利用家蚕表达合成人表皮生长因子_EGF_及产物对胃粘膜损伤的修复作用_cropped

利用家蚕表达合成人表皮生长因子_EGF_及产物对胃粘膜损伤的修复作用_cropped 利用家蚕表达合成人表皮生长因子 ( EGF)及产物 对胃粘膜损伤的修复作用 薛仁宇 曹广力 陈 淼 沈卫德 魏育红 贡成良 ()苏州大学生命科学学院 ,苏州 215123 ( )摘 要 基于家蚕杆状病毒密码子的偏爱性 ,对人表皮生长因子基因 hEGF 的部分密码子进行修改后合成一个 新的基因 ,命名为 CSEGF。所合成的 CSEGF能编码同 hEGF完全一致的氨基酸序列 ,并被重组进家蚕杆状病毒获 μμ得重组 Bm 2B acCSEGF。重组病毒感染家蚕后 ,该基因在家蚕中的表达量达 2814g /mL 幼虫血淋巴及 33107 g /mL μ蛹血淋巴 。将表达 CSEGF的蚕蛹经冻干直接制成 EGF 冻干粉胶囊 ,经测定冻干粉中 EGF 的质量比达 140 g / g。 动物模型试验显示该冻干粉对酸诱导的急性胃粘膜损伤的 SD 大鼠有显著的修复作用 ,对大鼠裸鼠的肾细胞生长 也有明显的促进作用 。 关键词 合成人表皮生长因子 ; 基因表达 ; 家蚕 ; 胃粘膜修复 ( ) 文章编号 0257 - 4799 200701 - 0067 - 07 中图分类号 S88112 文献标识码 A Exp re s s io n o f S yn th e t ic h EG F G e n e in B om b yx m o ri a n d th e Effe c t o f its P ro d u c t o n A c u te G a s t ric M u c o s a L e s io n 3XU E R e n 2Yu CAO G u a n g 2L i C H EN M ia o S H EN W e i2D e W E I Yu 2H o n g GO N G C h e n g 2L ia n g ( )C o lle g e o f L ife S c ie n c e , S o o c h ow U n ive rs ity, S u z h o u J ia n g s u 2 1 5 1 2 3 , C h in a ( ) A b s tra c t B a s e d o n th e c o d o n b ia s o f Bm N PV, s om e c o d o n s o f h um a n e p id e rm a l g row th fa c to r h EG F g e n e w e re m o d ifie d a n d n am e d a s C S EG F w h o s e d e d u c e d am in o a c id s e q u e n c e w a s id e n tic a lly th e s am e a s th a t o f h EG F. A n d th e re c om b in a n t b a c u lo v iru s Bm 2B a c C S EG F w ith C S EG F w a s g e n e ra te d. In s ilkw o rm s , th e μμEG F e xp re s s io n le ve l re a c h e d 2 8 14 g p e r m illilite r la rva h em o lym p h a n d 3 3 10 7 g p e r m illilite r p up a h em o 2 lym p h, re s p e c tive ly. Fu rth e r m o re , th e p up a e e xp re s s e d C S EG F w e re d ire c tly u s e d to p ro d u c e th e lyop h iliz e d μp up a p ow d e r w h o s e fin a l c o n c e n tra tio n o f EG F re a c h e d 1 4 0 g / g. W h ic h p e rfo rm e d o b v io u s fu n c tio n