null实验四 血糖的测定---邻甲苯胺法
实验四 血糖的测定---邻甲苯胺法
标准曲线法实 验 目 的实 验 目 的掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法。
掌握标准曲线法在定量
分析
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中的应用实 验 原 理实 验 原 理本实验采用临床上常用的邻甲苯胺法,利用葡萄糖在热的醋酸溶液中脱水后与邻甲苯胺缩合,生成青色的Schiff碱,对波长630nm的光有特征吸收,可比色定量测定。
由于邻甲苯胺只与醛糖作用而显色,故此种测定法不受血液中其他还原物质的干扰,测定时也无需去除血浆或血清中的蛋白质。 原理反应式 原理反应式实 验 操 作实 验 操 作一、标准曲线的制备(标准品梯度稀释)
取l0ml容量瓶5只,分别编号1,2,3,4,5,依次加入葡萄糖贮存标准液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0(ml),再以饱和苯甲酸溶液稀释至l0ml刻度,混匀。上述溶液l00ml葡萄糖含量分别为50,100,200,300,400(mg)。二、显 色二、显 色取7只试管,编号,按下
表
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操作。混匀后,置沸水浴中煮沸15min,取出,在冰水浴中冷却。邻甲苯胺法测定血糖操作表比色及结果比色及结果
以“0”号管为对照,用分光光度计在630nm处比色测定,以各管的吸光度为纵坐标,相应管中葡萄糖含量为横坐标,绘制标准曲线。
根据测定管吸光度,通过标准曲线即查得含量。
附:标准样品法定量测定附:标准样品法定量测定取3只试管,编号,按下表操作。混匀后,置沸水浴中煮沸15min,取出,在冰水浴中冷却。以空白号管为对照,用分光光度计在630nm处比色测定,记录各管吸光度,数学计算,获得待检血清中血糖含量值。