农残快速检测
培训
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资料
采样是选取有代表性的果蔬样品。应根据样本种类实际情况确定
采样方法,通常有随机法、对角线法、五点法、“Z”形法、“S”形法、棋盘式法、交叉法等。应避免采有病、过小或未成熟的样本。取样本
时,需在植株各部位 (上、下、内、外、向阳和背阴面) 采取。擦去表面泥土或洗净后待检测。
“一三五”原则:
“一”即一个样品一个袋子,独立包装;
“三”即茄果瓜类等大果型蔬菜至少采不同地方的三个; “五”即叶菜类蔬菜至少采不同地方五棵。
具体的取样
? 叶菜类:青菜、小青菜、菜心、菜苋、米苋、生菜、菠菜、
蕹菜、大白菜、杭白菜、黄芽菜、空心菜、娃娃菜、鸡毛菜、油麦菜、
塔菜、芥兰、草头、紫角叶、荠菜、蓬蒿、黄心菜、甘蓝、卷心菜、
牛心菜、菊花菜、芹菜、美芹、水芹、黄心芹、香菜、豆苗、金丝芥、
芥菜、马兰、韭菜、韭黄、大葱、小葱、大蒜、蒜苗、洋葱等
叶菜类取1克样品时,不易太碎,以叶为主。葱蒜等特殊菜注意
假阳性,样品比对是用标准对照库。
? 花菜类:花菜、白花菜、青花菜等
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花菜类选取3棵样品,取叶1克(1厘米长宽,不要剪的太碎)。
? 果菜类:茄子、番茄、青茄、红茄、辣椒、尖椒、甜椒、杭
椒、青椒、黄瓜、西葫芦、冬瓜、瓠瓜、苦瓜、丝瓜、南瓜、节瓜、
金瓜、佛手瓜、豇豆、刀豆、芸豆、扁豆、白扁豆、毛豆、蚕豆、豌
豆、荷兰豆等
果菜类可以采取顺皮削取1克的方法。具体用带刮皮器的水果刀
顺皮削下一片,然后切成1厘米左右见方碎片。
? 食用菌:蘑菇、香菇、平菇、袖珍菇、金针菇、茶树菇等
食用菌类可以采取整株浸泡的方法。
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我国是农药使用的第一大国(年使用量100万吨以上),由农药残留引起的食物中毒事故屡有发生,这主要分为在蔬菜、瓜果上使用
高毒农药后,短时间内采摘和食用所引起的急性中毒事故和农药残留
量超过最高允许限量(MRL值),长期食用引起的慢性中毒两种。由
于农药品种结构不合理,加上一些人为不合理的使用,以及农药残留
监管力度不够,致使我国农药残留问题比较突出。
农残超标的主要原因:一是生产者不严格按农药安全使用准则的
要求进行生产,使用违禁农药或使用量和安全期掌握不好。二是施药
器具喷洒的均匀性欠佳,易导致局部给药超量所致。
由于高毒、高残留的有机磷农药如:对硫磷、甲基对硫磷、乐果、
氧乐果、敌敌畏及甲胺磷等占据了杀虫剂产量的70%以上,并且其中70%以上的中毒事故都是由有机磷农药引起的。
酶抑制法是研究最多且相对成熟的一种对部分农药进行残留快
速检测技术。酶抑制法是利用有机磷与氨基甲酸酯类农药可特异性地
抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性,破坏神经的正常传导,使昆虫中毒致死这一毒理学原理,将AChE与样品反应,根据AChE活性受到抑制的情况,可判断出样品中是否含有有机
磷与氨基甲酸酯类农药。为了提高检测的灵敏度和准确度,将提取液
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用比色法进行分析,从而研制出各种农药残留快速检测仪。残留农药
对乙酰胆碱酯酶活性有抑制,浓度越高,抑制率越高。仪器通过测定
酶与底物、显色剂显色反应变色速率,并与空白对照比较求得酶抑制
率,从而判定农药残留量是否超标。
蔬菜中的水份、碳水化合物、蛋白质、脂等物质不会对农药残留
物的检测造成干扰,不必进行分离去杂,节省了大量预处理时间,从
而能达到快速检测的目的。因此该方法既具有快速方便、前处理简单、
又无需专业仪器(设备相对简单),适用于现场的定性和半定量测定。
此标准操作简便、易行、成本低、前期投入少,适合生产基地、
市场、超市等进行市场准入和产地准出农药残留初筛快速批量检测。
通过采用现场快速初筛检测和实验室验证性检测结合,对结果阳性的
样品用准确、可靠的色谱法进行验证,可大大减少分析工作量,提高
分析效率,有利于加强农药残留监控的力度。
以大米为样品,通过检测不同温度、不同提取时间,所得到的抑
