大,小鼠性别鉴定图片 (7页)

大,小鼠性别鉴定图片大,小鼠性别鉴定图片篇一：一种新生小鼠早期性别的快速鉴定新生小鼠早期性别的快速鉴定1牛永东，石刚刚汕头大学医学院药理教研室，汕头市新陵路22号，515041[摘要]目的：快速鉴定新生小鼠的性别。方法：根据GenBank上Sry（sex-determiningregionofY-chromosome）的序列， 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 小鼠的mSry引物，盲法对10只新生小鼠（<7日龄）及6只已知性别的小鼠抽提鼠尾DNA，并进行PCR性别鉴定。结果：雄性小鼠尾组织DNA样品中扩增出了1条91bp的DNA片段,雌性小鼠DNA样品没能有效扩增出特异的SryDNA片段。结论：利用PCR检测鼠尾中的mSry是一简便快捷、有效的新生小鼠早期性别鉴定手段。中图分类号：S865.1文献标识码：B关键词：PCR；性别鉴定；小鼠原发性肝细胞癌（HepatocellularCarcinoma,HCC）是我国及世界范围内常见的恶性肿瘤，其发病机制迄今为止尚不清楚。原发性肝细胞癌HCC病因学认为，乙肝病毒(HBV)感染和包括黄曲霉毒素(AFB1)在内的化学因素摄入是肝细胞肝癌发生的两大主要因素，且两者之间具有明确的协同作用1-3。然而，二者间交互作用的分子机制不清。流行病学调查发现：男性HCC发病率是女性的3-5倍；50岁以下男性中HCC发病率高达女性的7-10倍。因此，性别差异是HCC病因学研究中一个不可忽视的重要影响因素。因此，包括黄曲霉毒素(AFB1)在内的化学致癌物暴露诱导HCC的动物模型以雄性为多见。本试验采用PCR对新生幼鼠（7日龄内）进行性别鉴定,旨在建立一简单、快速鉴定新生个体性别的方法。1资料与方法1.1新生幼鼠基因组DNA的提取新生7日龄以内的未知性别的幼鼠10只，分别剪去鼠尾2-3mm，置于1.5mL的EP管中,加入80?lNaOH·EDTA溶液，沸水浴60min，加入80?lTris-HCl溶液,吹打混匀,离心后取2?l上清作为PCR模板。1.2引物设计根据小鼠Sry基因序列（GI：200873），用NCBI/Primer-BLAST（Primer3online）设计引物mSry。Forwardprimer：AGCTGTCTTGACTAATCGTAGTTC；Reverse1基金资助：中国博士后科学基金(No.2012M510200)和广东省自然科学基金（No.S2012010010955)primer：TGCATGAGTACTGACTTGTATCTG。1.3PCR及电泳鉴定采用2×PCRMix，20?l体系中加入DNA模板2?l。反应程序:95℃预变性2min；95℃变性30Sec，59℃退火30Sec,72℃延伸20Sec,35个循环;72℃延伸5min。2%的Agarosegel，90V，15min。凝胶成像系统检测拍照。2结果2.1鼠尾DNA的质量控制新生7日龄以内的幼鼠鼠尾进行DNA提取与PCR扩增实验，做2个实验重复，用小鼠β-Actin引物进行PCR实验后，10?lPCR产物的琼脂糖电泳结果，离心柱型动物组织基因组试剂盒提取DNA做扩增阳性对照。由图1可见，新生7日龄以内的幼鼠鼠尾DNA可以用于下一步的PCR鉴定。2.2性别鉴定用所设计的mSry引物对10只7日龄内的新生幼鼠和已知性别的小鼠进行鉴定,雄性DNA样品可扩增91bp的mSry基因片段,而雌性DNA样品中未见特异的mSry基因片段。由图2可知,1,2,4,5，8号是雌性；3,6,7,9,10号是雄性。此外，对6只已知性别的小鼠进行了鉴定,正确率为100%。3讨论有关HCC动物模型有很多，主要包括灵长类、大鼠、兔子、树鼩、土拨鼠、旱獭、金黄地鼠、北京鸭等。但兼顾考虑病毒(HBV)感染和化学致癌物协同作用、HCC显著的性别差异等因素，以及试验费用和HBV病毒宿主局限性等原因，目前化学致癌物暴露诱导的HCC动物模型仍多选择小鼠。