茶多酚的抗病毒活性研究

第30卷第6期2007年12月云南中医学院学报JournalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicineVol.30No.612.2007茶多酚的抗病毒活性研究‘张文明’，陈朝银‘，韩本勇‘，赵声兰24，叶敬昌(1.昆明理工大学一清华大学生物资源开发工程研究所，云南昆明650224;2.云南中医学院，云南昆明650200)关键词:茶多酚;抗病毒;EGCG;病毒中图分类号:8284文献标识码:A文章编号:1000-2723(2007)06--0057-03茶多酚是从茶叶提取的一组多酚美物质的通称，通常为儿茶素和没食子酸衍生物。茶多酚有多种功能:清除自由基、抗氧化、降压降血脂、减肥，提高免疫力、抗菌、抗毒素、抗病毒、抗辐射及抗癌等作用。有些功能已经用于各个领域中，如用于饲料添加剂，食品添加剂中抗氧化，以及食品着色剂等。而茶多酚的天然低毒高效抗病毒作用正受到生物医学领域的高度关注，试图以茶多酚作为突破口，筛选出理想的抗病毒药物。????????????????EGCG(表没食子儿茶素没食子酸酷)OHECG{表儿茶素没食子酸醋》EGC(表没食子儿茶精)EC(表儿茶素)TFZA(茶黄素一3一食子酸酷)C(儿茶素)TF,(茶黄素一3,3'一二没食子酸醋)‘基金项目:云南省科学研究基金项目.N0;2006CO046M收稿日期作者简介2007--08--03张文明(1984一)，男，浙江义乌人，在读研究生，主要研究方向:杀微生物剂。△通讯作者:赵声兰，E-mail:zhaoshenglan@163.com万方数据2007年云南中医学院学报第30卷TF2B(3一异茶黄素-3一单没食子酸醋)图1茶多酚中的主要化合物结构及其英文缩写名1抗流感病毒茶多酚对流感病毒A3直接灭活作用实验表明，在3.12-50}Lg/mL浓度范围内，流感病毒A3在混有茶多酚的培养条件下培养，茶多酚具有显著降低病毒活性、抑制病毒增殖的作用;茶多酚对流感病毒A3的治疗作用实验表明茶多酚在6.25一50Rg/mL浓度范围内具有显著的抗流感病毒A3的作用，且其作用随药物浓度的增加而相应增强。 说明 关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书 茶多酚有很好的体外抗流感病毒A3的作用〔‘〕。EGCG和ECG在MDCK细胞培养中对流感病毒的复制有抑制活性，而且对包括A/HIN1,A/H3N2和B病毒在内的各种流感亚型病毒都有活性。对于甲型流感病毒，EGCG,ECG和EGC的EC。分别为22-28[,M,22一40wM,309一318RM，同时EGCG和ECG都有凝集活性，它们对各种亚型病毒的凝集活性都不同，而且EGCG的凝集活性相对更高。定量RT一PCR分析表明，在高浓度条件下，EGCG和ECG抑制MD-CK细胞中病毒RNA的合成，而EGC没有此活性;与此类似，EGCG和ECG比EGC表现有更高的神经胺酶抑制活性。说明儿茶素类中3一没食子酞基在抗病毒中起到重要作用，而2位三经基苯中的5一经基起次要的作用;与凝集反应共同表明抗病毒活性不仅仅由凝集活性介导，而且还与改变病毒膜的物理性质有关[21。2抗轮状病毒和牛冠状病毒[[3]对红茶茶黄素各组分分别进行活性测定和混合后总体流行性测定，结果发现分离得到的初始峰组分的抗牛轮状病毒活性最高，其ECS。为0.1258扩mL，而TFZA的抗牛轮状病毒活性最低，其ECS。为251.39p,岁mL。四种成分混合的抗牛轮状病毒活性比四种成分的活性之和高，说明它们之间有协同效应。对于抗牛冠状病毒，仅仅混合的粗提物才有活性，其ECS。为34.7wg/mLo583抗SARS病毒在SARS流行期间，有许多通过喝茶来预防SARS感染的事例，说明可能茶内有能够抗SARS病毒的成分。3CLP`0样蛋白酶被认为是SARS一Cov在宿主细胞内复制的关键。人们从天然产物信息库的720种组分中筛选出有抗3CLP`0活性的组分，发现糠酸和TF2B有活性，ICS。为7wM，而这两种组分是属于茶叶中的天然茶多酚。