实验二、大鼠在体小肠吸收

实验二、大鼠在体小肠吸收 一、实验目的 1.掌握大鼠在体吸收的实验方法 2.掌握药物吸收速度常数(K)，半衰期t1/2，以及每小时吸收率的计算方法。 二、实验原理 被动扩散是消化管吸收的最重要途径，是指药物分子通过胃肠屏障从浓度高的区域(吸收部位)向浓度低的区域(血液)扩散，电动势高的向电动势低的区域移动，不消耗生物体的能量，只与浓度有关，其扩散速率与膜两侧浓度差成正比，Fick方程式定量地描述了这个过程。 dQC,CbC,Cb,DK0,PS (1) dtXX 式中为分子型药物的透过速度;S为膜的面积;D为膜内的扩散速度常数;K0dQdt 为膜物质/水溶液的分配系数;C为消化液中药物浓度(外部浓度);Cb为在血液中药物浓度(内部浓度);X为膜的厚度。P=DK0称为透过常数。 一般药物进入循环系统后，立即转运至全身，故药物在吸收部位循环液中的浓度相当低，可忽略不计。因此透过速度与消化液中的药物浓度成正比，若设PS/X=K，则(1)式可以简化为: dQPS (2) ,,C,KCdtX 由(2)式可以看出药物的透过速度属于 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 现一级速度过程。若以消化液中药物量的变化dx/dt表示透过速度，则 dX (3) ,,KXdt 将(3)式积分 LnX=LnXc-Kt (4) 以小肠内残留的LnX对时间作图应为一条直线，其直线斜率即为药物在小肠中的吸收速度常数K。 三、仪器与材料 1.实验仪器 蠕动泵1台，752分光光度计1台，磁力搅拌水浴锅加转子，红外灯一只，铁架台1只，固定板/手术托盘1个，烘箱，天平，手术剪1只，止血钳1只，镊子，乳胶管，棉花，手术线，纱布，坐标纸 量筒1000ml 1个，烧杯1000ml 1个，烧杯250ml 1个，容量瓶1000ml 1个，100ml 1个，10ml 6个，注射器5ml 1个，移液管10ml 1个，1ml 1个 2.实验试剂 法莫替丁，酚红，乌拉坦(20%，大鼠每200g腹腔注射1.2ml麻醉)，生理盐水，1mol/L NaOH溶液，Korbs-Ringer试液(每1000ml内含NaCl 7.8g，CaCl2 0.37g，NaHCO3 1.37g，NaH2PO4 0.32g，MgCl2 0.02g，葡萄糖1.4g)，乙醚 四、实验内容 1.操作 取100ml供试液(100ml Krobs-Ringer试液含法莫替丁10mg、酚红2mg)加入循环装置的烧瓶中，将实验前禁食一夜，体重200g左右的雄性大鼠(称重)乙醚初步麻醉后，腹腔注射乌拉坦1.2ml麻醉。将大鼠在固定板上固定，沿腹中线打开腹腔(约3cm长)，自十二指肠上部及回肠下部各插入一根蠕动泵上的乳胶管，用线扎紧，并用37?的生理盐水将小肠内容物冲洗干净。开动蠕动泵，将5ml/min的流速循环10min后调速至2.5ml/ml，自烧瓶中取样4ml(0.5ml用于酚红含量测定，剩余的用于法莫替丁含量测定)为药物和酚红零时间样品，并补加4ml酚红溶液(每ml Krobs-Ringer试液含酚红20μg)其后分别于0.5、1、2、3、4h取样(0.5ml用于酚红含量测定，剩余的用于法莫替丁含量测定)，同时补加酚红溶液。由于酚红不被小肠吸收，用来测定水被小肠吸收的量。试验结束后，取出小肠，冲 2洗后剖开，摊于坐标纸上，沿小肠边剪下坐标纸。冲洗后晾干，烘干称重。剪取10格(10cm) 2坐标纸称重后，即求得小肠的面积(cm)。 2.定量方法 (1)法莫替丁定量 药物浓度的测定:法莫替丁的最大吸收波长284nm处酚红也有吸收。为了消除酚红的影响，采用双波长等吸收消去法测定肠循环液中法莫替丁的含量。由于284nm与265nm为酚红的等吸收波长，故选择两波长进行测定。 取大鼠在体肠循环液不同时间点的样品，分别于284和265nm波长处测定吸光度A1和A2，?A=A1-A2。 法莫替丁的比色空白液为Korbs-Ringer试液。 (2)酚红定量 样品0.5ml，加入1mol/L NaOH溶液5ml，于557nm测定吸光度。 