所谓半保留复制就是以

所谓半保留复制就是以 三、判断 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 1. 所谓半保留复制就是以 DNA亲本链作为合成新子链 DNA的模板，这样产生的新的双链 DNA分子由一条旧链和一条新链组成。 2. DNA的复制需要 DNA聚合酶和RNA聚合酶。 3(在高盐和低温条件下由 DNA单链杂交形成的双螺旋表现出几乎完全的互补性，这一过程 可看作是一个复性(退火)反应。 4. 在核酸双螺旋(如DNA)中形成发夹环结构的频率比单链分子低。发夹结构的产生需要回 文序列使双链形成对称的发夹，呈十字结构。 5(B型双螺旋是 DNA的普遍构型，而 Z型则被确定为仅存在于某些低等真核细胞中。 6( 病毒的遗传因子可包括 l到300个基因。与生命有机体不同，病毒的遗传因子可能是 DNA或 RNA(但不可能同时兼有!)，因此 DNA不是完全通用的遗传物质。 7. Ct大小相关。 o1,2与基因组 8(CC复杂性相关。 01/2与基因组 9(非组蛋白染色体蛋白负责30nm纤丝高度有序的压缩。 10.大肠杆菌中，复制叉以每秒5O0个碱基对的速度向前移动，复制叉前的 DNA以大约 3000r,min的速度旋转。 11.“模板”或“反义” DNA链可定义为:模板链是被RNA聚合酶识别并合成一个互补的mRNA，这一 mRNA是蛋白质合成的模板。 .在DNA复制中，假定都从5’?3’同样方向读序时，新合成 DNA链中的核苷酸序列同模12 板链一样。 13.DNA的5’?3’合成意味着当在裸露3’-OH的基团中添加dNTP时，除去无机焦磷酸DNA链就会伸长。 14.在先导链上 DNA沿5’?3’方向合成，在后随链上则沿3’?5’方向合成。 15.如果 DNA沿3’?5’合成，那它则需以5’三磷酸或3’脱氧核苷三磷酸为末端的链作为前体。 16.大肠杆菌 DNA聚合酶缺失3’?5’校正外切核酸酶活性时会降低 DNA合成的速率但不影响它的可靠性。 17.复制叉上的单链结合蛋白通过覆盖碱基使DNA的两条单链分开，这样就避免了碱基配对 。 18.只要子链和亲本链中的一条或两条被甲基化，大肠杆菌中的错配校正系统就可以把它 们区别开来，但如果两条链都没有甲基化则不行。 .大肠杆菌、酵母和真核生物病毒DNA的新一轮复制是在一个特定的位点起始的，这个位19 点由几个短的序列构成，可用于结合起始蛋白复合体。 20.拓扑异构酶?之所以不需要ATP来断裂和重接 DNA链，是因为磷酸二酯键的能量被暂时贮存在酶活性位点的磷酸酪氨酸连接处。 21.酵母中的拓扑异构酶?突变体能够进行 DNA复制，但是在有丝分裂过程中它们的染色体不能分开。 22.靠依赖于DNA的DNA聚合酶所进行的 DNA复制要求有作为一个引发物的游离3’—OH的存在。游离的3’—OH可以通过以下三种途径获得:合成一个RNA引物、DNA自我引发的 115 或者一个末端蛋白通过磷酸二酯键共价结合到一个核苷酸。 23.当 DNA两条链的复制同时发生时，它是由一个酶复合物: DNA聚合酶?负责的真核生物的复制利用3个独立作用的 DNA聚合酶，Polα的一个拷贝(为了起始)和Po1δ的两个拷贝(DNA多聚体化，当MFl将RNA引发体移去之后填入)。 24.从oriλ开始的噬菌体复制的起始是被两个噬菌体蛋白 O和 P所控制的，在大肠杆菌E.coli中 O和 P是 DnaA和 DnaC蛋白的类似物。基于这种比较，O蛋白代表一个解旋酶而 P蛋白调节解旋酶和引发酶结合。 25(拓扑异构酶 ?和?可以使 DNA产生正向超螺旋。 26(拓扑异构酶? 解旋需要ATP酶。 27. RNA聚合酶 ?合成 DNA复制的RNA引物。 28(线粒体 DNA的复制需要使用 DNA引物。 29. λ噬菌体整合到大肠杆菌基因组上是由一个位点专一的拓扑异构酶(入整合酶)催化 的，它可以识别在两条染色体上短的特异 DNA序列。 30(在真核生物染色体 DNA复制期间，会形成链状 DNA。 31(所有已知的基因转变都需要一定量的 DNA合成。 32(根据不同物种同一蛋白质中氨基酸的不同来估计突变率往往较实际的突变率低，因为 一些突变体由于危及蛋白质功能，在选择压力下从种群中消失。 33(因为组蛋白 H4在所有物种中都是—样的，可以预期该蛋白基因在不同物种中也是一 样的。 34(DNA修复机制有很多种，但所有这些机制都依赖于二倍体染色体上两套遗传信息的存 在。 35.自发的脱膘呤作用和由尿嘧啶DNA糖基化酶切去一个已脱碱基的胞嘧啶都会产生可被无 膘呤嘧啶内切核酸酶作为底物识别的同样的中间产物。 36.DNA修复的第一步是由专用于修复过程的酶催化的，下面的步骤由 DNA代谢过程中的常 用酶催化。 37.大肠杆菌中 SOS反应的最主要作用是通过在原始 DNA损伤区附近导人补偿突变来提高 细胞存活率。 38.DNA中四个常用碱基自发脱氨基的产物，都能被识别出来。 39.在细菌细胞中，短片段修复是由损伤诱导的。相反，长片段修复是组成型的，且往往 涉及长约150O一9000bp损伤 DNA片段的替换。 40.真核生物中 DNA的修复没有原核生物重要，这是因为体细胞的二倍体特征。 41.一般性重组需要交换的双方都有一长段同源 DNA序列，而位点专一重组仅需要短而专 一的核苷酸序列。某些情况下，只需要交换双方中的一方具有该序列即可。 42.一般性重组包括 DNA片段的物理交换，该过程涉及 DNA骨架上磷酸二酯键的断裂 和重新形成。 43.RecA蛋白同时具有位点专一的单链切割的活性和将单链从双螺旋 DNA分子上脱离 的解旋酶的功能，但需要依赖于ATP活性。 44.大肠杆菌的单链结合蛋白通过与糖—磷酸骨架结合并使碱基暴露，从而解开单链上的 短发夹结构。 116 45.RecA蛋白同时与单链、双链 DNA结合，因此它能催化它们之间的联会。 46.交叉链互换包括交叉链和未交叉链，至少其中一条链的磷酸骨架断裂才可能使这个过 程逆转。 47.基因转变是真菌类偶然改变性别的方式;正常情况下，一次接合产生等量的雄性与雌 性孢子，但偶然也会出现1?3或3?1的比例。 48.当两个 DNA的突变片段相互间不能反式互补，则可以推测这两个突变影响了同一种功 能。这样的两个突变和每个不能反式互补的突变分为同一个互补群，并被认为是一个 独立遗传单位的一部分。这个遗传单位可能是一个顺反子，或者如果突变稳定地干扰 了转录过程，这可能是一个多顺反子转录单位。 49.编码区以外的突变不会导致细胞或生物体表型改变。 50.若一个二倍体酵母细胞中发生了一个错义突变，而这一突变将另外一个不同的氨基酸 引入了一个分解代谢酶的催化位点，从而使得这个酶可以利用别的底物。这就是所谓 的功能获得性突变。 51(因为 T4噬菌体至少编码30种参与基因组复制和转录的酶，它和寄主 DNA和RNA聚合 酶都是独立的，但它必须依赖寄主蛋白质的复制机制。 52.小的DNA病毒，如 SV40和噬φX174完全依赖寄主复制机制来复制它们的 DNA。 53. 负链病毒不包含编码蛋白的基因。 54(追踪有外壳病毒的一个生活周期就等于游历整个细胞。 55(当一个λ噬菌体侵染一个合适的大肠杆菌寄主细胞时，通常是裂解性侵染，释放出几 百个子代噬菌体;更少见的是，它会整合到寄主染色体中，产生带有原噬菌体λ染色 体的溶原菌。 56(通过从寄主细胞表面出芽生殖的病毒常因为出芽造成细胞表面改变而致癌。 57(一种把新病毒按 DNA或RNA分类的简易 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 是看它的生长是否受放线菌素 D的抑制。 放线菌素 D只阻遏依赖DNA的RNA合成，而对依赖RNA的复制酶无影响，如果病毒生长 受它抑制，那肯定是 DNA病毒。 58(大病毒比小病毒更有可能存在重叠基因，因为它们有更多的基因。 59(因为类病毒不编码任何蛋白但又能够复制并在植物中造成严重的疾病，所以非常特 殊。 60.负责λ噬菌体 DNA合成的酶是在裂解循环的晚期形成的。 61.溶源化是一个双链 DNA病毒的生活周期中的一种状态，是当病毒的基因组整合进一个 宿主细胞的基因组时形成的状态。 2.c?蛋白的稳定性是影响溶源和裂解循环之间开关的一个关键。 6 63.为了把噬菌体附着位点(attp)和在细菌染色体上的附着位点attB()结合重组起来，λ噬 菌体 DNA在感染大肠杆菌后靠末端cos位点退火成环。 64(下面哪些结构物能够诱导乳糖操纵子?哪些是β—半乳糖苷酶的底物? (a)β—l，4—半乳糖苷 (b)α—l，4—半乳糖苷 (c)β—1，6—半乳糖苷 (d)α—l，6—半乳糖苷 117 (e)上面既没有诱导物，也没有底物 65(下面哪些说法是正确的? (a)Lac A的突变体是半乳糖苷透性酶的缺陷 (b)在非诱导的情况下，每个细胞大约有4分子的β—半乳糖苷酶 (c)乳糖是一种安慰诱导物 (d)RNA聚合酶同操纵基因结合 (e)多顺反子 mRNA是协同调节的原因 (f) Lac阻遏物是一种由4个相同的亚基组成的四聚体 (g)腺苷酸环化酶将 cAMP降解成 AMP (h) CAP和 CRP蛋白是相同的 (i)-35和-10序列对于RNA聚合酶识别启动子都是很重要的 (j)色氨酸的合成受基因表达、阻遏、弱化作用和反馈抑制的控制 (k)Trp的引导 mRNA能够同时形成三个“茎—环”结构 (l)在转录终止子柄部的 A-T碱基对可以增强结构的稳定性 (m)真核生物和原核生物的转录和翻译都是偶联的 (n)在色氨酸浓度的控制下，核糖体停泊在 Trp引导区—串色氨酸密码子上，但并不 与之脱离 (o)Ara C蛋白既可作为激活蛋白，又可作为阻遏蛋白起作用 (p)Ara C的表达不受调控 66(转录的起始位点(stp)决定在模板链上嘧啶核苷酸的位置，在此形成第一个杂合的 RNA和 DNA碱基对。 67(反转录病毒侵染常常同时导致子代病毒的非致死释放和被侵染细胞内致癌的永久性基 因改变。 68(转座酶可以识别整合区周围足够多的序列，这样，转座子不整合到基因的中间，因为 破坏基因对细胞是致死的。 69(转座要求供体和受体位点之间有同源性。 70(TnA家族的转座子通常转移三种基因:转座酶、解离酶和氨苄抗性基因。 71(Tn10高水平表达转座酶。 72(水晰的基因组比人的基因组大。 73(高等真核生物的大部分 DNA是不编码蛋白质的。 74. 假基因通常与它们相似的基因位于相同的染色体上。 (在有丝分裂中，端粒对于染色体的正确分离是必要的。 75 76(大多数看家基因编码低丰度的 mRNA。 77(所有真核生物的基因都是通过对转录起始的控制进行调控的。 78(所有高等真核生物的启动子中都有TATA盒结构。 79(只有活性染色质转录的基因对 DNase ?敏感。 80. 内含子通常可以在相关基因的同一位置发现。 81(40,以上的 Drosophila ciril基因组is是由简单的7bp序列重复数百万次组成。 82(卫星 DNA在强选择压力下存在。 118 83(真核细胞中的RNA聚合酶仅在细胞核中有活性。 84. 在RNA的合成过程中，RNA链沿3’?5’方向延长。 85. 候选三磷酸核苷通过对生长中RNA链的α磷酸的亲和攻击加到链上。 86(核不均一RNA是mRNA和rRNA的前体而不是tRNA的前体。 87(密码子AUG专门起 mRNA分子编码区的终止作用。 Met的反88(tRNAf密码于是 TAC。 89. RNA聚合酶能以两个方向同启动子结合，并启动相邻基因的转录。但是，模板链的选择 由另外的蛋白因子确定。 90(细菌细胞用一种RNA聚合酶转录所有的RNA，而真核细胞则有三种不同的RNA聚合酶。 91. 转录因子具有独立的 DNA结合和转录激活结构域。 92.每个转录因子结合位点被单个转录因子识别。 93.纠正下列一段话中的错误: 在E. Coli中，通过RNA聚合酶同操纵基因的结合来起始转录。与转录起点碱基互 补 的dNTP同δ亚基结合，然后是第二个dNTP通过与第一个 dNTP形成2’?5’磷酸 二酯 键而结合上。当生成的RNA链约有12个核苷酸长度时， β’亚基脱离 DNA聚合酶，RN ,链在全酶的作用下继续延伸。当 DNA聚合酶在RNA链上遇到终止密码子时，转录作用 停止。 94. 在tRNA分子中普遍存在的修饰核苷酸是在掺入tRNA转录物结合前由 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 核苷酸共价 修饰而来。 95(如果tRNATyr加的反密码子发生单个碱基变化后成为丝氨酸的反密码子，被加入到无细 胞系统，所得的蛋白质在原来应为丝氨酸的位置都变成了酪氨酸。 96. 在肽链延伸的过程中，加入下一个氨基酸比加人氨酰 tRNA 更能激活每个氨酰tRNA间 的连接。 97(摇摆碱基位于密码子的第三位和反密码子的第一位。 98(核糖体小亚基最基本的功能是连接mRNA与tRNA，大亚基则催化肽键的形成。 99. 蛋白质合成时，每加人一个氨基酸要水解4个高能磷酸键(4个,密码子)，所消耗的总 能量比起 DNA转录(每加入一个核苷酸用两个高能磷酸键，6个,密码子)要少。 100(因为 AUG是蛋白质合成的起始密码子，所以甲硫氨酸只存在于蛋白质的 N末端。 101(通过延缓负载tRNA与核糖体结合以及它进一步应用于蛋白质合成的时间，可使与不 适当碱基配对的tRNA离开核糖体，提高蛋白质合成的可靠性。 