显微镜物镜的五个基本参数一、数值孔径（NA）子午光线能进入或离开纤芯（光学系统或挂光学器件）的最大圆锥的半顶角之正弦，乘以圆锥顶所在介质的折射率，数值孔径是判断物镜性能（分辨率、焦深、亮度等）的重要指数。数值孔径又叫镜口率，简写为NA。它是由物体与物镜间媒质的折射率（n）与物镜孔径角的一半（。\2）的正弦值的乘积，其大小由下式决定：NA=nXsinG/2。数值孔径!N-A.=AXsinSn：样品和糊镜丽喘之间的介蜃所具裔的折尉準（空*Un=1才1n=1.5I5）4陆外光践気光轴何前央甬数值孔径简写NA（蔡司显微镜的数值孔径简写CF），数值孔径是物镜和聚光镜的主要技术参数，是判断两者（尤其对物镜而言）性能高低（即消位置色差的能力，蔡司公司的数值孔代表消位置色差和倍率色差的能力）的重要标志。其数值大小分别标在物镜和聚光镜的外壳上。孔径角又称“镜口角”，是物镜光轴上的物体点与物镜前透镜的有效直径所形成的角度。孔径角越大，进入物镜的光通亮就越大，它与物镜的有效直径成正比，与焦点的距离成反比。显微镜观察时，若想增大NA值，孔径角是无法增大的，唯一的办法是增大介质率n值。基于这一原理，就产生了水浸系物镜和油浸物镜，因介质的折射率n值大于1,NA值就能大于1。数值孔径最大值为1.4,这个数值在理论上和技术上都达到了极限。目前，有用折射率高的溴萘作介质，溴萘的折射率为1.66，所以NA值可大于1.4。与其他参数的关系：数值孔径是显微镜物镜的重要参数，决定了物镜的分辨率。与物镜的放大倍数，工作距离，景深有直接关系。一般来说，它与分辨率成正比，与放大率成正比，焦深与数值孔径的平方成反比，NA值增大，视场宽度与工作距离都会相应的变小。容易产生的误区：数值孔径与分辨率成正比，但这并不是说在选择物镜的时候一定要选择数值孔径（NA）最大才是最好，因为物镜还会有很多其他重要参数，比如荧光透过率、工作距离等等，最好根据自己的实验选择。二、焦深焦深也叫景深，其定义是：指使用显微镜观察和拍摄样品表面时，从对准焦点的位置开始，改变物镜与样品表面的距离时，对焦能够保持清晰的范围。肉眼的调整能力因人而异，所以焦深也会出现因人而异的情况。现在常用的是与实验结果比较一致的Berek公式。±0.0,F.=A1CN.A.y(Um)D.O.F.；DepthOfFocu$m；眼詩的好崭龍尢o.ooh（设眼冯的视角为5曲］M:息倍率（物镜倍率x目镜倍率）A:光的液喪A=0.土D.O.F.h350+0.275N.A.XM(D上式表駁了li.A.趣大摆深趣小的持匸°MzMPLFLNIOOx,HHNIOxH0.39+0.34工0.73UPi三、齐焦距离齐焦距离是指，对准焦点时的物镜镜体定位面到物体表面的距离oOLYMPUSUIS2/UIS光学系统物镜的齐焦距离为45mm，ZEISSICCS光学体统、LEICAHC光学系统的齐焦距离也是45mm，NIKONCFI60光学系统的齐焦距离是60mm。斓讳表面齐焦距离示意图四、工作距离工作距离也叫物距，即指物镜前透镜的表面到被检物体之间的距离。镜检时，被检物体应处在物镜的一倍至二倍焦距之间。因此，它与焦距是两个概念,平时习惯所说的调焦，实际上是调节工作距离。在物镜数值孔径一定的情况下，工作距离短孔径角则大。数值孔径大的高倍物镜，其工作距离小。五、分辨率分辨率是指在物体表面能够分解的最小间隔。数值孔径(NA)越大，分辨率越高。通常，分辨率的大小可以用下式表示。£=0.61X(RevleighiJS)■.rn■■A:长(可见光A=0.55tim计理)N.*.：物镜的1?］；F/PLFLM10QX0.9Q).A=0.&5um时fNLA,0.90
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