制率来选择,所得结果见图1和图2。从图中可见,样品的提取温度在10-30?范围抑制率变化较小,高于30?时抑制率有所降低,而静置制备样品提取时间达6分钟后,抑制率不再增加。
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100
80
抑农药敌百虫浓度为3.1 mg/kg 制
率(60%)
40
温度 (?) 20
0
1020304050
图.1不同提取温度对抑制率的影响曲线
农药敌百虫浓度为3.1 mg/kg
100
抑
制
率
(80%
)
60
提取时间(min)
40
20
0
246810
图.2不同提取时间对抑制率的影响曲线
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假阳性的产生:一方面,由于各蔬菜品种间(如:葱蒜类、香菜、
韭菜等容易出现假阳性的蔬菜)对检测抑制率有不同干扰和影响,使
一般的快速检测方法难以区分与农残抑制作用的比例关系容易造成
误判(假阳性);另一方面,因色素的干扰可能影响检测结果的准确
性。当待测样品的色素(如:叶绿素、胡萝卜素等)含量较高时,会
使测得的透过率非常低,从而造成对吸光度随时间变化值计算的错
误,影响检测结果的可靠性。
《果蔬农药残留比对数据库》:2004年,上海博纳新技术研究所与农业部农产品质量监督和检测中心(北京)及中国农业大学农药残
留与环境毒理教研室共同合作,依据GB/T5009.199-2003的标准,在
CL-B?农残快速测定仪的基础上成功研发了《果蔬农药残留比对数据
库》,初步解决了应用“酶抑制率法+分光光度法”检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留时存在的部分“检测盲区”,在一定程度上避免了
检测结果的假阳性,并实现了检测过程中对吸收光谱的自动校准。利
用这一科研成果,可使非专业人员能较快掌握相应的操作技能,从而
达到复杂原理与简易操作的有机统一。
如何处理和避免假阳性?
A.由于果蔬细胞液中存在有抑制胆碱酯酶的物质,在检测取样
时,最好不要将果蔬样品切的太碎,以免果蔬细胞液流入检测液中,
影响实验结果。
B.大多果蔬由于剪得太碎,或浸提时间过长,使得提取的样品
溶液中,含有较多叶绿素,干扰实验结果的准确性。
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C.韭菜、生姜、葱、辣椒、胡萝卜等蔬菜中,含有破坏酶活性
的物质,处理这类样品时,必要时可采取整株蔬菜浸提。
D.用CL-B?残留农药测定仪的软件中,“保存对照”和“装入
对照”的功能,我们能分别建立相应果蔬品种的空白对照库。并能用
相应果蔬品种的空白对照同该果蔬品种的样品进行测定。这样就有可
能对如:韭菜、生姜、葱、辣椒、胡萝卜等蔬菜进行更好地检测。
现阶段,我国农业上有机磷农药和氨基甲酸酯类农药的种类有一
百多种,质量和品种很杂,不宜用气相色谱方法逐一查出。用CL-B?残留农药测定仪,能较好地避免假阳性,把好质量关。
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? 存放仪器的地方必须保持干燥、防尘、防振动。
? 仪器内部通道应保持干净,无灰尘,若有污物,可用棉质物
拭净。
? 仪器操作时,必须注意比色皿通光面不能受到手指或油迹等
污染,如有污物或液体可用过滤纸檫净。
? 仪器所配套的各个检测项目所需的辅助设备、检测试剂和检
测用品器具。每次检测完毕后,应注意进行维护和保管。
? 禁止在仪器DC输入孔插入非本公司配套的其他电源。
? 仪器使用前必须先仔细阅读仪器使用说明书,根据说明书上
的操作步骤进行操作。如仪器出现不正常现象时,应通知销售商或送
到特约维修点维修。用户不得自行拆卸修理,否则将影响销售商按照
仪器维修条款提供优质服务。
解决方法:检查电压如果高于220V,则仪器及其稳压电源可能被烧坏,请更换稳压电源;若更换稳压电源后,仍然无法开机,请将
仪器寄送回我公司修理。
解决方法:首先检查仪器与电脑间的数据线是否连接好。若连接
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正常,请检查仪器是否调整为“受控工作模式”,然后在食品质量安
全检测软件中的设备设置中,选择相应的仪器型号。如果还是不行,
则换一台电脑试试,有可能是电脑的串口出故障。