102. 延伸因子eEF—1α帮助氨酰tRNA进入 A位点依赖于ATP内一个高能键的断裂。 103(三种RNA必须相互作用以起始及维持蛋白质的合成。 104(G-U碱基负责fMet-tRNA对GUG的识别。 105.限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源 DNA的修饰和对自身 DNA的 限制实现的。 106.限制性内切核酸酶在 DNA中的识别,切割位点的二级,三级结构也影响酶切效率。一 般来说，完全切割质粒或病毒 DNA，要比切割线状 DNA需要更多的酶，最高的需要20 倍。 107.如果限制性内切核酸酶的识别位点位于 DNA分子的末端，那么接近末端的程度也 119 影响切割，如Hpa?和Mbo ?要求识别序列之前至少有一个碱基对存在才能切割。 108.能够产生防御病毒侵染的限制性内切核酸酶的细菌，其本身的基因组中没有被该核酸 酶识别的序列。 109(限制性图谱与限制性片段长度多态性(RFLP)图谱的最显著的区别在于前者是一个物 理图谱而后者是一个连锁图。 110(用限制性内切核酸酶Hpa ?分别切割载体 DNA和供体 DNA后，可用E(coli DNA 连 接酶进行连接。 111(已知某一内切核酸酶在一环状 DNA上有3个切点，因此，用此酶切割该环状 DNA，可 得到3个片段。 112.迄今所发现的限制性内切核酸酶既能作用于双链 DNA，又能作用于单链 DNA。 113(基因工程中使用的?类限制性内切核酸酶不仅有内切核酸酶的活性，而且有甲基化 酶的活性。 114.DNA多态性就是限制性片段长度多态性。 115.用限制性内切核酸酶 ?切割质粒 pBR322后，再用外切核酸酶 ?进行系Pst,.coli 列缺失，可得到一系列大小不同的缺失突变体。 116.甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶的星活性的主要原 因之一，防止的办法是酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5,以下。 117.具有EcoR ?末端的外源片段只能以一个方向插入到EcoR ?末端的载体中。 18.从Eshe‎‎ K中分离的限制性内切核酸酶命名为K 。 1richia coliEco 119.同一种限制性内切核酸酶切割靶 DNA，得到的片段的两个末端都是相同的。 120.在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他的限制性 酶就不能切割了‘ 121.稀有酶是指那些识别序列很长又不常用的限制性内切核酸酶。 122.T4 DNA连接酶和E.coli连接酶都能催化平末端和粘性末端的连接。 123.T4 DNA连接酶和E.coli连接酶都能催化双链 DNA和单链 DNA的连接。 124.反转录酶能够以单链RNA或单链 DNA为模板，在引物的引发下合成一条互补的DNA链。 以 RNA为模板合成的 DNA是互补 DNA(complementaly DNA, cDNA)。若是以 DNA模板 合成 DNA，dNTP的掺人速度很低(约5个核苷酸,秒)，比 T7 DNA 聚合酶的合成速度差 不多低100倍。 125.以RNA为模板，用反转录酶可同时产生单链和双链的cDNA，双链 DNA是由自身引 物引 导合成。但这种自身引物引导的合成效率远低于外加寡核苷酸引物引导的合 成。 2+ Ca126.Ba131核酸酶(Ba131 nuclease)是依赖性的，在反应混合物中加入 EDTA便可抑制 它的活性。 127.λ外切核酸酶不能在双链 DNA的 gap和 nick处切割 DNA。 128.当一个 DNA结合蛋白同它识别的核苷酸序列结合以后，就保护了它们的磷酸二酯 键免遭切割，其结果，电泳胶上就有明显可见的空缺带(与对照相比)，这就是 DNA 足迹法。 +129.T4 DNA连接酶和E.coli连接酶作用时‎‎都需要ATP和NAD作为辅助因子。 32P标记130.多核苷酸激酶之所以能够用于 DNA片段的标记，是因为它能够将单个的的单核苷 120 酸加到每一 DNA链的5’端。 131.在反转录过程中，使用 AMV比使用 M-MLV可得到较多的产物。 132.真核生物可能有两种DNA连接酶，连接酶?和连接酶 ?都能在 DNA合成和连接中起 作用。 133.DNA聚合酶?有三种酶活性，其中3’?5’外切核酸酶的活性在较多的dNTP存在 下， 常被5’?3’合成酶的活性所掩盖。 134(用同一种酶切割载体和外源 DNA得到粘性末端后，为防止它们自身环化，要用 CIP将 它们脱磷酸。 135.λ外切核酸酶的作用产物可以作为末端转移酶的作用底物。 136.用外切酶?作系列缺失突变时，可以从突出的3’端开始。 137.nick和gap的含义是不同的，前者指 DNA的单链中有较小的缺失，后者仅是断开 了 一个磷酸二酯键。 138.迄今发现的质粒 DNA都是环状的。 139.线性质粒同环状质粒一样都不带有宿主必需的基因。 140.有 a、b、c三个质粒，因为 a和 b能够共存于一个细胞，a和 c也可共存于同一个细 胞，所以 b和 c一定能够共存于同一个细胞。 141.插入元件(IS)也是一种转座元件，它除了有转座酶基因外，还有附加基因。 142.如果两个不同的质粒可以稳定地共存于同一个细胞中，这两种质粒则属于同一个不亲 和群。 143.一个带有反向重复序列的双链 DNA经变性后，复性时其单链可形成发夹环。 144.能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。 145.任何一种质粒都可以用氯霉素扩增的方法，增加它的拷贝数。 146.只有完整的复制子才能进行独立复制，一个失去了复制起点的复制子不能进行独立复 制。 147(CsCl-EB密度梯度离心法纯化SC DNA原理是根据 EB可以较多地插入到 SC DNA 中， 因而沉降速度较快。 148(质粒 Co1El同 pSC101共整合后，得到重组质粒 pSC134，具有两个复制起点，这两个 起点在任何细胞中都是可以使用的。 149(pBR322可以用于粘性末端连接、平末端连接和同聚物接尾法连接，无论用哪种方法连 接，都可以用同一种酶回收外源片段。 150(所谓穿梭质粒载体是能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒，所用的复制起 点不同。 151.一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。 152. Co1El是唯一用作基因工程的自然质粒载体，它具有四环素抗性标记，因而很容易选 择。 153.某一染色体 DNA经内切酶Sal ?切割后，产生了若干个具有粘性末端的 DNA片段，将 这些片段分别在 T4 DNA连接酶的作用下自身连接成环，然后导人受体细胞，都可以进 行独立地复制。 154(如果细菌的某种表型特征在UV处理下丧失后不再恢复，这种表型有可能是质粒赋予 121 的。 155(基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。 156.代型载体(replacement vector)是指同一种限制性内切核酸酶在λDNA中具有两 个切 点。外源 DNA通过取代这两个切点间的片段被克隆。 157(现在最常用的 pUC载体是 pUC18，它的分子量小，具有多克隆位点和易于选择的分 子标记，并且是松弛型复制。另外，这种载体可在辅助质粒的帮助下合成单链 DNA。 158.噬菌粒(phagemid)pUC118,pUC119载体是集质粒和丝状噬菌体有利特征于一身 的载 体，既能合成单链 DNA，又能合成双链 DNA。 159.λ噬菌体 DNA和 M13单链噬菌体 DNA在成熟前的 DNA复制都是用滚环模型。 160.M13噬菌体每个世代裂解宿主后，可释放100个子代噬菌体。 161.以粘粒为载体的重组体虽然在平板上生长的速度不同，但是转化子中插入片段的扩增 量是相同的。 162.氯霉素扩增 DNA时，加氯霉素的时间是重要的，因为加得太早，菌数不够，加入时间 过迟，菌龄过老，容易自溶。 163(所谓引物就是同 DNA互补的一小段RNA分子。 164(脉冲凝胶电泳采用一个很强的电场来分离非常长的DNA分子，其原理在于迫使 DNA 分子根据长度的不同而具有不同的速度，并按大小顺序通过凝胶。 165(Agarose-EB电泳法分离纯化 CCC DNA原理是根据 EB可以较多地插入到 CCC DNA 中， 因而迁移速度较快。 166.如果 PCR的每一次循环都把上一次循环中合成的 DNA都加了一倍，那么，10个循环 就扩增了1000倍，20个循环就扩增了100万倍，30个循环就扩增了10亿倍。 167(PCR既能用于扩增任何天然存在的核苷酸序列，又能重新 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 任何天然核苷酸序列的 两个末端。因此，任意两个天然存在的 DNA序列都能快速有效的扩增，并拼接在一 起。 168(最有效的制备纯RNA的方法是让其在细胞中超表达，然后提纯。 169(大量制备已被克隆基因编码蛋白产物的常用方法是体外转录和翻译。 170.通过报告基因与来自于目的基因上游和下游各种 DNA片段的结合，研究基因的调控序 列。 171.温度敏感突变型是非常有用的，在这些突变型中，可以通过对温度的改变控制这些突 变体中异常表型的出现。 172(用人工合成的含有所需碱基变化的寡聚核苷酸，可以将特殊突变引入克隆的基因。 173(蛋白质的氨基酸序列中各种重要信号都可以通过短氨基酸序列同报告蛋白的融合进 行研究。 174(简并引物是根据已知 DNA序列设计的引物群。 175(在 DNA贮存液中加一滴三氯甲烷，可防止真菌的污染。 176(密码的偏爱性是指不同种属的生物对简并密码具有不同的使用频率。 177(插入到质粒 DNA中的 EB可以用正丁醇抽提除去。 178(碱法和煮沸法分离质粒 DNA的原理是不相同的。 179(酚法和碱法分离质粒 DNA都要用溶菌酶破壁，但碱法用的溶菌酶的浓度要高。 122 180(外源基因(或 DNA片段)插入到某一基因内的位点后，这个基因不再有任何功能。 181(用不同的产生粘性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源 DNA，得到的粘性 末端是不亲和的粘性末端。 182.基因组 DNA文库是含有某一生物中全部 DNA序列随机克隆的克隆群，而cDNA文库是含 有某一生物中所有表达基因随机克隆的克隆群。 183.cDNA克隆较之基因组克隆最重要的优越性就是它们含有一个基因的完整序列。 184(通过差示杂交后制备的 cDNA文库使克隆那些只在特定分化细胞中表达基因的机率大 为提高。 185(在染色体步移中，可通过 DNA测序知道已到达所感兴趣的基因。 186(一旦有了一套已知顺序的基因组克隆，通过从文库中获得覆盖目的突变基因所在基 因组区的所有克隆，就可以进行染色体步移。 187(根据遗传连锁作图把基因定位在基因组中是定位克隆的第一步，它为分离特定的人 的基因提供了一个直接而快速的方法。 188.人工感受态和自然感受态细胞都能吸收线性和环状单链 DNA。 189.人工导入基因和正常染色体基因间的同源重组，可以发生基因置换。 ———190.为了保证重组 DNA分子在受体细胞中能够稳定地独立存在下来,通常用rrem表型c 的细胞株作为受体菌。 191.线性 DNA片段被导人哺乳动物细胞后，在细胞内酶的作用下，很快相互连接成重复的 DNA大片段)并能在随机位点整合到染色体中。 192.不匹配的粘性末端是不能通过粘性末端连接的。 193.用限制性内切核酸酶切割载体、供体 DNA后，要加入 EDTA—SDS中止液使限制性内切 核酸酶失活，这样有利于重组连接。 194.限制性内切核酸酶Bgl?识别的序列为 A ?GATCTBam，H?识别的序列为G?GATCC，用 它们分别切割载体 DNA和供体 DNA，不必使酶失活，就可以直接通过粘性末端连接法 进行连接。 195.具有E.coR ?末端的外源片段只能以一个方向插E.co入到R ?末端的载体中。 196.不匹配的粘性末端可以通过部分填补后进行连接。 197.低丰度的mRNA不仅拷贝数少，而且种类也少。 198.同聚物接尾法构建重组体，不仅连接效率高，而且也很容易回收插入的片段 199.以λ噬菌体为载体的筛选方法比较简便，凡能形成噬菌斑的就一定是重组体。 200.核酸杂交探针就是带有放射性标记的 DNA分子。 201.Northern杂交中，为了防止RNA形成部分环状发夹结构，影响迁移率，所以要 用变 性缓冲液进行电泳。 202(探针的离体标记实际上是酶法标记。 203(切口移位法(nick translation)只能标记线性双链 DNA不能标记环状双链 DNA。 204(通过原位菌落杂交得到的阳性克隆即是重组体，但不能判断插入的外源基因是否进 行了表达。 205(尼龙膜(nylon membrane)是核酸杂交的一种固体支持物，具有同 DNA结合能力强、韧 性强，可反复洗脱使用，并且杂交信号本底低等优点，就是成本高。 