酚红的比色空白液为1mol/L NaOH溶液。 3. 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线的制备 (1)酚红的标准曲线 精密称取酚红100mg，置1000ml容量瓶内，加Korbs-Ringer试液稀释至刻度，成100微克/毫升的标准溶液，取1，2，3，4，5，6ml于10ml容量瓶中，加Korbs-Ringer试液至刻度。自上述各溶液中吸取0.5ml，按酚红的定量方法测定吸收度，并绘制标准曲线。 (2)法莫替丁的标准曲线 贮备液的配制:精密称取法莫替丁标准品10mg，置100ml容量瓶中，以Korbs-Ringer试液溶解并稀释至刻度，使成100μg /ml的标准溶液。 标准曲线制备:取上述贮备液适量，稀释至50μg /ml的工作液，分别吸取0.5，1，1.5，2，2.5，3ml于10ml容量瓶中，取酚红100微克/毫升的标准溶液适量，同样稀释为50μg /ml的工作液，分别吸取0.5，1，1.5，2，2.5，3ml于上述对应的10ml容量瓶中，加Korbs-Ringer试液至刻度，得含酚红的浓度分别为2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0μg /ml的法莫替丁标准溶液，分别在284及265nm处测定A1与A2值，计算?A=A1-A2，以?A对法莫替丁浓度C(μg /ml)进行线性回归，得法莫替丁标准曲线。 4.实验数据与处理 将实验数据按表中 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 进行计算。 以剩余药量的对数对时间作图，求出吸收速度常数K，吸收半衰期t1/2和每小时吸收率(%)。 零时间剩余药量-60分钟剩余药量每小时吸收率(%)=×100% 零时间剩余药量 根据小肠面积，计算每小时,c?(或每小时,100c?)的吸收率。 大鼠在体小肠吸收量的 计算公式 六西格玛计算公式下载结构力学静力计算公式下载重复性计算公式下载六西格玛计算公式下载年假计算公式 取样时吸收法莫酚红酚红供试液体积(ml) 剩余药量(微克) 间(hr) 度 替 吸 浓度 丁浓收度 度 循环前 ?A0 C0 A0’ C0’ V0=100ml P0=100,C0 0 ?A1 C1 A1’ C1’ 1=C1V1 PC'V00V, 1C'1 0.5 ?A2 C2 A2’ C’ 2=C2V2+1.5C1 P2(V,1.5)C'，4011V, 2C'2 1.0 ?A3 C3 A3’ C’ 3=C3V3+1.5(C1+C2) P3(V,1.5)C'，4022V, 3C'3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? tn An Cn An’ Cn’ n,1(V,1.5)C'，401n1V, P,CV，1.5C n,nnniC'ni,1 五、思考 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 1(作好本实验的关键是什么,在操应该注意哪些问题, 2(本实验装置能否进一步改进, (V,1.5)C'，401n1V,3、推导公式 nC'n 六、注意事项 1. 麻醉时注射乌拉坦不得过多，一般大鼠称重后注射1.2ml/200g，可以先注射1ml，看麻 醉效果再决定是否继续注射。否则实验大鼠容易死亡。 2. 麻醉后将大鼠仔细固定在固定板上，防止大鼠在实验过程中苏醒挣扎。 3. 沿腹中线打开腹腔时，剪开3cm左右即可，不可过长，否则实验大鼠容易失血过多或者 无法维持体温而死亡。 4. 将肠与肠系膜分离时小要心用小剪刀分离，否则容易将小肠弄破，造成后续试验的漏液。 5. 插入管后要用线系紧否则会造成漏液或者肠段与管脱离。 6. 实验前要将小肠内容物冲洗干净否则会造成后续试验时测定的吸光度不准确。 7. 实验时插入小肠的两根胶管的管径要相同否则会造成一端的肠段撑爆或一端的肠段紧 缩，造成液体无法顺利流通循环。