 -29.44? 白色棱晶 同上 15222(sophocarpine) 从苦参中提取生物碱一般用水、酸水或醇提法，粗提物用树脂法或酸碱法纯化， 分离方法多用氧化铝或硅胶柱层色谱。 1 将70g聚苯乙烯磺酸型树脂(交联度3%)，放入烧杯中，加200ml 80?的蒸馏水溶胀30分钟，倾出蒸馏水后加入2mol/L盐酸300ml，充分搅拌，放置半小时(静态转型)，后装入树脂柱(2cm×100cm)，并使全部酸水溶液通过树脂柱(动态转型)，流出液的速度以液滴不成串为宜。后用蒸馏水洗至中性，待用。注意从装柱到洗涤过 程中始终保持液面高于树脂床。 2 称苦参根的粉末200g，加入260ml左右0.5%的盐酸湿润，搅匀，放置20分钟后装入渗漉筒，加入适量0.5%盐酸至下口有溶液流出且筒内无气泡。 将渗漉筒与树脂柱相连，计算渗漉速度。然后以合适的流速开始渗漉和离子交 换，实验开始时及每过1小时之后检查渗漉液和交换液的pH值和生物碱反应，并讨论其变化的原因。当生物碱提取完全或树脂完全饱和时终止实验。 停止渗漉后，用蒸馏水洗树脂至中性，倾出水层，将树脂倒入搪瓷盘中，铺平， 空气中晾干。 将晾干的树脂称重后放入烧杯中，加14%的氨水湿润(使树脂充分溶胀又无过剩 的水)，加盖，静置20分钟，装入沙氏提取器，用300ml 95%乙醇回流提取生物碱约6小时，中间注意检查生物碱是否已被提取完全。停止实验后，将树脂回收，提 取液置500ml三角瓶中保存。 3 将乙醇提取液常压回收乙醇至小体积（6ml左右），加入70ml~80ml氯仿溶解，转入分液漏斗中，静置分层，分出氯仿层，油状物另外保存。氯仿溶液用无水硫酸 钠干燥1~2小时(注意干燥过程中经常振摇)，回收氯仿至干。残留物用丙酮析晶， 即析出黄白色固体，放置，抽滤，用少量丙酮洗涤，得氧化苦参碱粗品，交给老师， 放干燥器中干燥，母液放置待用。氧化苦参碱粗品用丙酮重结晶可得其精品。 4 1() 方法：硅胶HF254-CMC碱性薄层，调合剂为0.5%CMC溶液—4%NaOH(9:1)， 2，4块/人) (5×15cm 展开剂： ? 氯仿—甲醇（4:1） ? 氯仿—甲醇—氢氧化铵（5:0.6:0.3下层） ? 氯仿—甲醇—氢氧化铵（10ml:1.2ml:2滴） ? 苯—丙酮—乙酸乙酯—氢氧化铵（2:3:4:0.2） 2 玻璃板：20×20cm2 硅胶HF25：20g 调合剂：同粗品检识项下，用量为60ml左右。 样品：氧化苦参碱粗品300mg 展开剂：自选，用量250ml/4人 显色方法：自定。 洗脱：将氧化苦参碱色带刮下，装入洗脱柱，以氯仿—甲醇(7:3)混合溶剂洗脱 至无生物碱为止，回收溶剂。残留物用丙酮溶解，过滤，回收丙酮至少量，放置， 待析晶完全，滤集结晶、干燥。注：氧化苦参碱后面色带刮下，交老师。 色谱柱规格：2×50cm 吸附剂：230-400目闪柱硅胶35g 压力：0.3~0.5kg/cm2 样品：120mg氧化苦参碱精品溶于1ml氯仿中，湿法上样。 洗脱剂：氯仿—甲醇—氢氧化铵(5:0.6:0.3)(充分振摇后，静置，用下层)。 洗脱：每5ml一流份，用硅胶碱性薄层检识，合并单一色点流份，回收溶剂， 得氧化苦参碱纯品。 5 （1） 纯度检查：用TLC法，条件自选。 （2）测定mp （3） 测定产品的IR、MS、1H-NMR谱。 1. 叙述酸水法及离子交换法提取纯化生物碱的原理。 2. 应如何检查(1)渗漉液中是否含有生物碱？(2)渗漉液中生物碱是否被交换在 树脂上？(3)离子交换树脂是否已饱和？ 3. 简述沙氏提取器提取原理及特点。 4. 什么叫闪柱色谱？其有何优缺点？ 5. 制备性薄层色谱的特点是什么？ 6. 简述提取、分离和鉴定生物碱的程序并分析所测氧化苦参碱的各种波谱数 据。 1．白世泽等．中草药，1982：13(4)，8 2．张守芳．中草药通讯，1977(1)：38；(2)：39 3．A．Ueno et al．Chem．Pharm．Bull．1978，26，1832 4．陈德昌．中药化学对照品工作手册．北京：中国医药科技出版社，2000：142 5．杨云等．天然药物化学成分提取分离手册．北京：中国中医药出版社，2003：454 （一）概述 芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素 （Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为 174~178?