123 206(如果 DNA序列的某种变异在群体中是稀有的，称为突变;若是普遍的，则称为多态 险。 207(用寡聚 DNA进行高度严紧的杂交可用于胎儿遗传病的诊断，可检测到因单个核苷酸变 化而造成的基因突变。 208.由于基因家族中成员之间是密切相关的，因此可以用其中一个成员作为探针进行高度 严紧的杂交来检测其他成员。 209(通过用化学标记法取代放射性标记法，并采用一种抗体来特异性地识别这种化学修 饰，使得原位杂交的分辨率大大提高。 210(在杂交之前先用凝胶电泳将粗提取物中的RNA或 DNA分子进行分离，假定杂交后只有 一种或少数几种大小的片段被探针杂交上了，就能肯定这种杂交是特异性的。 211(根据某一感兴趣蛋白质的序列、抗原性以及配基结合性质制备探针，可从 DNA文库中 筛选到相应的基因。 212.如果用其他的方法对某种蛋白质已进行过鉴定，那么要确定某一克隆是否含有该蛋白 编码基因就相当容易了。 213(用DNA探针进行杂交反应非常敏感并具有选择性，可用来测定某一特定 DNA序列在细 胞基因组中的拷贝数。 214(双重药物选择法富集哺乳动物细胞中稀有重组体的原理是:一种药物用于选择以任 意方式整合外源 DNA的细胞，第二种药物杀死带有随机整合 DNA的细胞。 215(就像对培养中的鼠胚性干细胞进行遗传操作获得突变鼠一样，用 DNA转染培养中的单 个植物细胞，能够创造转基因植物。 216(NC(硝酸纤维素膜)和尼龙膜都可作为电转移 DNA支持物。 217(单克隆抗体是淋巴细胞和瘤细胞杂交后形成的单个杂交瘤细胞经无性繁殖而产生的 特异性抗体。 218(用免疫化学法筛选重组体不需要外源基因的表达。 219(用 DNA探针同RNA 分子杂交在测定一已知基因在某一细胞中是否表达时是很有 用 的，但不能用于检测转录起始位点、终止位点或内含子的位置。 220. 核酸杂交的原理是根据 DNA分子间互补。 221. 突出的3’末端或凹缺的3’末端都可以用Klenow大片段酶进行末端标记。 222(用多核苷酸激酶进行5’末端标记前， DNA必须进行脱磷酸，否则无法标记。 223. X-gal显色反应的基本原理是使载体上与受体互补的α肽失活。 224(Norhern印迹和 Southern印迹的基本原理是一样的，都是用于检测结构基因的表达。 225. 在液相—液相和液相—固相杂交中，它们的杂交效率都是一样的。 四、简答题 1.为什么只有 DNA适合作为遗传物质? 2.在体内，rRNA和 tRNA都具有代谢的稳定性，而 mRNA的寿命却很短,原因何在? 3.碱基对间在生化和信息方面有什么区别? 4.在何种情况下有可能预测某一给定的核苷酸链中“G”的百分含量? 5.真核基因组的哪些参数影响 Ct值? o1,2 124 6.请问哪些条件可促使 DNA复性(退火)? 7.为什么 DNA双螺旋中维持特定的沟很重要? 1)8.大肠杆菌染色体的分子量大约是2.5×109Da，核苷酸的平‎‎均分子量是330Da，两个邻近核苷酸对之间的距离是0.34mn;双螺旋每一转的高度(即螺距)是3.4nm，请问: (l)该分子有多长? (2)该 DNA有多少转? 9.曾经有一段时间认为，DNA无论来源如何，都是4个核甘酸的 规则 编码规则下载淘宝规则下载天猫规则下载麻将竞赛规则pdf麻将竞赛规则pdf 重复排列(如， ATCG(ATCG(ATCG(ATCG„)，所以 DNA缺乏作为遗传物质的特异性。第一个直接推翻该四核苷酸定理的证据是什么? 10.为什么在 DNA中通常只发现 A—T和 C—G碱基配对? 11.列出最先证实是 DNA(或RNA)而不是蛋白质是遗传物质的一些证据。 12.什么是连锁群?举一个属于连锁基因座的例子。 13.什么是顺反子?用“互补”和“等位基因”说明“基因”这个概念。 14.对于所有具有催化能力的内含子，金属离子很重要。请举例说明金属离子是如何作用的。 15.列出真核生物mRNA与原核生物mRNA的区别。 16.列出各种tRNA所有相同的反应及个别 tRNA的特有反应。 17.为什么真核生物核糖体RNA基因具有很多拷贝? 18.为什么说信使RNA的命名源自对真核基因表达的研究，比说源自对原核基因表达的研究更为恰当? 19.说明为什么mRNA仅占细胞RNA总量的一小部分(3,一5,)。 20.为何rRNA和tRNA分子比 mRNA稳定? 21.起始tRNA具有哪两种与其他 tRNA不同的特性? 22.区别rRNA和mRNA在翻译中的作用。 23.氨基酸分子如何与正确的tRNA分子连接? 24.简要说明证明信使的存在及其本质为RNA的证据。 25.列举4种天然存在的具有催化活性的RNA。 26.?型内含子发生改变后，可以产生其他酶的活性吗?如果可以，是哪些活性?这意味着 ?型内含子的催化中心有什么特点? 27(某些自剪接的内含子具有可读框，它们编码何种蛋白?这与内含子的移动有什么关系? 28.描述 Meselson-Stahl试验，说明这一实验加深我们对遗传理解的重要性。 29.请列举可以在线性染色体的末端建立线性复制的三种方式。 30.为什么一些细菌完成分裂的时间比细菌基因组的复制所需的时间要少?为什么在选择营 养条件下，E. coli中可以存在多叉的染色体或多达4个以上的开环染色体拷贝， 而正 常情况下染色体是单拷贝的? 31.在 DNA聚合酶?催化新链合成以前发生了什么反应? 32.DNA复制起始过程如何受DNA甲基化状态影响? 33.请指出在 oriC或Xф型起点起始的 DNA复制之间存在的重要差异。 34.大肠杆菌被 T2噬菌体感染，当它的 DNA复制开始后提取噬菌体的 DNA，发现一些RNA 125 与 DNA紧紧结合在一起，为什么? 35.DNA连接酶对于 DNA的复制是很重要的，但RNA的合成一般却不需要连接酶。解释这个现象的原因。 36.曾经认为 DNA的复制是全保留复制，每个双螺旋分子都作为新的子代双螺旋分子的模板。如果真是这样，在Meselson和 Stahl的实验中他们将得到什么结果? 37.描述 Matthew和Franklin所做的证明 DNA半保留复制的实验。 38.解释在DNA复制过程中，后随链是怎样合成的。 39(描述滚环复制过程及其特征。 40.假如发生了碱基对的错配会产生什么表型，它们怎样被修复? 41.为什么 DNA的甲基化状态可以为复制的调节和 DNA的修复所利用? 42.错配修复的方向可以怎样被调节(突变型到野生型或野生型到突变型)? 43.RecA蛋白是怎样调节 SOS反应的? 44.以图4.1A为例，画出图4.1B所示分子同源区域交叉重组的产物，图中用一条单线表示 DNA双螺旋，同源重组的靶位点用箭头标出。 图4.1 各种重组的底物 45.图4.2所示为两条同源的亲代双螺旋和两套可能的重组产物。请画图表示两亲代双螺旋间可以产生指定重组产物的 Holliday连接，在每条链的左端标明 Holliday连接的3’或5’端，这样亲代和重组双螺旋间的关系就比较清楚。请指明为了产生每套重组产物哪些链应被切去。最后，画出经过一轮 DNA复制后的重组产物。 126 图4.2 亲代与重组的双螺旋 46.为什么基因内互补只发生在:(1)某一基因座的等位基因间;(2)这些基因座的特殊等位基因对间? 47.有很多突变对于野生型基因是隐性的，也就是说，在一个含有突变型和野生型基因二倍体细胞中，野生型的特性能够得到表达。请根据对突变过程的认识解释这一事实。对于说明为什么有些突变是显性的，有何见解? 48.为了选择下面两种突变型，应对只含有葡萄糖、硫酸铵以及无机离子的基本培养基作何调整? — (1) ，leu亮氨酸营养缺陷型; — (3) gal，不能以半乳糖作为唯一碳源的突变型。 49.写出利用突变研究以下问题的步骤: (l)氨基酸 X的代谢途径; (2)E(coli中细胞分裂的控制。 50.在工业微生物菌种的选育中，人们喜欢用诱变的方法筛选解除了酶合成阻遏的突变 株，而不要解除了酶活性反馈抑制的突变株。请解释原因。 51.为什么一个基因座的正向突变发生的频率要比回复突变高? 52.一个基因间阻遏物突变怎样阻遏了一个错义突变? 53.为什么吖啶类染料诱导的突变较碱基类似物诱导的突变对生物体更有害? 54.羟胺对游离噬菌体和转化 DNA都是高度特异的致变剂。它只与 DNA中的C反应，使之转变成偶尔可与 A错配的形式。 (1)羟胺诱导的碱基替代是什么? (2)推测羟胺是否可回复自身诱导的突变? (3)羟胺可以回复5—溴尿嘧啶诱导的突变吗? (4)5—溴尿嘧啶可以回复羟胺诱导的突变吗? 55.在下列哪些基因中你可以分离到温度敏感突变和琥珀突变? (l) lacO;(2) lacZ; (3) lacP;(4) lacI 56.区别反向突变、回复突变和第二位点回复突变。 57.指出突变频率和突变率的区别。 58.简述大肠杆菌中的增变基因。 59.简述怎样利用化学诱变剂在细菌中的诱变来检测它们致癌作用。 127 60.简述 Muller—5技术，并说明如何利用它测得 X射线对果蝇突变频率的影响。 61.列举几种具以下特征突变:(1)不能合成特殊多肽;(2)组成型合成多肽。 62.突变能影响高等真核生物结构基因表达的几个水平?并指出每种突变最明显的分子表型。 63.当E.coli菌株 K同时被两个特异的 T4噬菌体 r?突变体所感染时，感染细胞裂解并释放出正常数量的噬菌体后代。这些后代是重组的结果还是互补作用的结果?应怎 样辨别? 64.在E.coli中， A和 B基因座相隔了大约5,的基因组，另一对标记 C和 D间隔1,的基因组。哪对能被(1)共转化;(2)共转导? 65.当一个烈性噬菌体的所有基因全部表达时，如果不对转录进行时序性调控，将出现 什么问题? 66.为什么λ噬菌体感染产生的溶源菌通常对其他的λ噬菌体的感染有免疫? 67.请预测具有下列突变的λ噬菌体感染细菌的表型。并说明原因: (1)产生一个抗蛋白酶的λ c?蛋白的突变。 (2)具有阻止蛋白结合的λOR2的突变。 (3)使λN基因失去作用的突变。 (4)编码λ c I蛋白的基因突变。 68(鉴定化合物的致癌性的一个通用实验是爱姆斯试验，通过营养缺陷型菌的回复突变 性。用人噬菌体和计一个实验使之能用于致癌物的检测。 确定其致癌E.coli设 69(为什么像流感病毒这样的RNA 病毒的生命周期，有力地支持了以下这一论点:与其说 病毒是生命有机体，不如说它是“寄生的遗传因子”。 70.大肠杆菌噬菌体 T2的染色体是一个线性 DNA分子，它的两端都有冗余并且可作循 环变换。解释冗余的含义并说明这些分子是怎样产生的。 71.烈性噬菌体和温和噬菌体的区别是什么? 72.从噬菌体 MS2中提取出来的裸露染色体可以感染大肠杆菌的原生质球(去除胞壁的细 菌)，这会产生和具感染能力的噬菌体一样的噬菌体颗粒。如果染色体先用RNA酶处 理，就会失去感染能力;另外，如果标记感染的RNA，在子代中不出现标记。解释这些 现象。 73.从λ噬菌体中提取的 DNA用两种只攻击单链 DNA的外切核酸酶处理。外切核酸酶 A 只从突出的5’端消化 DNA，而外切核酸酶 B只攻击自由的3’端。这种处理对λ噬菌 体 DNA的生物活性有什么影响? (比较真核生物与原核生物转录起始的第一步有什么个同。 74 75(转录涉及模板链和编码链的分离，解释在转录中单链 DNA是怎样被保护的。 76(概括说明ζ因子对启动子调节的辅助功能。 77(什么是增效与减效突变? 78(细菌促旋酶突变通常是致死的，但是促旋酶,拓扑异构酶?突变却可以成活，其原何 在? 79(解释因子是怎样选择专一性启动子共有序列而启动不同基因表达的(考虑对环境压力 的应答)。 128 5480( rpoN基因编码ζ因子:ζ，它具有不同于已知原核生物的因子的特征。请与E. coli 70因子:ζ(RpoD)作比较讨论这些特征。 的 81(在原核生物中，核心酶与 DNA的松散结合和紧密结合之间存在—种平衡，为什么这比 核心多聚酶自身形成游离与结合平衡更有利? 82(正调控和负调控的主要不同是什么? 83(区别(1)启动子增效突变与启动子减效突变;(2)上游序列和下游序列。 84(解释为什么操纵子和启动子是反式隐性、顺式显性的，而编码阻碍蛋白的基因既是反 式显性又是顺式显性。 85(为什么只有 DNA双螺旋中的一条链能被正常的转录? 86(哪三个序列对原核生物mRNA的精确转录是必不可少的? 87(说明因 RNA聚合酶—启动子不同的相互作用如何导致不同基因的转录。 88(原核生物的核糖体 RNA和 tRNA的相对较稳定并且半衰期长，而 mRNA却不稳定，很快 被降解，请解释这种稳定性的差异。 89(列举两种受调控蛋白控制的、与氨基酸的生物合成有关的操纵子。 90(什么是安慰诱导物? 91(葡萄糖是如何影响涉及糖代谢的操纵子(葡萄糖敏感型操纵子)的表达? 92(在大多数细菌操纵子中，结构基因通常紧靠在一起并由单个操纵序列—启动子区调 控，而在一些例子中结构基因分散在染色体上。请问这些基因是如何以简单的方式达 到协同调节的。 93. 反转录病毒与反转录转座子有什么不同? 94. gag和pol基因的蛋白产物是‎‎怎样生成的? mRNA编码的 Env蛋白是怎样生成的? 95. 蛋白酶为什么对反转录病毒生活史很重要? 96. 列出转化病毒正链RNA掺入到宿主双链 DNA的详细过程。 