解决方法:确认是否在调0时放入黑块,黑块拿出时调100;另外不要在0到100或是100到0的变化过程中,按下0/100键。
解决方法:这种现象是正常的,要在调0/100按“结束分析”键后,重新点击“开始对照分析”键,才会看到0线和100线的数值变为0或100。
解决方法:仪器与电脑的数据采集线是否连接好;正常联接排除
后有可能是比色池中的灯泡老化,需要更换灯泡。
A.在加入不同的试剂时,一定要用不同的枪头。
B.在取出试剂后,要检查枪头内的试剂有无气泡。
C.在向试管内加入试剂时,要保证枪头与液面垂直,并将试剂全部加入溶液中,而没有在留在试管壁上。
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解决方法:检查其它通道中是否装入对照样例,点击“”,选
择相应通道,点击“读取”。
解决方法:在做标准溶液配置时,加完底物后晃动试管并将溶液
倒入比色皿后快速放入比色池,不要过很长时间后再放。检查比色皿
是否由于清洁而影响其透光率,更换新的比色皿或者把不干净的比色
皿放到酒精中浸泡4-5小时,然后用棉球将其擦拭干净。
解决方法:一般看对照的差值,检测的时间为3分钟,则差值应
该大于8,如果差值偏小达不到要求,则表明试剂中有一样或几样过
期,无法使用。
此问题分几种情况
A.当对照结束后,对照溶液的颜色没有什么变化,则表明有可
能是酶试剂过期。
B.当加入底物后,对照溶液一下子变为深黄色,则表明有可能
是底物过期。
C.如果换过一瓶新酶,依然出现A中的现象,则有可能是显色剂过期。
每种蔬菜都有自己特殊的一种化合物,该化合物对酶的作用和农
药对酶的作用是类似的,即:会抑制酶的活性。有些蔬菜本身对酶的
活性的抑制作用比较强,而有些则较弱。在所有的蔬菜中有刺激性气
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味的蔬菜对酶活性的抑制作用是比较强的,为来更好的消除这种来自
蔬菜本身的影响,上海博纳新技术研究所和中国农大合作开发来该标
准对照库,也是全国唯一一家有此对照库的厂家。
A.做一标准的空白对照,并且进行保存。
B.按“装入对照样例”键,打开对照数据库,在选择“标准对
照库”。
C.在对照上半部分选择当天做的空白对照。
D.在对照库下半部分选择所做蔬菜的修正对照。
E.在对照库的右上角出选择所要用的通道,并在通道号前打
“?”。
F.在对照库的右下角处按“读取”键完成转入工作。
解决方法:检查是否在做样品分析的时,加入底物后时间过的较
长才进行样品分析。是否样品本身的沉淀物和杂质含量较多,样品本
身的色素干扰作用,是否品种为假阳性——用滤纸或其他方式进行过
滤,在“系统设置”菜单中选种“自动修正色素干扰的检测结果”,
选择样品比对库。
此问题有数种可能,请分别检查下面的步骤是否正确:
A.没有做空白对照,或用来以前的空白对照。
B.在做样品溶液时,菜叶剪得太碎,以至于检测液颜色较深。
建议菜叶大小为1厘米见方。
C.检测液中有悬浮物或浑浊物,使光线无法正常通过比色皿,
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建议过滤后再检测。
D.试剂加入的顺序错误,或漏加某个试剂。试剂加入的顺序一
定是:酶,显色剂,底物。
E.比色皿污浊或放入方位错误,使光线无法通过比色皿。
F.比色皿外表有水滴使样品曲线不正常。
此问题有数个可能,请分别检查下面的步骤是否正确:
A.没有调0和100。
B.制作样品检测液时,静止等待的时间不够15分钟。
C.加入酶和显色剂后等待的时间不够15分钟。
解决方法:“系统设置”菜单中不要选种的“检测完成后自动保
存检测结果”,如选种,检测结果就需要在“统计汇总”菜单下的“自
动保存检测数据”一栏查看。
解决方法:由于数据库文件出现损坏,需要重新安装软件。平时
在做数据的过程中尽量多进行备份,以免数据丢失。
解决方法:把电脑的时间调整到服务器时间之后,重新进行上传。
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附表1.不同种类农药的浓度(mg/kg)与抑制率(%)的关系
浓度(mg/kg) 0.05 0.1 0.2 1.0 2.0 4.0 1 敌百虫
抑制率(%) 13.3 29 53 73.2 83.7 92.3
浓度(mg/kg) 0.1 0.5 1.0 2.5 5 16 2 敌敌畏