，无水物188~190?。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、 石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁具有维生素P样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作 防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。 实验目的和要求 实验目的 ? 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 ? 通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 ? 了解UV及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 要求 ? 要拿到以下三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰化合物。 ? 能够拿根据化学试验及UV、NMR数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类化 合物的结构测定有一般性的了解。 试验方法 芦丁的提取与分离（见下图） 芦丁的鉴定 ? 芦丁的定性反应 取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使其溶解，分成三份作下述试验： A. 取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，在酌加少许镁粉，注意观察颜色变化情 况。 B. 取上述溶液1~2ml，然后滴加2%柠檬酸的甲醇溶液，注意观察颜色变化情况， 在继续向试管中加入2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记录颜色变化情况。 C. 取上述溶液1~2ml，然后再加入10%α-等体积的萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管 壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化。 ? 芦丁的紫外光谱解析 取芦丁溶于色谱纯甲醇中，加入规定的试剂，测定其UV光谱，试解析光谱并初步判断其结构。 芦丁的NMR波谱解析 A. 芦丁的三甲基硅醚NMR谱的解析 B. 十乙酰化芦丁的NMR光谱解析 ? 芦丁水解后糖与苷元的鉴定 A. 水解方法：精密称取芦丁1g（?0.01g），加1%硫酸100ml，加热40min，放 冷静置，过滤。所得沉淀用少许水洗除酸，干燥称重，计算苷元与糖的重量比。然 后用乙醇（95%大约10ml）进行重结晶，即得苷元。 B. 苷元的鉴定：用纸色谱法与对照品对照。 槐花米粗粉（20g） 置500ml烧杯中，加水300ml，在搅拌下加入石 灰乳（1~1.5g），调至PH8~9，加热至微沸， 保持30min，趁热抽滤。 残渣滤液 在60~70?下用浓盐酸调至 PH4~5，精置1hr,抽滤。 沉淀（粗制芦丁）滤液 重结晶 将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热 煮沸15min，趁热过滤 残渣滤液 充分静置后过滤，60~70?下干燥 芦丁（精制品） （四）实验指导 1．本实验讲解要点及注意事项 ? 芦丁提取方法，重点介绍碱-酸法的原理及注意事项。 ? 定性实验的目的、意义及注意事项。 ? UV及NMR光谱在芦丁结构检识中的应用。 2．实验报告要求 ? 碱-酸法提取芦丁的原理 ? 定性反应的反应机理 ? 黄酮类UV和NMR的特点 ? 详细记录定性反应结果 ? 绘制色谱结果模拟图，并计算Rf值 3．思考题 ? 苷类结构的检识大体程序如何？ ? 苷类水解有几种催化方法？ ? 怎样确定芦丁结构中糖基是连接在槲皮素3-O-上？ ? 怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖基一个鼠李糖？ ? 苷元的结构是怎样确定的？ ? 怎样确定苷键的构型？ ? 芦丁的全乙酰化物的制备与苷元乙酰化物（槲皮素）的制备有何不同？为什 么？ （一）概述 大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。 自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所 收载的世界性生药。大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L），大黄（R. officinale Baill）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。 已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种： OHOOH RR12O R R 名 称 晶 形 熔 点 12 -H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320? -CH -OH 大黄素(Emodin) 橙色针晶 256~257? 3 -H -CHOH 芦荟大黄素橙色细针晶 206~208? 2 (Aloe-emodin) -CH - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207? 3 -H -CH 大黄酚(Chyrsophanol) 金色片状结196? 3 晶 大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。大黄酸连有-COOH，酸性最强；大黄素连有β-OH，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH和-CH，后者只连有-CH，333因而后者酸性排在第四位。 （二）实验目的和要求 1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果， 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 液液萃取法分离混 合物的实验 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 。 2．掌握PH梯度法的原理及操作技术。 3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作 技术。 4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。 （三）实验方法 1．大黄总蒽醌苷元的提取 大黄粗粉（100g） 加20%HSO水溶液200ml，氯仿500ml，24 水浴回流4hr，过滤，测量滤液体积。 残渣氯仿提取液（约450ml） 注意：?大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织 中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂， 用苯时应注意苯蒸气的挥发，严防中毒；?所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用 分液漏斗分出弃去，并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取液 放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余液进行下一步分离试验用。 2．总蒽醌苷元分离方案的设计 ? 大黄总蒽醌苷元的纸色谱 ? 蒽醌类成分的缓冲纸色谱试验 ? 最佳萃取剂及其用量的确定 各种萃取剂用量的确定 新分离方法的设计 蒽醌类成分的分离与精制 大黄酸的分离与精制 将含有总游离蒽醌的氯仿液450ml移至1000ml的大分液漏斗中，加PH8缓冲液275ml振摇萃取，静置至彻底分层，放出氯仿液后，到出碱水液至置250ml烧杯中，加HCl酸化至PH=3，待黄色沉淀析出完全后，过滤、干燥，干燥后的样品加冰醋酸 10ml加热使溶，趁热过滤，滤液静置，析出黄色针晶为大黄酸，过滤即得纯品。 