97. 噬菌体整合到宿主基因组后，4,6个宿主 DNA的核苷酸被复制，这是为什么?这与转座 子插入新位点有何相似之处?另外，两个核苷酸从5’U3的5’和3’被切除，这意味着 遗传信息从反转录病毒中被丢失吗? 98(反转录病毒怎样获得像onc基因这样的细胞‎‎基因?获得此类基因会对反转录病毒基 因产生影响吗?一个反转录病毒怎样才会丢失如pol 和 env这样的重要的基‎‎因而复 制? 99(描述酵母 Ty元件的结构。它与反转录病毒有何相似之处?为什么它不形成感染粒子? 100(你如何证明 Ty元件在转座时经历了一个RNA中间体? 101(FB元件与copia因子有何不同? 102(列出病毒和非病毒超家族反转录转座子之间的4种差异。 103(为什么说 Alu元件可能作为 DNA复制的起点?有什么理由不支持这种假说呢? 104(描述两种转座子引起基因组重排的方式。 105( IS元件整合到靶位点时会发生什么? 106(一个复合转座子和一个 IS元件之间的关系是什么? 107(列出一个转座子插入到一个新位点所要求的步骤。 108(当(l)DNA在两个定向重复之间(2)DNA在两个反向重复之间发生重组的效应各是什么? 129 109(在什么过程中会形成一个共整合体?它的结构是什么? 110(Tn10元件只有在自己的转座酶基因具有活性时发生转座(与利用基因组中 Tn10元件表 达的转座酶的情况正好相反)，这种偏爱的原因是什么? 111(什么是杂种不育?是什么引起的? 112(即使不携带癌基因，反转录病毒依然会导致癌变转化。列举这种现象发生的三种方 式。 113(简述大肠杆菌的插入序列，并指出它们对自发突变的重要性。 114(比较基因组的大小和基因组复杂性的不同: —个基因组有两个序列，一个是 A，另—个是 B，各将2000bP长。其中—个是由40 0bp的序列重复5次而成，另一个则由50bp的序列重复40次而成，问: (1)这个基因组的大小怎样? (2)这个基因组的复杂性如何? 115. 一个基因如何产生两种不同类型的mRNA分子? 116. 在一个克隆基因的分析中发现:—个含有转录位点上游3.8kb DNA的克隆，其 mRNA 直接转录活性比仅含有3.1kb上游 DNA的克隆的转录活性大50倍。这表明了什么? 117(被加工的假基因与其他假基因有哪些不同?它是如何产生的, 118(非转录间隔区与转录间隔区分别位于 rRNA重复的什么位置?转录间隔区与内含子 有何区别? 119(请描述 C值矛盾，并举一个例说明。 120(在酵母基因中，其生活必需基因占多大比例?为什么有些基因可能是不必要的? 121(酵母mRNA的大小一般与基因的大小相—致。而哺乳动物 mRNA比对应的基因明显小。 为什么? 122(在一个基因复制后，外显子发生突变的机率比内含子小。但是，所有 DNA的突变率是 相同的。请解释原因。 123(什么证据表明外显子与蛋白质的功能结构域相一致?这一证据如何支持外显子改组 (exon shuffling)假说? 124(为什么卫星 DNA在密度梯度离心时会形成一个清晰的峰? 125. 为什么基因组 DNA在用限制性内切核酸酶消化时，哺乳类的卫星 DNA会产生特 异 的带? 126(举例说明什么是梯级重复，这样的序列是如何产生的? 127(跳跃复制的结果是什么? 128(重复序列并不是在选择压力下存在，因此能快速积累突变。这些特性表明重复序列 相互间应存在很大的不同，但事实并不是这样的。请举例说明。 129(哪些细胞器带有自身基因组?为什么这些细胞器带有自身的基因组? 130(线粒体 DNA的突变率与细胞核 DNA突变率有什么不同?为什么? 131(人线粒体 DNA的哪些特征表明了其基因组的组织方式具有经济性? 132( RNA分子能被运到细胞器中吗? 133(什么证据表明细胞器与原核生物关系比真核生物关系密切? —134(酵母 rho小菌落突变株的线粒体DNA发生了什么变化? 130 135(除了自身免疫疾病，机体如何实现不对“自己”产生免疫? 136. 简述重链免疫球蛋白基因重排的步骤。 137(列举产生免疫多样性的途径。 138(当J区与 V区发生重排后，其5’端的命运如何?3’端呢? 139. 假设免疫球蛋白是由基因组中完整的基因编码，而不是多个片段组装而成，那么人 体识别百万个不同的抗原需要多少个基因参与免疫反应?这些基因占人基因组的多 大比率? 140(地中海贫血症是一类因α和β珠蛋白合成降低而导致的疾病，什么类型的 DNA重排 能引发这些疾病? 141(列举一个已知的 DNA序列编码一种以上蛋白质的三种方法。 142(哺乳动物中，从母亲与父亲遗传而来的基因是差异表达的，这种现象的理论基础是 什么? 143(简述 T—DNA转化所需的细菌及质粒基因。 144(氨甲蝶呤对哺乳动物细胞有何作用?细胞是如何对这种药物产生抗性的?其中稳定 和不稳定抗性有什么不同? 145(一个tRNA基因的启动子序列突变将会分别对(l)基因产物和(2)细胞或生物体的表型有 什么影响? 146(列举原核生物同真核生物转录的差异。 147(增强子具有哪些特点? 148(哪些转录因子含有 TBP?为什么它们被称为定位因子?请用一个模型解释为什么所 有 三种RNA聚合酶都能与 TBP发生作用? 149(什么是转录起始前复合体? 150(RNA聚合酶的内部启动子位于起始位点下游50个核苷酸的位置，它是如何被定位并正 确起始转录的? 151(对带有内部启动子的RNA聚合酶?基因有什么样的编码限制因素? 152(当一段活性转录 DNA受损时，模板首先被修复。请用一个模型解释这一现象。 153(真核生物中，基因的表达受不同水平的调控，请列举其中3种。 154(甾醇类转录因子与锌指蛋白类转录因子的区别是什么? 155(亮氨酸拉链蛋白所识别的 DNA有何特点?如何理解亮氨酸拉链转录因子的二聚体结构 同识别位点的关系? 156(虽然同源异型蛋白与锌指蛋白差别很大，但是它们识别 DNA序列的结构元件相 似的，这个元件是什么? 157(协同控制(coordinate control)下的基因是如何被同时激活的? 158(列出调控转录因子被激活的7种途径，并各举一例。 159(许多转录因子是细胞原癌基因的产物，为什么突变的转录因子可能导致癌变? 160(转录因子能够与装配成核小体的 DNA序列结合吗? 161(有两个模型可以解释染色质中的基因是如何被转录的。优先模型(preemptive model)中，转录因子和RNA聚合酶是如何与启动子结合的?为什么在动态模型中需要 ATP? 131 162(为什么酵母SWI与SNF基因的突变会影响不同靶基因的转录? 163(一般认为，染色体中具有多个调控基因表达的结构域。每个结构域中可以找到哪些 功能位点，它们的作用如何? 164(MyoD是一种 bHLH蛋白，对肌肉细胞的发育很重要，它的活性是如何被调控的? 165(酵母 U6 sRNA基因有一个TATA盒位于上游，在基因内有一个弱的 A盒，基因下游的 远端还有一个保守的 B盒。体外实验时，RNA聚合酶?和?都可以转录这个基因，但体 内实验发现只有RNA聚合酶?可以转录它。如何确定该基因启动子的聚合酶特异性? 166(举例说明单链核酸中形成茎环结构的重要性。 167(用负超螺旋环状 DNA样品进行体外转录实验。但是预实验中并没有获得满意的结 果，试讨论改进实验的可行方法。 168(组蛋白 H2A基因在所有细胞中都进行表达，而免疫球蛋白基因只在淋巴样细胞中表 达。两类基因的启动子都含有转录因子 Oct-1的结合位点， Oct-1也存在于这两类细 胞中，但为什么免疫球蛋白只在淋巴样细胞中表达? 169(RNA聚合酶?起始转录后，起始复合物必须转变为延伸复合物。因此聚合酶复合 物 必须解旋一小段 DNA。在线性 DNA上，解旋需要ATP， TF?E， TF?H和解旋酶活性。 然而，超螺旋 DNA的转录并不需要这些因子。请解释这一现象。 170(RNA聚合酶?特异性地转录小分子RNA，但为什么不转录5.8S rRNA? 171(当剪接的分支位点被移到内含子内的另一个位置，其活性将会消失。相反，正确位 置附近隐藏的一个分支位点被激活。请作出解释。 172(请列举剪接体组装过程中的各个步骤，其中哪一个复合物是具有活性的剪接体? 173( Ul SnRNP与5’剪接位点间作用的基础是什么?如何证明? 174(列举前体mRNA剪接过程中发生的6种RNA-RNA相互作用? 175(通过遗传筛选，在酵母中分离得到许多与前体mRNA剪接有关的基因。其中几个基因 编码RNA解旋酶。如何解释前体mRNA的剪接需要多个RNA解旋酶?这些酶可能在哪一 步反应中起作用? 176(前体mRNA剪接体的催化中心是什么?它是如何形成的?有什么证据可以证明这 个 模型? 177(据说前体mRNA的剪接是从?型剪接进化而来的。有什么证据可以证明这一点?是如何 发生的?这种进化为什么对生物体有利? 178(可变剪接如何控制果蝇中的性别分化? 179(比较RNA聚合酶 ?、?、?催化的转录终止过程和转录产物3’端的形成。 180(组蛋白mRNA3’端的加工需要什么样的RNA结构?如何证明所涉及的是RNA的二级结构 而不是初级结构?在其他反应中会形成类似的结构吗? 181(为什么把同样的第一外显子(SL外显子)加在所有mRNA上对锥虫是有利的? 182(如何确定在一个多内含子基因的剪接过程中，内含子被切除的顺序? 183(为什么mRNA的翻译起始密码子的上游必须含有不被翻译的核糖核苷酸? 184(在RNA编辑中，向导RNA(gRNA)的作用是什么?它的哪些部分分别与:(1)编辑前mRNA; (2)编辑后的前体 mRNA互补? 185(指出下列序列中的3’剪接位点: 132 5’—ACGUACUAACAUUCUAUUCCUUAAG/UUCAUAAGUUGAGUC—3’ 如果3’剪接位点的保守序列发生突变，附近的一个“隐藏”3’剪接位点通常取而代之 。这个位点在哪里?这将对该前体mRNA所编码的蛋白产生什么影响? 186(既然真核rRNA的 poly(A)尾不是由 DNA编码的，为什么能将它准确地加到3’末端 上呢? 187. 解释什么是“套索结构”，在内含子套索中的磷酸二酯键有什么特别之处? 188(哪一种真核生物RNA不需要加工? 189(为什么剪接是一个精确的过程? 191. 如果剪接发生在一个内含子的 GU序列与相邻内含子的AG序列间，会有什么结果? 192( N—甲酰甲硫氨酸—tRNA的功能是什么? 193. 解释核糖体肽基转移反应。 194(简述真核细胞中翻译终止的过程。 195(真核与原核核糖体的主要区别是什么? 196(简述真核与原核细胞中翻译起始的主要区别。 197(氨酰tRNA合成酶的功能是什么? 198(有两个系统发育上十分接近的物种，它们染色体中的(G十C)%含量不同， A株(G+C) 含量为55,而 B株是68,。同源及异源转化,重组实验表明:来自(G+C),低的DNA 易于转化入(G十C),高的生物体/基因组中，反之则不然。请说明原因。 根据翻译过程所涉及的各个步骤，设计出至少六种抑制翻译的方案。 199( 200(根据遗传密码字典，将mRNA序列5’-AUGUUCCAGAGCACGGGCCCUAAA-3’翻译成多肽，假 定翻译从5’端的 AUG开始。如果: (1) C改成 G; (2) C改成 A; (3) C被缺失。 上述变化对多肽有何影响? 201(在大肠杆菌的一个无细胞蛋白质合成系统中，耗尽内源 mRNA后与 poly(AG)的随机多 聚体共温育，其中 A?G=3?1。预测何种氨基酸能够掺人到多肽中，以及它们的相对 掺入频率。 202(为什么说翻译后氨基酸的化学修饰与蛋白质总体构象的形成有关? 203(说明氨基酸残基的磷酸化怎样调节蛋白质的活性? 204(比较并指出O-连接和N-连接合成途径的异同。 205(为什么大多数移码突变导致多肽链的提前终止? 206(为什么说基因工程技术是60年代末70年代初发展起来的? 207(重组 DNA的含义是什么? 208(如何理解基因工程的两个特点? 209(在 Cohen构建有生物功能重组体的第一步实验中，用EcoR ?切割了 R6—5质粒，然 后转化正E.coliC600，在卡那霉素抗性平板上筛选到了 pSC102，它是由 R6—5的三 个E.coR ?片段组成，请推测这个质粒具有什么遗传特性: 210(什么是动物乳腺生物反应器? 133 211(现分离到,82噬菌体的一个突变型，它同野生型的噬菌斑相当不同，并已分离到这 两种噬菌体的 DNA，请设计一个实验，初步鉴定是点突变、插人突变还是缺失突变? 212(说明 Sanger DNA测序法的原理。 213(在酶切反应缓冲液中加入 BSA的目的是什么?机理是什么? 214( Fredrick和 McClarin等用一个由13个碱基对的 DNA片段与EcoR ?反应，然后分离 到酶和 DNA共结晶的复合物，通过 X射线分析发现了什么? 215. 有些噬菌体和质粒常常编码一些抗限制性酶的蛋白以中和宿主的限制系统。你认为 噬菌体和质粒还有哪些可能的方式避免宿主的限制作用? 216(某学生在用EcoR ?切割外源片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因? 217(在序列5’—CGAACATATGGAGT-3’中含有一个6bp的 ?