抑制率(%) 39.5 48.9 77.7 83.2 87.2 93.5
浓度(mg/kg) 0.5 3.125 5.0 7.5 10 16 25 3 伏杀磷
抑制率(%) 7.6 37.3 43.1 61.0 73.2 81.2 92.4
浓度(mg/kg) 1.0 2.0 3.0 10 15 25 30 4 久效磷
抑制率(%) 9.7 23.4 44.8 56.9 69.1 89.9 93.5
浓度(mg/kg) 1.25 2.5 5.0 10 15 20 30 5 蝰硫磷
抑制率(%) 16.8 41.6 50.1 65.3 79.3 81 96.4
浓度(mg/kg) 0.5 1.0 2.0 5.0 10 15 20 6 马拉硫磷
抑制率(%) 10.3 22.9 37.8 43.1 60.9 64.6 85.3
浓度(mg/kg) 0.05 0.10 0.50 1.0 2.0 4.0 7 西维因
抑制率(%) 2.6 40.5 50.6 58.1 76.0 94.0
浓度(mg/kg) 0.5 1.0 2.5 3.0 3.2 8 三硫磷
抑制率(%) 13.8 54.3 70.3 89.0 93.7
浓度(mg/kg) 1.0 2.0 3.0 10 20 40 9 乙硫磷
抑制率(%) 5.5 18.9 45.8 58.3 78.4 88.4
浓度(mg/kg) 0.5 1.0 2.0 4.0 10 20 10 氧化乐果
抑制率(%) 23.7 39.6 48.0 65.8 85.3 93.4
浓度(mg/kg) 0.1 0.2 0.4 0.5 0.8 1.0 2.5
4.0
11 内吸磷
抑制率(%) 18.1 28.3 32.5 40.9 48.0 61.6 81.6
87.3
浓度(mg/kg) 0.002 0.004 0.01 0.04 0.1 0.2 12 呋喃丹
抑制率(%) 18.4 25.9 51.8 85.1 97.1 99.9
浓度(mg/kg) 0.1 0.2 0.5 1.0 5 10 20 13 抗蚜威
抑制率(%) 16.3 20.6 31.0 41.2 59.4 69.3 87.3
浓度(mg/kg) 0.1 0.2 0.5 1.0 2.0 5.0 10 14 对硫磷
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抑制率(%) 10.3 20.1 39.2 46.3 57.6 68.9 85.4
浓度(mg/kg) 0.05 1.0 2.0 5.0 10 20 15 甲拌磷
抑制率(%) 13.3 30.4 44.3 58.3 75.3 87.6
浓度(mg/kg) 0.1 0.5 1.0 2.0 5.0 10 16 杀扑磷
抑制率(%) 6.3 13.9 27.2 60.2 74.9 86.6
浓度(mg/kg) 2.5 5 10 20 30 17 乐果
抑制率(%) 40.1 50.1 71.3 83.0 90.2
浓度(mg/kg) 0.2 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 18 倍硫磷
抑制率(%) 33.0 49.6 58.7 69.8 88.4 96.5
浓度(mg/kg) 2.0 5.0 10 20 30 19 甲胺磷
抑制率(%) 37.7 50.6 70.9 86.3 89.8
浓度(mg/kg) 0.5 1.25 2.50 3.0 10 20 20 水胺硫磷
抑制率(%) 9.8 27.7 38.9 57.7 73.6 87.6
浓度(mg/kg) 0.5 1.0 2.0 5.0 10 20 甲基对21 硫磷 抑制率(%) 13.6 26.6 39.0 65.6 71.3 85.5
浓度(mg/kg) 0.5 1.0 2.0 4.0 10 20 30 22 二嗪磷
抑制率(%) 14.4 27.0 39.9 41.4 62.5 76.3 84.3
浓度(mg/kg) 0.4 1.0 2.0 4.0 10 20 30 23 异吸硫磷
抑制率(%) 19.2 29.2 39.2 46.0 56.5 71.3 79.1
浓度(mg/kg) 0.1 0.2 0.5 1.0 2.0 24 灭多威
抑制率(%) 42.0 56.7 62.3 74.6 80.3
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