由于成年小鼠对AFB1等化学致癌物的肝毒性多不敏感（多数情况下，小鼠多不自发肝细胞癌）；但新生小鼠，尤其是新生7日龄内的幼鼠，由于其相关代谢酶系尚未发育成熟，也被用于化学致癌物AFB1等的诱导成瘤实验。目前新生仔鼠性别鉴定，主要在离乳后依据生殖器与肛门之间的距离长短及肛门与生殖器有无被毛等为标志。因而，不能满足新生7日龄以内的幼鼠性别的要求，因此，及早获得新生仔鼠性别就显得比较重要,利用PCR对新生个体进行性别鉴定,然后再根据需要进行选择性处理。本研究中利用碱裂解法快速得到组织DNA，同时使用常规PXR获得特异的PCR产物， 说明 关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书 本套技术是一简便、快捷、且有效的手段。但鉴于PCR假阳性和假阴性的考虑，建议实验中一定要设立特异的阳性和阴性对照，以避免实验中出现的假性结果；其次，实验操作过程中要尽量避免交叉污染。参考文献：[1]QianGS,RossRK,YuMC,YuanJM,GaoYT,HendersonBE,WoganGN,GroopmanJD.Afollow-upstudyofurinarymarkersofaflatoxinexposureandlivercancerriskinShanghai,People'sRepublicofChina[J].CancerEpidemiolBiomarkersPrev1994;3:3-10.[2]LlovetJM,BurroughsA,BruixJ.Hepatocellularcarcinoma[J].Lancet2003;362:1907-17.[3]El-SeragHB,RudolphKL.Hepatocellularcarcinoma:epidemiologyandmolecularcarcinogenesis[J].Gastroenterology2007;132:2557-76.篇二：7.实验动物的性别鉴定实验动物的性别鉴定1、大、小鼠的性别鉴定离乳仔鼠性别鉴定主要以生殖器与肛门之间的距离长短及肛门与生殖器有无被毛为标志。识别要点是：①雄性的生殖器与肛门之间的距离较远，雌鼠较近；②雄性的生殖器与肛门之间有毛；③雄性的生殖器突起较雌鼠大；④雌鼠乳头较雄鼠明显。成熟后，雄性可见阴囊,雌性乳头明显而易于区分。2、豚鼠的性别鉴定豚鼠的性别鉴定主要是通过生殖器形态来判断。雌性外生殖器阴蒂突起比较小，用拇指按住阴蒂突起，余指拨开大阴唇的皱褶，可见阴道口呈”V”形（注意发情间期的闭锁现象，即一种除了发情和分娩时外，关闭阴道口的细胞结构）；雄性外生殖器有包皮覆盖的阴茎小隆起，用拇指按住其基部包皮，可见龟头向外突出。3、兔子的性别鉴定幼兔的性别鉴定主要以尿道开口部与肛门之间的距离及尿道开口部的形状来判别。哺乳期仔兔，雄性尿道开口部与肛门之间的距离较远，为雌性的1.5－2倍，雌性较近。雌性尿道开口扁形，大小与肛门同；雄性圆形，略小于肛门。1月龄仔兔，雄性生殖孔呈圆形，翻出可见呈圆柱体的突起；雌性生殖孔呈Y形，翻出仅见有裂缝，裂缝及于肛门。3月龄以上成年兔，雄性阴囊明显而雌性无阴囊；雄性头大短而圆而雌性头小略呈长形。4、猫的性别鉴定幼猫的性别是根据生殖器与肛门的距离来判断。距离远者为雄性，距离近者为雌性。5、猴类的性别鉴定猴类性别的区分较为困难。首先检查尿道开口，许多雌性动物有较大的阴蒂，其腹侧形成沟状通向尿道口，而雄性动物的尿道开口在阴茎头上。触摸阴囊内是否有睾丸是确定其雌雄的最可靠办法。6、鸟类的性别鉴定鸟类在第二性征如肉冠、羽毛、发声出现前，区分性别极为困难，但可以通过孵出时24小时内进行外翻泄殖腔鉴别。雄性中可观察到微小而能勃起的孔突上有输精管开口，但此法不仅要有丰富的经验，而且准确性常难以保证。7、鱼类许多鱼从外形上不易区分其雌雄，但可通过繁殖期的颜色不同及第二性征加以区分。雄性马口鱼一到生殖季节，体色变为红蓝条子相间；麦穗鱼平时体测呈灰黄色，到了生殖期雄性变成暗黑。鱼类的第二性征是珠星（或称追星），是一种灰白色结节状的皮肤衍生物，用手触摸感觉粗糙。一般在繁殖季节出现，雌性机体上出现较多且粗壮，雄鱼小而少。珠星大多分布在头部吻端或胸鳍上。