类限制性内切核酸酶的识别序 列，该位点的序列可能是什么? 218(下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是?类酶的识另别序列: GAATCG，AAATTT， GATATC，ACGGCA?为什么? 219(用连接酶将 3AI(?GATC)切割的 DNA与经H?(G?GATCC)切割的DNA连接起来SauBam 后，能够被BamH ?切割的机率有多大(用百分比表示)? 220(用Klenow酶填补的办法可使5’粘性末端转变成平末端。这种方法常使 DNA上的 某 些限制酶的识别位点消失。请问，对于下列限制酶，用这种方法处理会不会使它们的 识别序列都消失?BamH (G ? GATCC);Taq ?(T ? CGA)，BssH ?(G? CGCGC)。 请推测细菌的染色体上是否会有编码识别8个碱基的内切酶?怎样验证? 221( 222(当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施?为 什么? 223(按适当的顺序，列出将一种mRNA的 cDNA克隆到表达载体所用到的酶。 224(为什么反转录酶在聚合反应中会出错? M225(什么是测序酶(sequenaseT)? 226. 什么是 S1核酸酶作图(S1 nuclease mapping)? 227. 基因工程中，为什么不喜欢用 BAP来脱去 DNA的5’端的磷酸基团? 228(RNase A和RNase H在催化活性和应用上有何不同? 229(切口移位(nick translation)标记 DNA前，用 DNase ?处理 DNA时，应注意什么? 230(核酸酶与外切核酸酶?用于系列缺失突变有什么不同? 231(YAC载体具有什么样的功能性 DNA序列?为什么在克隆大片段时，YAC具有优越性? 232(列举质粒载体必须具备的4个基本特性。 233(什么叫穿梭载体? 234(说明减少质粒和噬菌体载体上某种酶的识别位点的方法和原理。 235(虽然质粒的带动转移给质粒载体的安全性带来一定的困难，但是通过带动转移将质 粒转移到特定的受体菌中也是基因工程中常用的实验技术。请举一例说明之。 ——236(为什么来自 Hfr× F的重组体几乎总是 F? 237(解释为什么不同的 Hfr菌株具有不同的转移起点和方向? gal+238(怎样从一个 E(coli的 Hfr菌株中分离到一个 F’的菌株? 239(你已经分离了一个新的 F’因子，怎样用最简便的方法知道最初的 F因子的部分 DNA 134 已经被切除，并被一个外源 DNA(也就是细菌 DNA)所替代? 240(你能用哪一种基因转移的方法确定 (1)色体上一个新发现的基因座在其染色体上的位置; E(coli染 (2)一个新分离的突变在基因内的位置。 +—241(用加有注释的图表说明 F质粒是怎样从一个 F细胞转移到 F细胞。并简要说明转 移复制如何不同于营养体的复制。 242(在转导过程中，通常需要把受体菌和在供体中生长的噬菌体悬浮液分别铺在选择性 培养基上，为什么? 243(如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体? 244(用sal?切割从噬菌体 J2分离的 DNA时，得到8个片段，分别是:1.3、2.8、3.6、 5.3、7.4、7.6、8.1和 11(4kb。但是，用Sal ?切割从被感染的寄主细胞中分离到 的 J2噬菌体 DNA时，只得到7个片段，分别是:1.3、2.8、7.4、7.6、8.1、8.9和 11.4kb，根据这些结果，您得到哪些信息? 245(在c?基因正常时为什么也会出现浑浊的噬菌斑?不正常则是清亮的噬菌斑? 246(λ噬菌体 DNA被包装到噬菌体的头部，需要哪些基本条件?为什么? 247( PCR反应包括引物与 DNA模板链间的解链与复性。讨论循环温度范围对引物—DNA双 螺旋稳定性的影响及对 PCR产率的影响。 248( Sanger的双脱氧法测序的原理。 分离DNA时，为什么要在缓冲液中加入一定浓度的 EDTA和蔗糖? 249( 250( PCR的基本原理是什么?用 PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息? 251( 说明合成接头在基因工程中的主要作用。 252( 从细菌中分离总 DNA，应采取哪些指施获得高分子量的 DNA? 253. 用酚抽提蛋白质时，离心后，为什么蛋白质总是会停留在水相和酚相之间? 254. 分离 pBR322 DNA可考虑用氯霉素扩增，分离 pUC18质粒 DNA则不必用氯霉素扩增， 为什么? 255(溶菌酶是破碎细菌细胞的有效方法。但有些细菌的孢子对溶菌酶不敏感，应该如何 处理? 256(假定你从粘质沙雷氏菌中克隆了一个基因，并推测可能是依赖于锌的金属蛋白酶， 因为它含有两个组氨酸和一个谷氨酸与锌形成锌指结构。请你设计一个方案，改变其 中一个组氨酸看看是否改变蛋白酶的活性? 257(你打算扩增下图所示的两段序列之间的 DNA，请从所列出的引物中选出合适的一 对。 5’-GACCTGTGGAAGC-----CATACGGGATTG-3’ 3’-CTGGACACCTTCG-----GTATGCCCTAAC-5’ 引物 1 引物2 5’-GACCTGTGGAAGC 5’-CATACGGGATTG 5’-CTGGACACCTTCG 5’-GTATGCCCTAAC 5’-CGAAGGTGTCCAG 5’-GTTAGGGCATAC 5’-GCTTCCACAGGTC 5’-CAATCCCGTATG 135 258. cDNA克隆与基因组克隆有何不同? 259(怎样将一个平末端 DNA片段插入到EcoR ?限制位点中去? 260(有哪些可能的原因使一个基因在 DNA库中丢失? 261(简述以粘粒为载体构建基因文库的原理。 262(一个双链 DNA分子(为5’突出端)可采用哪些方法使之加上 dA100,120的尾巴? 263(酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在，必须有哪些基本的结构? 264(何谓YAC?主要特性是什么? 265. Muller的 PCR反应同大肠杆菌体内的 DNA复制有哪些不同?你认为根本的差别在哪 里? 266(在构建 CDNA文库时，为什么常用GC接尾而不用 AT接尾法连接? 267(用限制性内切核酸酶切割 DNA后，经电泳检查，发现有拖尾现象，其可能的原因是 什么? 268(欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核生物(如iEcol助中进行‎‎表达，克隆时 应注意哪些问题? —269(假定你分离到一个Ecoli的 Thy突变体，并推测有可能是ThyA基因突变。请设计一 个方案用 PCR从染色体 DNA扩增突变的ThyA基因，测定突变的序列。(注:E.coli 野 生型的ThyA基因的序列是已知的) 270. 点印迹与 Southern印迹相比，有何优点和缺点? Southern印迹分析，并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案，下面一步骤271(你在做 是用 NaOH溶液浸泡凝胶，使 DNA变性为单链。为了节省时间，你略过了这一步，直 接将 DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上。然后用标记探针杂交，最后发现放射自显影 片是空白。错在哪里? 272(切口移位(nick translation)标记探针的主要步骤有哪些? 273(插人失活和插入表达法筛选重组体的主要差别是什么? 274(一个携带有氨苄和卡那霉素抗性基因的质粒被仅在卡那霉索基因中有识别位点的 EcoR ?消化。消化物与酵母 DNA连接后转化对两种抗生索都敏感的E coli菌株。 (l)利用哪一种抗生素抗性选择接受了质粒的细胞? (2)怎样区分接受了插入酵母 DNA的质粒的克隆? 275(用互E.coR ?和Hind?分别切割同一来源的染色体 DNA，并进行克隆，在前者的克隆 中筛选到 A基因，但在后者的克隆中未筛选到 A基因，请说明原因。 276(什么是Western印迹?它与 Southern印迹有什么不同? +277. 用一限制性内切核酸酶切割 Lac Tetr的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序 列，并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在lac 基因内有切割位点，并在第二个 氨基酸密码子内，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，+用DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化 Tetr Lac 受体菌，筛选 Tetr转化子，问:Lac的基因型是什么?并说明原因。 278(严谨杂交实验是如何控制的? 279(RNA与基因组 DNA复性已被广泛用于检测不同类 DNA的转录。 DNA驱动的复性 实 验与RNA驱动的复性实验有何不同? 136 280(在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用 cDNA 而不用基因组 DNA?为什么要在 cDNA前加上细菌的启动子? 281(从某种意义上讲，生物体的空间密码较三联体密码具有更广泛的简并性。 282(原核生物的RNA polymerase中δ(sigma)因子具正、负两方面的效应 283(?、?型Intron的Branch site中A具有高度保守性。 284(一般认为luxury gene才具Enhancer。 285(5BrU诱发“复制错误”(Replication error)的突变频率低于诱发“掺入错误” (incorporation error)的突变频率。 +c+286(Lac operon的/OcO部分二倍体的E. coli细胞中，对OO具有Cis-dominant效应。 287(将重组的苏云金杆菌δ毒素基因转化到植物细胞内，可以正确表达，但毒素蛋白合 成效率较低。 288(采用“加、减法”进行DNA序列分析时，在“+A”系统中，所合成的片段末端均为A。 289(将CHS(色苷合成酶)反义DNA基因导入红花烟草原生质体中，诱导培养出白花植株， 并对红花植株具显性效应。 290(在具Spm转座系统的玉米籽粒中，发现在无色胚乳的背景上出现有色斑圈。 291(E. Coli trp合成酶操纵子的trp L29突变株(第29dNt发生G的转换突变)表现型 为trp缺陷型。 292(一段Poly dG-dc双链DNA分子在体外，4.0M NaCl及含有Br原子的条件下，可以形成 转入体内生理条件下，也能保持其结构的稳定性并制备Z—DNA稳定的Z—DNA构型， 抗体。 293(E. Coli在Histidine缺乏时，体内至少有三套调控系统启动，以控制对这种环境的适 应。 294(利用改良的RNA Driven技术体系，可以估算出真核生物基因表达的数目及其丰富度。 295(利用某一随机引物分子进行某一生物总DNA的PCR反应时，选用45? anneal temperature所显示的带纹数较选用35?所显示的带纹数要少。 ,4,5感染感染eop,10eop,10,,,,,,,,296(λE. Coli C ,,,,,λ—CE.Coli K,,,,,λ—K eop=1 eop=1 297. 真核生物中，mRNA×DNA出现R—Loop的电镜图象。 298(原核生物中具有Direct Repeats的Tn9复合因子较具Inverted Repeats的Tn10复 合因子的稳定性差。 299(E. Coli在仅Arg饥饿时也会合成trp。 300(通过二点或三点测验测定的基因间的遗传图距与物理图距之间存在非对应的线性关 系。 301(pseudo gene是重复基因家簇中无功能的基因成员。 302(原核生物基因转录的强终止子，在行使其功能时，不一定需要Rho因子。 303( 近代研究发现若干Anti-Central dogma的现象，从而丰富和发展了,,,,年,rick 提出的,entrol dogma理论。 137 304(将复制进行一半的E. Coli转接于含利福平的培养基上，E.Coli可以完成该周期的 DNA的复制，但不能进入下一周期的复制。 305(生物体的翻译体系能在mRNA中UCU, UCC, UCA, UCA, UCG,AGU,AGC等6个密码子处准 确聚合Ser。 306(并非所有氨基酰tRNA合成酶的Amino Acio Site都具有双筛功能。 307(yeast Alg4具有7个非全同等位基因，研究表明它们发生基因转换的频率，从5ˊ? 3ˊ呈递减的趋势。 308(E. Coli的SOS修复系统的表达，必须受到紫外线诱导。 309(将转导噬菌体P(h-a、H-b)?Fla感染沙门氏菌(—Hc、h—d)fla菌株，获得3311212 个Fla转导子，血清反应检测其中11个为—Ha相，22个为H—c相。 