进一步对绿茶、乌龙茶、普洱茶及红茶提取物进行3CLP-抑制活性研究，发现来自普洱茶和红茶的提取物比绿茶和乌龙茶活性高。对一些茶内的已知成分进行抑制3CLP-抑制活性测定，发现咖啡因、EGCG,EC,C,ECG,EGC这些成分都没有抑制活性，而只有TF，是3CLP`0抑制剂，表明茶叶中的茶黄素TF,能够抑制3CLP-活性[a1。4抗腺病毒感染对绿茶中儿茶素及其主要成分EGCG抗腺病毒感染活性的研究结果表明，当加人EGCG100pm到培养基中培养受感染的细胞，结果病毒以两个数量级减少，其ICS。为25RM，且对Hep2细胞的治疗指数为22;他们还发现EGCG在病毒感染的过渡期加人时效果最佳，说明EGCG抑制病毒感染过程中的一个或若干个阶段，另外，有感染性的病毒和产生的病毒颗粒效价比病毒蛋白质的合成更容易受影响，说明其中一个受抑制的阶段是病毒的组装阶段。另一个可能受抑制的是病毒成熟时的裂解阶段，因裂解由腺病毒内肤酶来执行。而将儿茶素的四种组分分别对腺病毒内肤酶进行测试，EGCG的抑制活性最高，其ICS。为10911M，而 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 半胧氨酸蛋白酶抑制剂PCMB的IC5B仅为714p.MoEGCG对纯腺病毒颗粒的灭活作用的ICS。为250，而各种绿茶的灭活作用的ICS。在245和3095之间。由此得出，EGCG能在细胞内外通过若干种机制来抗腺病毒[5]。5抗HIV通过T淋巴细胞(H9)和单核细胞样(THP-1)系统，分析在慢性感染细胞中EGCG对HIV病毒颗粒附着、注人、反转录、组装及病毒mRNA表达的破坏作用，同时通过无细胞实验测定了抗病毒蛋白酶的活性。结果发现EGCG对病毒的附着及其mRNA的表达无抑制活性。但是当EGCG的浓度大于1wm时，对病毒颗粒有破坏作用，且在急性感染的单核细胞样细胞中能很好地抑制病毒的注人和反转录;在无细胞实验中，当EGCG浓度大于10wM时，能够减小病毒蛋白酶对底物的亲和力。在HIV一I慢性感染的THP一I中，EGCG对病毒的组装有剂量依赖性的抑制作万方数据第6期张文明，等:茶多酚的抗病毒活性研究’用，且随剂量的增大而增强。在THP一1细胞中，发现病毒mRNA的表达受到EGCG的有效抑制。相反，在T淋巴细胞(H9)中，EGCG对HIV一1的mRNA的产物表达却没有抑制作用。因此，EGCG通过作用于病毒生活周期中的若干个阶段来实现对HIV一1的抑制作用困。用中药含药血清实验方法、MTT细胞毒性实验、合胞体形成抑制实验等方法对EGCG抗HIV一1活性进行的检测结果发现，抑制50%合胞体形成的样品浓度EC50为2.5NLg/mL，选择指数Si(CCSO/ECso)为4.108，灭活50%HIV一1病毒的样品浓度INCS。为7.29WmL"。说明EGCG有较好的抗HIV活性，但选择指数较低，还需进一步研究。对红茶、绿茶中的茶黄素衍生物和儿茶素衍生物抗HIV一1的研究表明茶黄素的衍生物比儿茶素的衍生物有更高的抗HIV一1活性，而且它们可以通过阻断HIV一1外壳糖蛋白介导的膜融合来禁止病毒进入靶细胞，这种茶多酚膜融合的抑制活性与Gp41六螺旋束的生成阻断有关。另外，计算机辅助分子对接分析，这些茶多酚可以与Gp41N末端七价重复序列形成的中央三聚卷曲螺旋的表面高度保守疏水口袋相连接。这些结果表明，茶(特别是红茶)是抗HIV因子的来源，而茶黄素衍生物可能可以作为HIV一1靶向作用于Gp41并进入靶细胞的抑制物的先导化合物[8]。通过核磁共振分光光度法对绿茶中EGCG结合T细胞受体进行的研究结果显示，EGCG在CD4的Dl结构域中有结合位点，而这个口袋状结合域是与HIV一1的糖蛋白120结合的。EGCG的生理浓度(0.2wM)可以抑制HIV一I糖蛋白与人CD4T细胞的结合[19106抗EB病毒对(一)一表没食子儿茶精没食子酸醋抑制EB病毒裂解周期的研究中，通过免疫印记、流式细胞术、微点阵、间接免疫荧光法进行实验分析，表明当EGCG浓度超过50[tM，能够抑制包括TRA,ZTA,EA一D在内的EB病毒裂解周期蛋白的表达，但不影响EBNA一1的表达。