o f p le ro 2 s is p e r o s o n a c u te g a s tric m u c o s a le s io n in d u c e d b y a c e tic a c id , a n d it im p ro ve d th e g row th o f k id n e y c e ll o f n u d e m o u s e , to o. Ke y w o rd s S yn th e s is EG F; G e n e e xp re s s io n; B om b yx m o ri; G a s tric m u c o s a re p a ir ( 人表皮生长因 子 hum an ep ide rm a l grow th fac2 53 个氨基酸组成的多肽 ,且含有 3 个同生物学活性 [ 1 , 2 ] )to r, hEGF是具有抑制胃酸分泌作用的尿抑胃素 ,由相关的二硫键 。已有的实验 证 明 , EGF 通过 促 进 新 生 小 鼠 胃 粘 膜 生 长 从 而 促 进 消 化 道 的 分 [ 3 - 5 ] 化 , EGF 抗 血 清 可 延 缓 新 生 鼠 消 化 道 的 生 收稿日期 : 2006 - 09 - 16 [ 6 ] [ 3 ] 长 。 Jan sson等 报 道 , 将 EGF 给 予 切 除 唾 液 腺 ) (JH 022043;国家 资助项目 :江苏省教育厅高新技术产业化项目 编号 的成年鼠可以防止胃溃疡产生 ,推测可能是 EGF抑 ) (2005CB121000;国 重点基础研究发展计划“973”项目 编号 () 家自然科学基金项目 编号 30571404。 制了酸 分 泌 或 通 过 多 胺 合 成 产 生 了 细 胞 保 护 因 ( ) [ 7 , 8 ] [ 9 ] 作者简介 :薛仁宇 1963 - ,男 ,江苏 ,副教授子 。W a lke r2Sm ith 等 报 道 , 可 采 用 EGF 治 疗 E2m a il: xuery@ suda. edu. cn 促进消化道小细胞分裂来治疗儿童先天性微绒毛萎 通讯作者 :贡成良 ,教授 ,博士生导师 。[ 10 ] [ 11 ] 缩症 。 To im 等 、Gu llick 等 报 道 , EGF 及 其 受E2m a il: gongcl@ suda. edu. cn [ 12 ] 体在成年人多个肿瘤中起抑制作用 。W righ t等 、Boeh rige r 公 司 产 品 , 小 鼠 抗 牛血 清 白 蛋 白 为 [ 13 ] ( ) H is抗体为 Bo ston B iochem 公司产品 , 辣根过氧 Ta rnaw sk i等 报道 ,在产生溃疡的胃中 ,发现了由 6 神经细胞系所产生的有细胞保护性质以及生长促进 化物酶标山羊抗小鼠抗体为 ZYM ED 公司产品 。实 作用的 EGF。 EGF 对生长及 消 化道 粘膜 的 作用 还 验所用限制性内切酶 B am H ?、EcoR ?、B su36 ?、T4广泛地受到诸如营养 、消化液分泌 、激素 、胃肠肽 、胰 DNA L iga se和配套的缓冲液为 G IB ICOL BRL 公司 腺液分泌和消化 细菌 等 因素 的影 响 。许 多 研究 表 产品 , Tag DNA 聚合酶为上海生工产品 。 明 , EGF 能 在 体 外 培 养 时 对 多 种 内 皮 细 胞 生 1. 2 基因操作[ 14 - 17 ] [ 18 ] 长 、器官 等 起 促 进 作 用 , 并 且 EGF 还 具 有 质粒提取 、限制性内切酶消化 、连接 、转化及鉴 [ 24 ]抑制酸分泌以及对十二指肠粘膜的滋养作用 ,促进 定根据 Sam b rook等 的 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 稍作改进 。 ( 十二指肠溃疡愈痊的功效 。口服 EGF 在消化道粘 1. 2. 1 合成 CSEGF 根据 GenB ank 登录 号 : X04571, ) 膜修复过程中也能够调节粘液蛋白水平 ,刺激肠细 核心片段 3 347 - 3 505,参照 BmNPV 密码子的偏爱 [ 19 , 20 ] ( ) 胞对水解酶的表达 。 