11 提示:Fla:鞭毛蛋白基因，与H1基因紧因紧密连锁，控制沙门氏菌的运动。 (H—a、h—b)为H2相基因表达，血清型为a型 12 (H—c、h—d)为H1相基因表达，血清型为c型 12 310(从λphage溶源，裂解途径选择的分子机制中，你得到哪些有关生物基因表达调控的 启示。 311(E. coli在含有Glucose和Lactose的培养基中，Lactose不被分解利用。 312(E. coli,K菌株被T phage的r?a,r?b两种突变体双重感染后，细菌裂解，并放出正4 常数量的T4 phage。 313(羟胺(HA)不能使终止突变的a基因发生回复突变。 314(从寄主菌中分离提取PBR322质粒DNA，经电泳检则，出现了三条迁移率不同的带纹。 315(tRNA作为adaptor，保证了蛋白质合成过程中氨基酸的准确聚合。 316(核糖体可以准确地在mRNA5’端第一个AUG密码处起译蛋白质。 317(选用10个碱基的随机引物进行PCR反应时，在50?退火温度下较37?退火温度下扩 增出的带纹少。 DNA复制时，新生单链DNA总是从5’端向3’端延伸。 318( 319(假基因也称为Retrogene，并且只在真核生物的重复基因家族中发现有假基因存在。 320.玉米中，由DS引起的插入突变基因，也称为Non-Autonomous mutable gene。 321(A，a, a, a3是一组非全同复等位基因，研究发现它们发生基因转换的频率> a> 为a1213 a 2 322. 真核生物的基因在转录水平上的表达调控往往采用Positive control方式，而原核 生物多采用Negative control方式。 323. Z-DNA在活体细胞内能稳定存在。 324(两种GC%含量相同的DNA分子，分别在pH=12和pH=7的变性缓冲液中进行的变性反应 ，测得的Tm值不同。 +325(进行DNA复性动力学研究时，应保持缓冲液的Na浓度为0.18,0.2M，复性反应的温度 一般控制在低于Tm值25?左右。 326(合成与高度重复的卫星DNA(satellite DNA)两侧序列互补的特异引物，进行PCR反应 的技术，是研究DNA多型性的一种分子标记技术(SSR，Simple Sequence Repeats)。 327(各种类型的转座因子均具有“限制转座频率的负控制”机制。 138 328(同相重叠基因可以产生长度不同，序列相似的isoform protein，而异相重叠基因仅 能产生结构与功能完全不同的蛋白质。 329(Enhancer的启动具有严格的组织特异性。 -11330(生物体能保证DNA复制的错误机率小于10。 331(E. coli 组氨酸合成酶操纵子的引导区内存在一个编码16氨基酸的orf，并且其中有 7个组氨酸的密码子连续排列。 332(Neuraspora‎‎ A type 与a type杂交，形成的八核子囊孢子出现了A?a=5?3, 2?6, 6? 2, 4?4的多种分离的类型。 333(DNA复制过程中，新生单链DNA的延伸是从5’端向3’端方向进行的。 334(将提取的某种DNA分别置于含有与不含EB(溴化乙锭)的琼脂糖凝胶中电泳，发现其 迁移率不同。 335(真核生物染色体的端粒结构有效地防止了染色体DNA复制中5’端短缩的问题。 336(E. coli在色氨酸缺乏的条件下至少有三种调控机制被启动。 337(codon usage既有物种的共性规律，又有物种的个性特点。 338(一个真核生物的基因要在受体菌(E. Coli)中将到准确的表达，一般是: 1)用该基因的cDNA导入，而不用分离出来的DNA。 2)导入的cDNA必须与载体的某一基因的启动子和引导序列组成重组DNA。 3)载体分子的连接末端一般接上3种不同长度的人工聚合的同聚核苷酸对 G P O C GG P O CC GGG P O CCC 当外来的目的基因连接的末端径酶(专化性酶切S‎‎S.SDNA)消化后，与载体连接，导1 入受体细胞后，即可筛选到准确表达的克隆。 339. 已知AGA是Arg的密码，AGC是Ser的密码，你认为tRNAser的反密码子是否可能为ICA, 为什么, 分离真核生物基因的方法，以提出mRNA后制备cDNA的技术为主，其中有两条技术路340( 线。 其一，利用固定有poly u的亲合柱层析分离mRNA。 其二，(以Adh基因为例)将Adh酶纯化，制备Adh抗体，再与翻译体系混合，离心收集 复合物，然后使复合物解体从中分离mRNA，它们的理论据是什么, 341(利用分离到的mRNA制备成cDNA,但这种cDNA不能代表真正的基因，加以利用，必须 将它制成探针与总DNA进行分子杂交。才能获得真正的目的基因，这是为什么, 342(采用双脱氧法进行DNA序列分析时，A系统反应液中每一DNA片段的3’—末端都为 139 A，为什么, 343(一般都利用限制性核酸内切酶和连接酶将质粒DNA与目的基因构成分子，理重组DNA 论依据是什么, 344(将带有启动子和终止子在内的玉米Adh完整基因导入E. coli细胞内没有得到表达， 其主要原因是什么, 345(说明下列基因操作技术的分子遗传学原理。 A、运用Southern Blot技术在68?(High Stringency)的条件下杂交，洗膜，可以确 定真核生物单拷贝基因DNA酶切片段的电泳位置。 运用羟基磷灰石柱层析法法，对在50?(Low Stringency)条件复性的DNA分子进行 层析，可以分离出单拷贝基因的DNA分子。 322的A B、E.coli的质粒PBRmpR和TctR基因中分别具有PStI和 BamHI的切点，如果以 R322作PB外来目的基因的载体，制备目的基因的克隆，一般是将目的基因片段插入 I或BampStHI的切口内。 C、载体分子的连接末端一般接上3种不同长度的人工聚合的同聚核苷酸对 G P O C GG P O CC GGG P O CCC 当外来目的基因的连接末端S1酶(专化性酶切单链DNA分子)消化后，在连接酶作用 下，与载体接头重组，导入受体细胞内，即可筛选到准确表达的克隆 346(Repetive gene 形成的三种假说。 347(复制型转座因子与逆转录型转座因子。 348(Prokaryotic promoter与Eukaryotic promoter的基本结构。 349(Enhancer与Attenuator的功能与原理。 350(paracodon与codon in codon的特点与功能。 351(Rifampin是RNA转录的抑制剂。 A C 352(反向重叠基， 同向重叠基因 各具有不同的基因表达方式。 B D 353(生活细胞内DNA分子在结构上的不均一性体现在: dNt conformation, Helical form, Hydrogen bond, Superhelical direction, Dnase Sensitivity, chromatin structure. 354(两种DNA分子的GC%相同，但Tm值不同。 两种DNA分子的Tm值相同，但Cot1值不同。 /2 140 两种DNA分子的Cot值相同，但Tm值不同。 1/2 两种DNA分子的经随机引物扩增的片段长度相同，但DNA Sequence不同。 355(Yeast的cyt. b gene在E. coli内不能表达。苏云金芽胞杆菌的ICP基因在E. coli内的表 达量降低。 -11-4356(DNA复制的ε?10，蛋白质翻译的ε?10。 357(丝氨酸tRNA的anti-codon不会为ICU (AGA为Arg的codon, AGC为Ser的codon) 五、实验设计与分析 1.假定你在25?条件下用如下浓度的 DNase I:0，0.1，1.0及10.0mg,ml，对鸡红细胞细胞核的染色质进行酶切20分钟。将这些样品与分子量标记一起上样于6,变性聚丙烯酚胺凝胶，下图是凝胶电泳的结果。但由于你混淆了样品，因此弄不清每个泳道对应的样品是什么。惟一可以确信的是分子量标记上样于左边的泳道，但忘记了各带对应的分子量大小(图1.1)。 (l)请回忆起在各泳道分别使用的是哪一浓度的 DNase I? (2)请指出分子量标记泳道(用 M表示)各带的大约分子量。 (3)描述各泳道所显示的染色质结构特征，证实所记忆的数字是正确的。 图1.1 DNase ?消化鸡红细胞细胞核染色质后的电泳图 2.从4种不同的物种分离出的核酸中各种碱基的比率(,)如下: A+T(或A+U) A+G A T U G C G+C C+T(或C+U) 1 17 17 33 33 0.5 1.0 2 29 19 22 30 0.97 1.0 3 24 16 24 36 0.66 0.92 4 34 2.1 1.0 (1)对于每个物种，回答以下问题: ?核酸是 DNA还是RNA? ?它是双链还是单链? 141 (2)填充物种4中缺少的碱基百分比。 3(假定你从一新发现的病毒中提取了核酸。请用最简单的方法确定: (1)它是 DNA还是 RNA? (2)它是单链还是双链? 4. 某公司要招聘技术人员加入他们的抗病毒小组帮助设计新药对抗艾滋病病毒感染。 为 了得到这份工作，要求应聘者设计一个方案来阻止艾滋病病毒基因表达但不影响宿主 基因的表达。你能设计吗? 5. 假定你正在研究原核生物转座子 Tn1O，并已设计出一个很好的方法来确定 Tn1O在 转 座期间是否是通过复制还是不干涉 DNA复制直接移动。你的想法是根据这两种机制的 主要不同点:如果不复制那么转座子‎‎的两条亲链将同时移动，如果复制则只有一条亲 链移动(如图8.1)。你打算把来自两个不同 Tn10的链经退火后都标 图8.1一个转座子的复制与非复制转座 转座因子被示为一条杂合双链，由两条遗传上不同的链组成—条白色一条黑色。 在复制转座期间:一条链与供体 DNA留在一起，一条被转向受体DNA;非复制转座 时，转座子被从供体 DNA上切下，全部转到受体 DNA 上 记上。为了把这些杂种 Tn10双螺旋足够地分配到细胞中。你用了含有 Tn10的λ噬菌 体 DNA，它既能在体外操作又能包在病毒壳内成为有侵染力的噬菌体。你决定使用一 个因为其他突变而失去活性的噬菌体基因组，因此它就不会复制整合，而且最终可被 除去，这样噬菌体基因组可被忽略。你的噬菌体 DNA在同样位点插入了稍微不同的 Tn10。两种 Tn1O都含有四环索抗性基因和乳糖代谢基因(lacZ)，但其中一种由于突变 使lacZ 基因失活。这种差异为追踪两种 Tn10提供了一个很方便的方法，因为lac Z+ —细菌克隆(与适当的底物共育时)会变蓝，而 lacZ克隆则还是白色。你把两种噬菌体 DNA的混合物变性后退火，得到两份相等的杂交双链与纯合双链的混合物(图8.2)。 142 图8.2把两种不同的含 Tn10的λ噬菌体基因组变性与复性后，杂交双链与纯合双链混合物的形成浅线表 示噬菌体 DNA，框表示 Tn10。两种 Tn10的突变不同点如黑片段和白片段所示 — 然后你将混合物包装到噬菌体外壳中，侵染lacZ 细菌，并把被侵染细菌涂布在含 四环素和可产生有色底物的平板上。一旦噬菌体 DNA进入了细菌，转座子将进入细菌基因组(频率很低)，给细菌带来四环素抗性。获得一个 Tn10的稀有野生细菌，可以在选择条件下生存并形成克隆。统计大量这样的克隆会发现有25,为白色，25,为蓝色，50,为蓝色部分与白色部分的混合物。 (1)解释每种细菌克隆的来源并确定结果是否能说明 Tn10复制或不复制的转座机 制。 (2)你使用了一种无法修复 DNA错配的细菌菌株作为受体、来做这些实验。如果你用可 以修复错配的细菌菌株作为受体那么结果会有什么不同? (3)λ噬菌体 DNA通过位点专一重组整合到细菌基因组上要比转座更常见，如果你用能 复制但不能整合的λ噬菌体突变体结果有什么不同? (分析比较细菌转座子的结构与特点。 6 143 六、问答题 1(衰减作用如何调控E. coli中色氨酸操纵‎‎子的表达? 2(指出E.coli真核生物翻译起始的不同。 和 3. 概括典型原核生物启动子的结构和功能，并解释什么是保守序列。 4(阐述原核生物的转录终止。 (1)转录终止的两种主要的机制是什么? (2)描述翻译怎样能调节转录终止。 (3)为什么在细菌转录终止中很少涉及到Pho因子? (4)怎样能阻止转录的终止? 5(复制 DNA的聚合酶(DNA依赖的 DNA聚合酶)也有校正功能，解释为什么RNA聚合酶没有 这种功能。 6(讨论原核生物基因表达的聚合作用反应定向的重要性。假如核糖体从3’端到5’端读它 的模板 mRNA的话，那么将会发生什么情况? 7(概括细菌细胞内的转录过程。 8(转录如何在基因或基因组末端终止? 9((1)如何区分由启动子起始转录的RNA片段与5’端被加工过的RNA片段; (2)证明多肽是从氨基端到羧基端方向合成的。 10(比较 E(coli rRNA和 tRNA的转录和加工。 (区别可诱导和可阻遏的基因调控。 11 12(比较并指出细菌和真核生物RNA 翻译机理的异同。 13(什么是摇摆假说? 14(S(N Cohen于1973年构建了三个重组体，pSC102，pSC105，pSC109请说明这三个重组 体是如何获得的?各说明了什么? 15(基因克隆是如何使含有单个基因的 DNA片段得到纯化的? 