四大家鱼（青、草、鲢、鳙）的珠星分布在胸鳍上。篇三：幼龄大鼠的性别鉴别方法新探幼龄大鼠的性别鉴别方法新探【摘要】目的探讨幼龄大鼠性别的最佳鉴别方法。方法将同期交配的孕鼠分为4组，针对乳鼠在不同日龄的身体发育特点，在3～4日龄采用观察其肛门与外阴距离和相对距离的方法、对5～8日龄再附加对乳头（乳状突）观察的方法进行性别鉴别对比实验。结果B组鉴别法相对于A组准确度高，D组以距离再结合乳头观察的方法来鉴别乳鼠的性别无误差产生。结论上述两种方法对于幼龄大鼠的性别区分效果优于传统鉴别方法。LiZhiman，WangDeli，XuePing，etal.LaboratoryAnimalCenterofJilinUniversity，Changchun130021.【Abstract】ObjectiveTostudytheoptimummethodofdiscriminatingthenepionicratssex.MethodsThepregnantratsmatinginthecorrespondingperiodweredividedintofourgroups.AsfortheNepionicRatsatthebodygrowthcharacteristicofdifferentdaysages，themethodofobservingthedistanceandtherelativedistanceoftheanusandthevulvaswhentheywerethreetofourdaysoldwasusedtodiscriminatethesex.Whentheyarefivetoeightdaysold，themethodofobservingthepapillaswasaddedtodiscriminatethesex.ResultsTheaccuracyofdiscrimiˉnatingmethodinGroupBwasbetterthanthatinGroupA;themethodofobservingthedistancesandpapillaswasnoterrortodiscriminatethesexofnepionicrat.ConeclusionIthasthesignificanteffectsthatthetwomethodsdistinˉguishthesexofthenepionicrats.Keywordsnepionicratsexualdiscriminationdistance医学实验动物中，幼龄大鼠的性别区分的准确程度对于某些如生殖生理、细胞生物学、制药工程等有关生命科学实验具有十分重要的意义。而大、小鼠与猴及狗不同，生后外生殖器未熟，雄性要3～4周龄睾丸下降，雌性4～5周龄阴道才开口，因此，随着生后龄期的变化观察的侧重点亦异。传统的鉴别方法是:看肛门与外阴间的距离，距离长的为雄性，距离短的为雌性［1］。经笔者长期实践发现，此方法有一定的局限性，以此方法区分乳鼠性别常有失误产生。如结合仔鼠的几个不同日龄段特点来鉴别则更好。1材料与方法1.1实验动物230～270g雌性Wistar大鼠40只，290～330g雄性Wistar大鼠20只。来源于吉林大学实验动物中心。1.2方法1.2.1将雌、雄Wistar大鼠按2:1比例交配，以托盘阴栓法［2］检查雌鼠受孕情况，将阳性者提出。4天内提出32只孕鼠，记住交配日期，单笼饲养。1.2.2把孕鼠分为A、B、C、D四组，每组8只。19～21天乳鼠出生，其中A组计66只、B组65只、C组70只、D组68只。1.2.3在3～4日龄，将A组乳鼠提出，以肛门与生殖突间距离远近判别每只乳鼠的雌雄;将B组乳鼠提出，以肛门与生殖突的相对距离（即与其他乳鼠作相对比较）的远近来判别雌雄，并观察乳突的有无。然后，将A组“雄鼠”32只分4窝由A组的1～4号母鼠哺乳;将“雌鼠”34只分4窝由A组的5～8号母鼠哺乳。将B组的“雄鼠”34只分4窝由其1～4号哺乳，“雌鼠”31只由其5～8号哺乳。注意:在放入前一定要用沾有母鼠体液气味的垫料与待喂养乳鼠混合10min左右，以使母鼠适应。