性 http: / /www. kazusa. o r. jp / codon / _人 工 设 计 了 CSEGF序列 ,并通过合成几个小片段后再连成完整的 家蚕杆状病毒表达系统可通过核多角体病毒 ()N PV s表达外源基因而被广泛利用 ,已有许多外源 ( ) CSEGF。整个修改密码子后 CSEGF 序列为 : 1AAC2基因利用该系统成功地进行了表达 ,也有利用该系 A GCGACA GCGAA TGCCCGTTGA GCCACGACGGCTA 2 [ 21 - 23 ] 统在家蚕中进行规模化生产有用蛋白的报道 。 CTGCTTGCACGACGGCGTGTGCA TGTACA TTGAA G2 为了提高 hEGF 在 家 蚕 杆 状 病 毒 系 统 中 的 表 达 水 CGTTGGACAAA TACGCGTGCAACTGCGTGGTGGGC2 平 ,同时不改变表达产物的生理功能 ,并加以利用 , 我们依据家蚕密码子的偏爱性 , 对 hEGF密 码子进 TACA TTGGCGAACGCTGCCAA TACCGCGACTTGAA 2 行了修改 。修改后的 CSEGF 不仅能够编码同 hEGF ( ) (A TGGTGGGAA TTGCGCTAA 162不包括用于装入 核心片段完全一致的氨基酸 ,而且在家蚕杆状病毒 ) 载体而加入的酶切位点 。 系统中的表达水平极大提高 。尽管 EGF 活性不需 1. 2. 2 重组杆状病毒 用 B am H ?、EcoR ? 酶切要在蛋白质水平有翻译后加工 ,但对于一些需要翻 CSEGF 克隆进 pB acPA K2H is得到转移载体 pB acP2译后加工才能具备生物学活性的蛋白来说 ,该表达 系统具有非常大的优越性 。此外 , 家蚕可食用 , 当 A K2H is2CSEGF。再 将 B su36 ?酶 切 后 线 性 化 病 毒EGF在家蚕中得到表达后可直接用来制成口服药 , Bm 2B acPA K6 同 pB acPA K2H is2CSEGF用脂质体共转 无需繁杂的纯化工艺 。更有意义的是 ,口服表达的 染进 BmN 细胞 ,重组病毒以蓝白斑筛选出白色重组 CSEGF对胃 粘 膜 的 修 复 功 能 依 然 保 留 , 说 明 口 服 [ 23 ] 病毒 , PCR 鉴定后 ,再进行 2 轮空斑筛选获得纯CSEGF仍能 进 入 实 验 鼠 的 体 内 , 并 具 有 生 物 学 活 化病毒 。所获得的重组病 毒 Bm 2CSEGF 通过 BmN性 。基 于 以 上 方 面 , 本 试 验 将 修 改 密 码 子 后 的 CSEGF 在家蚕的幼虫中表达 ,以检查修改密码子后 细胞扩增备用 。 的表达效率 ,还在家蚕蛹中进行了表达 ,并将在蚕蛹 1. 3 家蚕幼虫及蚕蛹血淋巴的收集6 中表达的 CSEGF直接制成冻干粉 ,用于经醋酸诱导 用 10PFU 重组病毒 Bm 2CSEGF穿刺接种 5 龄 的 SD 大鼠急性胃粘膜损伤的治疗 。 起蚕环节处 ,后剪去腹足 ,冰上收集血淋巴 ,同时也 将重组病毒注射接种刚化蛹的家蚕 蛹 , 120 h 后 冰 上收集蛹血淋巴 , 2 组均设未接种过病毒的正常家 蚕和接种了线性化病毒 Bm 2B acPA K6的血淋巴作为 对照 ,所有收集的血淋巴置于 - 20 ?保存 。 1. 4 家蚕表达 CSEGF的检测 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与方法1 将感 染 重 组 病 毒 Bm 2B acPA K2HChEGF、家 蚕 1. 1 材料 杆状病毒 Bm 2B acPA K6 的 蚕血 淋 巴和 正常 蚕 血 淋 修饰型家蚕 线 性化 杆状 病 毒 Bm 2B acPA K6、家 巴用 PB S稀释 5 倍 , 4 ?、3 000 r /m in离心 5 m in, 蚕 BmN 培养细胞以及 pB acPA K2H is、供试家蚕品种 取上清 , 与 等 体 积 的 2 ×SD S 凝 胶 上 样 缓 冲 液 混 皓月 ×菁松均为本实验室保存 。家蚕人工饲料购自 合 , 100 ?煮 沸 5 m in, 冷 却 后 取 适 量 进 行 15 % (山东省蚕业研究所 。 hEGF 根据 GenB ank 登录号 : )X04571 合成 。 SD S2PA GE电 泳 , 考 马 斯 亮 蓝 R 250 染 色 后 观 察 。 ( ) ,将 2 mL 10 mmo l /L 醋酸直接灌入胃 ,解剖 不禁水 再将凝 胶 转 印 到 硝 酸 纤 维 素 膜 , 以 小 鼠 抗 H is 6 观察模型生成进 展 , 观 察到 造模 成 功后 进入 实 验 。 抗体为一 抗 , 辣 根 过 氧 化 物 酶 标 山 羊 抗 小 鼠 抗 体 其中 :空白组 SD 大鼠 1 只 ,用于观察正常大鼠的胃 为二抗进行 W e ste rn杂交 ,完成杂交后用二氨基联 粘膜的形态 ;模型组在造模后 24、48 h,各处死 3 只 苯氨显色 。 1. 5 家蚕表达 CSEGF对裸鼠肾细胞的促生长作用 观察 ,用于观察模型形成过程 ; 实验组每天灌 1 mL 试验 含表达 CSEGF的溶液 ,造模的第 4、7、10 天 ,各处死 将表达 CSEGF的家蚕蛹制成冻干粉 ,取 0105 g5只 ;对照组每天灌 1 mL 生理盐水 ,造模第 4、7、10 蛹冻干粉 ,加入 1 mL PB S,静置 30 m in,剧烈振荡混 天 ,各处 死 5 只 ; 参 考 组 每 天 灌 以 1 mL 感 染 Bm 2 匀 。 4 ?、12 000 r /m in离心 10 m in,取上清 ,重复 2 B acPA K6家蚕蛹后制成溶液 ,造模后第 10 天处死 5 只 ,观察结果 。次后过滤备用 。 用 1 %胰蛋白酶消化液 37 ?消化新生大鼠剪 1. 6. 3 胃粘膜损伤积分 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 将 SD 大鼠活体解 碎的肾细胞 30 m in,再用含 10 %胎牛血清的 R PM I 剖后取出胃 ,切开后进行整体外部观察 ,根据胃损伤 ( 情况 , 进 行 记 分 , 采 用 通 用 医 学 划 分 标 准 : 正 常 0 1640培养液终止消化 。吹打瓶壁细胞 ,接种在六孔 ) ( ) ( ) 4 ,6 h 后 , 吸 出 原培 养基 , 加 入 R PM I 1640 分 ,局部充血 1 分 , 点状出血 1 分 , 点状糜烂 板中 。 () ( ) ( ) 维持 液 含2 % 胎 牛 血 清 及 70 ng /mL 表 达1 分 ,线状糜烂 3 分 。将胃组织制成冰冻切片 CSEGF。对照孔中加入等量的维持液 。 后 ,用 H E 染色 ,根据病理切片 ,进行记分 。划分标 ( ) ( ) 1. 6 表达 CSEGF对醋酸诱导 SD 大鼠急性胃粘膜 准如下 :正常 0 分 ,表层上皮损伤 1 分 ,上层粘 ( ) 损伤的修复作用试验 膜充血水肿 2 分 ,中 /下层粘膜充血 、出血和水肿 ( ) ( ) 1. 6. 1 用于大鼠口服的表达 CSEGF溶液的制备 将3 分 ,粘膜上层腺体结构紊乱或坏死 4 分 ,有深 ( ) 层的坏死或溃疡 5 分 。通过累计积分来评判粘膜 表达 CSEGF的蚕蛹冻干粉 3 g加到 100 mL 生理 盐 μ损伤及修复 。 水中 ,根据实验结果计算其中 EGF 的含量约为 3 g /mL , 4 ?保存 ;以 Bm 2B acPA K6 感染家蚕蛹同样 制2 结果与分析 备用于参考组灌胃的溶液 。 2. 1 修改密码子后的 CSEGF 及 hEGF 的差异 1. 6. 2 实验动物模型建立 将实验 SD 大鼠 37 只 ()修改密码子后的 CSEGF及 hEGF的比较如图 1。 体重约 300 g /头 随机分成 3 组 ,造模前 24 h禁食 图 1 修改密码子后的 C SEG F 及 hEG F F ig. 1 Sequence s of mod ified CSEGF gene and hEGF gene 在 核 酸 水 平 上 修 改 密 码 子 后 的 CSEGF 与 的 Bm 2B acPA K6 经 共 转 染 后 , 空 斑 筛 选 重 组 病 毒 。 hEGF 的差异达 20 % , 二 者 均 编 码 相 同 的 氨 基 酸 PCR 鉴定结果显示感染细胞中有一 个 与转 移载 体 () 一样大小的片段 图 2 。序列 : N SD SEC PL SHD GYCLHD GVCM Y IEALD KYA 2 SD S2PA GE 分 析 显 示 家 蚕 在 被 重 组 病 毒 感 染CNCVV GY IGERCQ YRDL KWW ELR。