大黄素的分离与精制 将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中，用PH9.9缓冲液275ml振摇萃取，彻底分层后，分出碱水层，并用HCl酸化至PH=3，析出棕黄色沉淀，过滤，沉淀经 干燥后，用10ml冰醋酸加热使溶，趁热过滤，析出橙色大针晶，过滤后，即得大黄 素纯品。 芦荟大黄素的分离和精制 余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO:5%NaOH (9:1) 碱水液540ml或用3 0.5%KOH540ml振摇萃取，碱水液加HCl酸化，析出的沉淀过滤干燥，用10ml乙酸乙酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。 ? 大黄酚和大黄素甲醚的分离——磷酸氢钙柱色谱 蒽醌类成分的鉴定 ? 纸色谱鉴定 ? IR光谱解析 （四）实验指导 1．本实验讲解要点及注意事项。 ? PH梯度萃取的原理及注意事项。 ? 如何设计萃取分离方案的程序与方法。 ? 蒽醌化合物红外光谱的特点。 ，? 分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步最好用新鲜CHCl3回洗碱水液。 ? 缓冲液的配制和碱液的配制要准确，严格注意检查。 每步萃取时，利用纸色谱检查跟踪萃取效果，如未达到预想效果应及时纠正。 2．实验报告要求 ? 记录大黄总蒽醌的提取方法。 ? 总蒽醌的纸色谱检查结果（附色谱图）。 ? 总蒽醌的缓冲纸色谱结果，并 说明 关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书 它对总蒽醌分离方案设计有何启示。 ? 记录总蒽醌的分离程序（包括溶剂用量），及各分离物粗品的纸色谱检查结果， 与原设计有何出入，原因何在？ ? 记录大黄素、大黄酸、芦荟大黄素的精制方法及纸色谱、红外光谱的鉴定结果。 一、实验目的、要求、原理： （l）目的：通过一叶萩碱的提取分离，掌握用离子交换树脂法提取分离生物碱的原 理和方法。 （2）要求：分离得到纯一叶萩碱，加以鉴定。 ++（3）原理：ALK+H/HO ALKH 2 ++ ++--RSOH+ALKHRSOALKH+H 33 +-洗脱：吸碱树脂用NH4OH碱化后，反应如下： ++- +--RSOALKH+NH4OHRSONH4+ALK（游离生物碱）+ HO 332 二、一叶获简介 大戟科植物一叶萩（Securinega suffruticosa ( Pall ) Rehd）也称叶底珠，别名狗杏条等，我国资源十分丰富。其根、叶和嫩枝中均含有多种生物碱，结构已经清楚 的有十几种。其中一叶萩碱含量高，已用于临床。该生物碱于1956年首先由苏联学 者分离得到。1962 年完全确定了它的化学结构。我国在一叶萩碱的研究方面作出较 大贡献，于1962年自国产的一叶萩中用活性炭吸附法提取分离一叶萩碱，并测定了 它的化学结构。 O OH N H 一叶萩碱的化学结构 一叶碱获和它的衍生物能兴奋中枢 X 神经，增强心肌收缩、升高血压，临床用硝酸一叶获碱治疗面神经麻痹，小儿麻痹骸神经炎和股外侧神经炎感染引起的多 发性神经炎，成为神经科疾患的常用药物。 一叶获碱为淡黄色棱状晶体，难溶于水，易溶于醇、氯仿、较难溶于石油醚， 一叶萩碱是一由?αβ不饱和内酯环和一个环已烯及一个吡咯啶并合而成的叔胺碱； 分子中具有共扼双键，氮原子的孤对电子恰好处于键之上，因而可与兀电子发生干 扰，从而“延伸”了共辘体系，产生了“跨环共辘”。一叶获碱与酸生成盐后则为无 色，旋光度降低、表明 N 原子上电子与质子不能再参予“跨环共扼”。一叶萩 N 中 原子三价都结在环中，有一定程度的碱性（Pka=7.2），因而具有生物碱的一般通性；能与生物碱沉淀试剂产生沉淀反应，亦可与显色剂反应。从一叶萩叶中提取生物碱 可采用溶剂法、活性炭吸附法和离子交换法。 