16(什么是细菌的限制—修饰系统(restriction-modificaton system, R-M system) 17(细菌的限制—修饰系统有什么意义? 18(说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。 19(?类限制酶具有哪些特点?在基因工程中有什么作用? 20(?类限制酶有哪些特点? 21(何谓限制性内切核酸酶的切割频率? 22(什么是限制性内切核酸酶的星号活性?受哪些因素影响? 23(双酶消化法(double digests)绘制限制性内切核酸酶酶谱的原理。 24(什么是 DNA多态性(DNA polymorphism)? 25(限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)。 26(计算下列三种酶各自在某染色体 DNA序列上识别位点间的平均距离: Alu ?:5’AGCT 3” EcoR ?: 5’GAATTC 3’ 3 TCGA 5’ 3’CTTAGG 5’ Acy?:5’GPuCGPyC 3’ 3’CPyGCPu5’ 144 (注: Py=任何一种嘧啶; Pu=任何一种嘌呤) 27(在细菌质粒 pBP1的四环素抗性基因 tetR的中间有一个Hind?的切点。用Hind? 切割 果蝇基因组 DNA，以 pBP1为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆15带有果蝇的 目的基因。用Hind?和EcoRV对克隆15进行了酶切分析，电泳结果如图15.1(用酶切 的 pBP1质粒DNA作对照)，旁边标出了片段的大小。 图15.1酶切电泳图谱 1,2:Hind? 切割;3,4:,coRV 切割;5,6:Hind ?+,co RV; 1、3、5是质粒 DNA: 2、4、6是15号克隆。 (1)绘制含有插入片段和不含插入片段时的 pBPl的限制性图谱，并标明四环素抗性 基因的位置—; (2)如果用克隆在另一个与 pBP1完全不同源载体上的四环素抗性基因作为探针，进 行 Southern印迹杂交，预测上述电泳图会出现什么样的杂交带? (3)如果用克隆15的果蝇 DNA片段作为探针进行 Southem印迹杂交，放射自显影 的 结果又是如何? 28(为什么大多数内切酶被称为“限制”酶。 29(据Science杂志报道:一种重要的遗传疾病可由导致 DNA中碱基替换的诱变剂在体外进 行人工诱导。设计一种快速用以鉴定疾病基因型的检测方法。 145 30(为了绘制长为3.0kb BamH ?限制性片段的限制性图谱，分别用EcoR ?、Hpa ? EcoR ?十 Hpa?消化这一片段的三个样品，然后通过凝胶电泳分离 DNA片段，溴化乙锭染 Hpa ?单独切割及用这两种酶‎‎混合切割30kb 图15.2 用EcoR ?、 BamH?片段产生的 DNA带 R 色后观察DNA带型(图15.2)。请根据这些结果，绘制一个限制性图谱，要标明E.co ?和Hpa?识别位点间的相对位置，以及它们之间的距离(kb)。 31(1967年，有5个实验室几乎同时独立发现了DNA 连接酶，每个实验室的实验有什么特 点? 32(简述 DNA和RNA连接酶的催化反应机制。 33. 影响 DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些? 34(什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用? 35. 如何利用 T4 DNA聚合酶制备3’隐含末端或双链平末端? 36. 如何利用 T4 DNA聚合酶进行双链 DNA的3’末端标记? 37(如何利用 T4 DNA聚合酶制备平末端? 38(反转录酶有两种类型，一是来源于禽类骨髓母细胞瘤病毒(AMY, aviam myeloblast osis virus)，另一种来源于鼠类莫洛尼氏白血病毒(M—MLV，Moloney murine leukemia virus)，它们之间有什么不同? 39(与E.coli RNA聚合酶相比，细菌噬菌体的 SP6RNA聚合酶、 T7 RNA聚合酶和 T3 RNA 聚合酶具有哪些优越性? 40(什么是多核苷酸激酶的向前反应和交换反应? 41(细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同?在基因工程中有什么用途? 42(λ外切核酸酶(lambda exonuclease)基本活性是什么?在基因工程中有什么应用? 2+2+43(Mn、 Mg对 DNase ?(deoxyribonuclease ?)的活性有什么影响? DNase ?在基因工 程中有什么作用? 44(比较 S1-Mapping和 Footprinting在原理上、方法上、应用上有何不同? 146 45(什么是复制子(replicon)? 46(什么是质粒的相容性?什么是不相容群?机制是什么? 47(什么是质粒的带动转移? 48(说明变性定位法和限制性内切核酸酶定位法研究质粒复制起点的原理。 49( Co1El衍生质粒拷贝数调节机理的机理是什么? 50( R1质粒拷贝数受到怎样的调节控制? 51(质粒如何维持在细胞中的稳定? 52. 引起质粒不相容性的主要原因是什么? 53(由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全，进行 严格的监控，质粒载体的安全性是十分重要的。请问质粒载体的安全条件包括哪几个 方面? 54(请指出质粒 pSC101的一些生物学特性(包括结构和遗传)及在基因工程中的作用。 55. 自然界中具备理想条件的质粒载体为数不多，即使是 Co1E1和 pSC101这两个自然质粒 也不尽人意，通常需要进行改造，请问质粒改造包括哪些基本内容? 56. 质粒改造的发展过程如何? 57. 在质粒中如何增减酶切点? 58(有人用限制性内切核酸酶EcoR I分别切割松弛型质粒 Co1E1和严紧型质粒 pSC101(各 有一个切点)，然后重组连接形成一个杂种质粒 pSC134，请推测这种质粒有什么特性 和用途。 59(现分离了4种新的大肠杆菌 Hfr菌株，通过中断接合实验，针对每一菌株确定了高频转 —移的标记基因和它们进入 F受体的时间分别为: Hfr1 Hfr2 Hfr3 Hfr4 man 13min mal 29 lys 16 pur 6 标记基因和第一trp 6 met 14 arg 9 trp 3 次进入的时间 his 23 thr 4 mal 2 thr 31 pur 3 uvr 20 his 32 lac 23 gal 14 (gal、lac、mal、man不能发酵半乳糖、乳糖、麦芽糖和甘露糖;arg、his、met、trp 生长需要精氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、嘌呤和色氨酸;uvr:紫外线敏感)。 任何没有给出的标记都是不能高频转移的。上述数据能够说明大肠杆菌的染色体是环 状的吗?以分钟表示图距构建一个大肠杆菌染色体的连锁图。假定整个染色体用了100 分钟转移，而且苏氨酸被认为位于0分钟或10O分钟处。 60(YAC克隆载体常出现哪些问题? 61(为什么野生型的λ噬菌体 DNA不宜作为基因工程载体? 62(什么是蓝白斑筛选法? 63(蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性? 64(什么是c?筛选法? 65(λ噬菌体载体具有哪些优点与不足? 147 66(什么是 M13的IG序列区?有何特点和功能? 67(将野生型的 M13改造成基因工程载体，首先是进行酶切位点的改造，请问 M13中的 R ?最初是如何引入的? Eco 68(以置换型λ噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说能够形成噬菌斑的就一定是重组 体? 69( M13系列载体具有哪些优缺点? 70(粘粒载体具有哪些特点与不足? 71(辅助噬菌体 DNA和相应的噬菌粒是如何协同工作的? 72. 克隆的 DNA在质量上有什么要求? 73(为什么从细胞中分离 DNA时往往会断裂? 74(为什么苯酚要重蒸饱和后才能用于 DNA的分离? 75(为什么氧化变色的酚不能直接用于DNA的分离?应如何处置? 76. 在DNA分离过程中，酚通常与氯仿联合使用，即使不联合使用也要在苯酚抽提后用氯 仿再抽提一次，为什么? 77. 说明溴化乙锭—氯化钩密度梯度离心(ethidium bromide-caesium chloride gradient centrifugation)纯化DNA的原理。 78. 采用什么措施保证 DNA化学合成的定时性和专一性? 79(何谓简并引物(degenerate primer)? (简并引物设计的一般原则是什么? 80 81(双脱氧法(dideoxynucleotide method)测序的基本原理是什么? 82(在古生物学中，尚不知道恐龙是否是温血爬行动物，而不像今天的变温爬行动物。 假如你得到一些恐龙的 DNA，你如何通过 PCR和基因克隆来检测恐龙是否是温血 爬 行动物? 83(如果知道某一基因的功能及其相应的蛋白质的氨基酸序列组成，可以通过何种方法 克隆该基因? 84(何谓定位克隆(positional cloning)? 85(何谓染色体步移(chromosome walking)? 86(在染色体步移中，用哪些方法获得克隆的末端? 87(何谓表型克隆(phenotype cloning)? 88(什么是基因文库? 89(什么是基因组文库(genomic librarY)?构建基因组文库，涉及哪些基本过程?它同遗传 学上的基因库有什么不同? 90(什么是 cDNA文库(complement DNA libraly)?同基因组文库有何差别? 91(粘性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出 这 些不足之处， 92(什么是同聚物加尾连接法(homopolymer tails joining)?用何种方法加尾?具有哪些优 缺点? 93(何谓接头连接法(Iinker ligation)? 94(什么是同裂酶?为什么说用同裂酶进行体外重组效率最高? 148 95(如何使用甲基化酶对克隆 DNA进行保护?有什么意义? 96(何谓稀有酶?(举例说明) 97(为了大量获得许多用于生化鉴定的产物，你想将拟南芥中的一个序列已知、编码单体 酶蛋白的基因在单细胞微生物中表达，你如何确保最终能得到产物? 98(若在进行 DNA重叠群分析时，你发现在一个编码有价值但不稳定蛋白质的可读框 之 后，紧接着另一个可读框，它可在蛋白质的 C末端加上一个稳定结构。举出至少两种 获得被修饰蛋白产物的方法。 99(某一质粒载体具有 Tetr和 Kanr的表型，在 Kan抗性基因内有一Bgl ?的切点。现用 Bgl ?切割该载体进行基因克隆，问:(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培养后 长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插人片段的重 组体? 100(限制性内切核酸酶 Bam H ?和 Pst ?切割某一DNA序列，结果示于图20.1。 图20.1 BomH ?和Pst ?识别序列处的切割，只显示识别位点的核苷酸序列 (1)指出被切割 DNA分子的5’端和3’端; (2)如果你将切割后的 DNA同 DNA聚合酶、4种 dNTP 在一起温育，这些DNA末端会有 什么样的变化? (3)经过 B中的反应后，你还能够用 T4 DNA连接酶将BamH ?末端连接起来吗Pst ? ? 末端呢,(T4DNA连接酶能够连接平末端和黏性末端) (4)(3)中的连接后，能够重新形成BamH I位点吗,Pst I位点呢, 101(什么是遗传学检测法? 102(以 pBR322 DNA作为载体，从四环素抗性基因区克隆外源 DNA时，可采用环丝氨酸富 集法筛选重组体，说明其基本原理和基本操作过程。 放射性抗体检测法(radioactive antibody test)的基本原理是什么? 103( 104(何谓液相杂交?举例说明在分子生物学中的应用。 105. 什么是活体标记法(in vivo labeling)? 106. 单链RNA作为探针，具有哪些单链 DNA探针所没有的优点? 107. 什么是随机引物(random primer)?如何标记 DNA? 108(良好的固相支持物必须具备哪些优良特性? 109(以硝酸纤维素滤膜(nitrocellulose filter membrane)作为杂交的固相支持物具有哪 些优缺点? 149 110(什么是印迹(blotting)杂交? 111(什么是斑点杂交(dot hybridization)与狭缝杂交(slot hybridizatlon)? 112(什么是原位菌落杂交(colony hybridization)? 113(说明 Southern杂交的原理和方法。 114(Northern印迹与 Southern印迹有什么不同? 115(建立了一个基因文库后，如何鉴定一个携带目的基因的克隆? 