实验二蛋白质的两性反应与等电点测定了解蛋白质的两性解离性质掌握测定蛋白质等电点的
方法
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实验目的PCOOHNH2PCOO-NH3+PCOO-NH2PCOOHNH3+pH=pIpH>pIpH
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面电荷、水化膜本实验配制了各种不同pH值的缓冲液，沉淀出现最多的缓冲液pH值即为酪蛋白的等电点实验器材与试剂大试管、滴管、刻度吸量管0.5％酪蛋白醋酸钠溶液0.01％溴甲酚绿指示剂(指示范围:pH3.8-5.4)0.02MHCL溶液、0.02MNaOH溶液0.01M醋酸溶液、0.10M醋酸溶液、1.00M醋酸溶液蛋白质的两性反应（1）实验步骤取一干净试管酪蛋白液10滴溴甲酚绿指示剂3滴观察溶液颜色并解释现象蛋白质的两性反应（2）滴加0.02MHCL溶液边滴加边混匀有最大沉淀产生，观察溶液颜色变化至沉淀消失，观察溶液颜色并解释现象继续滴加0.02MHCL溶液边滴加边混匀蛋白质的两性反应（3）继续滴加0.02MNaOH溶液边滴加边混匀有最大沉淀产生，观察溶液颜色变化至沉淀消失，观察溶液颜色并解释现象继续滴加0.02MNaOH溶液边滴加边混匀溶液呈蓝色蛋白质的两性反应(1)实验结果酪蛋白溶液呈碱性(pH﹥5.4)，使溴甲酚绿指示剂显蓝色[H+]，沉淀蛋白质的两性反应(2)出现最大量沉淀时,说明到达了酪蛋白的等电点溶液由蓝色变成浅绿色（3.8﹤pH﹤5.4）继续加酸，[H+]继续增大，pH＜pI。酪蛋白所带正电荷不断增加，同电相斥，沉淀溶解沉淀完全溶解时，溶液显黄色(pH﹤3.8)[OH-]，沉淀蛋白质的两性反应(3)出现最大量沉淀时,说明到达了酪蛋白的等电点溶液由黄色变成浅绿色（3.8﹤pH﹤5.4）继续加碱，[OH-]继续增大，pH﹥pI。酪蛋白所带负电荷不断增加，同电相斥，沉淀溶解沉淀完全溶解时，溶液显蓝色(pH﹥5.4)结论1：酪蛋白的等电点在pH3.8-5.4之间pH=pI时，蛋白质溶解度最小蛋白质是两性电解质取7支同样规格的干燥试管，精确加入各试剂酪蛋白等电点的测定注：单位均为mL试管号码1234567蒸馏水2.43.2—3.01.52.753.381.00M醋酸1.60.8—————0.1M醋酸——4.01.0———0.01M醋酸————2.51.250.62pH3.53.84.14.75.35.65.9向每个试管中各加0.5%酪蛋白溶液20滴，加一管，立即混匀一管静置30分钟后，以0、+、++、+++、++++表示各管的混浊度，并指出哪一种pH是酪蛋白的等电点酪蛋白等电点的测定1234567实验结果1234567沉淀量0++++++++++00结论2：4号试管沉淀量最多说明4号管溶液的pH值为酪蛋白的等电点，即pI=4.7什么是蛋白质的等电点？在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀？思考
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