利用转录组测序生物信息学初步探讨热射病预后关键基因 &nbsh1; 利用转录组测序生物信息学初步探讨热射病预后关键基因 张玲琴, 谢建刚, 王倩梅, 徐云云, 黄 杨 热射病是自有记录以来一直困扰人类的疾病。由于全球气温不断升高，热射病的发生率和病死率明显增加，成为近年来广受关注的社会公共卫生突发事件[1]。热射病发病急且进展迅速，可导致多个器官发生系统性损伤，致死率、致残率特别高。据统计，在夏季热射病人群发病率为(17.6...
张玲琴, 谢建刚, 王倩梅, 徐云云, 黄 杨
热射病是自有记录以来一直困扰人类的疾病。由于全球气温不断升高，热射病的发生率和病死率明显增加，成为近年来广受关注的社会公共卫生突发事件[1]。热射病发病急且进展迅速，可导致多个器官发生系统性损伤，致死率、致残率特别高。据统计，在夏季热射病人群发病率为(17.6～26.5)/10万，住院患者病死率为14%～65%，而入住ICU的热射病患者病死率在60%以上[2]。热射病主要 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 现为中枢神经系统损伤、凝血障碍、肝肾功能衰竭、横纹肌溶解等临床现象[3]。目前临床上主要采取快速降温、纠正休克、改善凝血、脑保护及肝肾功能替代疗法等手段进行治疗[4]。研究[5]发现，热射病患者即使接受同样的治疗也可能预后不同，因而明晰影响热射病预后的要素，对热射病治疗可能有一定的指导意义。国内目前对影响热射病的相关研究主要集中在根据临床结果与预后相关性分析[6]，国外有通过动物模型、细胞测序探索热射病发展的关键分子因素，提示免疫细胞分化及功能调控是主要原因[7]。本研究拟通过对不同预后热射病患者发病早期外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells， PBMC)转录组测序结果进行生物信息学数据分析，探究潜在的关键细胞通路和功能，筛选出影响热射病预后的重要基因，为热射病临床研究和治疗提供参考。
1.1一般资料 选取2019-06-01～2020-08-30空军军医大学附属西京医院急诊科救治的热射病患者。纳入 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 ：按照中国热射病诊断与治疗专家共识[2]，诊断为热射病；年龄18～60岁；入科时病程不足24 h。排除标准：有肿瘤、血液、免疫相关基础疾病；签字同意采集外周血进行医学研究。本研究已在西京医院伦理委员会备案并通过审批(审批号：KY20193106)。
1.2分组和外周血单个核细胞转录组测序结果 入组患者发病24 h内收集外周血，分离PBMC并液氮冻存以长期保存。共29例患者诊断为热射病，按照预后分为生存组和死亡组，其中生存组18例，死亡组11例。随机数字法选取6例生存患者和4例死亡患者PBMC提取总RNA，送广州基迪奥公司进行热射病患者文库制备和测序分析。
1.3差异基因筛选 将测序所得数据，进行数据过滤。过滤后的高质量数据通过Cufflinks程序求各个基因的相对表达量值，构建新的转录本。对新的转录本进行差异表达生物信息学分析。首先按照错误发现率(false discovery rate， FDR)与两组间表达量的比值(FC)，对其取以2为底的对数(log2FC)的值来筛选差异基因，条件为： FDR1。求得差异基因之后，利用GO和KEGG Pathway数据库比对分析关键通路，结合基因表达热图，筛选出与预后关联最密切的基因。
1.4关键基因RT-PCR验证 提取存活组18例，死亡组11例患者PBMC的总RNA，按照反转录试剂盒(北京gennstar公司)予以反转录。反应体系如下：反转录产物1 μL，前引物0.5 μL，后引物0.5 μL，SYBR Green(北京gennstar公司) 5 μL，无RNA酶去离子水3 μL。反应程序：95 ℃持续2 min，模板变性；(95 ℃持续20 s，58 ℃持续15 s)×40次循环。所得Ct值按照2-△△Ct公式处理，以GAPDH为内参，计算目的基因相对表达量。
2.1两组差异基因表达火山图 测序文库下机数据使用edgeR软件进行差异分析。结果显示，筛选出明显差异基因693个，与生存组比较死亡组表达上调基因326个，下调基因267个。见图1。
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