革兰氏染色实验步骤
革兰氏染色
一(实验流程:
1、 取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈(用来大致确定菌液滴的位置)。涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。
2、 涂片:
液体培养基:左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖;右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基:先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。
3、 晾干:让涂片在空气中自然干燥。
4、 固定:让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定(以不烫手为宜)。 5、 染色:将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。 6、 水洗:用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形态。
7、 媒染:滴加1滴碘液，染1min，水洗。
8、 脱色:吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色，立即水洗。 9、 复染:滴加蕃红复染3-5min，水洗。至此，革兰氏染色结束。 二(染色结果:革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。 备注:
1.革兰氏阳性菌:葡萄球菌属(主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等)、链球菌属(肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等)、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆
肠球菌等为临床重要等病原菌。 菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、
2.革兰氏阴性菌:埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属(绿脓杆菌等)、莫拉菌属(卡他莫拉菌等)、奈瑟菌属(淋球菌、脑膜炎双球菌等)、不动杆菌属(鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等)、克雷伯菌属(主要是肺炎克雷伯杆菌)、沙门氏菌属、志贺氏菌属(痢疾杆菌等)、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属(杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等)、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。
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