但 按 照 我 们 的设想 ,在家蚕表达系统中经修改密码子后 CSEGF 120 h后 ,其血淋巴中有一同理论推测 值相 一致 的 10 kD 特异性条带 ,而用野生病毒感染的家蚕血淋 表达 EGF的效率将会得到很大的提高 。( ) 巴中则没有该条带 ,以小鼠抗 H is抗体为一抗 ,辣 62. 2 重组病毒 Bm 2B ac2CSEGF 的筛选及表达产物 根过氧化物酶标山羊抗小鼠抗体为二抗进行 W e st2 的鉴定 e rn杂交 ,结果在相应位 置 也各 呈现 一 条杂 交信 号 pB acPA K2H is2CSEGF 及由 B su36 ?酶切线性化 (μ) () 带 图 3 ,表明外源基因 CSEGF 已经成功地在家蚕 33107 g /mL 图 5 。 中得到表达 。 1. 重组 Bm 2B ac2CShEGF 2. 重组 pB acPA K2H is2CShEGF 3. 对照 Bm 2B acPA K6 图 4 hEGF的 EL ISA 标准工作曲线 1. Bm 2B ac2CShEGF 2. pB acPA K2H is2CShEGF F ig. 4 EL ISA standa rd cu rve of hEGF 3. Bm 2B acPA K6 图 2 PC R鉴定重组病毒 F ig. 2 PCR amp lifica tion of DNA of recom b inan t viru se s 图 5 家蚕蛹中 C SEGF的表达时相 F ig. 5 Exp re ssion p ha se of CSEGF in B. m ori p up ae 2. 4 家蚕表达的 hEGF 对大鼠乳鼠肾细胞生长的 影响M. 蛋白质分子量标记 1 , 2. 感染 Bm 2B ac2CShEGF 3. 感染 BmB acPA K6 的对照 原代培养的 SD 大鼠乳鼠肾细胞传代培养 3 代 M. M a rke r 1 , 2. Iinfec ted w ith Bm 2B ac2CShEGF 后 ,用含 CSEGF表达样品的细胞培养维持液培养 , 3. Iinfec ted w ith BmB acPA K6 同时设无 CSEGF的细胞培养维持液对照 。 96 h 后 图 3 家蚕幼虫血淋巴中所表达 EGF的 SD S(左 ) 的结果如图 6所示 ,添加表达 CSEGF样品区的细胞 及 W e stern b lo t检测 (右 )生长良好 ,而无 CSEGF区的细胞已将近死亡 。 () ( ) F ig. 3 SD S2PA GE L and W e ste rn b lo t R ana lysis of 2. 5 表达 CSEGF对 SD 大鼠急性胃粘膜损伤的修EGF exp re ssed in hemo lymp h of B. m ori 复作用 用醋酸诱导的急性胃粘膜损伤 SD 大鼠 , 每 天 2. 3 EL ISA 检测 HCEGF在蚕体中的表达 以 1 mL 含表达 CSEGF 的生理盐水灌胃 1 次 ,连续 EL ISA 检 测 结 果 显 示 在 家 蚕 幼 虫 感 染 120 h () 后 ,根据 EGF 工作曲线 图 4 重组 HCEGF 的表达 10 d处理 。表 1 显示了表达 CSEGF对 SD 大鼠急性 μ量可高达 2814 g /mL ,而直接使用 hEGF 在家蚕幼 胃粘膜损伤修复作用的大体观察结果 。在观察期 , 虫中进行表达 ,在本实验系统中用同样的方法则检 实验组的积分明显逐步降低 ,而对照组则呈增加趋 测不到 。表明通过修改密码子后的 CSEGF 在家蚕 势 。5 头实验鼠处理 10 d后 ,其中 3 头鼠的诱导胃 中的表达效率得到显著提高 。 粘膜损伤消失 ,病理切片观察也得到了相同的实验 家蚕蛹在感染 72、96 以及 120 h 后 , 经 EL ISA 结果 ,说明服用含表达 CSEGF冻干粉制成液能够显 检测 得 到 CSEGF 的 表 达 量 分 别 为 01613 4、6121、 著修复由醋酸诱导的急性胃粘膜损伤 ,而且通过口 服方式 CSEGF也能起到同 hEGF一致的作用 。 ,病理切片显示胃粘膜的表层及中层或下 线性糜烂 服用 Bm 2B acPA K6 感染家蚕的冻干粉 , 在造模 层粘膜均有充血或出血 ,一些病例出现腺体紊乱 ,总 后第 10天出现同对照组相似的情况 ,全部参考组大 体情况同对照组结果相似 ,在造膜后 10 d,胃粘膜的 ( ) 体观察均有点状出血及点状糜烂 ,个别伴有胃粘膜损伤情况没有得到修复 表 2 。 