另外，通过微点阵和瞬时转染分析表明，EGCG通过抑制立即基因的转录来阻断EB病毒的裂解周期，从而抑制EB病毒进人裂解周期〔10]。7抗HPV对绿茶提取物(去咖啡因绿茶儿茶素混合物制剂、polyE,EGCG)以药膏及胶囊的形式进行临床实验研究，研究对象为HPV感染的病人。发现两种形式对病人都有一定的疗效，说明绿茶提取物是HPV患者的一种潜在治疗药物叫。以上研究表明，茶多酚对多种病毒都有较好抗病毒活性，主要的活性成分是EGCG，其它成分也有部分的抗病毒活性。试验证明作用机制可能是抑制病毒生活周期中的若干阶段。天然、低毒、高效、广谱抗病毒特点的茶多酚有望成为理想的抗病毒药物。〔参考文献〕仁月彭慧琴，蔡卫民，项哨.茶多酚体外抗流感病毒A3的作用仁J].茶叶科学，2003,23(1):19一81.[2了SongJM，LeeKH,SeongBL.AntiviralEffectofCate-chinsinGreenTeaInfluenzaVirus[J〕.AntivirRes,2005，68(2):74一66.[3]ClarkKJ,GrantPG,SarrAB,etal.AninVitroStudyofTheaflavinsExtractedFromBlackTeatoNeutralizeBo-vineRotavirusandBovineCoronavirusInfections[J].VetMicrobiol,1998，63(2一4):57一147.[4]ChenCN,LinCPC，HuangKK,etal.InhibitionofSARS一CoV3C-likeProteaseActivitybyTheaflavin-3，3'-digallate(TF3)[J].EvidBasedComplementAlter-natMed,2005，2:15一209.[5]WeberJM,Ruzindana-UmunyanaA,ImbeaultL,etal.InhibitionofAdenovirusInfectionandAdenainbyGreenTeaCatechins[J〕.AntivirRes,2003，58(2):73一167.仁6]YamaguchiK,HondaM,IkigaiH，etal.InhibitoryEffectsof(一)一EpigallocatechinGallateontheLifeCy-cleofHumanImmunodeficiencyVirusTypel(HIV一1)[J].AntivirRes,2002，53(1):19一34.[7]张峰，一种中药含药血清及五种杀微生物中药制剂抗HIV一1作用〔D]，云南，昆明医学院，2004.仁8」LiuSW,LuH,ZhaoQ,etal.TheaflavinDerivativesinBlackTeaandCatechinDerivativesinGreenTeaInhibitHIV一1EntrybyTargetingGp41[J].BBA，2005，1723(1一3):81一270.[9]WilliamsonMP,McCormickTG,NanceCL,etal.Epi-gallocatechinGallate,theMainPolyphenolinGreentea,BindstotheT-cellReceptor,CD4;PotentialforHIV一1therapy[J].JAllergyClinImmunol,2006,118(6):74一1369.〔10]ChangLK,WeiTT,ChiuYF,etal.InhibitionofEp-stein-BarrVirusLyticCycleby(一)一EpigallocatechinGallate[J〕.BiochemBiophysResCommun,2003，301(4):8一1062.[川AhnWS,YooJ,HuhSW,KimCK,etal.ProtectiveEffectsofGreenTeaExtracts(PolyphenonEandEGCG)onHumanCervicalLesions[J〕.EurJCancerPrev,2003,12(5):90一383.(编辑:左媛媛)59万方数据