三、实验操作及注意事项 （一）操作 干燥的一叶萩叶（100g） 置容器中，用 3‰ 的HSO水溶液 300ml 充分浸润,24 放置 20分钟后，装入渗流筒 ，再用 3‰ 的HSO水24 溶液 1000ml,以6~8ml/分进行渗漉 酸水液药渣 （弃去） 通过731磺酸型阳离子交换柱（取50g阳离子交换树脂，动态装柱）， 以6~8ml/分的流速进行交换，测定交换液的pH值（0'、1'、2'、3'、 5'、10'、15'、20'、30'、60'）画出时间与pH值的曲线图，待酸水液 全部交换完毕后，将树脂倾入烧杯中，水洗至橙明，抽干放置培养 皿中，室温风干。 风干后的树脂 用NH4OH 10~12 ml碱化，闷置20分钟后挥散多余NH3，将树脂装入滤 纸筒，放入沙氏提取器中，用石油醚（30~60?）120ml，于水浴上，回 流洗脱3小时左右，取出树脂筒。 树脂石油醚（回收）（含生物碱） 回收至体积20ml左右转移到干燥的小锥形瓶中，加盖放置， 结晶析出后抽滤。 石油醚结晶 （供作鉴定）（回收） 注意事项： [1] 装渗滚筒：渗流筒底部，放一块脱脂棉（先用 水湿润）然后将润湿过的药料分次加入，分层填压， 顶部盖一张滤纸压上洁净的鹅卵石。 [2] 树脂处理：取新树脂（已用水膨胀过的）置烧 杯中，用五倍量的 6~7 % HCI 浸泡过夜，先用离 子水洗至 pH3~4 ，改用蒸馏水洗至中性，再用 5 % NaOH （约 2 倍）搅拌洗涤后，水洗至中性， 最后用 6~7 % HCl转型，蒸馏水洗至近中性。 [3] 装树脂柱用蒸馏水将已处理好的树脂悬浮起来加到底部垫有脱脂棉的交换柱 中，等树脂颗粒下沉后，其上复盖一层棉花或一张滤纸，以免加入液体时，冲破树 脂表面，注意在整个操作过程中树脂的上部是要覆盖少量液体，以免进入空气，影 响交换效果，将树脂柱表层多余液体由底部活塞放出，待液层降至树脂层表面时， 关闭活塞，由柱的上部加入含一叶萩碱的酸水，打开底部活夹。控制流速 （二）生物碱的定性试验 1 ．取渗漉液 lml ，加硅钨酸试剂数滴，产生淡黄色沉淀。 2 ．取渗漉液 lml ，加碘碘化钾 T . S 数滴，产生棕褐色沉淀。 3 ．取渗漉液 lml ，加碘化钾秘 T . S 数滴，产生棕红色沉淀。 （三）鉴定 1．原理：吸附层析 2．TLC： O（中性） [吸附剂]：Al23 [展开剂]： a．CHC1 3 b．石油醚：CHC1=1 3 c．CHC1：EtOH=9：1 3 [样品]：一叶萩碱/CHC1液 3 [ 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品]：一叶萩碱/CHC1液 3 [显色剂]：碘化秘钾：EtOH= 9：1 3 显微溶点测定 （四）思考题 1．为什么要用阳离子树脂交换生物碱？ 2．沙氏提取器的原理及其特点是什么？ O 碱化的目的是什么？ 3．用NH3H2 4．装树脂柱应该注意哪些事项？ 豆丁网（DocIn）是全球优秀的C2C文档销售与分享社区。 豆丁允许用户上传包括 .pdf, .doc, .ppt, .txt 在内的数十种格式的文档文件，并以Flash Player的形式在网页中直接展示给读者。简而言之，豆丁就如同文档版的Youtub e。现在每天都有数以万计的文档会上传到豆丁，正基于此，豆丁将致力构建全球最大的 中文图书馆。 豆丁努力使世界上任何人都能够自由地发挥他们的创造力。文档资料只通过少数、 单一的出版物来传播的时代已经结束。现在，互联网给文档资料提供了世界范围内的传 播渠道，豆丁希望能够给每个独立的文档持有者利用这个新机会的方法。现在，我们为 原创人群提供安全、自由、民主、便利的文档发布与营销平台。借助豆丁，你可以为你 的文档定价，并通过豆丁发表到不同博客、论坛、联盟中，进行广泛传播，在分享的同 时获得收入回报。 豆丁致力于构建全球领先的文档发布与销售平台，面向世界范围提供便捷、安全、 专业、有效的文档营销服务。包括中国、日本、韩国、北美、欧洲等在内的豆丁全球分 站，将面向全球各地的文档拥有者和代理商提供服务，帮助他们把文档发行到世界的每 一个角落。豆丁正在全球各地建立便捷、安全、高效的支付与兑换渠道，为每一位用户 提供优质的文档交易和账务服务。 现在，已经有成千上万的用户在豆丁上传Word、PDF、PPT等各种格式的文档， 分享给全世界，每个月超过4000万的用户，会来豆丁浏览文档。 豆丁全球Alexa排名 已进入1500以内，并稳步攀升。