A. 为不添加表达 CSEGF样品的细胞 为添加表达 CSEGF样品的细胞 B. A. W ithou t CSEGF B. W ith CSEGF 图 6 C SEGF对 SD 大鼠乳鼠肾细胞生长比较 F ig. 6 Grow th comp a rison of k idney ce lls w ith CSEGF 表 1 C SEGF对急性胃粘膜损伤及修复的大体观察 表 2 C SEGF对急性胃粘膜损伤及修复的病理观察 Tab le 2 Pa tho logica l sec tion ob se rva tion of acu te ga stric m uco2 Tab le 1 Gro ss ob se rva tion of acu te ga stric m uco sa le sion sa le sion and rehab ilita tion and rehab ilita tion 对照 Con tro l 处理 Trea tm en t 对照 Con tro l 处理 Treatm en t 天数 编号 天数 编号 总分 总分 总分 总分 得分 平均 得分 平均 D ay No D ay No 得分 平均 得分 平均 To tal To ta l To ta l To ta l Sco re s M ean Sco re s M ean Sco re s M ean Sco re s M ean sco re s sco res sco res sco re s 1 0 1 1 1 4 - - - 1133 2 1 1 3 1 - - - 2 1 3 1 + 2 3 1 1 1 1 1 + 1 2 7 - - - 2133 2 1 + 2 2 9 3 - - - 2 1 + 1 3 1 + 2 3 1 + 1 + 3 1 1 + 4 0 1 1 + 1 + 3 1 2 1 + 3 + 4 0 2 1 1 + 1 4 26 8 3 1 + 3 512 2 116 4 12 8 3 1 + 1 214 1 116 4 4 3 4 1 + 1 1 + 1 5 1 + 4 3 5 1 + 1 1 + 1 1 1 + 2 + 4 0 1 1 + 3 1 2 1 + 4 0 2 1 + 1 1 + 1 514 112 7 3 1 + 4 27 1 6 216 114 7 13 7 3 1 + 1 1 + 1 4 1 + 2 + 4 2 4 1 + 1 1 + 1 5 1 + 2 3 5 1 + 1 + 1 0 1 1 + 3 0 1 1 + 1 0 2 1 0 2 1 + 1 + 1 + 3 0 3 1 + 2 + 4 414 0 014 10 22 2 3 1 + 1 314 0 014 10 17 2 4 2 + 3 2 4 1 + 1 + 3 1 5 1 + 4 0 5 1 + 1 1 图 7 是 病 理 切 片 观 察 结 果 。在 醋 酸 诱 导 的 , 显 示 了 胃 粘 膜 损 果与病理 切 片 观 察 的 结 果 一 致 第 1 天 ,实验 SD 大鼠的胃粘膜就有相应的各种病 伤后的修 复 过 程 , 而 病 理 切 片 更 是 在 细 胞 水 平 进 理变化 ,而且随着时间推移 ,变得更 加严 重 。实 验 一步确认了口服表达的 CSEGF能够调节粘膜蛋白 水平 ,刺激 内 皮 细 胞 表 达 水 解 酶 达 到 修 复 消 化 道 组的结果显示经每天给予灌胃表达 CSEGF样品的 SD 大鼠胃粘膜产生了明显的修复 。大体观察的结溃疡的这一结论 。 A. 正常 B. 粘膜损伤 C. 粘膜水肿 D. 粘液腺紊乱 E. 中下层粘膜出血 F. 修复及增生 A. No rm a l B. M uco sa lesion C. M uco sa edem a D. M ucou s grand d iso rde r E. M id / lowe r layer m uco sa b leed ing F. R ehab ilita tion and hyp e rp la sia 图 7 酸诱导的胃粘膜损伤经口服表达 C SEGF样品后的修复状况 F ig. 7 Ga stric m uco sa le sion induced by ace tic ac id and its rehab ilita tion exp re ssed CSEGF p e r o s 影响 ,特别是用家蚕杆状病毒系统来表达 hEGF ,其 3 讨论 差异非常显著 。 