1.2.4在5～8日龄，将C组乳鼠提出，仅以肛门与生殖突（或称外阴）距离远近为准判别雌雄;对D组乳鼠以肛门与生殖突的距离相对较近且鼠蹊部至胸部间有3～4对点状乳头（或可称为乳状突）为雌性;以肛门与生殖突间距离相对较远且鼠蹊部与胸部间无点状乳突者为雄性。然后，将C组“雄鼠”33只分4窝由C组的1～4号母鼠哺乳;将“雌鼠”37只分4窝由C组的5～8号母鼠哺乳。将D组的“雄鼠”36只分4窝由其1～4号哺乳，“雌鼠”32只由其5～8号哺乳。在放入前要用沾有母鼠尿液气味的垫料与待喂养乳鼠混合15min左右，以使母鼠适应。1.2.521日龄离乳时核查乳鼠实际性别。2结果A组中有5只失误，B组1只;C组3只，D组0。具体情况如下: 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1幼龄大鼠性别鉴别结果与实际性别的对照（略）由此可见，B组（4日龄内的乳鼠）鉴别法相对于A组准确度较高;D组（5日龄以后）以距离再结合乳头观察的方法来鉴别乳鼠性别无误差产生。3结论与讨论3.1对于1～4日龄乳鼠，由于发育时间短，其其他生理特征尚未表现出来，只能凭其肛门与生殖突（笔者认为:此时此称法较外阴或生殖器要恰当）间的距离远近来判断，远者为雄性，近者为雌性。但因为乳鼠的体形大小与母鼠的胎产仔数的多少及其在胚胎期的发育状况有关，这两点间的距离也是相对的，所以在观察某胎其中1只鼠的肛门与生殖突间距离时，要参照另几只乳鼠的距离，否则容易出现失误。3.2对于5日龄以后的乳鼠，在观察其肛门与生殖器的距离远近的同时，一定要结合其乳头（或称乳状突）的有无来判断性别。在此时期，雌性乳鼠的体毛与乳头几乎是同时出现的。此时由于体毛呈浅白色，在其较稀疏时，乳头在皮肤上呈圆形点状。随着毛发逐渐浓密，乳头部位就呈凹陷深色，很容易发现。值得注意的是，在此阶段，要把乳头与脐带突加以区别:乳头出现在鼠蹊部至胸部间，以腹中线为轴成对对称排列，仅雌性有;而脐带突仅体现为腹部中间的一个点，雌雄均有。3.3单一性别的乳鼠在医学实验中应用较多，而清洁级和SPF动物的生产设施又为仔鼠性别区分带来一定的难度。希望此方法对大家有所借鉴。参考文献1魏泓.医学实验动物学，成都:四川科学技术出版社，1998，167-168.2李彦清，邵龙江，李森，等.大鼠阴栓的实验观察和孕鼠模型鉴定方法的比较.中国实验动物学杂志，2002，12（1）:17-18.作者单位:130021吉林长春吉林大学实验动物中心小鼠和大鼠是一个道理：远公近母一般而言，比较大一点的老鼠雄性的睾丸还是比较明显的，这很容易区分。对于比较小的，可以据以下方法：1.看肛门与生殖器之间的距离：雄性隔得远，雌性隔得近。2.雄性阴茎朝头的方向突出，可挤压包皮使其露出而确认。雌性较小时可见闭合的阴道口，挤压亦可张开。可以说，这个方法是最本质的，最能确认的。像兔、豚鼠等这些较难辨认雌雄的动物均可用此法。当然，看得多了，不用如此挤压，一眼就可看出来。将生殖器周围皮肤稍微用力往下挤压，可以分清柱状和缝状：前者雄，后者雌。3.看乳头。刚开始一定要认真仔细地观察，这样会有一些经验。熟悉以后，可以很迅速很准确的分出来。4.脑下垂体和肾上腺：雌性的远大于雄性5.肾脏鲍氏囊上皮(epitheliumofBowman'scapsuleinkidney)：雄性：立方上皮(cuboidal)雌性：鳞状上皮(squamous)未成年的动物性器官还没有成熟，雄鼠的睾丸还没有坠入阴囊，所以只有看肛门和肚子上的突起部位之间的距离了。雌小鼠的肛门距离生殖器是特别近的，之间基本没什么距离，其实有时我们看成年动物也是看这点。雄鼠除了距离要大一些外，生殖器略显凸起。1)将老鼠小心拿起,查看它的肚子一带,会发现有两个上下排列的小孔。2)如是雌鼠的话,这两个小孔的距离会较近，几乎连在一起。3)如是雄鼠的话,这两个小孔的距离会较远。(来自::大,小鼠性别鉴定图片)4)雄鼠尾部的两个洞（及）是明显地分开的，而雌鼠的两洞则是紧靠在一起的。成年鼠更易分出雌雄：雄鼠尾巴的两则各有一个阴囊，所以尾部看起来较膨大。而雌鼠尾部则较钝，腹部上有两排点状的乳头。