116(说明原核生物基因表达的正控制诱导型(positive inducible control)和负控制阻 遏型(Negative-represible control)调控的遗传机理。 ,CGAT,117(一个四核苷酸序列的DNA分子，经羟胺处理后，再经过两次复制，会产生,GCTA, 什么样的DNA分子,(5分) 118(有一段多肽链的C端氨基酸残基的Tyr-Pro-Asn-Val-Thr-Cys-Glu,其对应的DNA序列 为 (SS-1) GATAAGCGTGCATGTAAGCCCCAT (SS-2) CTATTCGCACGTACATTCGGGGTA 8119. 已知E.Coli基因组DNA含有4.2×106bp，Cot/2为4。鸡管状细胞内DNA含有7×，10 其复性动力学曲线为: 请求出鸡细胞DNA中，中度重复序列组分每一重复单位的核苷酸,及重复频率, 120. 将一个重组质粒PMR三个被λphage溶原的E. coli菌株(三菌株的差别为λph分别感染1——age的pRoR区段分别为或w.t 或oR或oR)，培养于含ONPG(邻硝基苯—β—半12 乳糖苷)的培养皿中，在加入不同的IPTG(异丙基—β—D—硫代半乳糖苷，类似于 乳糖，作为效应物分子)的培养皿中，检测被LacZ酶分解ONPG的黄色色度，并换算 成Z酶酶活，请根据测定结果判断这三条曲线分别代表哪一个测验菌株,为什么, 121. 某一生物DNA的chemicai complexity=8.82×108bp，复性动力学研究表明约有40%的 DNA其Cot=5, 请较详细地说明这部分DNA的特点。 (1/2) (E. coli DNA kinetic complexity=chemical complexity=4.2×108bp=4)， Cot(1/2)122(分别说明λ phage以下突变型的表现型并简述其分子机理: ———— λ[c?] , λ[c?], λ[hfl], λ[cro] 123. 说明constitutive splicing与alternative splicing, cis-splicing与trans-splicing之间在概念及 机制上的区别。 124(E. Coli阿拉伯糖(Arabinose)分解酶操纵子(ara operon)的调节基因I发生突变后， —即使在培养基中加入效应物(Arabinose)，操纵子仍处于关闭状态。将构建的i/I基因 150 的部分二部体E. Coli培养在含有阿拉伯糖的培养基中，操纵子处于开放状态。请说明 —ara operon的调控类型，并推测突变基因的i基因型。(简述推论的理由) 125(简述λphage选择溶原途径(lysogenic pathway)的分子生物学原理。 126. 请说明一种利用PCR技术进行目标基因定点突变的技术路线及原理。 127(拟应用苏云金秆菌中的一个毒素蛋白基因培育抗虫作物品种。请提出一个从基因分 离开始到品种推广为止的实验方案。并指出值得注意的关键问题。 128(说明不同种属的植物基因组共线性发现的理论和实践意义。 129(基因组研究对作物遗传改良将会产生哪些影响, 130(你正在克隆一个基因。现在你己得到了数个 DNA片段。下一步你将如何从中鉴定出你 所希望得到的目标基因。 131(谈谈基因工程的基本步骤，说明重要工具酶在各个步骤中的作用。 132(根据你对分子克隆载体的了解，对克隆载体的类别，用途及各自的特殊性加以简述。 133(以 E.Coli为例，简述其基因重组的类型，作用机理及其在分子生物学研究中的应用。 134(如何解释抗体生成多样性的分子机理。 135(如果你发现了一种新蛋白质，你将如何进行下一步研究?请按先后顺序列出基本方案。 136(应用生物技术创建作物新的种质有哪些途径和方法。 137(分子标记辅助选择在作物育种中有那些重要作用?如何实施? 138(说明真核生物前体 RNA加工的类别及机理。 139(说明原核生物与真核生物转录元件(cis and trans)的特点。 140(简述人类基因组研究近年来的进展。 141. 说明DNA芯片(含Oligonucleotide chip and cDNA microarray)技术的基本概念和可 能的用途。 142. 如何确定细菌的某一个遗传表型是由染色体控制还是由质粒控制的。 143. 简述 DNA重组的几种不同方式及分子机理。 144. 比较说明原核生物与真核生物在基因表达水平上的异同。 145(至少列举三例 (除 DNA双螺旋结构外)说明核酸分子结构的研究成果对分子生物学 理论发展的重要贡献( 146(说明生物体保证自身稳定遗传的机制。 147(说明蛋白质与 DNA之间序列非线性相关的因素。 148(在核苷酸测序的操作中，利用哪几个途径分别获得一个片段两条单链的序列?各自的 理论依据是什么?试言简意赅地加以论述。 149(到目前为止，在高等生物中根据性状表现分离未知产物基因采用哪些途径?请说明各 种途径的基本原理并各举一例。 150(请以基因组研究的新进展为例，讨论分子生物学发展与生物技术产业化的关系。 151(试述作物遗传资源的重要性，何谓作物遗传资源的创新? 152(利用分子标记进行基因定位的遗传群体有几种?各有什么优、缺点? 153(就你所熟悉的某一作物，简述作物杂种优势研究与利用的现状。 154(你对“基因工程育种”有何评价? 151 155(何谓断裂基因( split gene)?何谓重叠基因( overlapping gene)?它们在生物进化与 适应上有何意义? 156(何谓分子标记?分子标记的种类有哪些?可以开展哪些领域的研究? 157(自花授粉作物与异花授粉作物的育种方法有何异同?数量性状如何进行改良? 158(在提取由 ColEI所衍生的质粒(如pBR322)时，常在培养携带质粒的大肠杆菌摇瓶中加 入一定浓度的氯霉素或壮观霉素以扩增质粒DNA。质粒DNA扩增的理论依据是什么?这 种质粒DNA扩增的方法为何并不具有普遍性? 159(E. Coli K12菌株的限制一修饰系统分别由R. M基因控制现有K12的三个突变菌系， 当用A噬菌体分别感染三个突变株后，将放出的噬菌体再去感染这三个菌株。得到如 下不同的eop值，请判断这三个突变株的有关(R. M)基因型。 放出A的原始菌株 K K K 12-112—212—3 K 1 1 1 12-1 -2K 10 1 1 12—2 K 1 1 1 12—3 160(现有两种DNA片段: TCCAGGATCCTGGCACCG 1)AT TAAGGTCCTAGGACCGTGGC 2)CGATCTCCTAGATCTCAC GCTAGAGGATCTAGAGTG 分别用形成等列序列的同裂酶MboI和Sau3A消化后，混合，加入连接酶 ，会形成什么样的DNA片段。 161(现有枯草杆菌dnaG基因的一个终止突变型菌株，当用HA处理后，会得到什么结果, 说明理由。 162(下表中，a、b、c代表E. coli的Lac operon中的i、o、z三个基因。 A)根据不同试验菌株在效应物有无的条件下，测定Z酶的表达结果，说明a、b、c 各代表哪个基因。 B)用i、o、z三个基因代号写出第?、?菌株的可能基因型。 菌 株 基 因 型 有Lac 无Lac -++? abc + + ++-? abc + + +-+-+-? abc/F’-abc + + ++---+? abc/F’-abc + - -=+=--? abc/F’-abc + + 163. 一位科学研究λ噬菌体的一个蛋白质的功能时，获得了以下几个试验结果。 +A、当用HA处理野生型λ噬菌体后，分离得到一个突变体a(mua)，它只产生该蛋白质的 152 一个片段。 ++B、当用5Bru处量mu后，又分离出两t个突变体，mub, muc，它们也只产生与mutaa后相 度的该蛋白质的一个片段。 同长++++ C、mua，mub, muc分别可以在不同的S 基因型细胞u内合成该蛋白质的正常多肽链。 -+++基因型 Su Su Su Su 246 5?CGA 3’ TTG CCA 3?GCT 5’ AAC GGT -+Su?Su的DNA ? ? ? 序列突变 5?CTA 3’ TTA TCA 3?GAT 5’ AAT AGT +mua — — + — +mub — + — — +muc — — — + ++++++D、当感染有mau的Su4细菌分别与感染有mub的Su2感染有muc的Su6细菌结合后， -+没有野生型重组λ噬菌体产生，不能在野生型受菌体内繁Su殖，但当感染有bmu+++的Su2与感染有 muc的Su6细菌结合后的极少数野生型λ噬菌体产生。 ++++++请推测mua, mub, muc分别在su、su 、su细菌内产生的蛋白质与野生型λ合426 成的该蛋白质的差异，并解释A、B、C、D结果。 (CAA为谷氨酰胺的密码子:UCG为丝氨酸的密码子;UGG为色氨酸的密码子) 164(大豆phasealin(菜豆朊)是在种子内特异表达的一种分泌性蛋白，请用线段示意出该基因在DNA水平上的全部结构区域，以及Pre-mRNA，mature-mRNA，多肽链的对应区域，并标明各区域的名称。(提示:该基因的各区域包括:Promoter(含3个重要的Site 或 Box),Terminator, Leader Seq., Trailer seq., Signal seq., Chambon rule, Shine-Dalgarno seq., 2个Intron, 3个Exon, Adding trailer signaler, Repeat seq. in CTU.) c基因产物165(有人错误地认为“E. coli trp synthetase operon ic的突变型是由于i可以分解效应物分子所形成的”，正确的理解是什么,如何用遗传学试验否认这一说法, 166( 用HA处理W.t枯草杆菌，得到分别两个不同位点上发生了无意突变的菌株，mut1, mut2，并证明这两个无意突变的序列不同。当再用HA处理这两个突变株后得到了以下结果。 mut1 mut2 诱发DNA水平发生回复突变 - - 诱发一种无意序列变成另一种无意‎‎序列 + - +167(将E.coli Lac operon中的IPO片段与yeast的HO基因构成的重组DNA分子与带Leu基因的质粒连接，转化到Yeast 27B菌株中(基因型为HML a Leu-MATα HMRa SIR. ho)将转化子涂于分别含有Lactose, Maltose, Lactose +Glucose的培养皿中，当长出菌苔 153 后，再分别涂上DC14菌株(a 结合型)，DC17菌株(α结合型)，请判断在哪些培养皿 中会出现二倍体的杂合菌落，并说明推论的依据。 A B C D E F 27B 27B 27B 27B 27B 27B Mal Lac Lac+Gluc Mal Lac Lac+Gluc DC14(a) DC17(α) 七、名词解释 1(遗传工程 27.Kinetic Complexity 2(生物技术 28.Signal Sequence Hypothesis 3(基因工程 .Ribozyme 29 4(细胞工程 30.Replison 5(细胞分泌工程 31.Readthrough 6(酶工程 .Holliday intermediates 32 7(蛋白质工程 33.Histidine Utilization Operon 8(发酵工程 34.S D sequence 9(移动基因 35.retrogene 10(断裂基因 36.RFLP l1(重叠基因 37.Mic RNA 12(假基因 38.C value paradox + 13. 回文序列 39.Sugene 14. 同裂酶 40.pseudo allele 15. 限制性物理图谱 41.recombination hotspot 16.negative control; negative superhelix 42.RAPD 17.Cot; Rot 43.attenuator 1/21/2 18.调节子(Regulon) 44.RNA Driven 19.反式作用因子(Trans-action factor) 45.TATA BOX 19.引物(primer) .Allele 46 20.突变热点(Hot spot of mutation) 47.Leu Zipper 21.卫星DNA(Satellite DNA) 48.SOS repair 22.Sigma factor 49.Transposon 23.Cis dominance 50.Rho-dependent terminator 24.guide RNA 51.Homeobox 25.Replisome 52.Isocandermer 26.Covalently Closed Circle 53.Sense strand of DNA 154 54.Trans-splicing 55.CCAT box 56.Isochizomer .Lagging strand of DNA 57 58.Muton 59.Pseudo gene 60.Gene imprinting 61.Gene conversion 62.RNAi 63.DNA shuffling 64.Molecular Chaperon 155 51