家蚕本身可以食用 ,并具有一些特殊的药用价 用在蚕蛹中表达的 CSEGF 直接制成冻干粉 ,以 值 ,例如降血糖 ,因而也被特殊处理后用作药物 ,也 口服形式治疗 SD 大鼠急性胃粘膜损伤 。结果显示了 [ 25 ] 有利用家蚕提取抗菌肽或生产虫草的报道 ,但有 CSEGF对急性胃粘膜损伤具有非常好的调节功能 , 并迅速有效地进行了修复 。因此推断经口服在家蚕 关对蚕 体 EGF 的研 究 及利 用却 没有 详 细的 报 道 。 我们在 EGF的测活系统中 ,用 hEGF 抗体没能检测 蛹中表达的 CSEGF后 , CSEGF 能够进入实验鼠的血 液并且保持其生物学活性 。本次实验过程中检查了 到 EGF,表明蚕的 EGF同 hEGF有不同的抗原簇或 含量太低 ,以至于我们所采用的检测系统无法检测 鼠血液中 EGF含量的变化 ,在口服 CSEGF前 ,鼠血液 到 ,所以蚕体本身的 EGF 是否对 SD 鼠胃粘膜损伤 中的 EGF通过 EL ISA 检测不到 ,而在口服 CSEGF后 有修复作用尚无法评估 。 4 h,通 过 EL ISA 检 查 血 液 中 EGF 的 含 量 可 达 238 经比较实验 ,修改密码子的 CSEGF能够在家蚕 p g /mL。然而 ,目前仍无法阐明 CSEGF 是如何 、在什 μ幼虫中达到 2814 g /mL 表达量 ,直接使用 hEGF 在 么部位进入血液的 ,或许在家蚕体内存在着某种分子 家蚕中表达 ,我们在表达系统中检测不到有 hEGF ,伴侣可以将 CSEGF送入血液 。 表明因密码子的偏爱性存在 ,会受到表达系统重要利用家蚕杆状病毒表达系统高效表达了 C SE2 ( ) na l m uco sa [ J ]. D ige stion, 1990 , 46 2 : 125 - 133 GF,并达到了一定的浓度 ,表达产物可以不经纯化 [ 13 ] Ta rnaw sk i A S, Jones M K. The ro le of ep ide rm a l grow th facto r 及浓缩而直接口服 ,无论在表达成本 、表达产物的加 ( ) EGFand its recep to r in m uco sa l p ro tec tion, adap ta tion to in ju2 工过程及应用方面均显示出良好的应用前景 。但对 ry, and u lce r hea ling: invo lvem en t of EGF2R signa l tran sduc tion 于 CSEGF或 EGF是如何经消化系统进入血液仍需 ( ) p a thways[ J ]. J C lin Gastroen te ro l, 1998 , 27 1 : 512 - 520 进一步研究 ,以便充分利用该系统的优点来表达 、生 [ 14 ] Y L i, H Y W ang, C H Cho. A ssoc iation of hep a rin w ith ba sic fi2 产一些可直接口服的具药用价值的蛋白 。 b rob la st grow th fac to r, ep ide rm a l grow th fac to r, and con stitu tive n itric oxide syn tha se on hea ling of gastric u lcer in ra ts [ J ]. The ( )R efe rence s 参考文献 Jou rna l of Pharm aco logy and Exp erim en tal The rap eu tic s, 1999 , ( ) 290 2 : 789 - 796 Cohen S, Taylo r J M. Ep ide rm a l grow th fac to r: chem ical and b io2 [ 1 ] 2Paye t N , H ugon J S. 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